Islak eğirme esaslı kalıplama işlemi doku rejenerasyonu için jelatin

Bu protokol, tek bir lif şeridinden herhangi bir tercih edilen tıbbi uygulama için kullanılabilecek çeşitli şeritler e bir malzeme geliştirmek için ıslak iplik temel bir kavram geliştirir. Bu teknik basit, ucuz ve ilgi malzemeleri için protein kaynağı içine doğal polimerlerin özelleştirme için sentetik polimerler eklenmesi gerektirmez. Bu teknik, merkezi veya periferik sinir sistemi tedavisi, kan damarı replasmanı veya doğrudan idrar yolu rekonstrüksiyonu gibi soğuk tedavi öldürmek için biyomalzeme gelişimine genişletilebilir.

Bu yöntem doku nöralizasyon veya rejeneratif tıp için bir strateji olarak da dahil olmak üzere tıbbi uygulama için tasarlanmıştır. Bu teknik yeni başlayanlar tarafından kolayca uygulanabilir. Birkaç kalıp tekrarı sonra, çözümün kalitesi her zaman en iyi oluşumu korumak için kontrol edilmelidir unutmayın.

Islak dönen tüpü oluşturmak için, ilk üç saniye için taze hazırlanmış jelatin çözeltisi içine üç saniye için üç çeyrek inç periferik venöz kateter tarafından 24 göstergesi batırın, bir dakika için taze hazırlanmış aseton çözeltisi daldırma izledi. Bu adımları 20 kez tekrarlayın. Son aseton daldırma sonra, oda sıcaklığında beş dakika boyunca kalıplı tüp kuru izin, ve dikkatle oda sıcaklığında bir gecede başlık altı kuluçka için% 2.5 polikaprolakton diklorometan çözeltisi ile cam pastörette içine kateter jelatin tüp aktarmak için bir hemostat kullanın.

Ertesi sabah, jelatini ultraviyole ışık altında iki saat sterilize edin ve tüpü %75 etanol ile daldırın. Sonra artık etanol kaldırmak için kök hücre orta ile tüp iki kez yıkayın. Hücre kültürü ile jelatin tüp yetiştirmek için, 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksit 3,5 dakika kuluçka için% 0.25 Trypsin-EDTA bir mililitre ile bir kültür şişesi insan yağ kök hücrelerinin supinate sonu değiştirin.

Hücreler ayrıldığında, bir mililitre fetal sığır serumu ile reaksiyonu durdurun ve hücre süspansiyonuna mikrosantrifüj tüpüne aktarın. Santrifüj ile hücreleri toplamak ve kök hücre orta bir mililitre pelet resuspend. Daha sonra jelatin tüpünü, üç mililitre kök hücre lilitre içeren altı kuyulukbir plakanın bir kuyuya yerleştirin.

Hücreleri sayarak sonra, tohum dört kez 10 dördüncü insan yağ kök hücreleri hücre kültürü kuluçka iki hafta kuluçka için tüp içine. Bir kadın sekiz haftalık Sprague Dawley sıçanda parmak kıskacına yanıt eksikliği ile sedasyon uygun düzeyde doğruladıktan sonra, trapezius bölgeden saç tıraş ve povison-iyot çözeltisi ile maruz kalan cilt sterilize. Cerrahi sitenin bakteriyel kontaminasyonunu azaltmak için steril cerrahi perdeler ile sıçan kapağı ve sığ yapmak için cerrahi makas kullanın, iki santimetre uzunluğunda deri kesi.

Fasya ve kas arasındaki tabaka içine doğrudan jelatin tüp yerleştirin ve yara kapatmak için bir naylon dikiş kullanın. Sonra povison-iyot çözeltisi ile kesi sterilize. Ketoprofen ve sefazolin bir intramüsküler enjeksiyon yoluyla sıçan neden ve yedi gün boyunca aseptik koşullar altında hayvan korumak.

Bu kullanıcı dostu ıslak iplik kavramı lifler ve tüpler içine jelatin geliştirmek için kullanılabilir. Elektron mikroskobu tarayarak jelatin tüpünün morfolojik gözlemleri, 200 mikrometreden daha büyük iç çapı ve yaklaşık 20 mikrometre kalınlığında çok düzgün olmayan bir yüzey ortaya koymaktadır. Nöral hücre belirteç ekspresyonu için bir insan yağ kök hücre kültürü jelatin tüp boyama hücrelerin nüfuz ve jelatin tüp etek ve yapışmak ve nöral progenitor hücreleri içine ayırt düşündüren birden fazla tespit çekirdekleri ile birlikte marker için olumlu bir boyama göstermektedir.

Jelatin tüpün fasya tabakasına yerleştirilmesi, yerel dokuda kızarıklık, şişlik veya diğer iltihap belirtileri nin görülmemeve tüpün iyi gelişmiş bağ dokusu ile çevrili olması nedeniyle güvenlik ve biyouyumluluk olduğunu doğrular. Bu prosedürü iki nokta bir çalışırken, her çözeltide belirli kaplama süresi içinde kalıbın daldırma sağlanması çok hassas bir tüp formu oluşturmak için önemlidir. Bu prosedürütaki deneylerimiz, doku rejenerasyon stratejisi için biyomalzemelerin sonucunu doğru bir şekilde araştırmak için insan hastalığının hayvan modelini kullanmaktadır.

Bu teknik, geliştirildikten sonra, araştırmacıların basit korelasyonlu doğa polimerleri geliştirmelerinin önünü, karar verilen bir tıbbi uygulama için her türlü malzemeye dönüştürmektedir. Normal kullanım koşulu altında, polikaprolakson diklorotan çözeltisi minimal çevresel tehlike sunmak için kabul edilir, ancak uygun bir biyogüvenlik kabine bu kimyasal ile herhangi bir adım gerçekleştirmek için unutmayın.