Name: the madagascar hissing cockroach as an alternative non-mammalian animal model to investigate virulence, pathogenesis, and drug efficacy
Uploaded: 2017-11-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Madagascar Hissing Cockroach as an Alternative Non-mammalian Animal Model to Investigate Virulence, Pathogenesis, and Drug Efficacy at JoVE.com

J. Chua, N.A. Fisher, ö. DeShazer ve sabah Friedlander el yazması açıklanan yordamları tasarlanmıştır. J. Chua, N.A. Fisher, S.D. Falcinelli ve D. DeShazer deneyler yapılır. J. Chua el yazması yazdı.
Yazarlar Joshua J. W. Roan, Nora D. Doyle, Nicholas R. Carter ve Steven A. Tobery mükemmel teknik destek için ve David P. Fetterer ve Steven J. Kern istatistiksel analiz için teşekkür ederiz.
İş tarafından savunma tehdit azaltma ajansı önerisi #CBCALL12-THRB1-1-0270 A.M.F ve #CBS destek verdi. MEDBIO.02.10.Rd.034 D.D. için
Görüşleri, Yorumlar, sonuç ve öneriler yazarlar vardır ve mutlaka ABD Ordusu tarafından onaylanan değil.
Bu yayın içeriğini sayısı veya Savunma Bakanlığı politikaları yansıtmayabilir ne ticari adlarını, ticari ürünler, söz etmez veya kuruluşların ABD hükümeti tarafından onaylandığı anlamına.

1. Tıslayan hamamböceği koloni korumak için hazırlıklar
<ol><li>Tıslayan hamamböceği yaşamak için kümesler hazırlayın. İç duvarları kafes kafes dışına tırmanma ve kaçan Tıslayan hamamböceği önlemek için en yakın çevresi için vazelin, yaklaşık 20 ila 30 mm genişliğinde, ince bir tabaka uygulayın. Not: hamamböceği tıslama büyük bir yer var, yeterli yüksekliğini ve kapaklarını kapsayıcılar çeşitli barındırılıyor olabilir. Fare kafesleri kullanın (~ 43 cm x 23 cm x 20 cm). 37 ° C için mukadder kafesleri için vazelin geçerli değildir.</li>
	<li>Baş aşağı doğal utangaç böcekler için saklanacak bir yer sağlamak için kafesin içine yerleştirilen bir karton yumurta kartonu içerir. Karton yumurta kartonu polistren köpük plastik sindirim önlemek için yapılmış bir ile yerine değil.</li>
	<li>Odada mevcut yataklar kullanılıyorsa daha kolay temizlik için ve yeni taranmış perileri görünürlüğünü artırmak için sağlamaz.</li>
	<li>~ % 20 ham protein bileşimi içeren kuru köpek maması edinin. Kalitesiz köpek maması blender veya mutfak robotu ile eziyet ve 4 ° C'de depolayın</li>
	<li>Birkaç sığ yemekler ve akvaryum taş veya bir sünger yiyecek ve su elde etmek. Not: Custome Petri yemekler vardır.</li>
</ol>2. Tıslayan hamamböceği bakım ve yetiştirme
<ol><li>Hamam böcekleri (~ 5 cm)--dan a ticari doğurmak tıslama outbred Madagaskar elde edilir. Bu protokol için kullanılan Gromphadorhina laevigatatürdür. Tıslayan hamamböceği aldıktan hemen sonra içeren nakliye kutusunu açmak.</li>
	<li>Hayvanlar alınmasında kişisel koruyucu ekipman kullanım için uygun kurumsal yönergeleri izleyin. Not: kalın tek kullanımlık eldiven Tıslayan hamamböceği tarsal pençeleri keskin olduğu gibi Hamam böcekleri işlemek için kullanın.</li>
	<li>İlâ 75 büyük Tıslayan hamamböceği transfer (> 3 cm) büyük kafes başına. Yeni taranmış ve daha küçük perileri transfer (< 3 cm) için ayrı bir kafes. Not: önemli ölçüde daha fazla 75 büyük tutmak tıslama hamamböceği fare kafesi başına sağlık koloninin bozulan için neden olabilir ve ayrıca ölümle sonuçlanabilir.</li>
	<li>Kirli beyaz renkli, yavaşça olan yeni molted Hamam böceği, idare ve sıkma kaçının. Alternatif olarak, exoskeleton karartmak ve tutmadan önce sertleşmesine izin verir. Not: Akarlar, Gromphadorholaelaps schaeferi, sık sık--dan doğurmak aldıktan sonra Tıslayan hamamböceği eşlik kaldırmak için gerekli değildir. Faydalı akarları Tıslayan hamamböceği temiz tutmak ve insanlar için zararsızdır.</li>
	<li>Tıslayan hamamböceği ile zemin kuru köpek maması sığ bir tabak içinde bir veya iki kez bir hafta ver. Tıslayan hamamböceği yeterli gıda sonraki besleme kadar olması için köpek besin içerir. Islak ve küflü olmuştur herhangi bir gıda atmak.</li>
	<li>Köpek maması ek olarak kesilmiş meyve ve sebzeler, elma, patates veya marul, sığ bir tabak gibi sağlar. Küflü veya çürümüş gıda atmak.</li>
	<li>İçme suyu sığ bir tabak içinde bir veya iki kez bir hafta sağlar ancak yemek içinde belgili tanımlık kafes dökülmeyi önlemek için fazla değil. Küçük akvaryum taş veya bir sünger bir iniş pisti için küçük perileri sağlamak için çanak yerleştirin. Ters Ozmos su, varsa kullanır.</li>
	<li>Sıcaklık 21 ° C 30 ° C'ye kadar karanlıkta hamamböceği tıslama tutmak Deneme daha düşük sıcaklıkta (~ 21 ° C) ~ 2 ay ıslah ve gebelik azaltmak hedef alan büyük Tıslayan hamamböceği tutun. Buna ek olarak, perileri (28 ° C ile 30 ° C) daha yüksek sıcaklıklarda büyüme hızlandırmak için devam edin. Not: kafes, karanlık oda sıcaklığında (21 ° C) kabine tutun.</li>
	<li>Nem bir kuluçka makinesine hamamböceği tutulur tıslama Eğer ayrı bir tavada su ekleyerek sağlar.</li>
	<li>Kafes düzenli olarak veya aktarma tarafından 2-3 haftada bir temiz kafes Hamamböceklerine tıslama kuru dışkı scooping tarafından temiz. Kafesin dibinde kuru tutun. Aşırı su birikir ve kafesin dibinde dışkı ile karıştırın izni varsa kafes hemen temizle.</li>
</ol>3. Hamam böceği hazırlık deneme için
<ol><li>Bir kafeste Tıslayan hamamböceği uygun sayıda 37 ° C oksijen kuluçka 1 ila 3 hafta önce deney calıştıkları aktarın. Enjeksiyon için denetim grubu içerir. Bu calıştıkları dönem deneme sırasında sıcaklık şok kaçınmak için önemlidir.</li>
	<li>Vazelin jöle daha yüksek sıcaklık erir çünkü 37 ° C için mukadder kafesleri için geçerli değildir.</li>
	<li>Tıslayan hamamböceği her 1-2 gün gıda ve su yerine ve kafes temizlemek için kontrol edin.</li>
	<li>Açık tek kullanımlık plastik saklama kapları Tıslayan hamamböceği deneme sırasında gruplandırma için kapakları ile elde edilir. Havalandırma için kapağı veya kapsayıcı bir çivi ile tarafında delikler ve çekiç. Not: Kullanım vidalı kapak konteyner üzerinde ek Biyogüvenlik seviye 3 ayarı kaplarda kap. Snap kap kapsayıcılar kasetle, gerekirse takviye.</li>
	<li>Enjeksiyon gününde, 6-12 acclimatized Tıslayan hamamböceği konteyner, başına seks tarafından eşit dağıtım sağlanması gruplara dağıtabilir ve kitle vücut.</li>
	<li>Bireysel Tıslayan hamamböceği cinsiyetini belirlemek. Erkek ve kadın bunların eksikliği bulunan boynuzları çıkıntı tarafından seks belirler.</li>
	<li>Bireysel Tıslayan hamamböceği tartın. Tıslayan hamamböceği denge üzerinde ağırlığında kolaylaştırmak için şeytan iki tartmak tekne içinde alın. Not: deneyler arasında tutarlılık sağlamak için 4-8 g ağırlığıyla Tıslayan hamamböceği kullanın. Ancak, enfeksiyon sonra hayatta kalma hiçbir fark bulundu (1,5-2 g) küçük ve büyük (6-8 g) Tıslayan hamamböceği arasında. İlaç araştırmaları için Tıslayan hamamböceği ~ 5 g bir ağırlık ile vücut başına daha tutarlı bir ilaç konsantrasyonu elde etmek için kullanmak kitle.</li>
	<li>Bir su yemek yerine, yüksek su içeriği meyve veya bir dilim elma ya da patates gibi sebzeler içerir. Çürük yiyecek atmak. Konteyner kuru tutmak için ek su sağlar.</li>
	<li>Tıslayan hamamböceği 37 ° C'ye kadar enjeksiyonları dönün.</li>
</ol>4. bakteri kültürü ve hazırlıkları
Not: Bu protokol için kullanılan bakteriyel türdür B. mallei, B. pseudomallei ve B. thailandensis. Sınıf III biyolojik Emanet dolapları bir biyogüvenlik düzeyi (BSL) yer alan 3 laboratuvar veya B. mallei ve B. pseudomallei ile tüm manipülasyonlar sınıf II içinde gerçekleştirilmesi gerekir. Uygulamaları gerçekleştirin B. thailandensis benzer biyolojik güvenlik ile dolapları ya BSL2 ya da BSL3 laboratuar bulunmaktadır. BSL3 iş için kurumsal standart işletim prosedürü izleyin. Bakteri işlerken kişisel koruyucu ekipman kullanım için kurumsal yönergeleri izleyin.
<ol><li>En az 3 gün önce enfeksiyon Burkholderia ana bir tabak hazırla. Luria-Bertani (Lennox) (LB) kullanın agar B. pseudomallei veya B. thailandensis ve kullanım LB agar B. malleiiçin % 4 gliserol ile desteklenmiştir. -80 ° C'de depolanan bir % 25 gliserol hisse senedi bakterilerden çizgi Not: Her zaman doğrudan donmuş gliserol stoktan ana plaka çizgi; bakteri seri geçişini önlemek dan plaka için plaka bu azaltılmış virülans neden olabilir gibi.</li>
	<li>10-20 mL LB suyu B. thailandensis B. pseudomallei ve sömürgeler ana plaka ile aşılamak. Benzer şekilde B. malleiiçin % 4 gliserol ile desteklenmiş LB suyu aşılamak.</li>
	<li>175-250 devirde 37 ° c ~ 18 h için suyu kültür sallamak.</li>
	<li>2-3 mL 5000 x g 10 dk de kültürünün santrifüj kapasitesi.</li>
	<li>Süpernatant atın ve bakteriyel Pelet steril fosfat tamponlu tuz (PBS, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2PO4, 1.8 mM KH2PO4, pH 7,4) resuspend.</li>
	<li>Ölçü vasıl 600 bir Absorbans 0,5, optik bir yoğunluğu (OD) sağlamak için PBS ile bakteri seyreltik bir Spektrofotometre nm.</li>
	<li>Seri olarak bakteri panolarında içinde PBS üzerinden başlangıç OD 0,5 oranında seyreltin. Bu süspansiyonlar enfeksiyon için kullanın.</li>
	<li>Birim inoculum (CFU) tarafından seri seyreltme şekillendirme ve 100 µL aliquots agar medya, kaplama koloni belirlemek. Plakalar için 24-48 h 37 ° C'de kuluçkaya.</li>
</ol>5. uyuşturucu hazırlıkları
<ol><li>Uyuşturucu vücut verilecek uygun miktarını belirlemek kitle. Tıslayan hamamböceği verilen CLQ doz 50 mg/kg olan standart doz memeliler, dayanıyordu/gün.</li>
	<li>Resuspend veya araç ilgi uyuşturucu oranında seyreltin. Örneğin, PBS CLQ 12 mg/mL konsantrasyonu oranında seyreltin. Bu konsantrasyon ilaç cilt 25 µL hamamböceği enjekte tıslama ~ 6 g için 300 µg sağlar.</li>
	<li>Gerekirse, uyuşturucu çözüm 0,22 µm şırınga filtreden geçirilerek sterilize.</li>
	<li>4 ° C'de uyuşturucu çözüm kullanmak kadar saklamak. Uyuşturucu çözüm en az 21 ° c (oda sıcaklığında) enjeksiyonları önce sıcak.</li>
</ol>6. enjektör montajı
<ol><li>İşaretçiyi istediğiniz birime (25 µL) ayarı vida tekrarlayan bir pipet üzerinde döndürerek ayarlayın.</li>
	<li>Tekrarlayan pipet yayın bar içe doğru itin ve itici dışa doğru çekin. Tekrarlayan pipet şimdi dolu bir şırınga karşılamak hazırdır. Not: bir denge üzerinde atılır su miktarını ölçerek tekrarlayan pipet tarafından atılır birim kalibre.</li>
	<li>1 mL şırınga ya bakteri ya da uyuşturucu içeren süspansiyon ile doldurun.</li>
	<li>Şırınga steril bir 26 veya 27 G ½ inç x (veya daha kısa) iğne ekleyin.</li>
	<li>Hava kabarcıkları üst şamandıra ve % 10 çamaşır suyu ile dolu bir kap içine baloncuklar ve bazı süspansiyon çıkarmak için şırınga dokunun.</li>
	<li>Yukarı dönük olacak şekilde iğne eğim ile şırınga tekrarlayan pipet şırınga klibin üzerine oturtun.</li>
	<li>Yayın çubuğunu dışa doğru çekin ve sıkıca şırınga pistonu itici karşı gelene kadar % 10 çamaşır suyu ile dolu bir kap içine boş enjeksiyonları gerçekleştirmek için dağıtıcı düğmesine basın.</li>
	<li>Sıvı şırınga dışarı atılır sağlamak için 1 veya 2 ek boş enjeksiyonları gerçekleştirin. Tekrarlayan pipet enjeksiyonlar için hazırdır.</li>
</ol>7. Hamam böceği enjeksiyonları
<ol><li>Sınıf II ve sınıf III biyolojik Emanet bir BSL2 kabin tüm hamamböceği enjeksiyonları gerçekleştirmek veya BSL3 ayarı kurumsal kullanarak kişisel koruyucu ekipman önerilir.</li>
	<li>Tıslayan hamamböceği ile temas gelebilir temiz çalışma yüzeyleri kabin emniyet. % 10 çamaşır suyu % 70 etanol tarafından takip artık çamaşır suyu kaldırmak için kullanın. Hava yüzey kuru izin.</li>
	<li>Bir elinizle Tıslayan hamamböceği onun yanında tut. Öyle ki enjeksiyon sırasında geri tepme değiştiremiyor Tıslayan hamamböceği hareketsiz. Böylece karın terga arasında Kutanöz membranlar maruz Tıslayan hamamböceği biraz kır.</li>
	<li>İğne bir 0 ° 30 ° açı Tıslayan hamamböceği dorso-ventral orta hat öyle ki diğer elini de tekrarlayan pipet tutun. Kutanöz membran 3rd, 4thveya 5inci tergum posterior ucundan yanındaki delik. Not: Giriş belirtilen açıda Tıslayan hamamböceği içine iğne iğne geçmesi değil ve Tıslayan hamamböceği dışarı çıkmak sağlar. Enjeksiyon yeri çkarlyor malzeme hemolymph ile dolu karın boşluğu içinde bulunur sağlar. Tıslayan hamamböceği holding ve girişim iğneleri canlı bakteri ya da ilaç ile önce su ile enjekte uygulama.</li>
	<li>Sıkıca birimi enjekte için besleme butonuna basın. Yavaşça olarak kullanılan aynı açıda iğne giriş için geri alıyorum.</li>
	<li>Değil henüz enjekte etmiş Tıslayan hamamböceği ayırmak için bir yer ayrı bir kapta enjekte Tıslayan hamamböceği. Dışarı enjeksiyon sitesinden oozed herhangi bir hemolymph yok etmek.</li>
	<li>Aynı şırınga ve iğne kullanarak bir grup içindeki diğer Tıslayan hamamböceği enjekte devam edin. Şırınga pistonu eksik son enjeksiyon dozaj önlemek için varil dibinde ulaşmadan önce enjekte durdurmak.</li>
	<li>Bakteri ve uyuşturucu, olanlar gibi tek bir Tıslayan hamamböceği içinde birden çok enjeksiyonlar için farklı bir tergum Tıslayan hamamböceği dorsal tarafta kenarlarında enjekte. Alternatif olarak, birden çok enjeksiyonları farklı terga (3rd 5inciiçin) adlı enjekte edilerek gerçekleştirin.</li>
	<li>Konteyner kapağı güvenli bir şekilde sabitlenmiş emin olun. Teyp, kapaklı gerekirse güçlendirmek.</li>
	<li>Hamamböceği oksijen 37 ° C kuluçka tıslama kuluçkaya.</li>
</ol>8. kayıt hamamböceği morbidite ve mortalite tıslama
<ol><li>Tüm Tıslayan hamamböceği sınavları sınıf II ve sınıf III biyolojik güvenlik ile kurumsal kabin kişisel koruyucu ekipman önerilen gerçekleştirin. Emniyet dolap yüzeyleri % 70 etanol tarafından takip % 10 çamaşır suyu ile temizleyin. Hava için çalışma alanını kuru izin.</li>
	<li>Tıslayan hamamböceği bir veya iki kez 1-2 hafta tablo (Tablo 1) puanlama morbidite kullanarak günlük bir süre içinde puan.</li>
	<li>Ölü Tıslayan hamamböceği kapsayıcıdan kaldır ve ölüm kaydedin.</li>
	<li>Aşırı nem konteyner alt kısmında birikmiş Eğer temiz bir kapsayıcı Hamamböceklerine tıslama canlı kalan aktarın. Alternatif olarak, tek kullanımlık kağıt havlu aşırı nem silmek için kullanın.</li>
	<li>Çürük yiyecek günlük ve dönüş oksijen 37 ° C kuluçka Hamamböceklerine tıslama değiştirin.</li>
	<li>Çalışma sonunda kalan kurtulan bir biohazard torbaya koyun ve ötenazi yapmak-80 ° C'de dondurmak.</li>
	<li>LD50 belirlemek için veri14 istatistiksel analiz ve hayatta kalmak için Kaplan-Meier ve günlük sırası analizi tarafından. Tüm böcek deneme gibi bazı ölümler kontrol grubunda oluşabilir. Bu ölümlerin böcekler 15doğal ölüm atfedilen. Daha ayrıntılı bilgi için nasıl hesabına ölümlerinin kontrol grubunda, başvuru15bakın.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Sifri, C. D., Ausubel, F. M., Boquet, P., Cossart, P., Normark, S., Rappuoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cellular Microbiology. , 543-563 (2004).</li><li>Silcock, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+your+experiment+really+necessary?.">Is your experiment really necessary?.</a> New Sci. 134 (1817), 32-34 (1992).</li><li>Muller, U., Vogel, P., Alber, G., Schaub, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+innate+immune+system+of+mammals+and+insects.">The innate immune system of mammals and insects.</a> Contrib Microbiol. 15, 21-44 (2008).</li><li>Lavine, M. D., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+hemocytes+and+their+role+in+immunity.">Insect hemocytes and their role in immunity.</a> Insect Biochem Mol Biol. 32 (10), 1295-1309 (2002).</li><li>Bergin, D., Reeves, E. P., Renwick, J., Wientjes, F. B., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+production+in+Galleria+mellonella+hemocytes:+identification+of+proteins+homologous+to+the+NADPH+oxidase+complex+of+human+neutrophils.">Superoxide production in Galleria mellonella hemocytes: identification of proteins homologous to the NADPH oxidase complex of human neutrophils.</a> Infect Immun. 73 (7), 4161-4170 (2005).</li><li>Browne, N., Heelan, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+analysis+of+the+structural+and+functional+similarities+of+insect+hemocytes+and+mammalian+phagocytes.">An analysis of the structural and functional similarities of insect hemocytes and mammalian phagocytes.</a> Virulence. 4 (7), 597-603 (2013).</li><li>Lemaitre, B., Hoffmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+host+defense+of+Drosophila+melanogaster.">The host defense of Drosophila melanogaster.</a> Annu Rev Immunol. 25, 697-743 (2007).</li><li>Mulder, P. G., Shufran, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Madagascar+hissing+cockroaches,+information+and+care.">Madagascar hissing cockroaches, information and care.</a> Oklahoma Cooperative Extension Service Leaflet L-278. , 4 (2016).</li><li>Nelson, M. C., Fraser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sound+production+in+the+cockroach,+Gromphadorhina+portentosa:+Evidence+for+communication+by+hissing.">Sound production in the cockroach, Gromphadorhina portentosa: Evidence for communication by hissing.</a> Behav Ecol Sociobiol. 6 (4), 305-314 (1980).</li><li>Chua, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pH+Alkalinization+by+Chloroquine+Suppresses+Pathogenic+Burkholderia+Type+6+Secretion+System+1+and+Multinucleated+Giant+Cells.">pH Alkalinization by Chloroquine Suppresses Pathogenic Burkholderia Type 6 Secretion System 1 and Multinucleated Giant Cells.</a> Infect Immun. 85 (1), e0058616 (2017).</li><li>Fisher, N. A., Ribot, W. J., Applefeld, W., DeShazer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Madagascar+hissing+cockroach+as+a+novel+surrogate+host+for+Burkholderia+pseudomallei,+B.+mallei+and+B.+thailandensis.">The Madagascar hissing cockroach as a novel surrogate host for Burkholderia pseudomallei, B. mallei and B. thailandensis.</a> BMC Microbiol. 12, 117 (2012).</li><li>Haraga, A., West, T. E., Brittnacher, M. J., Skerrett, S. J., Miller, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burkholderia+thailandensis+as+a+model+system+for+the+study+of+the+virulence-associated+type+III+secretion+system+of+Burkholderia+pseudomallei.">Burkholderia thailandensis as a model system for the study of the virulence-associated type III secretion system of Burkholderia pseudomallei.</a> Infect Immun. 76 (11), 5402-5411 (2008).</li><li>West, T. E., Frevert, C. W., Liggitt, H. D., Skerrett, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalation+of+Burkholderia+thailandensis+results+in+lethal+necrotizing+pneumonia+in+mice:+a+surrogate+model+for+pneumonic+melioidosis.">Inhalation of Burkholderia thailandensis results in lethal necrotizing pneumonia in mice: a surrogate model for pneumonic melioidosis.</a> Trans R Soc Trop Med Hyg. 102 Suppl 1, S119-S126 (2008).</li><li>Finney, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Probit Analysis. , (1971).</li><li>Abbott, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+of+computing+the+effectiveness+of+an+insecticide.">A method of computing the effectiveness of an insecticide.</a> J Am Mosq Control Assoc. 3 (2), 302-303 (1987).</li><li>Schell, M. A., Lipscomb, L., DeShazer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+genomics+and+an+insect+model+rapidly+identify+novel+virulence+genes+of+Burkholderia+mallei.">Comparative genomics and an insect model rapidly identify novel virulence genes of Burkholderia mallei.</a> J Bacteriol. 190 (7), 2306-2313 (2008).</li><li>Wand, M. E., Muller, C. M., Titball, R. W., Michell, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+and+Galleria+mellonella+infection+models+reflect+the+virulence+of+naturally+occurring+isolates+of+B.+pseudomallei,+B.+thailandensis+and+B.+oklahomensis.">Macrophage and Galleria mellonella infection models reflect the virulence of naturally occurring isolates of B. pseudomallei, B. thailandensis and B. oklahomensis.</a> BMC Microbiol. 11 (1), 11 (2011).</li><li>Pilatova, M., Dionne, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burkholderia+thailandensis+is+virulent+in+Drosophila+melanogaster.">Burkholderia thailandensis is virulent in Drosophila melanogaster.</a> PLoS One. 7 (11), e49745 (2012).</li><li>Ramarao, N., Nielsen-Leroux, C., Lereclus, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+Galleria+mellonella+as+a+powerful+infection+model+to+investigate+bacterial+pathogenesis.">The insect Galleria mellonella as a powerful infection model to investigate bacterial pathogenesis.</a> J Vis Exp. (70), e4392 (2012).</li><li>Eklund, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+orange+spotted+cockroach+(Blaptica+dubia,+Serville+1839)+is+a+permissive+experimental+host+for+Francisella+tularensis.">The orange spotted cockroach (Blaptica dubia, Serville 1839) is a permissive experimental host for Francisella tularensis.</a> PeerJ Preprints. 4, e1524v1522 (2016).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

En iyi deneysel koşullar tutarlı süre taahhüdü ama en az gerektiren bir sağlıklı Tıslayan hamamböceği koloni başlayın. Hamamböceği tıslama oldukça uzun bir süre için gidebilirsiniz, ancak (~ hafta) yiyecek ve su, haftalık veya iki haftalık kafes bakım sağlanmalıdır. Bu yiyecek ve su kaynağı kontrol ve kafes kurudur sağlanması içerir. Kuru yaşam koşulları Bakımı calıştıkları ve daha yüksek sıcaklıklarda kuluçka sırasında özellikle önemlidir; Biz daha Tıslayan hamamböceği ?...

Böcekler bakteriyel Patogenez ve doğuştan gelen ana savunma eğitim için alternatif sigara memeli hayvan modeller olarak kullanımı son yıllarda ivme kazanmaktadır. Lojistik, nispeten ucuz maliyet ve alma, işleme ve memeliler göre böcekler için bakım kolaylığı nedeniyle bu. Böcekler araştırma kullanımı ile ilgili hiçbir yasal ilke olduğunu; Amaç tabi değil veya herhangi bir hayvan tarafından belirtilen koşullar Komitesi veya devlet kurumu kullanın. Böcekler gibi vekil hayvan modelleri özellikle virülans faktörleri, ana bilgisayar-patojen etkileşimleri ve değerlendirmeler anti-mikrobiyal ilaç etkinliğinin kapsamlı tarama çalışmaları için mükellef bulunmaktadır. Bunların kullanımı araştırma böylece bazı etik ikilemler hayvan deney 1,2yürütülmesi için doğal üstesinden gelmek için kullanılan memeli sayısını azaltabilirsiniz.
Böcekler ve memeliler 1,3doğuştan gelen bağışıklık sistemi arasında ortak olması yüksek derecede olduğundan böcekler vekil ev sahibi olarak hizmet verebilir. Böcek plasmatocytes ve memeli makrofajlar mikroorganizmaların 4phagocytose. Nötrofil böcek Özgününü hemocyte 5,6' dır. Böcek ve memeli hücreleri hücre içi oksidatif patlama yollar benzer; Reaktif oksijen türleri hem de orthologous p47phox ve p67phox proteinleri 5tarafından üretilmektedir. Toll reseptörleri Toll benzeri reseptörler ve böcek ve memelilerde Interleukin-1 sinyal cascades nehrin aşağısında da oldukça benzer; her ikisi de defensins 7gibi antimikrobiyal peptidler üretiminde neden. Böylece, böcekler metazoans tarafından paylaşılan genel doğuştan gelen bağışıklık mekanizmaları incelemek için yararlı olabilir.
Hamamböceği cins Gromphadorhina, gelen tıslama Madagaskar denilen bir böcek var, genellikle 5-8 cm vade sonunda ulaşan en büyük Hamam böceği türlerinden biridir. Bu sadece Madagaskar adasında için yerel ve kolaylaştırır - tıslayan ses Tıslayan hamamböceği solunum açıklıklar vızıltısı 8denilen havada ihraç etti zaman üreten bir ses ile karakterizedir. Kendine özgü tıslamak hamamböceği Kur ve saldırganlık 9 tıslama arasında sosyal iletişim biçimi olarak hizmet verir ve bir erkek tabiatında rahatsız olduğunda duydum. Hamam böceği tıslama Madagaskar yavaş hareket Amerikan hamamböceği ve diğer kentsel zararlı türler için karşılaştırılır. Bu cins ve bakımı kolaydır; hamile Tıslayan hamamböceği teker teker 20-30 yavru üretebilir. Bir perisi olarak adlandırılan Hamam böceği, 5 ayda cinsel olgunluğa ulaşır tıslama bebek 6 molts geçiren ve 5 vahşi ve esaret 8olabilir yıl yaşamak sonra.
İntrasellüler patojenlerin Burkholderia mallei, B. pseudomalleiile enfeksiyon ve B. thailandensis 10,11. için bir vekil ev sahibi olarak hamamböceği tıslama Madagaskar kullanılan Hamamböceği tıslama içinde bu patojenler virülans Burkholderiaiçin Suriye hamster onların virülans kıyaslama hayvan modeli için karşılaştırıldı. B. pseudomallei ve B. mallei % 50 öldürücü doz (LD50) her iki model 11' benzer bulundu. İlginçtir, B. thailandensis, olmayan kemirgen modelindeki Tıslayan hamamböceği 11' öldürücü olmasına rağmen. Bu fark B. thailandensis enfeksiyon ile ilgili yardımcı programı Tıslayan hamamböceği model vurguluyor; Mutantlar inceltiyorum B. thailandensis daha kolay Tıslayan hamamböceği kemirgen modellerinde çözülebilir. Ayrıca, model organizma için inceltiyorum mutasyonların bu tanımlama B. pseudomallei B. mallei 10,12,ve13, B. thailandensis genellikle kullanılır indirilebilir daha öldürücü akrabaları benzer hedefleri yol.
B. thailandensis karşı Suriye hamster Tıslayan hamamböceği virülans farkı, bu tür 6 salgı sistemi-1 (T6SS-1), gibi kritik virülans faktörleri mutasyonların rağmen hangi inceltiyorum B. mallei içinde ve B. pseudomallei, çoğu benzer şekilde B. thailandensis 11için inceltiyorum. Suriye hamster virülans üzerinde hiçbir etkiye sahip, bireysel T6SS mutantlar (T6SS-2 T6SS-6) B. pseudomalleiiçinde Tıslayan hamamböceği 11' öldürücü kalır bu Tıslayan hamamböceği model daha fazla doğrulanır. Böylece, Tıslayan hamamböceği bir uygun Taşıyıcı hayvan üç Burkholderia türler için modeldir. Son zamanlarda Tıslayan hamamböceği Burkholderia enfeksiyon 10 ve onun toksisite karşı anti-sıtma ilaç klorokin (CLQ) etkinliğini incelemek için bir vekil hayvan modeli olarak kullanılmaktadır.
Burada, tarif biz yetiştirme ve bakım Madagaskar hamamböceği tıslama ve bu böcek üç Burkholderia türleri ile enfekte konusunda ayrıntılı bilgi sağlar. Ayrıca, biz virülans ve Burkholderia enfeksiyonlar ilaç etkinliğini ve bu büyük olasılıkla da benzer çalışmalar diğer bakteriyel patojenler için bir vekil olarak hizmet edebilir ki çalışmaya uygun vekil manken Tıslayan hamamböceği olduğunu göstermektedir.

<table><tbody><tr><td>Madagascar hissing cockroach&lt;br/&gt; &amp;nbsp;&amp;nbsp;&lt;br/&gt; &amp;nbsp;&lt;br/&gt; &amp;nbsp;&lt;br/&gt; &amp;nbsp;</td><td>Carolina Biological Supply Co, Burlington, NC&amp;nbsp;</td><td>143668</td><td></td></tr><tr><td>Kibbles n Bits, any flavor</td><td>Big Heart Pet Brands, San Francisco, CA</td><td>UPC #079100519378</td><td></td></tr><tr><td>Snap on disposable plastic containers or equivalent</td><td>Rubbermaid, Huntersville, NC</td><td>UPC #FG7F71RETCHIL</td><td></td></tr><tr><td>Screw on disposable plastic containers or equivalent</td><td>Rubbermaid, Huntersville, NC</td><td>UPC #FG7J0000TCHIL</td><td></td></tr><tr><td>Tridak STEPPER series repetitive pipette</td><td>Dymax Corporation&lt;br/&gt; www.dymax.com</td><td>T15469</td><td></td></tr><tr><td>Syringe (1 mL)&amp;nbsp;</td><td>Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>Needle (26 or 27G x 1/2)</td><td>Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ</td><td>305109, 305111</td><td></td></tr><tr><td>Chloroquine diphosphate</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>C6628</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline</td><td>Gibco/ Thermo Fisher Scientific, Gaithersburg, MD</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Difco Luria- Bertani (Lennox)</td><td>Becton Dickinson, Sparks, MD</td><td>240230</td><td></td></tr><tr><td>Agar&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>A1296</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>G6279</td><td></td></tr></tbody></table>

the madagascar hissing cockroach as an alternative non-mammalian animal model to investigate virulence, pathogenesis, and drug efficacy

Doğuştan gelen bağışıklık birçok özelliği memelileri ve böcekler arasında korunmuş. Bir böceği, Hamam böceği Gromphadorhina, cins gelen tıslama Madagaskar virülans, ana bilgisayar-patojen etkileşim, doğuştan gelen bağışıklık yanıtı ve ilaç etkinliğinin incelenmesi için alternatif bir hayvan model olarak yararlı olabilir. Ayrıntılar için yetiştirme, bakım ve Tıslayan hamamböceği üreme sağlanır. Biz de nasıl o intrasellüler patojenlerin Burkholderia mallei, B. pseudomallei ve d. thailandensisgibi bakteri ile enfekte göstermektedir. Tıslayan hamamböceği kullanımı ucuz ve araştırma memelilerde kullanımı ile ilgili düzenleme sorunları üstesinden gelir. Buna ek olarak, sonuç Tıslayan hamamböceği model kullanarak bulundu tekrarlanabilir ve memeli modelleri kullanılarak elde benzer. Böylece, Madagaskar Tıslayan hamamböceği hayvan çalışmaları yürüten zaman keşfedilmeyi bir çekici vekil konak temsil eder.

Bu bölümde Madagaskar Tıslayan hamamböceği B. mallei, B. pseudomallei, veya B. thailandensisile enfekte elde sonuçları göstermektedir; sonuçlar virülans, ilaç toksisitesi ve uyuşturucu etkinliği bakteriyel enfeksiyona karşı okumak bu böcek Burkholderia farklı türler için uysal bir hayvan modeli olduğunu gösterir. Daha fazla Tıslayan hamamböceği hayatta zayıflatılmış mutantlarla (Δhcp1) ile wildtype B. pseudomallei K...

Watch this Scientific Journal Video about The Madagascar Hissing Cockroach as an Alternative Non-mammalian Animal Model to Investigate Virulence, Pathogenesis, and Drug Efficacy at JoVE.com

The Madagascar Hissing Cockroach as an Alternative Non-mammalian Animal Model to Investigate Virulence, Pathogenesis, and Drug Efficacy

Biz Madagaskar kullanmak için bir protokol hamamböceği bakteriyel virülans, Patogenez, ilaç zehirlenmesi, ilaç etkinliğini ve doğuştan gelen bağışıklık yanıtı çalışmalar yapmak için alternatif bir non-memeli hayvan model tıslama mevcut.

Hamam böceği virülans, Patogenez ve uyuşturucu etkinliği araştırmak için alternatif bir Non-memeli hayvan Model tıslama Madagaskar

Many aspects of innate immunity are conserved between mammals and insects. An insect, the Madagascar hissing cockroach from the genus Gromphadorhina, can ...

the-madagascar-hissing-cockroach-as-an-alternative-non-mammalian

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

10.9K Görüntüleme.  United States Army Medical Research Institute of Infectious Diseases. Biz Madagaskar kullanmak için bir protokol hamamböceği bakteriyel virülans, Patogenez, ilaç zehirlenmesi, ilaç etkinliğini ve doğuştan gelen bağışıklık yanıtı çalışmalar yapmak için alternatif bir non-memeli hayvan model tıslama mevcut.

Video: The Madagascar Hissing Cockroach as an Alternative Non-mammalian Animal Model to Investigate Virulence, Pathogenesis, and Drug Efficacy

The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

We demonstrate a method using Caenorhabditis elegans as a model host to study microbial interaction. Microbes are introduced via the diet making the intestine the primary location for disease. The nematode intestine structurally and functionally mimics mammalian intestines and is transparent making it amenable to microscopic study of colonization. Here we show that pathogens can cause disease and death. We are able to identify microbial mutants that show altered virulence. Its conserved innate response to biotic stresses makes C. elegans an excellent system to probe facets of host innate immune interactions. We show that hosts with mutations in the dual oxidase gene cannot produce reactive oxygen species and are unable to resist microbial insult. We further demonstrate the versatility of the presented survival assay by showing that it can be used to study the effects of inhibitors of microbial growth. This assay may also be used to discover fungal virulence factors as targets for the development of novel antifungal agents, as well as provide an opportunity to further uncover host-microbe interactions. The design of this assay lends itself well to high throughput whole-genome screens, while the ability to cryo-preserve worms for future use makes it a cost-effective and attractive whole animal model to study.

The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

Here, we present the nematode Caenorhabditis elegans as a versatile host model to study microbial interaction.

Nematot Caenorhabditis Elegans - konak-mikrop etkileşimleri çalışmaya çok yönlü Vivo içinde manken

We demonstrate a method using Caenorhabditis elegans as a model host to study microbial interaction. Microbes are introduced via the diet making the ...

Genetik

Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs

Traditionally, hamsters are experimentally inoculated in the snout or the footpad. However in these sites an ulcer not always occurs, measurement of lesion size is a hard procedure and animals show difficulty to eat, breathe and move because of the lesion. In order to optimize the hamster model for cutaneous leishmaniasis, young adult male and female golden hamsters (Mesocricetus auratus) were injected intradermally at the dorsal skin with 1 to 1.5 x l07 promastigotes of Leishmania species and progression of subsequent lesions were evaluated for up to 16 weeks post infection. The golden hamster was selected because it is considered the adequate bio-model to evaluate drugs against Leishmania as they are susceptible to infection by different species. Cutaneous infection of hamsters results in chronic but controlled lesions, and a clinical evolution with signs similar to those observed in humans. Therefore, the establishment of the extent of infection by measuring the size of the lesion according to the area of indurations and ulcers is feasible. This approach has proven its versatility and easy management during inoculation, follow up and characterization of typical lesions (ulcers), application of treatments through different ways and obtaining of clinical samples after different treatments. By using this method the quality of animal life regarding locomotion, search for food and water, play and social activities is also preserved.

Optimization of the experimental hamster model for cutaneous leishmaniasis by intradermal injection of Leishmania promastigotes at the dorsal skin. This approach is useful during inoculation, follow-up, characterization of lesions, application of treatments and obtaining of clinical samples. Locomotion, search for food and water, play and social activities are preserved.

Hamsterlar ve Dorsal Skin Kutanöz Leishmaniasis: Antileishmanial Uyuşturucu Tarama için Faydalı Model

Traditionally, hamsters are experimentally inoculated in the snout or the footpad. However in these sites an ulcer not always occurs, measurement of ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of insects as infection models provides a valuable alternative. Compared to other non-vertebrate model hosts such as nematodes, insects have a relatively advanced system of antimicrobial defenses and are thus more likely to produce information relevant to the mammalian infection process. Like mammals, insects possess a complex innate immune system1. Cells in the hemolymph are capable of phagocytosing or encapsulating microbial invaders, and humoral responses include the inducible production of lysozyme and small antibacterial peptides2,3. In addition, analogies are found between the epithelial cells of insect larval midguts and intestinal cells of mammalian digestive systems. Finally, several basic components essential for the bacterial infection process such as cell adhesion, resistance to antimicrobial peptides, tissue degradation and adaptation to oxidative stress are likely to be important in both insects and mammals1. Thus, insects are polyvalent tools for the identification and characterization of microbial virulence factors involved in mammalian infections.
Larvae of the greater wax moth Galleria mellonella have been shown to provide a useful insight into the pathogenesis of a wide range of microbial infections including mammalian fungal (Fusarium oxysporum, Aspergillus fumigatus, Candida albicans) and bacterial pathogens, such as Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Serratia marcescens Pseudomonas aeruginosa, Listeria monocytogenes or Enterococcus faecalis4-7. Regardless of the bacterial species, results obtained with Galleria larvae infected by direct injection through the cuticle consistently correlate with those of similar mammalian studies: bacterial strains that are attenuated in mammalian models demonstrate lower virulence in Galleria, and strains causing severe human infections are also highly virulent in the Galleria model8-11. Oral infection of Galleria is much less used and additional compounds, like specific toxins, are needed to reach mortality.
G. mellonella larvae present several technical advantages: they are relatively large (last instar larvae before pupation are about 2 cm long and weight 250 mg), thus enabling the injection of defined doses of bacteria; they can be reared at various temperatures (20 &deg;C to 30 &deg;C) and infection studies can be conducted between 15 &deg;C to above 37 &deg;C12,13, allowing experiments that mimic a mammalian environment. In addition, insect rearing is easy and relatively cheap. Infection of the larvae allows monitoring bacterial virulence by several means, including calculation of LD5014, measurement of bacterial survival15,16 and examination of the infection process17. Here, we describe the rearing of the insects, covering all life stages of G. mellonella. We provide a detailed protocol of infection by two routes of inoculation: oral and intra haemocoelic. The bacterial model used in this protocol is Bacillus cereus, a Gram positive pathogen implicated in gastrointestinal as well as in other severe local or systemic opportunistic infections18,19.

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

Oral and intra haemocolic infection of larvae of the greater wax moth Galleria mellonella is described. This insect can be used to study virulence factors of entomopathogenic as well as mammalian opportunistic bacteria. Rearing of the insects, methods of infection and examples of in vivo analysis are described.

Böcek<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Bakteriyel Patogenez İnceleyecek Güçlü Enfeksiyon Model olarak

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Two Infection Assays to Study Non-Lethal Virulence Phenotypes in C. Albicans using C. Elegans

While pathogens can be deadly to humans, many of them cause a range of infection types with non-lethal phenotypes. Candida albicans, an opportunistic fungal pathogen of humans, is the fourth most common cause of nosocomial infections which results in ~40% mortality. However, other C. albicans infections are less severe and rarely lethal and include vulvovaginal candidiasis, impacting ~75% of women, as well as oropharyngeal candidiasis, predominantly impacting infants, AIDS patients and cancer patients. While murine models are most frequently used to study C. albicans pathogenesis, these models predominantly assess host survival and are costly, time consuming, and limited in replication. Therefore, several mini-model systems, including Drosophila melanogaster, Danio rerio, Galleria mellonella, and Caenorhabditis elegans, have been developed to study C. albicans. These mini-models are well-suited for screening mutant libraries or diverse genetic backgrounds of C. albicans. Here we describe two approaches to study C. albicans infection using C. elegans. The first is a fecundity assay which measures host reproduction and monitors survival of individual hosts. The second is a lineage expansion assay which measures how C. albicans infection affects host population growth over multiple generations. Together, these assays provide a simple, cost-effective way to quickly assess C. albicans virulence.

Two Infection Assays to Study Non-Lethal Virulence Phenotypes in C. Albicans using C. Elegans

Fungal opportunist pathogens can cause life-threatening as well as minor infections, but non-lethal phenotypes are frequently ignored when studying virulence. Therefore, we developed a nematode model that monitors both the survival and reproduction aspects of host to investigate fungal virulence.

While pathogens can be deadly to humans, many of them cause a range of infection types with non-lethal phenotypes. Candida albicans, an opportunistic ...

Applications of RNA Interference in American Cockroach

Cockroaches, a sanitary pest, are essential species in insect developmental and metamorphic studies due to their easy feeding and hemimetabolous characteristics. Altogether with well-annotated genome sequences, these advantages have made American cockroach, Periplaneta americana, an important hemimetabolous insect model. Limited by the shortage of knockout strategy, effective RNA interference (RNAi)-based gene knockdown becomes an indispensable technique in functional gene research of P. americana. The present protocol describes the RNAi operation techniques in P. americana. The protocol includes (1) selection of the P. americana at proper developmental stages, (2) preparation for the injection setting, (3) dsRNA injection, and (4) gene knockdown efficiency detection. RNAi is a powerful reverse genetic tool in P. americana. The majority of P. americana tissues are sensitive to extracellular dsRNA. Its simplicity allows researchers to quickly obtain dysfunctional phenotypes under one or multiple targeting dsRNA injections, enabling researchers to better use the P. americana for developmental and metamorphic studies.

The present protocol describes step-by-step guidelines for the RNAi operation techniques in P. americana.

Amerikan Hamamböceğinde RNA Girişiminin Uygulamaları

Cockroaches, a sanitary pest, are essential species in insect developmental and metamorphic studies due to their easy feeding and hemimetabolous ...

Gelişim Biyolojisi

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, preferably in models which mimic the intended clinical indication. A method for inducing robust lung infections in immunocompetent rats and mice is described which allows for the assessment of treatments in a model of serious pneumonia caused by S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae or A. baumannii. Animals are anesthetized, and an agar-based inoculum is deposited deep into the lung via nonsurgical intratracheal intubation. The resulting infection is consistent, reproducible, and stable for at least 48 h and up to 96 h for most isolates. Studies with marketed antibacterials have demonstrated good correlation between in vivo efficacy and in vitro susceptibility, and concordance between pharmacokinetic/pharmacodynamic targets determined in this model and clinically accepted targets has been observed. Although there is an initial time investment when learning the technique, it can be performed quickly and efficiently once proficiency is achieved. Benefits of the model include elimination of the neutropenic requirement, increased robustness and reproducibility, ability to study more pathogens and isolates, improved flexibility in study design and establishment of a challenging infection in an immunocompetent host.

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

A method for establishing lung infections in immunocompetent rodents is described. With proficiency, this method can be performed quickly and easily to induce stable infection with many isolates of S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae and A. baumannii.

Immünkompetan Kemirgenler bir Sağlam Pnömoni Modeli karşı antibakteriyel etkinliğini değerlendirmektir<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;<i&gt; H. influenza</i&gt;<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; ya da<em&gt; A. baumannii</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our knowledge of prevention and treatment of viral infection. The fruit fly Drosophila melanogaster has proven to be one of the most efficient and productive model organisms to screen for antiviral factors and investigate virus-host interaction, due to powerful genetic tools and highly conserved innate immune signaling pathways. The procedure described here demonstrates a nano-injection method to establish viral infection and induce systemic antiviral responses in adult flies. The precise control of the viral injection dose in this method enables high experimental reproducibility. Protocols described in this study include the preparation of flies and the virus, the injection method, survival rate analysis, the virus load measurement, and an antiviral pathway assessment. The influence effects of viral infection by the flies' background were mentioned here. This infection method is easy to perform and quantitatively repeatable; it can be applied to screen for host/viral factors involved in virus-host interaction and to dissect the crosstalk between innate immune signaling and other biological pathways in response to viral infection.

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

This protocol describes how to establish viral infection in vivo in Drosophila melanogaster using the nano-injection method and basic techniques to analyze virus-host interaction.

Viral enfeksiyon ve analiz Drosophila Melanogaster ana bilgisayar virüs etkileşimin kurulması

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...

Infecting Mice with Malassezia spp. to Study the Fungus-Host Interaction

Animal models are crucial for infectious disease research. They provide an important basis for analyzing the full spectrum of interactions that occur between microbes and their host in vivo in a tissue-specific manner. Pathogenic fungi are increasingly recognized as a serious threat for humans and exploiting such infection models have greatly improved our understanding of fungal pathogenicity. Species of the genus Malassezia are the most abundant fungi of the human skin microbiota and they are also associated with the development of severe inflammatory skin disorders such as seborrheic dermatitis and atopic dermatitis. However, a causative link between Malassezia and disease pathogenesis remains unknown, a fact that can be attributed to the poor knowledge of the complex crosstalk of Malassezia with the skin immune system. This protocol describes the establishment of an experimental mouse model that allows studying the interaction of Malassezia with the mammalian skin in vivo. It outlines the method for cultivating Malassezia spp. under laboratory conditions, how to infect the murine skin with Malassezia spp. and how to assess the outcome of infection by means of the skin inflammation and fungal burden analyses. The model described here works in fully immunocompetent animals and does not rely on immune suppressive or antibiotic pretreatment of the animals. It is furthermore adaptable to virtually all genetically modified mouse strains and can be combined with other skin disease models. These features make this infection model a very powerful tool for studying in detail the innate and adaptive immune response of the host against Malassezia in the skin in vivo.

Infecting Mice with Malassezia spp. to Study the Fungus-Host Interaction

This protocol outlines the establishment of a mouse model for studying Malassezia-host interactions in the skin. It describes the cultivation of Malassezia in vitro, the infection of the murine skin with Malassezia, and the subsequent analysis of the inflammation and the fungal burden in the skin tissue.

Mantar-Konak Etkileşimini Incelemek için Farelere Malassezia spp.

Animal models are crucial for infectious disease research. They provide an important basis for analyzing the full spectrum of interactions that occur ...

Drosophila melanogaster Larva Injection Protocol

The use of unconventional models to study innate immunity and pathogen virulence provides a valuable alternative to mammalian models, which can be costly and raise ethical issues. Unconventional models are notoriously cheap, easy to handle and culture, and do not take much space. They are genetically amenable and possess complete genome sequences, and their use presents no ethical considerations. The fruit fly Drosophila melanogaster, for instance, has provided great insights into a variety of behavior, development, metabolism, and immunity research. More specifically, D. melanogaster adult flies and larvae possess several innate defense reactions that are shared with vertebrate animals. The mechanisms regulating immune responses have been mostly revealed through genetic and molecular studies in the D. melanogaster model. Here a novel larval injection technique is provided, which will further promote investigations of innate immune processes in D. melanogaster larvae and explore the pathogenesis of a wide range of microbial infections.

Drosophila melanogaster Larva Injection Protocol

Drosophila melanogaster adult flies have been extensively utilized as model organisms to investigate the molecular mechanisms underlying host antimicrobial innate immune responses and microbial infection strategies. To promote the D. melanogaster larva stage as an additional or alternative model system, a larval injection technique is described.

Drosophila melanogaster Larva Enjeksiyon Protokolü

The use of unconventional models to study innate immunity and pathogen virulence provides a valuable alternative to mammalian models, which can be costly ...

Establishment and Maintenance of Gnotobiotic American Cockroaches (Periplaneta americana)

Gnotobiotic animals are a powerful tool for the study of controls on microbiome structure and function. Presented here is a protocol for the establishment and maintenance of gnotobiotic American cockroaches (Periplaneta americana). This approach includes built-in sterility checks for ongoing quality control. Gnotobiotic insects are defined here as cockroaches that still contain their vertically transmitted endosymbiont (Blattabacterium) but lack other microbes that normally reside on their surface and in their digestive tract. For this protocol, egg cases (oothecae) are removed from a (nonsterile) stock colony and surface sterilized. Once collected and sterilized, the oothecae are incubated at 30 &#176;C for approximately 4&#8722;6 weeks on brain-heart infusion (BHI) agar until they hatch or are removed due to contamination. Hatched nymphs are transferred to an Erlenmeyer flask containing a BHI floor, sterile water, and sterile rat food. To ensure that the nymphs are not housing microbes that are unable to grow on BHI in the given conditions, an additional quality control measure uses restriction fragment-length polymorphism (RFLP) to test for nonendosymbiotic microbes. Gnotobiotic nymphs generated using this approach can be inoculated with simple or complex microbial communities and used as a tool in gut microbiome studies.

Establishment and Maintenance of Gnotobiotic American Cockroaches Periplaneta americana

This protocol is used in establishing and maintaining gnotobiotic American cockroaches (Periplaneta americana) by surface sterilizing the egg cases (oothecae) prior to hatching. These gnotobiotic insects contain their vertically transmitted Blattabacterium endosymbionts but have axenic guts.

Gnotobiyotik Amerikan Hamamböceklerinin Kurulması ve Bakımı (Periplaneta americana)

Gnotobiotic animals are a powerful tool for the study of controls on microbiome structure and function. Presented here is a protocol for the establishment ...

Hamam böceği virülans, Patogenez ve uyuşturucu etkinliği araştırmak için alternatif bir Non-memeli hayvan Model tıslama Madagaskar

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Nematot Caenorhabditis Elegans - konak-mikrop etkileşimleri çalışmaya çok yönlü Vivo içinde manken

Hamsterlar ve Dorsal Skin Kutanöz Leishmaniasis: Antileishmanial Uyuşturucu Tarama için Faydalı Model

Böcek

Two Infection Assays to Study Non-Lethal Virulence Phenotypes in C. Albicans using C. Elegans

Amerikan Hamamböceğinde RNA Girişiminin Uygulamaları

Immünkompetan Kemirgenler bir Sağlam Pnömoni Modeli karşı antibakteriyel etkinliğini değerlendirmektir

Viral enfeksiyon ve analiz Drosophila Melanogaster ana bilgisayar virüs etkileşimin kurulması

Mantar-Konak Etkileşimini Incelemek için Farelere Malassezia spp.

Drosophila melanogaster Larva Enjeksiyon Protokolü

Gnotobiyotik Amerikan Hamamböceklerinin Kurulması ve Bakımı (Periplaneta americana)