Name: a caenorhabditis elegans nutritional-status based copper aversion assay
Uploaded: 2017-07-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
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この研究は、自然科学およびエンジニアリング研究協議会（Canada Discovery Grant）RGPIN36481-08によってWilliam G. Bendenaに支持された。

1.実験生物の調製<ol><li> 生物が試験の際に若年成人であることを確認するために、アッセイを開始する24時間前に10株あたり10 L4段階の線虫を選ぶ。試験したそれぞれの突然変異体または対照線虫について、10匹のL4s（対照については10、アッセイについては10）を選択する。 <ol><li>標準的な方法26、OP50 大腸菌を播種し、標準的な寒天プレート上で27 24時間を使用して、L4生物を維持します。その後の洗浄ステップ中に生物が失われた場合は、開始サンプルサイズを増やして補正します（ つまり 、10個ではなく20個のワームを選ぶ）。 注：行動は本来変わる表現型です。 3つの別々の日に各株について3通りずつ方法を実施する。議論のセクションで強調したように、新規株のための追加の対照株および条件を含める。 </li></ol></li><li> アッセイの直前に、実験用のorga細菌を含まない寒天プレートに接種し、線虫が1分間自由に動いて余分な細菌を除去することを可能にする。 <ol><li>実験生物がアッセイの24時間前に汚染条件を経験した場合は、それらを捨てる。 </li></ol></li><li>細菌を含まないプレートに1 mLのM9をピペットで入れ、ワームをマイクロ遠心チューブに洗います。 </li><li> 3,000 xgで1分間遠心する。虫は、チューブの底にペレットを形成するはずです。ワームペレットを破壊することなくM9溶液を吸引する。ワームペレットに1 mLのM9を加え、チューブを反転させてワームを溶液と混合する。 </li><li> ステップ1.4をさらに3回繰り返します。 <ol><li>余分な細菌が最初にワームで移された場合は、合計5回繰り返します。銅フードレースプレートに細菌を移すべきではありません。食品がアッセイプレートに移されると、正確なデータ収集が妨げられます。 </li></ol></li><li>最終洗浄後、100まで上清を吸引する81; M9のLおよびワームペレットが残る。 注意：飢餓関連の行動は30分後に明らかになります。その結果、ワームはすぐに洗い流しが完了したら解決から移すべきです。 </li></ol> 2.アッセイプレートの調製<ol><li> 標準NGM寒天プレートをアッセイの2日前に調製する。 <ol><li>プレートを湿気の多い環境に置く場合は、アッセイの3日前に寒天プレートを作製する。あるいは、プレートのふたを3〜6時間はがしてください（滅菌環境の場合）。 </li></ol></li><li>太い恒久的なマーカーを使用して、プレートの外面に沿って下側に線を作り、中線のバリアを形成するようにもう一方の線を作ってください（ 図1 ）。ミッドラインバリアは、プレートの各エッジから等距離にある必要があります。正確な測定を保証するためにルーラーを使用してください。これらの系統は、バクテリアと銅溶液を移すときの目安となります。それを提供する大腸菌は銅溶液の前に移され、これらの系統は指標となる。 </li><li> シードプレートに50μLのOP50 E. coliを銅障壁の片側にのみ塗布し、均一な芝生を作製した（ 図2 ）。細菌濃度は、アッセイ全体にわたって一定でなければならない。しかしながら、濃度の穏やかな差異に応答して、ほとんど変化しないことが観察された。 <ol><li>プレートの下側​​にあるマーク付きの線を使用して、細菌が銅溶液と接触しないようにします。銅溶液がプレートの縁に沿って中間線バリアを形成するならば、銅溶液が食物源と接触しないように細菌を移す。 </li></ol></li><li>第2セットのプレートに印を付け、OP50 E.coliをそれらに移さない（ 図2 ）。これらのプレートは、ネガティブコントロールを評価するのに役立つ。これらのプレートにはまた、最初の転写起点を示すためにプレートの半分にマーキングする。 </li><li>細菌を乾燥させ、プレートを37℃で一晩インキュベートする。 37℃のインキュベーターまたは室内に移す際に細菌のパッチが乱されないように注意してください。過度の妨害は、食品パッチの位置または形状を変える可能性がある。 </li></ol> 3.走化性アッセイ<ol><li>アッセイ開始時間の前に、0.5M硫酸銅（II）溶液を新鮮に調製する。プレートあたり125μLの溶液が使用される場合、使用されるアッセイプレートの数（ 例えば、 5つのアッセイプレート、625μL）に依存して、この体積をスケールアップする。 </li><li> 100μLの硫酸銅（II）溶液を寒天の端にピペットで入れ、外側の銅バリアを作ります。マークされたプレートの下面が目安になります。 </li><li> 25μLの硫酸銅（II）溶液をピペットで入れ、中線バリアを作成する。 <ol><li>銅（II）硫酸塩溶液が細菌パッチとは接触しません。ストリークは寒天上のくぼみ/傷に起因する運動に影響を与える可能性があるため、点検技術を使用してください。 </li></ol></li><li>銅溶液をプレート上に乾燥させる。時間は、プレートとラボの条件によって異なります。移動後5分ごとに目視で乾燥状態をチェックする。 注：銅溶液は青色の色合いを示し、容易に識別できます。実験室のティッシュを使用して、プレートの端近くの溶液を軽く拭き取って乾燥を確認します。 </li><li> チューブの底からアッセイプレートの無菌半分上にウォームペレット20μLをピペットで加える。 <ol><li> 10個のワームがアッセイプレートに移されていることを確認します。追加のワームが誤って含まれていた場合は、ハロカーボンオイルで拭いて除去し、プレートに細菌が追加されていないことを確認します。各アッセイは、アッセイ中に一貫した数の線虫を有するべきである。 注：あまりにも少ない数のワームが感染している場合初期サンプルサイズを増加させることは、洗浄および移動の間の潜在的な損失を軽減する。 </li></ol></li><li>実験室の組織でプレートから過剰のM9を除去する。 M9は硫酸銅（II）溶液と接触してはならない。 注意：この手順を実行中は、ワームや寒天表面に影響を与えないように注意してください。あまりにも過酷に使用された場合、実験室組織はプレートの寒天表面にくぼみを形成し、ワームを除去することができます。 KimWipe 経由で誤って削除されたワームは破棄する必要があります。 </li><li> M9溶液を取り除き、すべてのワームが非液体歩行パターンを開始したら、アッセイストップウォッチを開始します。 <ol><li>最適には、分以内にM9溶液を除去する。本質的なパラメータは、正弦波運動の同定である。ワームは、時に液体で、異なっlocomote 例えばスラッシングではなく、正弦波。実験用の器官ごとに1回、アッセイ停止時計を開始するismsはスラッシングを止める。 </li></ol></li><li> 30分ごとにアッセイプレートをチェックする。 <ol><li>細菌パッチを含むアッセイプレートの場合、4時間にわたって食品パッチに到達すると、生物を正に評価する。ネガティブコントロールプレートについては、障壁を越えた場合には、生物にプラスのスコアを付けます。 </li></ol></li></ol>

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私たちは何も開示することはありません。

このアッセイ設計は、食品レースアッセイ24を変更して、嫌気性正中線バリアを作成し、線虫の損失を防ぐためにプレートの縁の周りに銅溶液を含むようにする。生物は、嫌悪の障壁を横切り、4時間にわたって食物パッチに達する能力について試験される。 npr-9（GF）との関連で 、我々は飢餓状態が嫌悪反応および食物の検出にどのように影響するかを評価するため?...

Caenorhabditis elegansは、わずか302個のニューロンのみからなる神経系の回路分析の比較的容易さのために、数十年間の神経生物学の研究のモデルとして用いられてきた1 。有機体が環境の合図に反応することに頼っているならば、神経系の多くは環境信号の統合を規制することに専念している2 。その神経系の単純さにもかかわらず、 C.エレガンスは、忌避剤3 、誘引物質4 、温度5 、さらには湿度6を含む多様な環境シグナルを検出し、応答することができる。適切に環境シグナルを統合するための失敗は、哺乳動物モデル系の7- 9における行動障害および神経変性条件の数にリンクされています。様々な利用可能な神経疾患モデル<html> C. elegansの 10 株および線虫医薬スクリーン11の開発により、この生物は神経生物学の研究に有用なシステムであることが証明されています。ほぼすべての線虫ゲノム12中の遺伝子、線虫の神経系の我々の理解、ひいては私たち自身にマッピングされた線虫のコネクトーム1および変異の利用可能性を考えると、部分的に創造適切なアッセイの設計によって制限されています。 走化性アッセイの数は、多様な嫌悪刺激3、4、13、14、15に線虫応答性を評価するために、過去40年にわたって開発されてきました。最初の実験では、急速な環境刺激の導入が関与していたが、単一のワームが寒天プレート= &quot;XREF&quot;&gt; 3、14、16。歩行応答に対する即時の変化が記録された。例えば、揮発性臭気物質オクタノールは、毛髪に適用され、野生型ワーム17における後方移動の開始を刺激するために、線虫の鼻の前で漂流され得る。行動選択の評価手段として複数の変数を組み込むために、より複雑なアッセイも開発されている18 。このアッセイのバリエーションには、銅溶液を使用して嫌気性中線バリアを作成することが必要です4 。誘引物質、すなわちジアセチルは、ジアセチル源から離れて移動した虫の化学的障壁の一方の側に置かれた。銅の嫌悪反応に欠陥のあるワームは直ちに障壁を越えてジアセチルに達し、野生型ワームは最初に障壁によって反発した。ワームが最初に銅の障壁に近づいたときの応答が採点された長期間の観察なしに。 ワームが飢餓状態を経て評価されると、環境刺激に対する感受性は低下する19 。忌み嫌う化学オクタノールが線虫の鼻の前で漂流されると、野生型生物は食べ物の上に3〜5秒以内に後退運動を刺激する。これらの生物は10分間食品から除去された後、8〜10秒の遅れた応答を示す20 。したがって、飢餓が増加すると、食物の探索が生存にとってより重要になるので、線虫は有害な環境シグナルに対する嫌悪反応を減少させる。逆に、その過剰発現神経ペプチド受容体9（NPR-9）線虫、食品オンまたはオフオクタノールに応答し、嫌悪刺激21の数に対応することができないことを示しません。これらのnpr-9（GF）生物はまた、食物の存在下でそれらの逆転頻度を調節しないが、過酷なタッチ刺激に反応して逆方向に動き、後方への移動21が可能であることを示す。我々はまた、彼らはまだ食べ物オフ異常な低下反転周波数を示すことが与えられたNPR-9（LF）の変異体は、食品21の存在下で、彼らの行動を調節することができる評価しました。急性外部刺激の導入により、ワームの栄養状態を結合することは食品関連の経路が広く感覚シグナル伝達が22、23の経路を調節することができますするメカニズムの解明に支援しています。線虫環境における食物の存在はまた、エタノール離脱反応を評価するために使用されている24 。この実験では、ワームを様々な濃度のエタノール中でインキュベートし、次いで「飼料競合アッセイ」として知られている寒天プレート上に置いた。食物パッチをプレートの一端に置き、線虫をw食品源から離れて置かれている。エタノール離脱は、ワームが食物のパッチに到達するのに必要な時間を測定することによって評価した。 この栄養ベースの銅回避アッセイは、時間経過に伴う行動変化を評価しながら、追加の環境変数、すなわち食物および銅を統合するための食品競争アッセイに基づいている。これはC. elegansコミュニティー全体で一般的に使用されるプロトコルの適応です4 。このプロトコールは、嫌悪反応および4時間にわたる食物の検出を評価するために使用されている21 。ワームの展示飢餓行動ので、絶食25の30分後、我々はまた、栄養状態への変更は、環境対応に影響を与えることができるかを評価することができます。このアッセイの条件は、実験生物が時間の経過とともに嫌悪感の刺激に反応する反応をどのように変化させるかを測定するため、行動変化を生物は飢えた状態に向かって進行する（そして継続的な飢餓の継続的な測定）。 npr-9（GF）動物は、食べ物や多くの嫌悪的な手がかりに反応して行動を変えないので、これらの行動障害が飢餓の状況で持続するかどうかを特定しようとした。最終的に、このアッセイ設計は、 npr-9（GF）突然変異体を特異的に評価するように処方されているが、新規な菌株を特徴付けるためにさらに適合させることができる。

<table><tbody><tr><td>M9 Solution [3 g KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, 6 g Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, 5 g NaCl, 1 ml 1 M MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O to 1 litre. Autoclave to sterilize before use.]</td><td></td><td></td><td>Produced in lab</td></tr><tr><td>Cupric Sulfate</td><td>Sigma</td><td>C-1297</td><td>Use water to appropriately suspend to a concentration of 0.5M</td></tr></tbody></table>

a caenorhabditis elegans nutritional-status based copper aversion assay

生き残りを確実にするために、生物は、不安定な生息地を避け、一貫した食物源を確保することができなければならない。 Caenorhabditis elegansは、多様な環境刺激の検出時に彼らの歩行パターンを変更し、飢餓状態に応じて行動反応のスイートを調整することができます。線虫は、典型的には、食物源から30分を超えて除去されると、嫌悪反応が減少する。変化する栄養状態に応答する行動変化の観察は、十分に栄養を与えられた状態から飢餓状態への移行を調節する機構に洞察を与えることができる。 本発明者らは、嫌悪な障壁（ すなわち、銅）を横切って長時間にわたり食物源に到達する線虫の能力を測定するアッセイを開発した。このプロトコルは、以前の研究を基にしています。有機体がますます飢えている状態。さらに、このアッセイは、より大きい線虫の集団を同時に評価することができるように、増加したサンプルサイズを可能にする。 銅を検出または応答する能力に欠陥がある生物は、化学バリアを直ちに横切り、一方、野生型線虫は最初に忌避される。野生型ワームはますます飢えているので、障壁を越えて食物源に到達し始めます。我々は、食品感覚または嫌悪な化学物質の検出を含む、多様な環境的合図に応答することができない変異体を評価するためにこのアッセイを設計した。このプロトコルで評価したところ、欠陥のある生物はすぐに障壁を越えたが、食物源を検出することもできなかった。したがって、これらの突然変異体は一時的に食物源に達するにもかかわらず、化学的バリアを繰り返し交差する。このアッセイは、嫌悪と飢餓に関連する可能性のある経路の欠陥を評価するために、ワームの集団を直接的に試験することができる。

野生型（N2）、 npr-9（tm1652）およびnpr-9過剰発現株、 すなわち npr-9（GF） （IC836- npr-9 :: npr-9; sur-5 :: gfp; odr -1 :: rfp）、飢餓と銅嫌悪に対する応答を評価する。野生型生物は、 嫌気的銅障壁を検出し応答することができるが、 npr-9（GF）突然変異体は、4時間のアッセイ21で銅に対して嫌悪反応を開始しない...

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A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

A<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt;栄養状態ベースの銅回避アッセイ

ここでは、有機体がよく摂食された状態から飢えた栄養状態に進行するにつれて、銅回避行動の変化および共通の食物源を見つける能力を評価するために設計されたCaenorhabditis elegans特異的アッセイを提示する。

To ensure survival, organisms must be capable of avoiding unfavorable habitats while ensuring a consistent food source. Caenorhabditis elegans alter their ...

a-caenorhabditis-elegans-nutritional-status-based-copper-aversion

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

6.5K ビュー.  Queen's University. ここでは、有機体がよく摂食された状態から飢えた栄養状態に進行するにつれて、銅回避行動の変化および共通の食物源を見つける能力を評価するために設計されたCaenorhabditis elegans特異的アッセイを提示する。 

ビデオ: A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

Automated Analysis of a Nematode Population-based Chemosensory Preference Assay

The nematode, Caenorhabditis elegans' compact nervous system of only 302 neurons underlies a diverse repertoire of behaviors. To facilitate the dissection of the neural circuits underlying these behaviors, the development of robust and reproducible behavioral assays is necessary. Previous C. elegans behavioral studies have used variations of a "drop test", a "chemotaxis assay", and a "retention assay" to investigate the response of C. elegans to soluble compounds. The method described in this article seeks to combine the complementary strengths of the three aforementioned assays. Briefly, a small circle in the middle of each assay plate is divided into four quadrants with the control and experimental solutions alternately placed. After the addition of the worms, the assay plates are loaded into a behavior chamber where microscope cameras record the worms' encounters with the treated regions. Automated video analysis is then performed and a preference index (PI) value for each video is generated. The video acquisition and automated analysis features of this method minimizes the experimenter's involvement and any associated errors. Furthermore, minute amounts of the experimental compound are used per assay and the behavior chamber's multi-camera setup increases experimental throughput. This method is particularly useful for conducting behavioral screens of genetic mutants and novel chemical compounds. However, this method is not appropriate for studying stimulus gradient navigation due to the close proximity of the control and experimental solution regions. It should also not be used when only a small population of worms is available. While suitable for assaying responses only to soluble compounds in its current form, this method can be easily modified to accommodate multimodal sensory interaction and optogenetic studies. This method can also be adapted to assay the chemosensory responses of other nematode species.

We present a behavior recording setup and protocol that enables automated analysis of the nematode, Caenorhabditis elegans' preference for soluble compounds in a population-based assay. This article describes the construction of a behavior chamber, the behavioral assay protocol, and video analysis software usage.

線虫集団ベースの化学感覚嗜好アッセイの自動解析

The nematode, Caenorhabditis elegans' compact nervous system of only 302 neurons underlies a diverse repertoire of behaviors. To facilitate the dissection ...

行動学

A High-throughput Assay for the Prediction of Chemical Toxicity by Automated Phenotypic Profiling of Caenorhabditis elegans

Applying toxicity testing of chemicals in higher order organisms, such as mice or rats, is time-consuming and expensive, due to their long lifespan and maintenance issues. On the contrary, the nematode Caenorhabditis elegans (C. elegans) has advantages to make it an ideal choice for toxicity testing: a short lifespan, easy cultivation, and efficient reproduction. Here, we describe a protocol for the automatic phenotypic profiling of C. elegans in a 384-well plate. The nematode worms are cultured in a 384-well plate with liquid medium and chemical treatment, and videos are taken of each well to quantify the chemical influence on 33 worm features. Experimental results demonstrate that the quantified phenotype features can classify and predict the acute toxicity for different chemical compounds and establish a priority list for further traditional chemical toxicity assessment tests in a rodent model.

A High-throughput Assay for the Prediction of Chemical Toxicity by Automated Phenotypic Profiling of Caenorhabditis elegans

A quantitative method has been developed to identify and predict the acute toxicity of chemicals by automatically analyzing the phenotypic profiling of Caenorhabditis elegans. This protocol describes how to treat worms with chemicals in a 384-well plate, capture videos, and quantify toxicological related phenotypes.

線虫の表現型プロファイリングを自動化によって化学的毒性予測のための高スループット試金

Applying toxicity testing of chemicals in higher order organisms, such as mice or rats, is time-consuming and expensive, due to their long lifespan and ...

環境学

線虫の食物摂取量と寿命を測定するためのハイスループットアッセイ

Quantifying Food Intake in Caenorhabditis elegans by Measuring Bacterial Clearance

Feeding is an essential biological process for an organism&#39;s growth, reproduction, and survival. This assay aims to measure the food intake of Caenorhabditis elegans&#160;(C. elegans), an important parameter when studying the genetics of aging or metabolism. In most species, feeding is determined by measuring the difference between the amount of food provided and the amount left after a given time interval. The method presented here uses the same strategy to determine the feeding of C. elegans. It measures the amount of bacteria, the food source of C. elegans, cleared within 72 h. This method uses 96-well microtiter plates and has allowed the screening of hundreds of drugs for their ability to modulate food intake at a speed and depth not possible in other animal models. The strength of this assay is that it allows to measure feeding and lifespan simultaneously and directly measures the disappearance of food and, thus, is based on the same principles used for other organisms, facilitating species-to-species comparison.

著者スポットライト:脂肪毒性とHFpEFの関係を探る 

This protocol describes an assay to quantify Caenorhabditis elegans feeding rate based on measuring the clearance of bacteria in liquid culture.

細菌クリアランスの測定による 線虫 の食物摂取量の定量化

Feeding is an essential biological process for an organism&#39;s growth, reproduction, and survival. This assay aims to measure the food intake of ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the development of more effective treatments is the relative lack of understanding of the molecular underpinnings of the effects of ethanol on behavior. The nematode, Caenorhabditis elegans (C.&#160;elegans), provides a useful model in which to generate and test hypotheses about the molecular effects of ethanol. Here, we describe an assay that has been developed and used to examine the roles of particular genes and environmental factors in behavioral responses to ethanol, in which locomotion is the behavioral output. Ethanol dose-dependently causes an acute depression of crawling on an agar surface. The effects are dynamic; animals exposed to a high concentration demonstrate an initial strong depression of crawling, referred to here as initial sensitivity, and then partially recover locomotion speed despite the continued presence of the drug. This ethanol-induced behavioral plasticity is referred to here as the development of acute functional tolerance. This assay has been used to demonstrate that these two phenotypes are distinct and genetically separable. The straightforward locomotion assay described here is suitable for examining the effects of both genetic and environmental manipulations on these acute behavioral responses to ethanol in C.&#160;elegans.

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

C. elegans is a useful model for studying the effects of ethanol on behavior. We present a behavioral assay that quantifies the effects of ethanol on the locomotion speed of crawling worms; both initial sensitivity and the development of acute functional tolerance to ethanol can be measured with this assay.

の歩行速度に対するエタノールの効果を測定するためのアッセイ<em&gt;線虫（Caenorhabditis elegans）</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

神経科学

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the function and regulation of protein folding was studied in vitro, in isolated tissue culture cells and in unicellular organisms. Recent studies have uncovered links between protein homeostasis (proteostasis), metabolism, development, aging, and temperature-sensing. These findings have led to the development of new tools for monitoring protein folding in the model metazoan organism Caenorhabditis elegans. In our laboratory, we combine behavioral assays, imaging and biochemical approaches using temperature-sensitive or naturally occurring metastable proteins as sensors of the folding environment to monitor protein misfolding. Behavioral assays that are associated with the misfolding of a specific protein provide a simple and powerful readout for protein folding, allowing for the fast screening of genes and conditions that modulate folding. Likewise, such misfolding can be associated with protein mislocalization in the cell. Monitoring protein localization can, therefore, highlight changes in cellular folding capacity occurring in different tissues, at various stages of development and in the face of changing conditions. Finally, using biochemical tools ex vivo, we can directly monitor protein stability and conformation. Thus, by combining behavioral assays, imaging and biochemical techniques, we are able to monitor protein misfolding at the resolution of the organism, the cell, and the protein, respectively.

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

To study the relationship between protein homeostasis, stress and aging, we monitored changes in protein folding by following protein dysfunction, protein localization in the cell and protein stability at the organismal, cellular and protein levels, using the genetically tractable metazoan Caenorhabditis elegans as a model system.

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

生物学

Caenorhabditis elegans as a Model System for Discovering Bioactive Compounds Against Polyglutamine-Mediated Neurotoxicity

Age-related misfolding and aggregation of pathogenic proteins are responsible for several neurodegenerative diseases. For example, Huntington&#39;s disease (HD) is principally driven by a CAG nucleotide repeat that encodes an expanded glutamine tract in huntingtin protein. Thus, the inhibition of polyglutamine (polyQ) aggregation and, in particular, aggregation-associated neurotoxicity is a useful strategy for the prevention of HD and other polyQ-associated conditions. This paper introduces generalized experimental protocols to assess the neuroprotective capacity of test compounds against HD using established polyQ transgenic Caenorhabditis elegans models. The AM141 strain is chosen for the polyQ aggregation assay as an age-associated phenotype of discrete fluorescent aggregates can be easily observed in its body wall at the adult stage due to muscle-specific expression of polyQ::YFP fusion proteins. In contrast, the HA759 model with strong expression of polyQ-expanded tracts in ASH neurons is used to examine neuronal death and chemoavoidance behavior. To comprehensively evaluate the neuroprotective capacity of target compounds, the above test results are ultimately presented as a radar chart with profiling of multiple phenotypes in a manner of direct comparison and direct viewing.

Caenorhabditis elegans as a Model System for Discovering Bioactive Compounds Against Polyglutamine-Mediated Neurotoxicity

Here, we present a protocol to assess the neuroprotective activities of test compounds in Caenorhabditis elegans, including polyglutamine aggregation, neuronal death, and chemoavoidance behavior, as well as an exemplary integration of multiple phenotypes.

ポリグルタミン媒介性神経毒性に対する生理活性化合物を発見するためのモデルシステムとしてのCaenorhabditis elegans

Age-related misfolding and aggregation of pathogenic proteins are responsible for several neurodegenerative diseases. For example, Huntington&#39;s ...

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

Oxidative stress, which is the result of an imbalance between production and detoxification of reactive oxygen species, is a major contributor to chronic human disorders, including cardiovascular and neurodegenerative diseases, diabetes, aging, and cancer. Therefore, it is important to study oxidative stress not only in cell systems but also using whole organisms. C. elegans is an attractive model organism to study the genetics of oxidative stress signal transduction pathways, which are highly evolutionarily conserved.
Here, we provide a protocol to measure oxidative stress resistance in C. elegans in liquid. Briefly, ROS-inducing reagents such as paraquat (PQ) and H2O2 are dissolved in M9 buffer, and solutions are aliquoted in the wells of a 96 well microtiter plate. Synchronized L4/young adult C. elegans animals are transferred to the wells (5-8 animals/well) and survival is measured every hour until most worms are dead. When performing an oxidative stress resistance assay using a low concentration of stressors in plates, aging might influence the behavior of animals upon oxidative stress, which could lead to an incorrect interpretation of the data. However, in the assay described herein, this problem is unlikely to occur since only L4/young adult animals are being used. Moreover, this protocol is inexpensive and results are obtained in one day, which renders this technique attractive for genetic screens. Overall, this will help to understand oxidative stress signal transduction pathways, which could be translated into better characterization of oxidative stress-associated human disorders.

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

C. elegans is an attractive model organism to study signal transduction pathways involved in oxidative stress resistance. Here we provide a protocol to measure oxidative stress resistance of C. elegans animals in liquid phase, using several oxidizing agents in 96 well plates.

の酸化ストレス抵抗を測定<em&gt;線虫（Caenorhabditis elegans）</em&gt; 96ウェルのマイクロタイタープレート中

Oxidative stress, which is the result of an imbalance between production and detoxification of reactive oxygen species, is a major contributor to chronic ...

Long-Term Culture of Individual Caenorhabditis elegans on Solid Media for Longitudinal Fluorescence Monitoring and Aversive Interventions

Caenorhabditis elegans are widely used to study aging biology. The standard practice in C. elegans aging studies is to culture groups of worms on solid nematode growth media (NGM), allowing the efficient collection of population-level data for survival and other physiological phenotypes, and periodic sampling of subpopulations for fluorescent biomarker quantification. Limitations to this approach are the inability to (1) follow individual worms over time to develop age trajectories for phenotypes of interest and (2) monitor fluorescent biomarkers directly in the context of the culture environment. Alternative culture approaches use liquid culture or microfluidics to monitor individual animals over time, in some cases including fluorescence quantification, with the tradeoff that the culture environment is contextually distinct from solid NGM. The WorMotel is a previously described microfabricated multi-well device for culturing isolated worms on solid NGM. Each worm is maintained in a well containing solid NGM surrounded by a moat filled with copper sulfate, a contact repellent for C. elegans, allowing longitudinal monitoring of individual animals. We find copper sulfate insufficient to prevent worms from fleeing when subjected to aversive interventions common in aging research, including dietary restriction, pathogenic bacteria, and chemical agents that induce cellular stress. The multi-well devices are also molded from polydimethylsiloxane, which produces high background artifacts in fluorescence imaging. This protocol describes a new approach for culturing isolated roundworms on solid NGM using commercially available polystyrene microtrays, originally designed for human leukocyte antigen (HLA) typing, allowing the measurement of survival, physiological phenotypes, and fluorescence across the lifespan. A palmitic acid barrier prevents worms from fleeing, even in the presence of aversive conditions. Each plate can culture up to 96 animals and easily adapts to a variety of conditions, including dietary restriction, RNAi, and chemical additives, and is compatible with automated systems for collecting lifespan and activity data.

Long-Term Culture of Individual Caenorhabditis elegans on Solid Media for Longitudinal Fluorescence Monitoring and Aversive Interventions

Here, we present a protocol to culture isolated individual nematodes on solid media for lifelong physiological parameter tracking and fluorescence quantification. This culture system includes a palmitic acid barrier around single-worm wells to prevent animals from fleeing, allowing the use of aversive interventions, including pathogenic bacteria and chemical stressors.

縦断的蛍光モニタリングと嫌悪的介入のための固体培地上での個々の カエノラブディティスエレガンスの 長期培養

Caenorhabditis elegans are widely used to study aging biology. The standard practice in C. elegans aging studies is to culture groups of worms on solid ...

A

要約

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線虫集団ベースの化学感覚嗜好アッセイの自動解析

線虫の表現型プロファイリングを自動化によって化学的毒性予測のための高スループット試金

細菌クリアランスの測定による線虫の食物摂取量の定量化

細菌クリアランスの測定による線虫の食物摂取量の定量化

細菌クリアランスの測定による線虫の食物摂取量の定量化

の歩行速度に対するエタノールの効果を測定するためのアッセイ

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

ポリグルタミン媒介性神経毒性に対する生理活性化合物を発見するためのモデルシステムとしてのCaenorhabditis elegans

の酸化ストレス抵抗を測定

縦断的蛍光モニタリングと嫌悪的介入のための固体培地上での個々のカエノラブディティスエレガンスの長期培養

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線虫の表現型プロファイリングを自動化によって化学的毒性予測のための高スループット試金

細菌クリアランスの測定による 線虫 の食物摂取量の定量化

細菌クリアランスの測定による 線虫 の食物摂取量の定量化

細菌クリアランスの測定による 線虫 の食物摂取量の定量化

の歩行速度に対するエタノールの効果を測定するためのアッセイ

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

ポリグルタミン媒介性神経毒性に対する生理活性化合物を発見するためのモデルシステムとしてのCaenorhabditis elegans

の酸化ストレス抵抗を測定

縦断的蛍光モニタリングと嫌悪的介入のための固体培地上での個々の カエノラブディティスエレガンスの 長期培養

細菌クリアランスの測定による線虫の食物摂取量の定量化

細菌クリアランスの測定による線虫の食物摂取量の定量化

細菌クリアランスの測定による線虫の食物摂取量の定量化

縦断的蛍光モニタリングと嫌悪的介入のための固体培地上での個々のカエノラブディティスエレガンスの長期培養