Yazarlar moleküler Sitoloji tesis ve hayvan tesisin Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi tarafından sağlanan teknik hizmetleri kabul etmiş oluyorsunuz. Bu eser NIH hibe CA157686 (R.J. Wong) ve P30 CA008748 tarafından desteklenmiştir (Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi destek hibe).

Tüm yordamları hayvan konuları ile kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi tarafından kabul edildi.
1. kanser hücrelerinin hazırlanması
<ol><li>Hasat alt Konfluent Panc02-H7 hücrelerle % 0.25 tripsin 37 ° C'de 5 min için 15 mL santrifüj tüpü hücrelerde toplamak. Not: Hücreleri yaklaşık 12 x %10 80 confluency ve 4 mL tripsin şişesi başına6 hücre içeren T-225 şişesi yetiştirilen / şişesi kullanılır.</li>
	<li>Senaryo Özeti 5 dk. hücre resuspending tarafından hücreleri (yukarı ve aşağı iki kez pipetting tarafından) 1 mL PBS cips ve süspansiyon 1.5 mL microcentrifuge tüp buz üzerinde aktarım yıkama için 4 ° C'de 900 g x santrifüj kapasitesi.</li>
	<li>Tekrar hücreleri 5 min için 4 ° C'de 900 g x santrifüj kapasitesi ve süpernatant Pelet bozmadan atın. Buzda pelleted hücreler enjeksiyon kadar tutmak.</li>
</ol>2. fare ve cerrahi hazırlanması
Not: Bu çalışmada 8-hafta-yaşlı, erkek ve dişi C57BL/6J fareler kullanılır. Ameliyat koşulları kuruluşumuzun IACUC kuralları izler. Aletleri sterilize, cerrahi çalışma yüzeyi dezenfekte, hayvan dezenfekte ve cerrah steril eldiven giyer.
<ol><li>Ameliyattan önce gününde % 2 isoflurane kullanarak fare anestezi ve dorsal tarafta femur uzunluğu boyunca kürk ince bir jilet ya da kimyasal saç kaldırma aracı ile kaldır.</li>
	<li>Ameliyat günü, %2 isofluorane bir indüksiyon odasında kullanarak fare anestezi. Anesthetization bir ayak çimdik uyarıcı ve yanıt alınamaması onaylayın.</li>
	<li>Veteriner merhem göz kuruluğu anestezi altında önlemek için uygulayın.</li>
	<li>Ventral yan imzalat fareyi getirin ve yavaşça her bacak bacak enjekte edilir hafif gerginlik yaratmak için hipoalerjenik bant ile güvenli. Anestezi hassas Buharlaştırıcı ve burun konisi yolu ile teslim isoflurane kullanılarak korunur.</li>
	<li>Enjeksiyon yeri ile Betadine, sonra tekrar % 70 alkol ile temizleyin. Bu işlemi iki kez daha tekrarlayın. Hiçbir gevşek saç cerrahi sahada kalır emin olun.</li>
	<li>Küçük makas yaklaşık 2 mm aşağıda ve uyluk kemiği paralel ile 1 cm kesi yapmak. Cilt yanal kas altında ortaya çıkarmak için Forseps ile geri çek.</li>
	<li>Siyatik sinir derin gluteus maximus ve pazı kemiği kasları çalıştırır. Bu iki kaslar Fasial uçağa boyunca küçük makasla ayırmak ve siyatik sinir altında bulaşmasına neden. Künt diseksiyon kullanarak çevresindeki kas sinir ücretsiz.</li>
	<li>Kanser hücrelerinin (yaklaşık 50.000 hücreleri) 3 μL Pelet 10 μL enjektör çizin. Not: Alternatif olarak, bir denetim olarak PBS 3 μL çizin.</li>
	<li>Destek için enjeksiyon noktasında sinir altında küçük bir metal spatula yerleştirin. Diseksiyon mikroskop ile görselleştirme altında sinir sinir üzerine ekleme mümkün olduğunca paralel olarak iğne tutarak metal üssüne iğne takın. Sinir arkadan ponksiyon vermemek dikkatli olun. Sinir bu süreci boyunca mümkün olduğu kadar kullanımı en aza indirmek.</li>
	<li>Yavaş yavaş sinir üzerinde 5 enjekte s. Bir ampul enjeksiyon alanında bir oluşumu iyi bir enjeksiyon gösterir. Sonra yerde 3 için iğneyi bırak iğneyi yavaşça kaldırmadan önce s. İğne 3 için yerinde tutmak s geri dışarı sinir hücrelerinin en aza indirir. Not: Enjeksiyon distal sinir veya spinal kord doğru gerçekleştirilebilir. Deneyler bir dizi içinde tutarlı kalması önemlidir. Hücreleri dışında dökmek, hayvan deney analize dahil edilmemesini. Deneyim ile bu olaylar çok nadirdir.</li>
	<li>Sinir özgün konumuna geri dönün. Üstteki kaslı sinir kapsar. Fareler uygun analjezi ile tedavi ve Cilt 5-0 naylon sütür ile kapatın.</li>
	<li>Tam anesteziden uyanır kadar fare kurtarma sırasında gözlem için temiz bir kafeste tek başına koyun. Not: Tam kendine gelmek hayvan için 5-15 dakika sürer. Sternal recumbency korumak için yeterli kendine geldi kadar hayvan katılımsız sol değil. Hayvan tamamen iyileşti kadar diğer hayvanlar şirkete döndürülür. Bundan sonra kurtarma en az bir kez her 24 saat 72 h için değerlendirin.</li>
</ol>3. siyatik sinir çıkarma
<ol><li>Ameliyat günü #7, CO2fareler ötenazi. Fare ventral onun yanına koyun ve iğne kullanarak distal ekstremitelerde stabilize.</li>
	<li>Enjekte bacak ve gövde dorsal tarafta cilt kaldırın.</li>
	<li>Künt diseksiyon kullanarak, siyatik sinir kas için derin ortaya çıkarmak.</li>
	<li>Sinir kursları Ilium ve sakrum arasında. Sinir omurilik bölge erişimi için iki kemik ayırın. Siyatik sinir olduğu dar alanda kapalı makas yerleştir ve makas fareyi basılı tutarak açın. Hassas ve diseksiyonu sırasında siyatik sinir bütünlüğünü korumak.</li>
	<li>Siyatik sinir klemple sonuna femur ve proksimale omurilik dikkatle incelemek.</li>
	<li>Not: Son derece kırılgan ve gerilim altında bilgileri veya güçlü işleme eğilimli baskına sinirler vardır.</li>
	<li>Sinir distal sonuna keserek hasat. Bitişik doku boşaltma sırasında sinir çýkýntýdan. Sonunda proksimal, omurga üzerinden onun çıkış için mümkün olduğunca yakın sinir kesti.</li>
	<li>Kayıt sonra bir Vernier Kaliper kullanarak işgalinin brüt uzunluğu. Bu makroskopik tahmin sadece göstergesidir.</li>
</ol>4. işlem ve miktar cesareti
<ol><li>Disseke sinir Ekim bileşik gömün. Yapmak emin sinirler boyuna yerleştirmek ve mümkün olduğunca kalıp alt gibi dümdüz.</li>
	<li>Kasette mektup P ve ö. işaretleyerek sinir proksimal ve distal tarafı belirtmek</li>
	<li>Hemen kesitli değil, gömülü sinirler kuru buz, üstüne koyun. Örnek-80 ° C'de birkaç hafta için korunmuş.</li>
	<li>Cryostat microtome cam slaytlara 5 mikron kalınlık ve yer bölümleri de kullanarak bölümü örnekleri. Mümkünse, slayt 2 sinir bölüm uygun. Proksimal sinir tarafında gösterir.</li>
	<li>H & E12boyama kullanarak slaytları leke.</li>
	<li>Dijital olarak lekeli sinir bölümleri ile yüksek çözünürlüklü dijital verileri sağlayan bir slayt inceden inceden inceye gözden geçirmek.</li>
	<li>Görüntüleme yazılımı kullanarak ölçmek işgalinin uzunluk ölçü mesafe düğmesini tıklatarak, işgal, ya da diğer parametreleri istenen. İstila uzunluğunu iyi bir tahmin için birden çok bölüm (2-4) aynı sinir kullanın.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Liebig, C., Ayala, G., Wilks, J. A., Berger, D. H., Albo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perineural+invasion+in+cancer.">Perineural invasion in cancer.</a> Cancer. 115 (15), 3379-3391 (2009).</li><li>Bapat, A. A., Hostetter, G., Von Hoff, D. D., Han, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perineural+invasion+and+associated+pain+in+pancreatic+cancer.">Perineural invasion and associated pain in pancreatic cancer.</a> Nat Rev Cancer. 11 (10), 695-707 (2011).</li><li>Deborde, S., Wong, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+Schwann+cells+facilitate+cancer+progression+in+nerves.">How Schwann cells facilitate cancer progression in nerves.</a> Cell Mol Life Sci. 341 (177-186), 1236361-1236416 (2017).</li><li>Abiatari, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consensus+transcriptome+signature+of+perineural+invasion+in+pancreatic+carcinoma.">Consensus transcriptome signature of perineural invasion in pancreatic carcinoma.</a> Mol Cancer Ther. 8 (6), 1494-1504 (2009).</li><li>Ayala, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+dorsal+root+ganglia+and+human+prostate+cell+line+interaction:+redefining+perineural+invasion+in+prostate+cancer.">In vitro dorsal root ganglia and human prostate cell line interaction: redefining perineural invasion in prostate cancer.</a> Prostate. 49 (3), 213-223 (2001).</li><li>Gil, Z., Cavel, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+regulation+of+pancreatic+cancer+cell+invasion+by+peripheral+nerves.">Paracrine regulation of pancreatic cancer cell invasion by peripheral nerves.</a> J Natl Cancer Inst. 102 (2), 107-118 (2010).</li><li>Deborde, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+induce+cancer+cell+dispersion+and+invasion.">Schwann cells induce cancer cell dispersion and invasion.</a> J Clin Invest. 126 (4), 1538-1554 (2016).</li><li>Pour, P. M., Egami, H., Takiyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+growth+and+metastases+of+induced+pancreatic+cancer+in+relation+to+the+prognosis+and+its+clinical+implications.">Patterns of growth and metastases of induced pancreatic cancer in relation to the prognosis and its clinical implications.</a> Gastroenterology. 100 (2), 529-536 (1991).</li><li>Eibl, G., Reber, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+xenograft+nude+mouse+model+for+perineural+invasion+and+recurrence+in+pancreatic+cancer.">A xenograft nude mouse model for perineural invasion and recurrence in pancreatic cancer.</a> Pancreas. 31 (3), 258-262 (2005).</li><li>Stopczynski, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroplastic+changes+occur+early+in+the+development+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma.">Neuroplastic changes occur early in the development of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Cancer Res. 74 (6), 1718-1727 (2014).</li><li>Gil, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve-sparing+therapy+with+oncolytic+herpes+virus+for+cancers+with+neural+invasion.">Nerve-sparing therapy with oncolytic herpes virus for cancers with neural invasion.</a> Clin Cancer Res. 13 (21), 6479-6485 (2007).</li><li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections.">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2014 (6), 655-658 (2014).</li><li>Cremer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+the+N-CAM+gene+in+mice+results+in+size+reduction+of+the+olfactory+bulb+and+deficits+in+spatial+learning.">Inactivation of the N-CAM gene in mice results in size reduction of the olfactory bulb and deficits in spatial learning.</a> Nature. 367 (6462), 455-459 (1994).</li><li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemokine+(CCL2-CCR2)+signaling+axis+mediates+perineural+invasion.">The chemokine (CCL2-CCR2) signaling axis mediates perineural invasion.</a> Mol Cancer Res. 13 (2), 380-390 (2015).</li><li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFR&#945;1+released+by+nerves+enhances+cancer+cell+perineural+invasion+through+GDNF-RET+signaling.">GFR&#945;1 released by nerves enhances cancer cell perineural invasion through GDNF-RET signaling.</a> P Natl Acad Sci USA. , 02944 (2014).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu protokol için pankreas kanseri hücreleri tarafından siyatik sinir işgalinin miktar sağlar perineural işgalinin bir vivo içinde fare modeli açıklar. Bu model sinir işgalinin moleküler mekanizmaları çalışma sağlar. Bu tekniği kullanarak başarılı deneyler üç kritik adımı sürecinde dikkatli bir yaklaşım gerektirir: 1) enjeksiyon (Adım 2.7, 2.8), kanser hücrelerinin baskına sinirler (Adım 3.4) 2) çıkarımı ve 3) hasat sinirler (Adım 4.1) işlenmesi.
En...

Sinirleri uyarır kanser büyüme ve geçiş1,2,3belirli tümör microenvironment oluştururlar. Perineural işgali (PNI) içinde ve çevresinde sinirler hangi kanser hücreleri istila işlemidir. Sinirler boyunca kökenli siteleri uzak kanseri istila genişletir beri metastaz benzersiz bir yol olarak düşünülebilir. PNI % 22'i % 1001,2' ye kadar değişen bir insidans ile pankreas, prostat, baş ve boyun, tükürük, servikal ve kolorektal kanserler gibi çeşitli kanser türleri bulunur. PNI ağrı ile ilişkili olan ve kötü prognoz ve kötü hayatta kalma oranları1,2ile karşılıklı olarak ilişkilendirir.
Modelleri perineural işgalinin geliştirmeye, hücresel ve moleküler mekanizmaları bu sürecin aydınlatmak için ve aday terapötik ajanlar PNI azaltmak için test etmek esastır. Kanser hücrelerinin sinir explants4, dorsal kök ganglions5,6,7veya belirli hücreleri ile ortak kültür vitro kanserleri ve sinirler arasındaki etkileşimler eğitim yöntemleri şunlardır sinir7microenvironment gibi Schwann hücreleri. Vivo yaklaşımlar, ancak, daha fizyolojik ilgili, hangi kanser indüklenen nakledilen veya kanser fare modelleri kullanımını içerir ve tüm sinir microenvironment için muhasebe avantajına sahip. Orthotopic pankreas veya Prostat Kanser, PNI modelleri bildirilen8,9,10 olmuştur ve PNI insidansı kaydedilebilir, ancak bu organlar sinirler küçük boyutu nedeniyle, görmek zordur Tüm sinir ve bu nedenle PNI kapsamını ölçmek için. Biz burada tarif hangi kanser hücreleri-basit bir cerrahi prosedür11farelerin siyatik sinir içine enjekte edilir PNI vivo içinde modelin modelidir. Heterotopik transplantasyon sinir omurilik doğru içinde işgal etti. Sinir işgali sitesinden enjeksiyon spinal kord uzunluğu, yanı sıra sinir içinde kanser hacmi ölçülecek. Önemlisi, baskına sinir deneyleri mikroskobik ve moleküler analizleri de dahil olmak üzere çeşitli için toplanabilir. Kanser hücrelerinin çeşitli test ve genetik olarak değiştirilmiş veya belirli bileşikler ile tedavi ana bilgisayar fare de kullanılabilir olur. Bu güçlü tahlil kanser hücreleri ve ana bilgisayar microenvironment için PNI mekanizmaları içine soruşturma için değişiklik yapılmasına izin verir.

<table><tbody><tr><td>Mouse</td><td></td><td></td><td>Number and age variable depending on experimental needs</td></tr><tr><td>Cell culture media (PBS, Trypsin, and DMEM+10% FBS)</td><td>Any</td><td></td><td>Steps 1.1, 1.2, 1.3.</td></tr><tr><td>Conical centrifuge tube, 50 mL</td><td>Falcon</td><td>352098</td><td>Step 1.1</td></tr><tr><td>Microcentrifuge tube 1.5 mL</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C-S</td><td>Step 1.2</td></tr><tr><td>Electric razor</td><td>WAHL</td><td>9962</td><td>Step 2.1. Can be substituted with commercial hair removal agent</td></tr><tr><td>Isoflurane, 250 mL</td><td>Baxter</td><td>1001936060</td><td>Step 2.2</td></tr><tr><td>Hypoallergenic surgical tape</td><td>3M Blenderm</td><td>70200419342</td><td>Step 2.3</td></tr><tr><td>Betadine Swapsticks</td><td>PDI</td><td>SKU 41350</td><td>Step 2.4</td></tr><tr><td>Webcol Alcohol Preps</td><td>Covidien</td><td>5110</td><td>Step 2.4</td></tr><tr><td>Sterile surgical tools (scissors and forceps)</td><td></td><td></td><td>Steps 2.4, 2.5, 3.3, 3.4, 3.5</td></tr><tr><td>10 &amp;mu;L Hamilton syringe</td><td>Hamilton</td><td>80308</td><td>Steps 2.7, 2.8</td></tr><tr><td>Steel Micro spatula</td><td>Fisher Scientific</td><td>S50823</td><td>Step 2.7</td></tr><tr><td>Dissecting microscope</td><td></td><td></td><td>Step 2.7</td></tr><tr><td>Bupivacine, 1 g</td><td>Enzo Life Sciences</td><td>BML-NA139-0001</td><td>Step 2.9. Reconstitute to 0.5%</td></tr><tr><td>5-0 Nylon suture</td><td>Ethicon</td><td>698H</td><td>Step 2.9</td></tr><tr><td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td><td>VWR</td><td>25608-930</td><td>Step 4.1</td></tr><tr><td>Tissue-Tek Cryomold Molds</td><td>VWR</td><td>25608-916</td><td>Step 4.1</td></tr></tbody></table>

an in vivo murine sciatic nerve model of perineural invasion

Kanser hücrelerinin hangi kanser hücreleri çoğalırlar ve sinir microenvironment göç perineural işgali (PNI) olarak adlandırılan bir süreç sinirleri istila. İstila bu tür kanser türleri çeşitli tarafından sergilenen ve çok sık pankreas kanseri bulundu. Sinir lifleri fare pankreas içinde mikroskobik boyutunu PNI çalışmanın orthotopic fare modellerinde zor işler. Burada, nerede biz syngeneic pankreas kanseri hücre kültürünü Panc02-H7 fare siyatik sinir enjekte PNI, heterotopik vivo içinde modeli açıklar. Bu modelde, siyatik sinir imzalat farelerin maruz ve kanseri hücreleri enjekte. Kanser hücrelerinin sinirler omurilik enjeksiyon noktasından proksimale doğru istila. Baskına siyatik sinirleri sonra ayıklanır ve donmuş kesit için OCT ile işlenebilir. H & E ve bu bölümleri ayirt boyama işgali ve değişiklikleri her iki derece miktar protein ifadede izin verir. Bu model çok yönlü verilen PNI üzerinde çalışmalar çeşitli uygulanabilir. Farklı genetik değişiklikler ve/veya kanser hücrelerinin farklı türleri ile fare kullanarak PNI hücresel ve moleküler mekanizmaları incelenmesi ve farklı kanser türleri sağlar. Ayrıca, tedavi edici ajanların etkileri sinir işgali üzerinde bu farelerde tedavi uygulayarak okudu.

Bu yöntem pankreas kanseri hücreleri cerrahi implantasyon ölçülebilir sinir işgalinin vivo içinde model oluşturmak için fare siyatik sinir içine açıklar. Siyatik sinir anatomik konumunu ve Enjeksiyon Makinası şekil 1 gösterir. Şekil 2 bir çıplak fare iki siyatik sinirleri gösterir. Damarına enjekte PBS (solda) MiaPaCa-2 kanser hücreleri (sağda) enjekte bir sinir ile karşılaştırıldığında. Ka...

Watch this Scientific Journal Video about An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion at JoVE.com

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

Vivo fare siyatik sinir modeli Perineural işgali

Biz bir vivo içinde fare modeli perineural işgalinin siyatik sinir syngeneic pankreas kanseri hücreleri enjekte edilerek tanımlamak. Model ölçüde sinir işgalinin miktar için sağlar ve araştırma perineural işgalinin hücresel ve moleküler mekanizmaları destekler.

Cancer cells invade nerves through a process termed perineural invasion (PNI), in which cancer cells proliferate and migrate in the nerve ...

an-in-vivo-murine-sciatic-nerve-model-of-perineural-invasion

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Cancer Research

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

12.0K Görüntüleme.  Memorial Sloan Kettering Cancer Center. Biz bir vivo içinde fare modeli perineural işgalinin siyatik sinir syngeneic pankreas kanseri hücreleri enjekte edilerek tanımlamak. Model ölçüde sinir işgalinin miktar için sağlar ve araştırma perineural işgalinin hücresel ve moleküler mekanizmaları destekler.

Video: An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

Coculture Assays to Study Macrophage and Microglia Stimulation of Glioblastoma Invasion

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased understanding of the molecular events that give rise to glioblastomas, this cancer still remains highly refractory to conventional treatment. Surgical resection of high grade brain tumors is rarely complete due to the highly infiltrative nature of glioblastoma cells. Therapeutic approaches which attenuate glioblastoma cell invasion therefore is an attractive option. Our laboratory and others have shown that tumor associated macrophages and microglia (resident brain macrophages) strongly stimulate glioblastoma invasion. The protocol described in this paper is used to model glioblastoma-macrophage/microglia interaction using in vitro culture assays. This approach can greatly facilitate the development and/or discovery of drugs that disrupt the communication with the macrophages that enables this malignant behavior. We have established two robust coculture invasion assays where microglia/macrophages stimulate glioma cell invasion by 5 - 10 fold. Glioblastoma cells labelled with a fluorescent marker or constitutively expressing a fluorescent protein are plated without and with macrophages/microglia on matrix-coated polycarbonate chamber inserts or embedded in a three dimensional matrix. Cell invasion is assessed by using fluorescent microscopy to image and count only invasive cells on the underside of the filter. Using these assays, several pharmacological inhibitors (JNJ-28312141, PLX3397, Gefitinib, and Semapimod), have been identified which block macrophage/microglia stimulated glioblastoma invasion.

Understanding the malignant behavior of cancer requires creating accurate models of how tumor cells interact with components of the tumor microenvironment, such as macrophages. Here we describe two methods to study glioblastoma cell interaction with tumor associated macrophages and microglia where the effect on glioblastoma invasion is assessed.

Coculture Tahliller Glioblastoma Invasion Makrofaj ve Mikroglia Stimülasyon Eğitim için

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased ...

Kanser Araştırmaları

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, radiation, and chemotherapy, locoregional recurrences and distant metastases occur at higher rates, and overall survival is decreased by 40% compared to HNSCC without PNI. In vitro studies of the pathways involved in HNSCC PNI have historically been challenging given the lack of a consistent, reproducible assay. Described here is the adaptation of the dorsal root ganglion (DRG) assay for the examination of PNI in HNSCC. In this model, DRG are harvested from the spinal column of a sacrificed nude mouse and placed within a semisolid matrix. Over the subsequent days, neurites are generated and grow in a radial pattern from the cell bodies of the DRG. HNSCC cell lines are then placed peripherally around the matrix and invade preferentially along the neurites toward the DRG. This method allows for rapid evaluation of multiple treatment conditions, with very high assay success rates and reproducibility.

Perineural invasion (PNI) is a common feature of head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC), conferring lower survival rates. Its mechanisms are poorly understood. Utilizing neurites generated from murine dorsal root ganglia confined to a semisolid matrix, the pathways involved in the PNI of HNSCC cell lines can be investigated.

Baş ve Boyun Skuamöz Hücre Karsinomu içinde perinöral invazyon İçin Bir Model

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. Here we describe a method using targeted peripheral irradiation to induce fatigue-like behavior in mice. With appropriate shielding, the irradiation targets the lower abdominal/pelvic region of the mouse, sparing the brain, in an effort to model radiation treatment received by individuals with pelvic cancers. We deliver an irradiation dose that is sufficient to induce fatigue-like behavior in mice, measured by voluntary wheel-running activity (VWRA), without causing obvious morbidity. Since wheel running is a normal, voluntary behavior in mice, its use should have little confounding effect on other behavioral tests or biological measures. Hence, wheel running can be used as a feasible outcome measure in understanding the behavioral and biological correlates of fatigue. CRF is a complex condition with frequent comorbidities, and likely has causes related both to cancer and its various treatments. The methods described in this paper are useful for investigating radiation-induced changes that contribute to the development of CRF and, more generally, to explore the biological networks that can explain the development and persistence of a peripherally-triggered but centrally-driven behavior like fatigue.

We describe a method using targeted peripheral irradiation to induce fatigue-like behavior in mice. The selected non-lethal irradiation dose leads to a week-long reduction in voluntary wheel-running activity.

Periferik Radyasyonla Bağlı Yorgunluk A Fare Modeli

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model

One way that solid tumors disseminate is through neural invasion. This route is well-known in cancers of the head and neck, prostate, and pancreas. These neurotropic cancer cells have a unique ability to migrate unidirectionally along nerves towards the central nervous system (CNS). The dorsal root ganglia (DRG)/cancer cell model is a three dimensional (3D) in vitro model frequently used for studying the interaction between neural stroma and cancer cells. In this model, mouse or human cancer cell lines are grown in ECM adjacent to preparations of freshly dissociated cultured DRG. In this article, the DRG isolation protocol from mice, and implantation in petri dishes for co-culturing with pancreatic cancer cells are demonstrated. Five days after implantation, the cancer cells made contact with the DRG neurites. Later, these cells formed bridgeheads to facilitate more extensive polarized, neurotropic migration of cancer cells.

In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model

This video article shows the use of the dorsal root ganglia (DRG)/cancer cell model in pancreatic ductal adenocarcinoma.

Sırt kök ganglion Modeli: Kanserli Sinir Invasion Vitro Modelleme

One way that solid tumors disseminate is through neural invasion. This route is well-known in cancers of the head and neck, prostate, and pancreas. These ...

Nörobilim

The Chick Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Assess Perineural Invasion in Head and Neck Cancer

Perineural invasion is a phenotype in which cancer surrounds or invades the nerves. It is associated with poor clinical outcome for head and neck squamous cell carcinoma and other cancers. Mechanistic studies have shown that the molecular crosstalk between nerves and tumor cells occurs prior to physical interaction. There are only a few in vivo models to study perineural invasion, especially to investigate early progression, before physical nerve-tumor interactions occur. The chick chorioallantoic membrane model has been used to study cancer invasion, because the basement membrane of the chorionic epithelium mimics that of human epithelial tissue. Here we repurposed the chick chorioallantoic membrane model to investigate perineural invasion, grafting rat dorsal root ganglia and human head and neck squamous cell carcinoma cells onto the chorionic epithelium. We have demonstrated how this model can be useful to evaluate the ability of cancer cells to invade neural tissue in vivo.&#160;

The Chick Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Assess Perineural Invasion in Head and Neck Cancer

Perineural invasion is an aggressive phenotype for head and neck squamous cell carcinomas and other tumors. The chick chorioallantoic membrane model has been used for studying angiogenesis, cancer invasion, and metastasis. Here we demonstrate how this model can be utilized to assess perineural invasion in vivo.

Kafa ve boyun kanseri Perinevral Invazyonu değerlendirmek için Chick Chorioallantoik membran In vivo model

Perineural invasion is a phenotype in which cancer surrounds or invades the nerves. It is associated with poor clinical outcome for head and neck squamous ...

Tıp

Modified Spared Nerve Injury Surgery Model of Neuropathic Pain in Mice

Spared nerve injury (SNI) is an animal model that mimics the cardinal symptoms of peripheral nerve injury for studying the molecular and cellular mechanism of neuropathic pain in mice and rats. Currently, there are two types of SNI model, one to cut and ligate the common peroneal and the tibial nerves with intact sural nerve, which is defined as SNIs in this study, and another to cut and ligate the common peroneal and the sural nerves with intact tibial nerve, which is defined as SNIt in this study. Because the sural nerve is purely sensory whereas the tibial nerve contains both motor and sensory fibers, the SNIt model has much less motor deficit than the SNIs model. In the traditional SNIt mouse model, the common peroneal and the sural nerves are cut and ligated separately. Here a modified SNIt surgery method is described to damage both common peroneal and sural nerves with only one ligation and one cut with a shorter procedure time, which is easier to perform and reduces the potential risk of stretching the sciatic or tibial nerves, and produces similar mechanical hypersensitivity as the traditional SNIt model.

<meta charset="utf8"></head><body>Farelerde Nöropatik Ağrının Modifiye Edilmiş Korunmuş Sinir Yaralanması Cerrahisi Modeli

The modified surgery is a simplified method for mouse or rat spared nerve injury model that requires only one ligation and one cut to injure both common peroneal and sural nerves.

Farelerde Nöropatik Ağrının Modifiye Edilmiş Korunmuş Sinir Yaralanması Cerrahisi Modeli

Spared nerve injury (SNI) is an animal model that mimics the cardinal symptoms of peripheral nerve injury for studying the molecular and cellular ...

Establishing a Three-dimensional Co-culture Model of Murine Dorsal Root Ganglia and Cancer Cells: An In Vitro Model to Study Perineural Cancer Cell Invasion

Source: Huyett, P. et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/video/55043" target="_blank">A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma.</a> J. Vis. Exp. (2017)
In this video, we demonstrate the procedure for developing an in vitro perineural cancer cell invasion model by co-culturing mouse dorsal root ganglion and neurotropic cancer cells. The model can be utilized to conduct cancer assays, producing rapid and reproducible results.

Murin Dorsal Kök Gangliyonları ve Kanser Hücrelerinin Üç Boyutlu Ko-kültür Modelinin Oluşturulması: Perinöral Kanser Hücre İstilasını İncelemek İçin Bir İn Vitro Model

Source: Huyett, P. et al. A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma. J. Vis. Exp. (2017)
In this video, we demonstrate the ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Baş ve Boyun Kanseri

Analizler ve teknikler

Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion or PNI: Extraction and Processing of Sciatic Nerve to Understand Invasion by Cancer Cells

Source: Deborde, S. et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/video/56857" target="_blank">An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion.</a> J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we describe the procedure to establish a murine model of perineural invasion by injecting cancer cells into the sciatic nerve. The model can help gain an understanding of the magnitude of nerve invasion for subsequent assessment of anti-cancer drugs.

Perinöral İnvazyon veya PNI'nin Murin Siyatik Sinir Modeli: Kanser Hücrelerinin İstilasını Anlamak için Siyatik Sinirin Ekstraksiyonu ve İşlenmesi

Source: Deborde, S. et al. An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion. J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we describe the procedure to ...

Sinir Sistemi Kanserleri

Ex vivo çalışmalar

Murine Perineural Invasion Model: Generating an In Vivo Model to Simulate Perineural Invasion in Mouse Sciatic Nerve

Source: Deborde, S. et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/video/56857" target="_blank">An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion.</a> J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we develop an in vivo mouse model for perineural invasion by injecting pancreatic cancer cells into the sciatic nerve. This model helps quantify the extent of invasion and study the interactions between cancer cells and nerves.

Murin Perineural İnvazyon Modeli: Fare Siyatik Sinirinde Perinöral İnvazyonu Simüle Etmek için İn Vivo Model Oluşturma

Source: Deborde, S. et al. An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion. J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we develop an in vivo mouse ...

Vivo fare siyatik sinir modeli Perineural işgali

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Coculture Tahliller Glioblastoma Invasion Makrofaj ve Mikroglia Stimülasyon Eğitim için

Baş ve Boyun Skuamöz Hücre Karsinomu içinde perinöral invazyon İçin Bir Model

Periferik Radyasyonla Bağlı Yorgunluk A Fare Modeli

Sırt kök ganglion Modeli: Kanserli Sinir Invasion Vitro Modelleme

Kafa ve boyun kanseri Perinevral Invazyonu değerlendirmek için Chick Chorioallantoik membran In vivo model

Farelerde Nöropatik Ağrının Modifiye Edilmiş Korunmuş Sinir Yaralanması Cerrahisi Modeli

Farelerde Nöropatik Ağrının Modifiye Edilmiş Korunmuş Sinir Yaralanması Cerrahisi Modeli

Murin Dorsal Kök Gangliyonları ve Kanser Hücrelerinin Üç Boyutlu Ko-kültür Modelinin Oluşturulması: Perinöral Kanser Hücre İstilasını İncelemek İçin Bir İn Vitro Model

Perinöral İnvazyon veya PNI'nin Murin Siyatik Sinir Modeli: Kanser Hücrelerinin İstilasını Anlamak için Siyatik Sinirin Ekstraksiyonu ve İşlenmesi

Murin Perineural İnvazyon Modeli: Fare Siyatik Sinirinde Perinöral İnvazyonu Simüle Etmek için İn Vivo Model Oluşturma