Bu vücuda uygun kalıpları kullanarak fare in vivo PET görüntülemenin nasıl gerçekleştirileceğini ve ilgili veri analizi platformunda nasıl gezinileceğini kesinlikle gösteriyoruz. Bu, tüm hayvanları zaman noktaları boyunca aynı fiziksel konumda tutmamıza olanak tanır ve otomasyonla aşağı akış görüntü analizini önemli ölçüde hızlandırabilir ve standartlaştırabilir. İn vivo görüntüleme, geleneksel görüntüleme dışı deneylere kıyasla birçok avantaj sunar.
Örneğin, görüntüleme, bir ilacın tüm denek içindeki dağılımının ve farmakolojik etkilerinin sistemik, bütünsel olarak değerlendirilmesine olanak tanır, bu da yalnızca hedef bölgedeki etkinliğin izlenmesini değil, aynı zamanda beklenmedik saha dışı aktivitelerin de tespit edilmesini sağlar. Tekrarlanabilirliği yüksek ve kantitatif verilerin elde edilmesi, ilaç geliştirme için kritik öneme sahiptir. Örneğin, PET bazlı bir bağırsak dağılımı çalışması, bir bileşiğin kinetiği, doku birikimi ve hedef bağlanması hakkında büyük miktarda değerli bilgi üretir.
Ancak, bu verileri analiz etmek için verimli otomatik süreçlerin eksikliği vardır. Burada, bu BCAM'lerle elde edilen PET CT görüntülerinin oldukça tekdüze olduğunu ve bulut tabanlı otomatik segmentasyon aracı tarafından gruplar halinde analiz edilebileceğini ve bu da muazzam miktarda zaman tasarrufu sağladığını gösteriyoruz. Ayrıca, otomatik analizin manuel yöntemimizle tutarlı olarak tatmin edici sonuçlar verdiğini gösterebiliriz.
Bir sonraki adımımız, bu otomatik aracın performansının daha kapsamlı bir değerlendirmesini yapmaktır. SAS tarafından oluşturulan ROI sonuçlarını, çeşitli deneyim seviyelerine sahip insan analistler tarafından üretilenlerle yakından karşılaştıracağız ve in vivo görüntüleme sonuçlarını temel gerçek ex vivo kantitasyonla karşılaştıracağız. Başlamak için, üst kısmı 90 derece yukarı çevrilmiş olarak ön klipse uygun boyutta vücuda uygun bir hayvan kalıbı veya BCAM takın.
Anestezi uygulanmış bir fareyi tabana yerleştirin ve uzuvlarını uzatın. Ardından, farenin sırt tarafına yavaşça bir BCAM tümör enjeksiyon şablonu kalıbı yerleştirin. Bir işaretleyici kullanarak istenen kesme konumunda dikkatli bir şekilde geçici bir dairesel referans işareti oluşturun.
İşaret yapıldıktan sonra şablon kalıbını çıkarın. Geçici işaretleri referans olarak kullanarak, bir çadır oluşturmak için cildi parmaklarınızla veya forsepsle kaldırın. İğneyi yavaşça yerleştirin ve tümör hücresi süspansiyonunu istenen yere deri altından enjekte edin.
İğneyi biyolojik tehlike içeren bir kesici alet kabına atın. Steril bir şırıngaya dikkatlice hedef bir flor 18 FDG dozu hazırlayın. Şırıngayı doz kalibratörü kuyusu haznesine yerleştirin ve radyoaktif dozu ölçmek için kepçeyi indirin.
Doz kalibratöründen stabil bir okuma alın. Tarih ve saati kaydedin. Enjeksiyondan önce fare ağırlığını kaydedin.
Fareyi uygun bir sınırlayıcıya aktarın ve kuyruk damarını bulun. Daha sonra dozu bilinçli fareye enjekte edin ve enjeksiyon süresini kaydedin. Şırıngayı bir kenara koyun ve gazlı bez kullanarak kuyruktaki fazla kanı temizleyin.
Ardından fareyi sınırlayıcıdan çıkarın ve uygun yuvaya geri yerleştirin. Şimdi şırıngayı doz kalibratör odasına geri yerleştirin ve doz hesaplaması için kalan okumaları kaydedin. Kalan aktivite okumasının tarihini ve saatini kaydedin.
Flor 18 FDG'nin intravenöz uygulamasından 60 dakika sonra, anestezi uygulanmış fareyi vücut ağırlığına göre uygun büyüklükte bir BCAM'a aktarın. Fareyi yavaşça ensesinden alın. Kuyruğu kuyruk yuvasına yerleştirin ve BCAM'ın altına sarın.
Ardından kuyruğu kuyruk platformuna yerleştirin ve bantla sabitleyin. Omurganın düz olduğundan emin olun ve BCAM'ı nazikçe kapatın. Dört uzvunu da BCAM pençe platformlarına yerleştirin ve gerektiği gibi bantla sabitleyin.
Ardından, önce ön ucu yerleştirerek BCAM'ı görüntüleme yatağı mekiğine nazikçe oturtun. Bir tık sesi G8 mekiğine sabitlendiğini gösterene kadar BCAM'ın arkasını aşağı doğru itin. Başlamak için G8 PET edinme yazılımını açın.
Farenin ağırlığı, tarihi, saati, başlangıç doz miktarı, enjeksiyon ayrıntıları ve kalıntı aktivite okumaları dahil olmak üzere çalışma ayrıntılarını yazılıma girin. Ardından, fare ile görüntüleme yatağı mekiğini tarayıcı açıklığına yerleştirin. Uygun PET CT parametrelerini seçin ve görüntüleme verilerini alın.
Alım tamamlandıktan sonra, mekiği fare ile çıkarın ve yuvaya yerleştirin. G8 mekiğinden serbest bırakmak için BCAM dikey sekmesine basın. BCAM'ı fare ile yavaşça yukarı çekin ve çıkarın.
BCAM'ın üst kısmını yukarı çevirmek ve açmak için iki tutma tırnağına basın. Ardından fareyi yavaşça çıkarın. Görüntü analizi için app.invivo'da oturum açın.
AX'a gidin ve bir proje oluşturun. Ardından, pencerenin sağ üst köşesindeki kırmızı Yükle sekmesine tıklayın. Çalışmada kullanılan görüntüleme sistemini ve raportörü seçin.
Ardından görüntüleme verilerinin bulunduğu klasörü seçin. Proje klasörü içindeki Ek Açıklama sekmesine gidin. Konu adı, cinsiyet, BCAM boyutu, konu ağırlığı, kohort adı, zaman noktası ve enjekte edilen doz değeri dahil olmak üzere ilgili tarama bilgilerini eklemek için Açıklama Ekle'ye tıklayın.
Veri analizi için proje, grup ve bireysel konu seviyelerinde gezinmek için taramalara tıklayın. Ardından Analiz Et'i seçin. Proje altındaki analiz şeridi penceresinin sağ üst kısmında artı simgesini seçin ve Organ Olasılık MAP'i veya OPM ROI'yi seçin.
Doğrusal regresyon analizi, beynin otomatik OPM analizi ile manuel yöntemler arasında en yüksek korelasyona sahip olduğunu ve yüksek doğruluğu yansıttığını gösterdi. Sağ böbrek ve kalp, manuel analize kıyasla OPM analizinde orta derecede bir korelasyon gösterdi. Dalak, muhtemelen manuel segmentasyondaki zorluklar nedeniyle en düşük korelasyona sahipti ve bu da yakındaki yumuşak dokulardan ayırt etmeyi zorlaştırıyordu.
