우리는 이러한 신체 적합 금형을 사용하여 마우스 in vivo PET 이미징을 수행하는 방법과 관련 데이터 분석 플랫폼을 탐색하는 방법을 확실히 보여줍니다. 이를 통해 모든 동물을 여러 시점에 걸쳐 동일한 물리적 위치에 유지할 수 있으며, 자동화를 통해 다운스트림 이미지 분석을 크게 가속화하고 표준화할 수 있습니다. In vivo 이미징은 기존의 비이미징 실험에 비해 여러 가지 이점을 제공합니다.
예를 들어, 이미징을 통해 전체 피험자에 대한 약물 분포 및 약리학적 효과에 대한 체계적이고 전체적인 평가가 가능하므로 표적 부위의 효능을 모니터링할 수 있을 뿐만 아니라 예상치 못한 외부 활동도 감지할 수 있습니다. 재현성이 높고 정량적인 데이터를 얻는 것은 약물 개발에 매우 중요합니다. 예를 들어, PET 기반 장 분포 연구는 화합물의 동역학, 조직 축적 및 표적 결합에 대한 방대한 양의 귀중한 정보를 생성합니다.
그러나 이러한 데이터를 분석하기 위한 효율적인 자동화 프로세스가 부족합니다. 여기에서 우리는 이러한 BCAM으로 획득한 PET CT 이미지가 매우 균일하고 클라우드 기반 자동 세분화 도구를 통해 배치로 분석할 수 있어 엄청난 시간을 절약할 수 있음을 보여줍니다. 또한 자동화된 분석이 수동 방법과 일치하는 만족스러운 결과를 산출했음을 보여줄 수 있습니다.
다음 단계는 이 자동화된 도구의 성능을 보다 포괄적으로 평가하는 것입니다. SAS를 통해 생성된 ROI 결과를 다양한 경험 수준을 가진 인간 분석가가 생성한 결과와 면밀히 비교하고, in vivo 이미징 결과를 실측 ex vivo 정량화와 비교합니다. 시작하려면 상단이 90도 위로 뒤집힌 상태에서 적절한 크기의 신체 순응 동물 곰팡이(BCAM)를 프리클립에 부착합니다.
마취된 마우스를 바닥에 놓고 팔다리를 뻗습니다. 그런 다음 BCAM 종양 주입 템플릿 몰드를 마우스의 등쪽에 부드럽게 놓습니다. 마커를 사용하여 원하는 컷아웃 위치에 임시 원형 참조 마크를 조심스럽게 만듭니다.
표시가 만들어지면 템플릿 틀을 제거합니다. 임시 표시를 참조로 사용하여 손가락이나 집게로 피부를 들어 올려 텐트를 만듭니다. 바늘을 천천히 삽입하고 종양 세포 현탁액을 원하는 위치에 피하로 주입합니다.
바늘을 생물학적 위험 날카로운 물건 용기에 버리십시오. 멸균 주사기에 불소 18 FDG의 목표 용량을 조심스럽게 끌어냅니다. 주사기를 선량 교정기 웰 챔버에 넣고 디퍼를 내려 방사량 선량을 측정합니다.
용량 검사기에서 안정적인 판독값을 취하십시오. 날짜와 시간을 기록합니다. 주입하기 전에 마우스 무게를 기록하십시오.
마우스를 적절한 구속기로 옮기고 꼬리 정맥을 찾습니다. 그런 다음 의식이 있는 마우스에 복용량을 주입하고 주입 시간을 기록합니다. 주사기를 한쪽에 놓고 거즈를 사용하여 꼬리에서 여분의 혈액을 청소합니다.
그런 다음 고정장치에서 마우스를 제거하고 적절한 하우징에 다시 놓습니다. 이제 주사기를 투여 교정기 챔버에 다시 놓고 투여 계산을 위해 잔여 판독값을 기록합니다. 잔류 활동 판독값의 날짜와 시간을 기록합니다.
불소 18 FDG의 정맥 투여 후 60분 후, 마취된 마우스를 체중에 따라 적절한 크기의 BCAM으로 옮깁니다. 목덜미를 잡고 마우스를 부드럽게 들어 올립니다. 테일을 테일 슬롯에 삽입하고 BCAM 아래에 감쌉니다.
그런 다음 꼬리를 꼬리 플랫폼에 놓고 테이프로 고정합니다. 척추가 곧게 펴졌는지 확인하고 BCAM을 부드럽게 닫습니다. 네 개의 팔다리를 모두 BCAM 발 플랫폼에 놓고 필요에 따라 테이프로 고정합니다.
그런 다음 프론트 엔드를 먼저 삽입하여 BCAM을 이미징 베드 셔틀에 부드럽게 끼웁니다. 딸깍 소리가 G8 셔틀에 고정되었음을 나타낼 때까지 BCAM 뒷면을 아래로 누릅니다. 먼저 G8 PET 획득 소프트웨어를 엽니다.
마우스의 무게, 날짜, 시간, 초기 투여량, 주입 세부 정보 및 잔류 활동 판독값을 포함한 연구 세부 정보를 소프트웨어에 입력합니다. 그런 다음 마우스가 있는 이미징 베드 셔틀을 스캐너 구멍에 삽입합니다. 적절한 PET CT 매개변수를 선택하고 영상 데이터를 획득합니다.
획득이 완료되면 마우스로 셔틀을 제거하고 도크에 삽입합니다. BCAM 수직 탭을 눌러 G8 셔틀에서 분리합니다. 마우스로 BCAM을 부드럽게 위로 당겨 제거합니다.
두 개의 고정 탭을 눌러 위로 뒤집어 BCAM의 상단을 엽니다. 그런 다음 마우스를 부드럽게 제거합니다. 이미지 분석을 위해 app.invivo에 로그인하십시오.
ax를 만들고 프로젝트를 만듭니다. 그런 다음 창 오른쪽 상단에 있는 빨간색 업로드 탭을 클릭합니다. 연구에 사용된 이미징 시스템과 리포터를 선택합니다.
그런 다음 이미징 데이터가 있는 폴더를 선택합니다. 프로젝트 폴더 내의 Annotation 탭으로 이동합니다. Annotate를 클릭하여 피험자 이름, 성별, BCAM 크기, 피험자 체중, 코호트 이름, 시점 및 주입된 투여량을 포함한 관련 스캔 정보를 추가합니다.
데이터 분석을 위해 스캔을 클릭하여 프로젝트, 그룹 및 개별 주제 수준을 탐색합니다. 그런 다음, 분석을 선택합니다. 프로젝트 아래의 분석 리본 창 오른쪽 위에서 더하기 기호를 선택하고 장기 확률 MAP 또는 OPM ROI를 선택합니다.
선형 회귀 분석은 뇌가 자동화된 OPM 분석과 수동 방법 간에 가장 높은 상관관계를 보였으며 높은 정확도를 반영하는 것으로 나타났습니다. 우측 신장과 심장은 수동 분석에 비해 OPM 분석에서 중간 정도의 상관관계를 보였다. 비장은 상관관계가 가장 낮았는데, 이는 수동 분할의 어려움으로 인해 근처의 연조직과 구별하기 어려웠기 때문일 수 있습니다.
