Este método ajuda a determinar se a célula tumoral invadiu além da lamina elástica no câncer gástrico pT3. erosão elástica de lamina no quadro prognóstico para câncer gástrico pT3. A principal vantagem dessa técnica é que é conveniente e preciso a abordagem para identificar a lâmina elástica, o que torna mais preciso para o patologista avaliar se as células tumorais invadem além da lamina elástica no câncer gástrico pT3.
Esta técnica pode ser para um diagnóstico de estágio de teste patológico de câncer de pulmão e câncer. Este método também pode ser aplicado ao sistema de estágio TNM de câncer de pulmão e câncer colo-retal. Primeiro, mergulhe os slides em xileno em um frasco de Coplin por 10 minutos.
Remova os slides deste frasco e mergulhe-os em xileno fresco em um frasco coplin diferente por mais 10 minutos. Mergulhe os slides em 100% etanol por cinco minutos, e depois transfira-os para o fresco 100% etanol por mais cinco minutos. Em seguida, mergulhe os slides em 95% de etanol por dois minutos.
Transfira os slides para um frasco contendo 70% de etanol por dois minutos. Depois disso, enxágue os slides brevemente com água destilada em um novo frasco de Coplin. Primeiro, use papel de tecido para limpar qualquer solução em excesso na lâmina ou ao redor do tecido.
Coloque os slides em condições que correspondam à temperatura ambiente e à umidade. Adicione algumas gotas de permangã de potássio a cada slide para oxida-las, certificando-se de que o volume adicionado é suficiente para cobrir a seção de tecido em cada lâmina. Após cinco minutos, enxágue os slides oxidados com água destilada em frascos de Coplin, repetindo a lavagem duas a três vezes e usando um novo frasco de água para cada enxágue.
O tecido deve ter uma cor marrom observável. Agora, adicione algumas gotas de ácido oxálico a cada lâmina para branqueá-los, certificando-se de que o volume adicionado é suficiente para cobrir a seção de tecido em cada lâmina. Após cinco minutos, enxágue os slides branqueados com água destilada, repetindo a lavagem duas a três vezes e usando um novo frasco de água para cada enxágue.
Lave os slides brevemente em 95% de álcool. Mergulhe os slides lavados na solução de elastina por oito a 24 horas. Em seguida, mergulhe os slides diretamente em 95% de etanol por um a dois minutos para diferenciar bem cada seção de tecido.
Enxágüe as lâminas completamente com água destilada. Verifique microscopicamente as fibras elásticas azul-pretas e o fundo cinza. Contratente os slides em uma solução van Gieson por um minuto, certificando-se de que o volume usado é suficiente para cobrir completamente a seção de tecido em cada slide.
Em seguida, derrube rapidamente 95% de etanol nas fatias de tecido por alguns segundos para diferenciar bem cada seção de tecido. Para começar, mergulhe os slides em 95% de álcool por cinco minutos para desidratá-los rapidamente. Transfira os slides para 100% álcool por cinco minutos para continuar a desidratação.
Em seguida, transfira os slides para álcool fresco 100% por cinco minutos adicionais. Mergulhe os slides em duas mudanças diferentes de xileno com cada imersão durando três minutos. Depois disso, adicione uma gota de meio de montagem resinoso ao slide e coloque um deslizamento de tampa por cima.
Usando um microscópio, observe as seções teciduais conforme descrito no protocolo de texto. Neste estudo, a coloração elástica é utilizada para identificar visualmente a lâmina elástica subsoeral. Um representante de coloração bem sucedida revela que após a coloração da solução de elastina, mas antes da contra-mancha de Van Gieson, a lâmina elástica pode ser claramente vista na forma de filamentos que são manchados azul-preto.
Eles estão perto das células mesotéciais sororesais, e uma certa distância ainda é vista entre a lamina elástica e as células tumorais. Manchas elásticas típicas com a contra-mancha de Van Gieson demonstram que a lâmina elástica está manchada azul-preta. As fibras de colágeno estão manchadas de vermelho, e as fibras musculares e células cancerosas estão manchadas de amarelo.
Células cancerígenas penetrando na lâmina elástica é considerada invasão elástica de lamina. Considerando que as células cancerígenas estarem próximas, mas não invadindo a lâmina elástica, são consideradas lamina elásticas não-invasão. Se a coloração revelar uma estrutura repetitiva indicativa de múltiplas camadas de lâmina elástica, e o tumor não invadir além da camada mais externa, a amostra deve ser diagnosticada como lamina elástica não-invasão.
A solução elastina é e o tempo de coloração é relativo longo, por isso é melhor imergir todos os slides com a mancha de elastina em um recipiente selado. Após a coloração da solução de elastina, deve ser lavada com água destilada.
