조직 재생에 대 한 젤라틴의 젖은 회전-기반 성형 과정

이 프로토콜은 단일 섬유 스트립에서 원하는 의료 응용 프로그램에 사용할 수있는 다양한 스트립으로 재료를 개발하기 위해 습식 방적의 기본 개념을 향상시킵니다. 이 기술은 간단하고 저렴하며, 관심있는 물질을 위한 단백질 자원에 천연 폴리머의 사용자 정의를 위한 합성 폴리머를 첨가할 필요가 없습니다. 이 기술은 중추 또는 말초 신경계 치료, 혈관 교체 또는 직접 요로 재건과 같은 감기 치료를 죽이는 생체 물질 적 개발로 확장 될 수 있습니다.

이 방법은 조직 신경화 또는 재생 의학을 위한 전략으로 포함하여 의학 응용을 위한 것입니다. 이 기술은 초보자가 쉽게 구현 할 수 있습니다. 여러 성형 반복 후 최적의 형성을 유지하기 위해 솔루션의 품질을 항상 확인해야 합니다.

젖은 회전 튜브를 형성하기 위해 먼저 24 게이지를 3 분기 인치 주변 정맥 카테터를 갓 준비 된 젤라틴 용액에 3 초 동안 담근 다음 갓 준비 된 아세톤 솔루션에 1 분 동안 침지합니다. 이 단계를 20번 반복합니다. 마지막 아세톤 침지 후, 성형 튜브를 실온에서 5분 동안 건조하게 하고, 하층 온도에서 2.5%의 폴리카폴락톤 디클로로메탄 용액을 사용하여 카테터에서 젤라틴 튜브를 유리 파스퇴르 파이펫으로 조심스럽게 옮기도록 한다.

다음 아침, 75%에탄올에 튜브를 잠깐 잠정적으로 잠정적으로 잠정하기 전에 자외선 아래에서 2 시간 동안 젤라틴을 살균하십시오. 그런 다음 줄기 세포 배지로 튜브를 두 번 세척하여 잔류 에탄올을 제거합니다. 세포 배양으로 젤라틴 튜브를 육성하기 위해 배양 플라스크에서 인간 지방 줄기 세포의 수피네이트 끝을 0.25%의 1밀리리터로 대체하여 섭씨 37도및 이산화탄소 5%에서 3.5분 배양에 대한 트립신-EDTA를 1밀리리터로 대체한다.

세포가 분리되면 태아 소 혈청의 1 밀리리터로 반응을 체포하고 세포 현탁액을 미세 원심 분리 튜브로 옮기십시오. 원심분리에 의해 세포를 수집하고 줄기 세포 매체의 1 밀리리터에서 펠릿을 재보힙. 그런 다음 젤라틴 튜브를 줄기 세포 배지 3 밀리리터를 포함하는 6웰 플레이트의 1웰에 놓습니다.

세포를 세은 후, 세포 배양 배양기에서 2주 동안 튜브내로 줄기세포를 4번 10번 시드한다. 8주된 스프라그 Dawley 쥐의 발가락 핀치에 대한 반응 부족으로 적절한 수준의 침착을 확인한 후, 트라페지오 부위에서 모발을 면도하고 포비도네 요오드 용액으로 노출된 피부를 살균한다. 수술 부위의 세균 오염을 줄이기 위해 멸균 수술 커튼으로 쥐를 덮고 수술 가위를 사용하여 얕고 2센티미터 긴 피부 절개를 합니다.

젤라틴 튜브를 근막과 근육 사이의 층에 직접 넣고 나일론 봉합사를 사용하여 상처를 닫습니다. 그런 다음 포비도오드 요오드 용액으로 절개를 살균합니다. 케토프로펜과 세파졸린의 근육 내 주입을 통해 쥐를 유도하고 7 일 동안 무균 조건하에서 동물을 유지합니다.

이 사용자 친화적 인 습식 방사 개념은 섬유와 튜브로 젤라틴을 개발하는 데 사용할 수 있습니다. 전자 현미경 을 스캔하여 젤라틴 튜브의 형태학적 관측은 200 마이크로미터 의 내부 직경과 약 20 마이크로미터의 두께로 매우 매끄러운 표면을 나타낸다. 신경세포 마커 발현을 위한 인간 지방 줄기 세포 배양 젤라틴 튜브의 염색은 세포가 젤라틴 튜브에 침투및 부착하고 신경 전구 세포로 분화할 수 있음을 시사하는 다중 검출된 핵과 함께 마커에 대한 긍정적인 염색을 보여준다.

젤라틴 튜브를 근막층으로 이식하면 적색, 붓기 또는 기타 염증 증상이 국소 조직 내에서 관찰되지 않고 잘 발달된 결합 조직으로 둘러싸여 있기 때문에 그 안전성 및 생체 적합성을 확인합니다. 이 절차를 2점 1로 시도하는 동안 각 솔루션의 특정 코팅 시간에 금형의 침지를 보장하는 것은 정확한 튜브 형태를 구축하는 데 매우 중요합니다. 이 절차에 따라, 우리의 실험은 조직 재생 전략에 대한 생체 재료의 결과를 정확하게 조사하기 위해 수행 될 수 있습니다 인간 질환의 동물 모델을 사용합니다.

개발 후, 이 기술은 결정된 의료 응용을 위한 물질의 어떤 모형으로 간단한 상관 관계 특성 폴리머를 개발하는 연구원을 위한 도로를 포장했습니다. 정상적인 사용 조건하에서 폴리카폴톤 디클로로메탄 용액은 최소한의 환경 적 위험을 제시하는 것으로 간주되지만 적절한 생물 안전 캐비닛에서이 화학 물질로 어떤 단계를 수행하는 것을 잊지 마십시오.