Name: a caenorhabditis elegans nutritional-status based copper aversion assay
Uploaded: 2017-07-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay at JoVE.com

Bu çalışma Kanada Doğa Bilimleri ve Mühendislik Araştırma Konseyi tarafından Discovery Grant RGPIN36481-08 tarafından William G. Bendena&#39;ya desteklenmiştir.

1. Deneysel Organizmaların Hazırlanması <ol><li> Test yapılan organizmaların genç erişkin olmasını sağlamak için tahlile başlamadan 24 saat önce 10 L4 safhalı nematod seçin. Test edilen her mutant veya kontrol nematodu için 10 L4s seçin (kontrol için 10, test için 10). <ol><li> L4 organizmalarını standart yöntemler 26 , 27 kullanarak 24 saat süreyle OP50 Escherichia coli ile tohumlanan standart agar plakaları üzerinde muhafaza edin. Organizmalar sonraki yıkama adımlarında kaybolursa, başlangıç ​​örneği boyutunu arttırarak telafi edin ( örn . 10&#39;dan çok 20 solucan alın). Not: Davranış doğuştan değişken fenotiptir. Her bir suş için üç ayrı gün içinde yöntemi üç kez gerçekleştirin. Tartışma bölümünde vurgulandığı gibi, yeni soylar için ek kontrol soyları ve koşulları ekleyin. </li></ol></li><li> Testten hemen önce deneysel orgaBakteri içermeyen bir agar plakasına yerleştirin ve aşırı miktarda bakteri çıkarmak için nematodların 1 dakika boyunca serbestçe hareket etmesine izin verin. <ol><li> Deney organizmaları deneyden 24 saat önce kontaminasyon koşullarına maruz kaldıysa onları atın. </li></ol></li><li> Mikrosantrifüj tüpüne solucanlar yıkamak için bakteri içermeyen plaka üzerine 1 mL M9 pipetle. </li><li> 1 dakika 3,000 xg&#39;de santrifüjleyin. Solucanlar tüpün altına bir pelet oluşturmalıdır. Solucan peletini bozmadan M9 solüsyonunu aspire. Solucan topağına 1 mL M9 ilave edin, solucanları çözeltiyle karıştırmak için tübü tersine çevirin. </li><li> Adımları 1.4 üç kez tekrarlayın. <ol><li> Aşırı bakteri başlangıçta solucanlarla nakledilirse, toplam 5 kez tekrarlayın. Bakır yiyecek yarışı plakalarına hiçbir bakteri aktarılmamalıdır. Gıda, tahlil plakasına aktarılırsa, doğru veri toplanmasını engelleyecektir. </li></ol></li><li> Nihai yıkamadan sonra, yüzer maddeyi 100&#39;e kadar aspire edin81, L of M9 ve solucan peleti kalır. Dikkat: Açlık ile ilgili davranışlar 30 dakika sonra belirginleşti. Sonuç olarak yıkama adımları tamamlandıktan sonra solucanlar çözeltiden hemen aktarılacaktır. </li></ol> 2. Deney Tabakalarının Hazırlanması <ol><li> Testten iki gün önce standart NGM agar plakaları hazırlayın. <ol><li> Plakalar nemli bir ortamda muhafaza edildiyse, deneyden 3 gün önce agar plakaları yapın. Alternatif olarak, düzgün bir kuruluğun sağlanması için (steril bir ortamda ise) 3-6 saat plakanın kapağını çıkarın. </li></ol></li><li> Kalın bir kalıcı işaretleyiciyle, dış kenar boyunca plakanın alt tarafında bir çizgi oluşturun ve bir orta hat bariyeri oluşturmak için bir başka çizgi oluşturun ( Şekil 1 ). Orta hat bariyeri plakanın her kenarından eşit mesafede olmalıdır. Kesin ölçümler yapmak için bir cetvel kullanın. Bu çizgiler, bakteri ve bakır çözeltisini transfer ederken bir rehber görevi görecektir. ŞartıylaE. coli bakır solüsyonundan önce transfer edilir, bu hatlar göstergeler olarak görev yapar. </li><li> Düzgün çim oluşturmak için bakır bariyerin sadece bir tarafında 50 μL OP50 E. coli tohum plakası ( Şekil 2 ). Bakteriyel konsantrasyon deneyler arasında tutarlı olmalıdır; Bununla birlikte, konsantrasyonda hafif farklılıklara yanıt olarak küçük değişkenlik gözlemlenmiştir. <ol><li> Bakterilerin bakır çözeltisiyle temas etmemesini sağlamak için plakanın altındaki işaretli çizgileri kullanın. Bakır solüsyonun plakanın kenarını çizmesi ve orta hat bariyeri oluşturması koşuluyla, bakteri transferini yaparak bakır solüsyonu gıda kaynağı ile temas etmemelidir. </li></ol></li><li> İkinci bir tabak tabakasını işaretleyin ve onlara hiçbir OP50 E. coli aktarmayın ( Şekil 2 ). Bu plakalar negatif kontrolü değerlendirmeye yarayacak. Bu plakaların da birPlakanın yarısına başlangıç ​​transferini bildirmek için işaretleme. </li><li> Bakterilerin kurutulmasına izin verin ve plakaları 37 ° C&#39;de gece boyunca inkübe edin. 37 ° C inkübatör veya odaya transfer ederken bakteri lekelerinin rahatsız edilmemesine dikkat edin. Aşırı rahatsızlık yiyecek yamasının yerini veya şeklini değiştirebilir. </li></ol> 3. Kemotaksis Deneyi <ol><li> Deney başlama saatinden önce 0.5 M bakır (II) sülfat solüsyonu hazırlayın. Tablet başına 125 μL solüsyon kullanılıyorsa, bu hacmi kullanılan tahlil plakalarının sayısına bağlı olarak ölçeklendirin ( örn. 5 deney plakası, 625 μL). </li><li> Bir dış bakır bariyer oluşturmak için agar kenarında bakır (II) sülfat çözeltisi 100 mcL Pipet. Tabağın işaretli alt kısmı bir rehber görevi görmelidir. </li><li> Orta hat bariyeri oluşturmak için 25 μL bakır (II) sülfat solüsyonu pipetleyin. <ol><li> Bakır (II) sülfat çözeltisinin,Bakteriyel yama ile temasa girmez. Çizgi, agara girinti / çiziklerden dolayı hareketleri etkileyebileceğinden lekeli bir teknik kullanın. </li></ol></li><li> Bakır solüsyonunun tabağa kurutulmasına izin verin. Süre plaka ve laboratuvar koşullarına bağlı olarak değişebilir. Aktarımdan sonra her 5 dakikada bir kuruluk olup olmadığını gözle kontrol edin. Not: Bakır çözeltisi mavimsi renk tonunu gösterir ve kolaylıkla teşhis edilebilir. Kuru- luğu ayırt edebilmek için çözeltiyi plakanın kenarına hafifçe vurmak için bir laboratuar dokusu kullanın . </li><li> Tüpün altından tahlil plakasının bakteri içermeyen yarısına 20 mL&#39;lik solucan peleti pipetleyin. <ol><li> Tahlil plakasına 10 solucanın aktarılmasını sağlayın. İlave solucanlar yanlışlıkla içerildiyse, plakaya hiçbir bakteri eklenmediğinden emin olmak için halokarbon yağı ile toplayarak çıkarın. Her tahlil, tahlil sırasında tutarlı bir sayıda nematod içermelidir. NOT: Çok az solucan transferseDenemeler sırasında yanlış olan, başlangıç ​​örneği boyutunun arttırılması, yıkama ve aktarımlar sırasında ortaya çıkabilecek olası kayıpları azaltacaktır. </li></ol></li><li> Fazla M9&#39;yu bir laboratuar dokusu ile plakadan çıkarın. M9 bakır (II) sülfat solüsyonuyla temas etmemelidir. Dikkat: Bu adımı gerçekleştirirken solucanların ve agar yüzeyinin etkilenmediğinden emin olun. Çok sert kullanıldığında, laboratuar dokusu plakanın agar yüzeyine girinti oluşturabilir ve solucanları kaldırabilir. Yanlışlıkla KimWipe yoluyla ayrılmıştır solucanlar atılmalıdır. </li><li> M9 çözümü kaldırıldıktan ve tüm solucanlar sıvı olmayan lokomotif kalıplara başladıktan sonra, test kronometresini başlatın. <ol><li> Optimum olarak, M9 solüsyonunu bir dakika içinde çıkarın. Temel parametre, sinüzoidal hareketin tanımlanmasıdır. Kurtlar lokomotasyondan farklı, örn. Sinüzoidal olmaktan ziyade, sıvı olduğunda. Deney durdurma saatini deney organının her birine bir kez başlatınIsms parçalanmayı bırakır. </li></ol></li><li> Tahliller plakaları her 30 dakikada bir kontrol edin. <ol><li> Bakteriyel yamalı tahlil plakaları için, 4 saatlik bir süre zarfında yiyecek yamasına ulaşırsa, organizmaları pozitif olarak puanlayın. Negatif kontrol plakaları için, bariyerden geçtiyse organizmaları pozitif olarak puanlayın. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+nervous+system+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 314 (1165), 1-340 (1986).</li><li>Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemosensation+in+C.+elegans+(October+25,+2006).">Chemosensation in C. elegans (October 25, 2006).</a> The C. elegans Research Community, WormBook. , (2006).</li><li>Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant-selective+genes+and+neurons+mediate+olfaction+in+C.+elegans.">Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans.</a> Cell. 74 (3), 515-527 (1993).</li><li>Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotaxis+by+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+identification+of+attractants+and+analysis+of+the+response+by+use+of+mutants.">Chemotaxis by the nematode Caenorhabditis elegans: identification of attractants and analysis of the response by use of mutants.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 70 (3), 817-821 (1973).</li><li>Ramot, D., MacInnis, B. L., Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+temperature-sensing+by+a+single+thermosensory+neuron+in+C.+elegans.">Bidirectional temperature-sensing by a single thermosensory neuron in C. elegans.</a> Nat. Neurosci. 11 (8), 908-915 (2008).</li><li>Russell, J., Vidal-Gadea, A. G., Makay, A., Lanam, C., Pierce-Shimomura, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humidity+sensation+requires+both+mechanosensory+and+thermosensory+pathways+in+Caenorhabditis+elegans.">Humidity sensation requires both mechanosensory and thermosensory pathways in Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 111 (22), 8269-8274 (2014).</li><li>van Campen, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+modulation+disorders+in+childhood+epilepsy.">Sensory modulation disorders in childhood epilepsy.</a> J. Neurodev. Disord. 7 (34), (2015).</li><li>Festa, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neocortical+disconnectivity+disrupts+sensory+integration+in+Alzheimer's+disease.">Neocortical disconnectivity disrupts sensory integration in Alzheimer's disease.</a> Neuropsych. 19 (6), 728-738 (2005).</li><li>Boecker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+processing+in+Parkinson's+and+Huntington's+disease:+investigations+with+3D+H(2)(15)O-PET.">Sensory processing in Parkinson's and Huntington's disease: investigations with 3D H(2)(15)O-PET.</a> Brain. 122 (9), 1651-1665 (1999).</li><li>Markaki, M., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+disease+in+Caenorhabditis+elegans.">Modeling human disease in Caenorhabditis elegans.</a> Biotechnol. J. 5 (12), 1261-1276 (2010).</li><li>O'Reilly, L. P., Luke, C. J., Perlmutter, D. H., Silverman, G. A., Pak, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+in+high-throughput+drug+discovery.">C. elegans in high-throughput drug discovery.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. , 247-253 (2014).</li><li>Thompson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+million+mutation+project:+a+new+approach+to+genetics+in+Caenorhabditis+elegans.">The million mutation project: a new approach to genetics in Caenorhabditis elegans.</a> Genome Res. 23 (10), 1749-1762 (2013).</li><li>Chao, M. Y., Komatsu, H., Fukuto, H. S., Dionne, H. M., Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+status+and+serotonin+rapidly+and+reversibly+modulate+a+Caenorhabditis+elegans+chemosensory+circuit.">Feeding status and serotonin rapidly and reversibly modulate a Caenorhabditis elegans chemosensory circuit.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 101 (43), 15512-15517 (2004).</li><li>Maricq, A. V., Peckol, E., Driscoll, M., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanosensory+signaling+in+C.+elegans+mediated+by+the+GLR-1+glutamate+receptor.">Mechanosensory signaling in C. elegans mediated by the GLR-1 glutamate receptor.</a> Nat. 378 (6552), 78-81 (1995).</li><li>Chalasani, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+a+circuit+for+olfactory+behaviour+in+Caenorhabditis+elegans.">Dissecting a circuit for olfactory behaviour in Caenorhabditis elegans.</a> Nat. 450 (7166), 63-70 (2007).</li><li>Hilliard, M. A., Bargmann, C. I., Bazzicalupo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+responds+to+chemical+repellents+by+integrating+sensory+inputs+from+the+head+and+the+tail.">C. elegans responds to chemical repellents by integrating sensory inputs from the head and the tail.</a> Curr. Biol. 12 (9), 730-734 (2002).</li><li>Hart, A. C., Kass, J., Shapiro, J. E., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+signaling+pathways+mediate+touch+and+osmosensory+responses+in+a+polymodal+sensory+neuron.">Distinct signaling pathways mediate touch and osmosensory responses in a polymodal sensory neuron.</a> J. Neurosci. 19 (6), 1952-1958 (1999).</li><li>Ishihara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HEN-1,+a+secretory+protein+with+an+LDL+receptor+motif,+regulates+sensory+integration+and+learning+in+Caenorhabditis+elegans.">HEN-1, a secretory protein with an LDL receptor motif, regulates sensory integration and learning in Caenorhabditis elegans.</a> Cell. 109 (5), 639-649 (2002).</li><li>Saeki, S., Yamamoto, M., Iino, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+chemotaxis+revealed+by+paired+presentation+of+a+chemoattractant+and+starvation+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Plasticity of chemotaxis revealed by paired presentation of a chemoattractant and starvation in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> J. Exp. Biol. 204 (10), 1757-1764 (2001).</li><li>Chao, M. Y., Komatsu, H., Fukuto, H. S., Dionne, H. M., Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+status+and+serotonin+rapidly+and+reversibly+modulate+a+Caenorhabditis+elegans+chemosensory+circuit.">Feeding status and serotonin rapidly and reversibly modulate a Caenorhabditis elegans chemosensory circuit.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (43), 15512-15517 (2004).</li><li>Campbell, J. C., Polan-Couillard, L. F., Chin-Sang, I. D., Bendena, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NPR-9,+a+Galanin-Like+G-Protein+Coupled+Receptor,+and+GLR-1+Regulate+Interneuronal+Circuitry+Underlying+Multisensory+Integration+of+Environmental+Cues+in+Caenorhabdities+elegans.">NPR-9, a Galanin-Like G-Protein Coupled Receptor, and GLR-1 Regulate Interneuronal Circuitry Underlying Multisensory Integration of Environmental Cues in Caenorhabdities elegans.</a> PLoS Genet. 12 (5), (2016).</li><li>Harris, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+distinct+amine+receptors+operating+at+different+levels+within+the+locomotory+circuit+are+each+essential+for+the+serotonergic+modulation+of+chemosensation+in+Caenorhabditis+elegans.">Three distinct amine receptors operating at different levels within the locomotory circuit are each essential for the serotonergic modulation of chemosensation in Caenorhabditis elegans.</a> J. Neurosci. 29 (5), 1446-1456 (2009).</li><li>Harris, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+the+serotonergic+food+signal+stimulating+sensory-mediated+aversive+behavior+in+C.+elegans.">Dissecting the serotonergic food signal stimulating sensory-mediated aversive behavior in C. elegans.</a> PLoS One. 6 (7), (2011).</li><li>Mitchell, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+differential+role+for+neuropeptides+in+acute+and+chronic+adaptive+responses+to+alcohol:+behavioural+and+genetic+analysis+in+Caenorhabditis+elegans.">A differential role for neuropeptides in acute and chronic adaptive responses to alcohol: behavioural and genetic analysis in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 5 (5), (2010).</li><li>Colbert, H. A., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+signals+modulate+olfactory+acuity,+discrimination,+and+memory+in+Caenorhabditis+elegans.">Environmental signals modulate olfactory acuity, discrimination, and memory in Caenorhabditis elegans.</a> Learn Mem. 4 (2), 179-191 (1997).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genet. 77 (1), 71-71 (1974).</li><li>Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior+(July+3,+2006).">Behavior (July 3, 2006).</a> The C. elegans Research Community, WormBook. , (2006).</li><li>Sambongi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensing+of+cadmium+and+copper+ions+by+externally+exposed+ADL,+ASE,+ASH+neurons+elicits+avoidance+response+in+Caenorhabditis+elegans.">Sensing of cadmium and copper ions by externally exposed ADL, ASE, ASH neurons elicits avoidance response in Caenorhabditis elegans.</a> NeuroReport. 10 (4), 753-757 (1999).</li><li>Gray, J. M., Hill, J. J., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+circuit+for+navigation+in+Caenorhabditis+elegans.">A circuit for navigation in Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 102 (9), 3184-3191 (2004).</li><li>Rechavi, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Starvation-Induced+Transgenerational+Inheritance+of+Small+RNAs+in+C.+elegans.">Starvation-Induced Transgenerational Inheritance of Small RNAs in C. elegans.</a> Cell. 158 (2), 277-287 (2014).</li><li>Gloria-Soria, A., Azevedo, R. B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=npr-1+Regulates+Foraging+and+Dispersal+Strategies+in+Caenorhabditis+elegans.">npr-1 Regulates Foraging and Dispersal Strategies in Caenorhabditis elegans.</a> Cell. 18 (21), 1694-1699 (2008).</li><li>Beron, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burrowing+behavior+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+A+new+assay+for+the+study+of+neuromuscular+disorders.">The burrowing behavior of the nematode Caenorhabditis elegans: A new assay for the study of neuromuscular disorders.</a> Genes Brain Behav. 14 (4), 357-368 (2015).</li><li>Wang, S. J., Wang, Z. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Track-A-Worm,+An+Open-Source+System+for+Quantitative+Assessment+of+C.+elegans+Locomotory+and+Bending+Behavior.">Track-A-Worm, An Open-Source System for Quantitative Assessment of C. elegans Locomotory and Bending Behavior.</a> PLoS One. 8 (7), (2013).</li></ol>

Açıklayacak bir şeyimiz yok.

Bu tahlil tasarımı, gıda yarış tahlilini 24 , nefis bir orta hat bariyeri oluşturmak için bir bakır solüsyonu ve nematodların kaybını önlemek için plakanın kenarı etrafında değiştirir. Canlılar, caydırıcı bariyerden geçme ve 4 saatlik bir sürede bir yemeğe erişme yetenekleri açısından test edilir. Npr-9 (GF) bağlamında, açlığın aversive yanıtları nasıl etkilediğini ve gıdanın tespitini değerlendirmek için bu tahlilden yararlandık. Daha önce <...

Caenorhabditis elegans , sadece 302 nöron 1&#39;den oluşan bir sinir sisteminin devresini analiz etmede göreli kolaylık nedeniyle onlarca yıldır nörobiyolojinin çalışması için bir model olarak kullanılmıştır. Organizmanın çevresel ipuçlarına tepki vermeye güvenmesi koşuluyla, sinir sisteminin büyük bir kısmı çevresel sinyallere entegrasyonu düzenlemekle yükümlüdür 2 . Sinir sisteminin sadeliğine rağmen, C. elegans , kovucular 3 , cezbediciler 4 , sıcaklık 5 ve hatta nem 6 da dahil olmak üzere çeşitli çevresel sinyaller algılar ve bunlara cevap verebilir. Doğru çevreye sinyalleri entegre bir başarısızlık memeli model sistemlerinde 7 9 davranışsal bozukluklar ve nörodejeneratif hastalıklardan bir dizi ile bağlantılı olmuştur. Bir dizi mevcut nevral hastalık modeli ile<html> 10 C. elegans&#39;da ve nematod farmasötik eleklerinin 11 gelişiminde, bu organizmanın nörobiyolojinin çalışması için yararlı bir sistem olduğu kanıtlanmıştır. Nematod genomu 12&#39;de eşlenen bir nematod bağlantı 1 ve mutasyonların neredeyse her bir geninin varlığı göz önüne alındığında, nematod sinir sistemini ve kendi uzantımızı anlayışımız kısmen yaratıcı uygun tahliller tasarlamakla sınırlıdır. Çeşitli caydırıcı uyaranlara nematod tepkilerini değerlendirmek için son 40 yılda bir dizi kemotaks testi geliştirildi 3 , 4 , 13 , 14 , 15 . İlk deneme, akut bir çevresel uyaranın ortaya çıkmasına neden olurken, tek bir solucan bir agar plakasında gezindi= &quot;Xref&quot;&gt; 3 , 14 , 16 . Lokomotif cevaplardaki ani değişiklikler kaydedildi. Örneğin, uçucu koku oktanol bir saç teline uygulanabilir ve yabani tip solucanlarda geriye doğru hareket hareketini başlatmak için bir nematodun burnunun önüne fırlayabilir 17 . Daha karmaşık tahlilleri de davranışsal seçim 18 değerlendiren bir araç olarak birden çok değişkeni birleştirmek için geliştirilmiştir. Bu tahlilin bir varyasyonu, caydırıcı bir orta hat bariyeri 4 oluşturmak için bir bakır solüsyonunun kullanılmasını gerektirir. Bir çekici, yani diasetil, kimyasal bariyerin bir tarafına kondu ve solucanlar diasetil kaynağından uzaklaştırıldı. Kurşunsuz yanıt için arızalı solucanlar hemen diasetil ulaşmak için engel geçti, vahşi tip solucanlar başlangıçta bariyer tarafından itildi. Solucanlar ilk önce bakır bariyere yaklaştığında tepkiler alındıUzun süreli gözlem olmadan. Açlık koşullarından sonra solucanlar değerlendirildiğinde çevresel uyaranlara olan duyarlılığı azaltılır 19 . Caner oktanol, nematod burununun önüne savurulduğunda, yabani tip organizmalar gıdaya çıktığında 3-5 saniye içinde geriye doğru harekete neden olurlar. Bu organizmalar 10 dakika süreyle gıdalardan çıkarıldıktan sonra 8-10 s&#39;lik bir gecikmeli yanıt veriyorlar 20 . Böylece, açlıktan arttıkça, nematodlar zararlı çevresel sinyallere karşı azaltılmış aversive bir yanıt sergilemektedir; çünkü gıda araması hayatta kalmak için daha önemli hale gelir. Tersine, nöropeptid reseptör 9&#39;u ( npr-9) aşırı miktarda eksprese eden nematodlar, gıda üzerindeki veya dışı oktanol üzerine cevap vermez ve birtakım aversif uyaranlara cevap vermede yetersizlik sergiler 21 . Bu npr-9 (GF) organizmaları aynı zamanda, gıda varlığında reversal frekanslarını modüle etmezler, ancakSert dokunuş uyarılarına karşılık olarak geriye doğru hareket etme yeteneğine sahip olduklarını gösterir 21 . Ayrıca npr-9 (LF) mutantlar, gıda 21 varlığında davranışlarını modüle edebilir ancak gıda dışı bir anormal seviyede azalmış ters frekans sergileyen verilen değerlendirilmiştir. Akut dış uyaranların tanıtımıyla solucanının beslenme durumunu bağlanması, bir gıda ile ilgili yol genel olarak duyu sinyallemesini modüle hangi mekanizma ile açıklık destekli olan 23, 22 geçiş yolu. Nematod ortamında gıdaların varlığı da etanol geri çekilme yanıtlarını değerlendirmek için kullanılmıştır 24 . Bu deneyde, solucanlar çeşitli konsantrasyonlarda etanol içinde kuluçkalanır ve daha sonra bir &quot;gıda yarış tahlili&quot; olarak bilinen bir gıda yamasına sahip bir agar plakası üzerine yerleştirilir. Yemek yaması plakanın bir kenarına yerleştirilirken nematodlar wYiyecek kaynağından uzak durdu. Etanol çekimi, solucanların yiyecek yamasına ulaşmaları için gereken süreyi ölçerek değerlendirildi. Bu beslenme esasına dayanan bakır kaçınma analizi, zaman içindeki davranış değişikliklerini değerlendirirken ek çevre değişkenlerini (gıda ve bakır) entegre etmek için gıda yarış testine dayanıyor. Bu C. elegans topluluğu genelinde yaygın olarak kullanılan bir protokolün uyarlanmasıdır 4 . Bu protokol, caydırıcı tepkiler ve dört saatlik bir süre üzerinde 21 gıda saptanmasını değerlendirmek için kullanılmıştır. Solucan, 30 dakika gıda yoksunluğundan 25 sonra açlık davranışları sergilediğinden, beslenme durumundaki değişikliklerin çevresel cevapları nasıl etkileyebileceğini de değerlendirebiliyoruz. Bu deneyin koşulları, deneysel organizmaların zaman içinde aversive uyaranlara yanıt verme şeklini ölçer, bu nedenle davranış değişiklikleri şu şekilde değerlendirilir:Organizmalar açlık durumuna doğru ilerledikçe (ve uzun süren açlık ölçümlerine devam ederler). Npr-9 (GF) hayvanları, besin ya da birçok caydırıcı ipucu karşısında davranışlarını değiştirmediğinden, bu davranış açıklarının açlık bağlamında devam edip etmeyeceğini tespit etmeye çalıştık. Sonuçta, bu tahlil tasarımı npr-9 (GF) mutantlarını spesifik olarak değerlendirmek üzere formüle edilmiştir, ancak yeni suşları karakterize etmek için daha da uyarlanabilir.

<table><tbody><tr><td>M9 Solution [3 g KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, 6 g Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, 5 g NaCl, 1 ml 1 M MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O to 1 litre. Autoclave to sterilize before use.]</td><td></td><td></td><td>Produced in lab</td></tr><tr><td>Cupric Sulfate</td><td>Sigma</td><td>C-1297</td><td>Use water to appropriately suspend to a concentration of 0.5M</td></tr></tbody></table>

a caenorhabditis elegans nutritional-status based copper aversion assay

Canlılığı sağlamak için organizmalar, tutarlı bir gıda kaynağı temin ederken, olumsuz habitatlardan kaçınabilmelidir. Caenorhabditis elegans , çeşitli çevresel uyarıların saptanması üzerine lokomotif kalıplarını değiştirir ve açlık koşullarına cevaben davranışsal tepkiler setini modüle edebilir. Nematodlar tipik olarak, bir gıda kaynağından 30 dakika boyunca çıkarıldığında azaltılmış aversive yanıtı sergiler. Değişen bir beslenme durumuna yanıt olarak davranış değişikliklerinin gözlenmesi, iyi beslenmiş bir durumdan aç bırakılan bir duruma geçişi düzenleyen mekanizmalara dair bilgiler sağlayabilir. Nematodun caydırıcı bir bariyerden ( mesela bakır) geçme yeteneğini ölçen bir deney geliştirdik ve daha sonra uzunca bir süre bir gıda kaynağına ulaştık. Bu protokol, önceki çalışmalara, organizmaların bir aya doğru kaymasıyla devam eden veri toplamanın yapılmasına izin verecek şekilde çoklu değişkenleri entegre ederek oluşturmaktadırGiderek açlık çeken durum. Dahası, bu tahlil, daha büyük popülasyon nematodların eşzamanlı olarak değerlendirilebilmesi için, numune sayısının arttırılmasına izin verir. Bakır tespit etme veya tepki verme yeteneğine sahip olmayan organizmalar, kimyasal bariyerden geçerler, vahşi tip nematodlar başlangıçta itilir. Vahşi tip solucanlar giderek açlığa kavuştuğundan bariyerini aşmaya ve besin kaynağına ulaşmaya başlarlar. Bu tahlil, gıda sansasyonu veya caydırıcı kimyasalların saptanması da dahil olmak üzere çeşitli çevresel ipuçlarına cevap veremeyen bir mutantı değerlendirmek üzere tasarlandı. Bu protokol aracılığıyla değerlendirildiğinde, kusurlu organizmalar hemen engelden geçtiler, ancak bir gıda kaynağını bulamıyorlardı. Dolayısıyla, bu mutantlar geçici olarak bir besin kaynağına ulaşmalarına rağmen kimyasal bariyerini tekrar tekrar aşar. Bu tahlil, kaçınma ve açlık ile ilgili potansiyel yol hatalarını değerlendirmek için solucan popülasyonlarını basitçe test edebilir.

Biz vahşi tip (N2), npr-9 (tm1652) ve bir npr-9 aşırı sentezleme soy, yani npr-9 (GF) (IC836- npr-9 :: npr-9; sur-5 :: gfp; odr -1 :: rfp), açlık ve bakır kaçınma yanıtlarını değerlendirmek için. Vahşi tipli organizmalar aversive bakır bariyerini algılama ve yanıt verme yeteneğine sahiptirler, buna karşın npr-9 (GF) mutantları, 4 saatlik test 21 üzerinden bakırdan aversive tepki başlatm...

Watch this Scientific Journal Video about A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay at JoVE.com

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

bir<emCaenorhabditis elegans</emBeslenme Durumuna Dayalı Bakır Kaçınma Deneyi

Burada, organizmanın iyi beslenmiş bir beslenme durumundan aç kalmış beslenme durumuna geçmesiyle bakırdan kaçınma davranışındaki ve ortak bir besin kaynağını bulma yeteneğini değerlendirmek için tasarlanmış Caenorhabditis elegans spesifik bir analiz sunuyoruz.

To ensure survival, organisms must be capable of avoiding unfavorable habitats while ensuring a consistent food source. Caenorhabditis elegans alter their ...

a-caenorhabditis-elegans-nutritional-status-based-copper-aversion

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

6.5K Görüntüleme.  Queen's University.  Burada, organizmanın iyi beslenmiş bir beslenme durumundan aç kalmış beslenme durumuna geçmesiyle bakırdan kaçınma davranışındaki ve ortak bir besin kaynağını bulma yeteneğini değerlendirmek için tasarlanmış Caenorhabditis elegans spesifik bir analiz sunuyoruz. 

Video: A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

Automated Analysis of a Nematode Population-based Chemosensory Preference Assay

The nematode, Caenorhabditis elegans' compact nervous system of only 302 neurons underlies a diverse repertoire of behaviors. To facilitate the dissection of the neural circuits underlying these behaviors, the development of robust and reproducible behavioral assays is necessary. Previous C. elegans behavioral studies have used variations of a "drop test", a "chemotaxis assay", and a "retention assay" to investigate the response of C. elegans to soluble compounds. The method described in this article seeks to combine the complementary strengths of the three aforementioned assays. Briefly, a small circle in the middle of each assay plate is divided into four quadrants with the control and experimental solutions alternately placed. After the addition of the worms, the assay plates are loaded into a behavior chamber where microscope cameras record the worms' encounters with the treated regions. Automated video analysis is then performed and a preference index (PI) value for each video is generated. The video acquisition and automated analysis features of this method minimizes the experimenter's involvement and any associated errors. Furthermore, minute amounts of the experimental compound are used per assay and the behavior chamber's multi-camera setup increases experimental throughput. This method is particularly useful for conducting behavioral screens of genetic mutants and novel chemical compounds. However, this method is not appropriate for studying stimulus gradient navigation due to the close proximity of the control and experimental solution regions. It should also not be used when only a small population of worms is available. While suitable for assaying responses only to soluble compounds in its current form, this method can be easily modified to accommodate multimodal sensory interaction and optogenetic studies. This method can also be adapted to assay the chemosensory responses of other nematode species.

We present a behavior recording setup and protocol that enables automated analysis of the nematode, Caenorhabditis elegans' preference for soluble compounds in a population-based assay. This article describes the construction of a behavior chamber, the behavioral assay protocol, and video analysis software usage.

Nematod Popülasyona Dayalı Kemoterapi Tercihi Testinin Otomatik Analizi

The nematode, Caenorhabditis elegans' compact nervous system of only 302 neurons underlies a diverse repertoire of behaviors. To facilitate the dissection ...

Davranış

A High-throughput Assay for the Prediction of Chemical Toxicity by Automated Phenotypic Profiling of Caenorhabditis elegans

Applying toxicity testing of chemicals in higher order organisms, such as mice or rats, is time-consuming and expensive, due to their long lifespan and maintenance issues. On the contrary, the nematode Caenorhabditis elegans (C. elegans) has advantages to make it an ideal choice for toxicity testing: a short lifespan, easy cultivation, and efficient reproduction. Here, we describe a protocol for the automatic phenotypic profiling of C. elegans in a 384-well plate. The nematode worms are cultured in a 384-well plate with liquid medium and chemical treatment, and videos are taken of each well to quantify the chemical influence on 33 worm features. Experimental results demonstrate that the quantified phenotype features can classify and predict the acute toxicity for different chemical compounds and establish a priority list for further traditional chemical toxicity assessment tests in a rodent model.

A High-throughput Assay for the Prediction of Chemical Toxicity by Automated Phenotypic Profiling of Caenorhabditis elegans

A quantitative method has been developed to identify and predict the acute toxicity of chemicals by automatically analyzing the phenotypic profiling of Caenorhabditis elegans. This protocol describes how to treat worms with chemicals in a 384-well plate, capture videos, and quantify toxicological related phenotypes.

Bir yüksek-den geçerek tahlil tarafından otomatik fenotipik profil oluşturma Caenorhabditis elegans ve kimyasal toksisitesi tahmin için

Applying toxicity testing of chemicals in higher order organisms, such as mice or rats, is time-consuming and expensive, due to their long lifespan and ...

Çevre

Caenorhabditis elegans gıda alımını ve ömrünü ölçmek için yüksek verimli test

Quantifying Food Intake in Caenorhabditis elegans by Measuring Bacterial Clearance

Feeding is an essential biological process for an organism&#39;s growth, reproduction, and survival. This assay aims to measure the food intake of Caenorhabditis elegans&#160;(C. elegans), an important parameter when studying the genetics of aging or metabolism. In most species, feeding is determined by measuring the difference between the amount of food provided and the amount left after a given time interval. The method presented here uses the same strategy to determine the feeding of C. elegans. It measures the amount of bacteria, the food source of C. elegans, cleared within 72 h. This method uses 96-well microtiter plates and has allowed the screening of hundreds of drugs for their ability to modulate food intake at a speed and depth not possible in other animal models. The strength of this assay is that it allows to measure feeding and lifespan simultaneously and directly measures the disappearance of food and, thus, is based on the same principles used for other organisms, facilitating species-to-species comparison.

Yazar Spotlight: Lipotoksisite ve HFpEF Arasındaki İlişkiyi Keşfetmek 

This protocol describes an assay to quantify Caenorhabditis elegans feeding rate based on measuring the clearance of bacteria in liquid culture.

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Feeding is an essential biological process for an organism&#39;s growth, reproduction, and survival. This assay aims to measure the food intake of ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the development of more effective treatments is the relative lack of understanding of the molecular underpinnings of the effects of ethanol on behavior. The nematode, Caenorhabditis elegans (C.&#160;elegans), provides a useful model in which to generate and test hypotheses about the molecular effects of ethanol. Here, we describe an assay that has been developed and used to examine the roles of particular genes and environmental factors in behavioral responses to ethanol, in which locomotion is the behavioral output. Ethanol dose-dependently causes an acute depression of crawling on an agar surface. The effects are dynamic; animals exposed to a high concentration demonstrate an initial strong depression of crawling, referred to here as initial sensitivity, and then partially recover locomotion speed despite the continued presence of the drug. This ethanol-induced behavioral plasticity is referred to here as the development of acute functional tolerance. This assay has been used to demonstrate that these two phenotypes are distinct and genetically separable. The straightforward locomotion assay described here is suitable for examining the effects of both genetic and environmental manipulations on these acute behavioral responses to ethanol in C.&#160;elegans.

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

C. elegans is a useful model for studying the effects of ethanol on behavior. We present a behavioral assay that quantifies the effects of ethanol on the locomotion speed of crawling worms; both initial sensitivity and the development of acute functional tolerance to ethanol can be measured with this assay.

Locomotion Speed ​​Etanol Etkilerinin Ölçülmesi için bir Testi<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

Nörobilim

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the function and regulation of protein folding was studied in vitro, in isolated tissue culture cells and in unicellular organisms. Recent studies have uncovered links between protein homeostasis (proteostasis), metabolism, development, aging, and temperature-sensing. These findings have led to the development of new tools for monitoring protein folding in the model metazoan organism Caenorhabditis elegans. In our laboratory, we combine behavioral assays, imaging and biochemical approaches using temperature-sensitive or naturally occurring metastable proteins as sensors of the folding environment to monitor protein misfolding. Behavioral assays that are associated with the misfolding of a specific protein provide a simple and powerful readout for protein folding, allowing for the fast screening of genes and conditions that modulate folding. Likewise, such misfolding can be associated with protein mislocalization in the cell. Monitoring protein localization can, therefore, highlight changes in cellular folding capacity occurring in different tissues, at various stages of development and in the face of changing conditions. Finally, using biochemical tools ex vivo, we can directly monitor protein stability and conformation. Thus, by combining behavioral assays, imaging and biochemical techniques, we are able to monitor protein misfolding at the resolution of the organism, the cell, and the protein, respectively.

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

To study the relationship between protein homeostasis, stress and aging, we monitored changes in protein folding by following protein dysfunction, protein localization in the cell and protein stability at the organismal, cellular and protein levels, using the genetically tractable metazoan Caenorhabditis elegans as a model system.

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Biyoloji

Caenorhabditis elegans as a Model System for Discovering Bioactive Compounds Against Polyglutamine-Mediated Neurotoxicity

Age-related misfolding and aggregation of pathogenic proteins are responsible for several neurodegenerative diseases. For example, Huntington&#39;s disease (HD) is principally driven by a CAG nucleotide repeat that encodes an expanded glutamine tract in huntingtin protein. Thus, the inhibition of polyglutamine (polyQ) aggregation and, in particular, aggregation-associated neurotoxicity is a useful strategy for the prevention of HD and other polyQ-associated conditions. This paper introduces generalized experimental protocols to assess the neuroprotective capacity of test compounds against HD using established polyQ transgenic Caenorhabditis elegans models. The AM141 strain is chosen for the polyQ aggregation assay as an age-associated phenotype of discrete fluorescent aggregates can be easily observed in its body wall at the adult stage due to muscle-specific expression of polyQ::YFP fusion proteins. In contrast, the HA759 model with strong expression of polyQ-expanded tracts in ASH neurons is used to examine neuronal death and chemoavoidance behavior. To comprehensively evaluate the neuroprotective capacity of target compounds, the above test results are ultimately presented as a radar chart with profiling of multiple phenotypes in a manner of direct comparison and direct viewing.

Caenorhabditis elegans as a Model System for Discovering Bioactive Compounds Against Polyglutamine-Mediated Neurotoxicity

Here, we present a protocol to assess the neuroprotective activities of test compounds in Caenorhabditis elegans, including polyglutamine aggregation, neuronal death, and chemoavoidance behavior, as well as an exemplary integration of multiple phenotypes.

Poliglutamin aracılı nörotoksisiteye karşı biyoaktif bileşiklerin keşfedilmesi için bir model sistem olarak Caenorhabditis elegans

Age-related misfolding and aggregation of pathogenic proteins are responsible for several neurodegenerative diseases. For example, Huntington&#39;s ...

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

Oxidative stress, which is the result of an imbalance between production and detoxification of reactive oxygen species, is a major contributor to chronic human disorders, including cardiovascular and neurodegenerative diseases, diabetes, aging, and cancer. Therefore, it is important to study oxidative stress not only in cell systems but also using whole organisms. C. elegans is an attractive model organism to study the genetics of oxidative stress signal transduction pathways, which are highly evolutionarily conserved.
Here, we provide a protocol to measure oxidative stress resistance in C. elegans in liquid. Briefly, ROS-inducing reagents such as paraquat (PQ) and H2O2 are dissolved in M9 buffer, and solutions are aliquoted in the wells of a 96 well microtiter plate. Synchronized L4/young adult C. elegans animals are transferred to the wells (5-8 animals/well) and survival is measured every hour until most worms are dead. When performing an oxidative stress resistance assay using a low concentration of stressors in plates, aging might influence the behavior of animals upon oxidative stress, which could lead to an incorrect interpretation of the data. However, in the assay described herein, this problem is unlikely to occur since only L4/young adult animals are being used. Moreover, this protocol is inexpensive and results are obtained in one day, which renders this technique attractive for genetic screens. Overall, this will help to understand oxidative stress signal transduction pathways, which could be translated into better characterization of oxidative stress-associated human disorders.

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

C. elegans is an attractive model organism to study signal transduction pathways involved in oxidative stress resistance. Here we provide a protocol to measure oxidative stress resistance of C. elegans animals in liquid phase, using several oxidizing agents in 96 well plates.

Oksidatif Stres Direnci Ölçüm<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; 96 oyuklu mikrotiter plakalarında

Oxidative stress, which is the result of an imbalance between production and detoxification of reactive oxygen species, is a major contributor to chronic ...

Long-Term Culture of Individual Caenorhabditis elegans on Solid Media for Longitudinal Fluorescence Monitoring and Aversive Interventions

Caenorhabditis elegans are widely used to study aging biology. The standard practice in C. elegans aging studies is to culture groups of worms on solid nematode growth media (NGM), allowing the efficient collection of population-level data for survival and other physiological phenotypes, and periodic sampling of subpopulations for fluorescent biomarker quantification. Limitations to this approach are the inability to (1) follow individual worms over time to develop age trajectories for phenotypes of interest and (2) monitor fluorescent biomarkers directly in the context of the culture environment. Alternative culture approaches use liquid culture or microfluidics to monitor individual animals over time, in some cases including fluorescence quantification, with the tradeoff that the culture environment is contextually distinct from solid NGM. The WorMotel is a previously described microfabricated multi-well device for culturing isolated worms on solid NGM. Each worm is maintained in a well containing solid NGM surrounded by a moat filled with copper sulfate, a contact repellent for C. elegans, allowing longitudinal monitoring of individual animals. We find copper sulfate insufficient to prevent worms from fleeing when subjected to aversive interventions common in aging research, including dietary restriction, pathogenic bacteria, and chemical agents that induce cellular stress. The multi-well devices are also molded from polydimethylsiloxane, which produces high background artifacts in fluorescence imaging. This protocol describes a new approach for culturing isolated roundworms on solid NGM using commercially available polystyrene microtrays, originally designed for human leukocyte antigen (HLA) typing, allowing the measurement of survival, physiological phenotypes, and fluorescence across the lifespan. A palmitic acid barrier prevents worms from fleeing, even in the presence of aversive conditions. Each plate can culture up to 96 animals and easily adapts to a variety of conditions, including dietary restriction, RNAi, and chemical additives, and is compatible with automated systems for collecting lifespan and activity data.

Long-Term Culture of Individual Caenorhabditis elegans on Solid Media for Longitudinal Fluorescence Monitoring and Aversive Interventions

Here, we present a protocol to culture isolated individual nematodes on solid media for lifelong physiological parameter tracking and fluorescence quantification. This culture system includes a palmitic acid barrier around single-worm wells to prevent animals from fleeing, allowing the use of aversive interventions, including pathogenic bacteria and chemical stressors.

Uzunlamasına floresan izleme ve aversif müdahaleler için katı ortam üzerinde bireysel caenorhabditis elegans'ın uzun süreli kültürü

Caenorhabditis elegans are widely used to study aging biology. The standard practice in C. elegans aging studies is to culture groups of worms on solid ...

bir

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Nematod Popülasyona Dayalı Kemoterapi Tercihi Testinin Otomatik Analizi

Bir yüksek-den geçerek tahlil tarafından otomatik fenotipik profil oluşturma Caenorhabditis elegans ve kimyasal toksisitesi tahmin için

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Locomotion Speed Etanol Etkilerinin Ölçülmesi için bir Testi

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Poliglutamin aracılı nörotoksisiteye karşı biyoaktif bileşiklerin keşfedilmesi için bir model sistem olarak Caenorhabditis elegans

Oksidatif Stres Direnci Ölçüm

Uzunlamasına floresan izleme ve aversif müdahaleler için katı ortam üzerinde bireysel caenorhabditis elegans'ın uzun süreli kültürü

bir

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Nematod Popülasyona Dayalı Kemoterapi Tercihi Testinin Otomatik Analizi

Bir yüksek-den geçerek tahlil tarafından otomatik fenotipik profil oluşturma Caenorhabditis elegans ve kimyasal toksisitesi tahmin için

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Locomotion Speed ​​Etanol Etkilerinin Ölçülmesi için bir Testi

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Poliglutamin aracılı nörotoksisiteye karşı biyoaktif bileşiklerin keşfedilmesi için bir model sistem olarak Caenorhabditis elegans

Oksidatif Stres Direnci Ölçüm

Uzunlamasına floresan izleme ve aversif müdahaleler için katı ortam üzerinde bireysel caenorhabditis elegans'ın uzun süreli kültürü

Locomotion Speed Etanol Etkilerinin Ölçülmesi için bir Testi