K.E.H. was supported by the Training Grant in Molecular Biology NIH-T32-GM08730. This work was supported by NIH, NIDDK Grant 5K01DK095932 and AHA Award 12BGIA11930014 to T.R.

1. İlgi Genotiplerinde ile Sineklerin Gelen Yumurta Toplama NOT: İdeal haçlar 150 bakire sinek ve en az 75 erkek oluşur. Stok koleksiyonları en az 200 sinekler oluşmalıdır. <ol><li> üzüm tabak hazırlayın. <ol><li> 4 L&#39;lik bir şişede 1.5 L damıtılmış su ile 37.5 g agar ekleyin. </li><li> 121 ºC (250 ºF) 50 dakika süreyle otoklav su / agar karışımı. </li><li> Su / agar karışımı otoklavlama iken, 500 mi üzüm suyu için 50 g sükroz ilave ve sükroz çözünene kadar ısıtılmış bir karıştırma plakası üzerinde bir karıştırma çubuğu ile karıştırıldı. </li><li> Isı kapatın ve 70&#39;in altında ºC üzüm suyu / sakaroz karışımı soğutmak için karıştırma devam edin. bir alkol termometre ile iç sıcaklığını kontrol edin. </li><li> Üzüm suyu / sükroz karışımı ısınmaya bırakılmış ve çözünmesi için karıştırılmıştır (ör Tegosept) 3 g Drosophila anti-mantar maddesi ekleyin. </li><li> su / Agar karışım otoklav dışında olduğunda, şişeyi bazen dönen irtibatta soğumaya bırakın. </li><li&gt; Su / agar karışımı ve üzüm suyu / sakaroz karışımı birleştirin ve iyice karışık kadar karıştırın. </li><li> Küçük bir petri kabı (35 x 10 mm tarzı) kapak üzüm karışımı 10 ml - 8 eklemek için serolojik bir pipet kullanın. kapak duvarlarının yüksekliği dışbükey şekil oluşturmak için daha karışım yüksek taç izin verin. </li><li> üzüm plakaları 4 ° C&#39;de hava geçirmez bir kapta oda sıcaklığında 2 saat boyunca soğumaya ve daha sonra saklamanıza olanak sağlar. </li></ol></li><li> maya hamurunu hazırlayın. <ol><li> 50 ml konik bir tüp içinde 4 g canlı aktif kuru maya 6 ml fosfat tampon çözeltisi (PBS) ilave edin ve pürüzsüz hale gelene kadar bir spatül ile karıştırın. </li><li> Mağaza maya 4 ° C&#39;de yapıştırın. </li></ol></li><li> üzüm plakanın ortasına maya hamur küçük topak (yaklaşık 1/8 çay kaşığı) ekleyin. bir spatula ile herhangi bir pürüzlü kenarları pürüzsüz. </li><li> onlar ortam sıcaklığına ulaşana kadar bir kuluçka üzüm tabak yerleştirin. </li><li> bir yumurta toplama haznesi ve yer üzüm plaka w içine ilgi sinekler aktarınüstünde içe dönük i maya yapıştırın. Yumurta toplama haznesine bant üzüm plaka plaka dışarı düşmesine izin önlemek için. üzüm plaka altındaki önemli genotip ve tarih bilgilerini yazmak için emin olun. </li><li> sinekler üzüm plaka üzerinde yumurtalarını bırakmak için izin yumurta toplama haznesini upend. </li><li> Bir kutu yerleştirin veya yumurta toplama odaları üzerinde kapak ve 25 ºC bir kuluçka koyun. </li><li> 6 saat - sinekler 4 yumurtalarını bırakmak için izin verin. </li><li> Yumurta toplama odasının dışında üzüm plakasını alarak ve gıda onların şişenin içine geri sinekler aktararak toplama bitirin. üzüm plaka herhangi bir aşırı maya macunu temizlemek için bir spatula kullanın. 24 saat ~ 25 ° C&#39;de, nemlendirilmiş bir kuluçka makinesi içinde daha büyük bir petri tabağına deposu üzüm plakası. </li></ol> Deneysel Gıda 2. Aktarım Larvalar <ol><li> Deneysel yemek hazırlamak. NOT: Bu yemek tarifi Bloomington stok merkezi tarifi 18 dayanmaktadır. önemli değişikliklersahne dolaşıp zamanlaması ile değerlendirilen gıda besin değerini optimize etmek için maya miktarı artmış içerir (112 arası - 120 saat 25 ° C&#39;de yumurta toplandıktan sonra). sağlık ve deneysel larva gelişimi için bu tarifi doğru bulduk birlikte, herhangi bir gıda tarifi adım 3.10 listelenen örnekleri pozitif ve negatif kontroller, kabul edilebilir belirli bir kalibre edilmesidir. <ol><li> 1.600 mL distile su ölçün. </li><li> 134 g mısır unu, 10.6 gr Drosophila Agar tip II ve 1 L&#39;lik bir beher içinde suyun bir kısmı (~ 500 mi) karıştırın. Motorlu bir el mikseri ile 2 dakika boyunca karıştırın. </li><li> 70 g canlı aktif kuru maya, 18.4 g soya unu, 84.8 g malt özü, başka bir 1 L&#39;lik bir kap içinde bir miktar su (~ 500 mi) karıştırın. Motorlu bir el mikseri ile 2 dakika boyunca karıştırın. </li><li> her behere girdap ve 4 L&#39;lik bir şişeye dökün. beher yıkayın ve balona eklemek için kalan su kullanın. </li><li> döndürülerek karıştırılır, 140 ml hafif mısır şurubu ölçün ve balona ekleyin. &lt;/ Li&gt; <li> Sıvı ortamda 121 ºC (250 ºF) 50 dakika süreyle otoklav. </li><li> Otoklavlamadan sonra, 4 L&#39;lik bir beher içine gıda dökün ve soğumaya bırakın. motorlu el mikseri ile harmanlayarak soğutma sürecine yardımcı. </li><li> Şişe dokunun kadar soğuduktan sonra, 8.8 ml propiyonik asit ve 16.8 ml Drosophila mantar önleyici madde / etanol çözeltisi ilave edilir. İyice karıştırın. (Çözelti 70 ° C&#39;yi etmez emin, 380 g Drosophila mantar önleyici madde L 1-200 derece etanol eklenerek ve çözünene kadar sıcak bir plaka üzerinde karıştırıldı Drosophila mantar önleyici madde çözeltisi olun). </li><li> Gıda, yaklaşık 1 inç derin kadar şişe içine yiyecek dökün ve 2 için oda sıcaklığında soğumaya bırakın - 3 saat. 25 ºC &#39;de bir kuluçka şişeleri ve mağaza takın. Bir hafta içinde kullanın. </li></ol></li><li> Bunu skor gıda flakon üst tabakası içine bir spatula birkaç kez dalma. Bu yuva ve beslemek için larva yardımcı olacaktır. </li><li> 22-24 saat Yumurta toplama sahip sonrauçlu, aynı yaklaşık boyutu 50 birinci evre (L1) larvaları toplamak için küçük bir fırça kullanın. Deneysel Gıda larva yerleştirin. ve başka bir genotip devam etmeden önce fırça üzerinde kalan larvalar olmadığından emin mendil bir laboratuvar üzerinde fırça temizleyin. </li><li> 25 ºC bir kuluçka larva flakon yerleştirin ve geliştirmeye olanak sağlar. </li></ol> 3. Larva Fat Düzeylerinin Belirlenmesi <ol><li> çözümler hazırlayın. <ol><li> 1 L 10x PBS stok hazırlayın. <ol><li> Bir karıştırma çubuğu ihtiva eden bir 2 L&#39;lik bir kap içinde 800 ml suya 80 g NaCl, 2 g KCI, 14.4 g 2 Na HPO 4 ve 2,4 g KH 2 PO 4 ekleyin. Tüm tuzlar dahil kadar hiçbir ısı ile karıştırın. 7.4 pH değerini. su ile 1 L ses seviyesini artırmak. </li></ol></li><li> 2 L 1x PBS hazırlayın. 1800 ml su 200 ml 10 x PBS stok solüsyonu ekleyin. </li><li> % 20 / h sakaroz w yapmak için 1x PBS bu stok kullanın. </li></ol></li><li> gelen larvaların şişesini kaldır(Genellikle yumurta koleksiyonları beş gün sonra) flakonun tarafı yukarı dolaşıp 40 larva - inkübatör kez 20 vardır. Tarih ve saat tahlilinde hem de larvaları dolaşıp sayısını kaydeder. </li><li> 50 ml konik bir tüp 11.5 ml PBS ve 9 ml% 20 sukroz eklenerek deney çözeltisi hazırlayın. </li><li> Şişenin üst 1 inç - 0.5 olana kadar şişeye% 20 sukroz ekleyin. </li><li> yavaşça hala gıda burrowing serbest larva gıda üst tabakası karıştırmaya bir spatula kullanın. Bütün larvalar sukroz çözeltisi yüzeyine yükselir. </li><li> yavaşça adım 3,3 başlangıçtaki sakaroz konsantrasyonu larvaları aktarmak için forseps kullanabilir. </li><li> nazikçe bu çözüm larvaları karıştırmak için bir spatula kullanın. </li><li> konik tüp Cap ve iyice çözüm karıştırmak için birkaç kez upend. </li><li> konik tüp kapağını açmak ve nazik bir vorteks oluşturmak için girdap. </li><li> ya solüsyon veya si üstüne kayan, larva yerleşmek için izinalt yanaşma. Larvalar yerleşmek için 5 dakika - 2 bekleyin. NOT: Her iki yüzen veya batan kesinlikle değil larva hala varsa, bir şamandıraya veya platin ya da larva etiketlemek için bir eşik noktası olarak kullanmak için bir hattı almak. tüm genotipleri, bu aynı kriter uygulayın. Biz 19 mutantları tahlilin kalibrasyonu için bir negatif kontrol olarak kullanılabilecek bir pozitif kontrol ve lsd2 olarak kullanılabilir eden sınır. ADP ya da SiR2 17 mutan larva olarak konik tüp altındaki açı kullanılır. </li><li> yüzen larva sayısı ve test spesifik konsantrasyon kaydedin. </li><li> yoğunluğunu artırmak için deney solüsyonuna 1 mi,% 20 sükroz ekleyin. </li><li> Tekrarlayın 3,10 3.7 adımları tekrarlayın. yüzen larva sayısı ve bu yeni konsantrasyon kaydedin. </li><li> larvaların en az% 95 yüzen kadar adımları 3.12 ve 3.13 devam edin. </li><li> PBS ile dolu bir diseksiyon çanak içine tüm larvaların toplamak için forseps kullanabilir. </li><li> obsHerhangi bir küçük larva, pupa öncesi, pupa veya genotipler arasında başka bir fark olup olmadığını bir mikroskop ve not altında erve larvaları. NOT: İdeal olarak, tüm larva homojen ve aynı gelişim aşamasında görünmelidir. Sadece bu koşullar altında uygun yağ ölçümleri gözlenmiştir. </li><li> larvaların toplam numarasını kaydedin. </li><li> forseps kullanarak, kuru mendil, bir laboratuara 10 larva transferi. Bir ependorf tüp Etiket ve tüp içinde 10 larva yerleştirin. </li><li> Sıvı nitrojen içinde larvaları dondurma. -20 ° C&#39;de tüp saklayın. </li></ol>

<ol>
	<li>Bier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila,+the+golden+bug,+emerges+as+a+tool+for+human+genetics.">Drosophila, the golden bug, emerges as a tool for human genetics.</a> Nat Rev Genet. 6, 9-23 (2005).</li><li>Liu, Z., Huang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+metabolism+in+Drosophila+development+and+disease+Using+Drosophila+System+to+Study+Lipid+Metabolism+Lipids+Function+in+Drosophila+Early+Development.">Lipid metabolism in Drosophila development and disease Using Drosophila System to Study Lipid Metabolism Lipids Function in Drosophila Early Development.</a> Acta Biochim Biophys Sin. 45 (1), 44-50 (2013).</li><li>Ruden, D. M., Lu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+conservation+of+metabolism+explains+howDrosophila+nutrigenomics+can+help+us+understand+human+nutrigenomics.">Evolutionary conservation of metabolism explains howDrosophila nutrigenomics can help us understand human nutrigenomics.</a> Genes Nutr. 1 (2), 75-84 (2006).</li><li>Wolf, M. J., Rockman, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila,+genetic+screens,+and+cardiac+function.">Drosophila, genetic screens, and cardiac function.</a> Circ. Res. 109, 794-806 (2011).</li><li>Trinh, I., Boulianne, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+obesity+and+its+associated+disorders+in+Drosophila.">Modeling obesity and its associated disorders in Drosophila.</a> Physiology (Bethesda). 28 (2), 117-124 (2013).</li><li>Azeez, O. I., Meintjes, R., Chamunorwa, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+body,+fat+pad+and+adipose+tissues+in+invertebrates+and+vertebrates:+the+nexus.">Fat body, fat pad and adipose tissues in invertebrates and vertebrates: the nexus.</a> Lipids Health Dis. 13, 71 (2014).</li><li>Dourlen, P., Sujkowski, A., Wessells, R., Mollereau, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+transport+proteins+in+disease:+New+insights+from+invertebrate+models.">Fatty acid transport proteins in disease: New insights from invertebrate models.</a> Prog. Lipid Res. 60, 30-40 (2015).</li><li>Hildebrandt, A., Bickmeyer, I., K&#252;hnlein, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliable+Drosophila+body+fat+quantification+by+a+coupled+colorimetric+assay.">Reliable Drosophila body fat quantification by a coupled colorimetric assay.</a> PLoS One. 6 (9), e23796 (2011).</li><li>Tennessen, J. M., Barry, W. E., Cox, J., Thummel, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+studying+metabolism+in+Drosophila.">Methods for studying metabolism in Drosophila.</a> Methods. 68, 105-115 (2014).</li><li>Al-Anzi, B., Zinn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorimetric+measurement+of+triglycerides+cannot+provide+an+accurate+measure+of+stored+fat+content+in+Drosophila.">Colorimetric measurement of triglycerides cannot provide an accurate measure of stored fat content in Drosophila.</a> PLoS One. 5 (8), e12353 (2010).</li><li>Thanh, N. T. K., Stevenson, G., Obatoml, D., Bach, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Lipids+in+Animal+Tissues+by+High-Performance+Thin-Layer+Chromatography+with+Densitometry.">Determination of Lipids in Animal Tissues by High-Performance Thin-Layer Chromatography with Densitometry.</a> J. Planar Chromatogr. 13, 375-381 (2000).</li><li>Borrull, A., Lopez-Martinez, G., Poblet, M., Cordero-Otero, R., Rozes, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+the+separation+and+quantification+of+neutral+lipid+species+using+GC-MS.">A simple method for the separation and quantification of neutral lipid species using GC-MS.</a> Eur. J. Lipid Sci. Technol. 117, 274-280 (2015).</li><li>Shui, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+one+step+analysis+of+cellular+lipidomes+using+liquid+chromatography+coupled+with+mass+spectrometry:+application+to+Saccharomyces+cerevisiae+and+Schizosaccharomyces+pombe+lipidomics.">Toward one step analysis of cellular lipidomes using liquid chromatography coupled with mass spectrometry: application to Saccharomyces cerevisiae and Schizosaccharomyces pombe lipidomics.</a> Mol. Biosyst. 6, 1008-1017 (2010).</li><li>Farvid, M. S., Ng, T. W. K., Chan, D. C., Barrett, P. H. R., Watts, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+adiponectin+and+resistin+with+adipose+tissue+compartments,+insulin+resistance+and+dyslipidaemia.">Association of adiponectin and resistin with adipose tissue compartments, insulin resistance and dyslipidaemia.</a> Diabetes. Obes. Metab. 7 (4), 406-413 (2005).</li><li>Urbanchek, M. G., Picken, E. B., Kalliainen, L. K., Kuzon, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+force+deficit+in+skeletal+muscles+of+old+rats+is+partially+explained+by+the+existence+of+denervated+muscle+fibers.">Specific force deficit in skeletal muscles of old rats is partially explained by the existence of denervated muscle fibers.</a> J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 56A (5), B191-B197 (2001).</li><li>Mosher, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordination+between+Drosophila+Arc1+and+a+specific+population+of+brain+neurons+regulates+organismal+fat.">Coordination between Drosophila Arc1 and a specific population of brain neurons regulates organismal fat.</a> Dev. Biol. 405 (2), 280-290 (2015).</li><li>Reis, T., van Gilst, M. R., Hariharan, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+buoyancy-based+screen+of+drosophila+larvae+for+fat-+storage+mutants+reveals+a+role+for+Sir2+in+coupling+fat+Storage+to+Nutrient+Availability.">A buoyancy-based screen of drosophila larvae for fat- storage mutants reveals a role for Sir2 in coupling fat Storage to Nutrient Availability.</a> PLoS Genet. 6 (11), e1001206 (2010).</li><li>Teixeira, L., Rabouille, C., R&#248;rth, P., Ephrussi, A., Vanzo, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+Perilipin/ADRP+homologue+Lsd2+regulates+lipid+metabolism.">Drosophila Perilipin/ADRP homologue Lsd2 regulates lipid metabolism.</a> Mech. Dev. 120 (9), 1071-1081 (2003).</li><li>Perez, C. L., Van Gilst, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+13C+Isotope+Labeling+Strategy+Reveals+the+Influence+of+Insulin+Signaling+on+Lipogenesis+in+C.+elegans.">A 13C Isotope Labeling Strategy Reveals the Influence of Insulin Signaling on Lipogenesis in C. elegans.</a> Cell Metab. 8, 266-274 (2008).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

10 - lipit düzeyleri 8 ölçmek için geliştirilmiş olan teknikler çok sayıda bulunmaktadır. Ancak, bu yöntemlerin her biri yukarıda özetlenen yüzdürme-bazlı deney ile ele bazı önemli dezavantajları ile birlikte geliyor. İlk olarak, bu deney, son derece hızlıdır. 60 dk - tam bir konsantrasyon gradyanı test fazla 30 sürer. Bu, şu anda kullanılmakta olan tekniklerin en çok büyük bir gelişmedir. bunları analiz etmek lipidler ve başka birkaç saat izole etmek iç...

Drosophila melanogaster genetik ve diğer temel biyolojik soruların çalışmada bir yüzyılı aşkın süredir kullanılmaktadır. Drosophila birçok insan hastalıklarının çalışmada güçlü bir araç olduğunu son birkaç on yıl içinde, bu netlik kazanmıştır. İnsan hastalıklarıyla bağlantılı genlerin% 80 bir tanımlanmış uçucu ortologu 1 etmek - - 70 de 4, Drosophila kompleks hastalıkların çalışma için basitleştirilmiş yapılmamış çevrilebilir bir sistem sağlar. Özellikle Metabolizma böyle çalışmaya yararlanmıştır. Sadece iyi uçar ve insanlar arasında korunmuş metabolizmanın genetik olarak, ama ilgili organ ve hücre tipleri, aynı zamanda 2,5 çok benzerdir. Örneğin, memeli karaciğer ve beyaz yağ dokusunda 6 yapılanlar hem triasilgliseridler (TAG) ve glikojen, fonksiyonlar benzer sinek mağazaların vücut yağ. Insan obezite için bir model olarak Drosophila kullanarak büyük ölçüde lipit anlayışımızı geliştirdimetabolizma ve obezite 7 genetiği. gelişme larva bu besleme adanmış ve enerji depolama pupariation sırasında kullanılmak üzere depolama veya kullanım besin ayrılmasını çalışmak için özellikle yararlıdır. Şu anda, Drosophila yağ depolama düzeylerinin belirlenmesi birçok farklı sayısal yöntemler vardır. En yaygın olarak kullanılan yöntem birleştiğinde kolorimetrik (CCA) 8,9 olduğunu. CCA İnsan serumundaki TAG düzeylerinin belirlenmesi için geliştirilmiş ve sonunda renkli bir ürün üreten bir redoks-bağlanmış reaksiyonda elde edilen çeşitli reaksiyonlara tabi olacak trigliseritlerin omurgasından serbest gliserol öncül faaliyet göstermektedir. ışığının belirli dalga boyu Absorbans, gliserol mevcut başlangıç ​​miktarını belirlemek için ölçülür. Bununla birlikte, gliserol da TAG ilave olarak mono- ve diasilgliseridler serbest bırakılabilir ve bu nedenle, S doğru bir göstergesi olabilirizlenmekte vücut yağ 9. Ayrıca, ezilmiş yetişkin sineklerin göz pigmenti bazı absorbans okumaları müdahale ve sonuçları 9,10 karmaşık hale getirebilir. Bu nedenle, CCA eşlik yoğunluk 10,11 nicelendirilebilir en lipit ailelerinin ayrılmasını sağlar, ince tabaka kromatografisi (TLC) ile doğrulanması gerekir. Ancak, steroller gibi bazı lipit sınıfları analiz edilemez ve farklı bir şekilde 12 sayısal olmalıdır. Kütle spektrometrisi (MS) önemli hücresel lipidlerin 12,13 bütün sınıfları ölçmek için doğru bir yöntemdir. Ancak, MS tarafından analiz için gerekli lipid çıkarma prosedürleri hem zaman alıcı (çoğu almayı neredeyse bir tam gün) ve yüksek maliyetlidir. Burada hızlı ve ucuza Drosophila melanogaster L3 larvaları organizma yağ düzeylerini belirlemek için alternatif bir yöntem mevcut. Aşağıda sunulan yöntem yağ dokusu ve yağsız doku arasındaki yoğunluk farkı patlatır. memeli faT hücre 1.06 g / ml, 15 yoğunluğunda olarak, yaklaşık 0.9 g / ml 14 ise, iskelet kası bir yoğunluğa sahiptir. Bu fark, yağ yüksek mağaza hayvanlar onları sabit yoğunluklu bir çözelti içinde daha iyi bir yüzer sağlayacak yağ alt mağazalar, hayvanların daha düşük bir yoğunluğa sahip olacağı anlamına gelir. Bu özellik, pahalı olmayan ve invazif olmayan hem de olan Hayvanların büyük sayıda son derece hızlı taranması için izin verir. Yüzdürme tabanlı analiz yanı sıra obezitenin 16,17 yeni genetik ve nörolojik düzenleyiciler tanımlamak için yağ seviyelerinin bilinen düzenleyicileri değiştiren fenotipleri onaylamak için ikisi de kullanılır olmuştur.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="670">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bacto Agar</td>
			<td style="width:168px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">214030</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Welch&#39;s Original 100% Grape Juice</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sucrose</td>
			<td style="width:168px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tegosept</td>
			<td style="width:168px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:119px;">20-259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethanol</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>200 proof</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Baker&#39;s yeast</td>
			<td style="width:168px;">Fleichmann&#39;s</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Yellow Corn Meal</td>
			<td style="width:168px;">Quaker</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Enriched degerminated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Drosophila Agar Type II</td>
			<td style="width:168px;">Apex</td>
			<td style="width:119px;">66-104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Soy Flour</td>
			<td style="width:168px;">ADM Specialty Ingredients</td>
			<td style="width:119px;">062-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Malt Extract</td>
			<td style="width:168px;">Breiss</td>
			<td style="width:119px;">5748</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Light Corn Syrup</td>
			<td style="width:168px;">Karo</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Propionic Acid</td>
			<td>VWR</td>
			<td>U330-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium chloride</td>
			<td style="width:168px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">50147491</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5655-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium phosphate anhydrous</td>
			<td style="width:168px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S3933</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium chloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P330-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">35 x 10mm petri plate</td>
			<td style="width:168px;">Fisher</td>
			<td>08-757-100A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50mL Conical</td>
			<td style="width:168px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">50-869-569</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a buoyancy-based method of determining fat levels in drosophila

Drosophila melanogaster is a key experimental system in the study of fat regulation. Numerous techniques currently exist to measure levels of stored fat in Drosophila, but most are expensive and/or laborious and have clear limitations. Here, we present a method to quickly and cheaply determine organismal fat levels in L3 Drosophila larvae. The technique relies on the differences in density between fat and lean tissues and allows for rapid detection of fat and lean phenotypes. We have verified the accuracy of this method by comparison to body fat percentage as determined by neutral lipid extraction and gas chromatography coupled with mass spectrometry (GCMS). We furthermore outline detailed protocols for the collection and synchronization of larvae as well as relevant experimental recipes. The technique presented below overcomes the major shortcomings in the most widely used lipid quantitation methods and provides a powerful way to quickly and sensitively screen L3 larvae for fat regulation phenotypes while maintaining the integrity of the larvae. This assay has wide applications for the study of metabolism and fat regulation using Drosophila.

Şekil 1 canlılık bazlı analiz genetik manipüle larva hem yüksek ve düşük yağ depolarını algılayabilir nasıl bir örnek temsil eder. Şekil 1A larva beyindeki nöronların belirli bir alt kümesi (E347) bu uyarma veya susturulması gösterir uyarır alt ve üst yağ sırasıyla saklar. Aynı genetik arka plan kontrolü her iki durumda da kullanılmıştır. 1B yoğunluk deneyi ile elde edilen bu fenotip GCMS ile nötral lipi...

Watch this Scientific Journal Video about A Buoyancy-based Method of Determining Fat Levels in Drosophila at JoVE.com

A Buoyancy-based Method of Determining Fat Levels in Drosophila

Burada üçüncü instar (L3) Drosophila melanogaster larva evresi içinde organizma yağ seviyelerini ölçmek için bir yöntem mevcut. Bu yöntem, değişmiş yağ mağazaları ile larva ayırt etmek için yağ dokusunun nispeten düşük yoğunluğa patlatır. Yüzdürme-tabanlı analiz, hızlı, tekrarlanabilir ve ekonomik tarama için değerli bir araçtır.

Yağ Düzeylerinin Belirlenmesi A Yüzdürme tabanlı Yöntemi<em&gt; Drosophila</em

Drosophila melanogaster is a key experimental system in the study of fat regulation. Numerous techniques currently exist to measure levels of stored fat ...

a-buoyancy-based-method-of-determining-fat-levels-in-drosophila

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

A Buoyancy-based Method of Determining Fat Levels in Drosophila

8.5K Görüntüleme.  University of Colorado Anschutz Medical Campus.  Burada üçüncü instar (L3) Drosophila melanogaster larva evresi içinde organizma yağ seviyelerini ölçmek için bir yöntem mevcut. Bu yöntem, değişmiş yağ mağazaları ile larva ayırt etmek için yağ dokusunun nispeten düşük yoğunluğa patlatır. Yüzdürme-tabanlı analiz, hızlı, tekrarlanabilir ve ekonomik tarama için değerli bir araçtır. 

Video: A Buoyancy-based Method of Determining Fat Levels in Drosophila

Studying Aggression in Drosophila (fruit flies)

Aggression is an innate behavior that evolved in the framework of defending or obtaining resources. This complex social behavior is influenced by genetic, hormonal and environmental factors. In many organisms, aggression is critical to survival but controlling and suppressing aggression in distinct contexts also has become increasingly important. In recent years, invertebrates have become increasingly useful as model systems for investigating the genetic and systems biological basis of complex social behavior. This is in part due to the diverse repertoire of behaviors exhibited by these organisms. In the accompanying video, we outline a method for analyzing aggression in Drosophila whose design encompasses important eco-ethological constraints. Details include steps for: making a fighting chamber; isolating and painting flies; adding flies to the fight chamber; and video taping fights. This approach is currently being used to identify candidate genes important in aggression and in elaborating the neuronal circuitry that underlies the output of aggression and other social behaviors.

Studying Aggression in Drosophila fruit flies

Drosophila (meyve sineği) Saldırganlık incelenmesi

Aggression is an innate behavior that evolved in the framework of defending or obtaining resources.  This complex social behavior is influenced by ...

Biyoloji

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a tremendous amount of data available comes an explosion of genotyping methods. Pyrosequencing(R) is one of the most thorough yet simple methods to date used to analyze polymorphisms. It also has the ability to identify tri-allelic, indels, short-repeat polymorphisms, along with determining allele percentages for methylation or pooled sample assessment. In addition, there is a standardized control sequence that provides internal quality control. This method has led to rapid and efficient single-nucleotide polymorphism evaluation including many clinically relevant polymorphisms. The technique and methodology of Pyrosequencing is explained.


Pyrosequencing(R) is one of the most thorough yet simple methods to date used to analyze polymorphisms. This method has led to rapid and efficient single-nucleotide polymorphism evaluation including many clinically relevant polymorphisms. The technique and methodology of Pyrosequencing is explained.

Pyrosequencing: Doğru Genotiplendirme için Basit Bir Yöntem

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

Visually Mediated Odor Tracking During Flight in Drosophila

Flying insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals additionally track odors carried in the wind. As such, visual stabilization of upwind tracking directly aids in odor tracking. But do olfactory signals directly influence visual tracking behavior independently from wind cues? Additionally, recent advances in olfactory molecular genetics and neurophysiology have motivated novel quantitative behavioral analyses to assess the behavioral influence of (e.g.) genetically inactivating specific olfactory activation circuits. We modified a magnetic tether system originally devised for vision experiments by equipping the arena with narrow laminar flow odor plumes. Here we focus on experiments that can be performed after a fly is tethered and is able to navigate in the magnetic arena. We show how to acquire video images optimized for measuring body angle, how to judge stable odor tracking, and we illustrate two experiments to examine the influence of visual cues on odor tracking.

Here we describe how to optimize the acquired video image for an olfactory magnetic-tether (OMT) apparatus. We also describe two sample experimental protocols for studying visuo-olfactory fusion.

Drosophila Uçuş sırasında Görme aracılığı Koku Takibi

Flying insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals additionally track odors carried in the wind. As such, visual ...

Neurocircuit Assays for Seizures in Epilepsy Mutants of Drosophila

Drosophila melanogaster is a useful tool for studying seizure like activity. A variety of mutants in which seizures can be induced through either physical shock or electrical stimulation is available for study of various aspects of seizure activity and behavior. All flies, including wild-type, will undergo seizure-like activity if stimulated at a high enough voltage. Seizure like activity is an all-or-nothing response and each genotype has a specific seizure threshold. The seizure threshold of a specific genotype of fly can be altered either by treatment with a drug or by genetic suppression or enhancement. The threshold is easily measured by electrophysiology. Seizure-like activity can be induced via high frequency electrical stimulation delivered directly to the brain and recorded through the dorsal longitudinal muscles (DLMs) in the thorax. The DLMs are innervated by part of the giant fiber system. Starting with low voltage, high frequency stimulation, and subsequently raising the voltage in small increments, the seizure threshold for a single fly can be measured.

Neurocircuit Assays for Seizures in Epilepsy Mutants of Drosophila

Using high frequency electrical stimulation, seizure-like activity can be induced in Drosophila. This activity is easily recorded from the giant fiber system.

, Epilepsi Mutants Nöbetler Neurocircuit Tahliller Drosophila</em

Drosophila melanogaster is a useful tool for studying seizure like activity. A variety of mutants in which seizures can be induced through either physical ...

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

A major strategy for purifying and isolating different types of intracellular organelles is to separate them from each other based on differences in buoyant density. However, when cells are disrupted prior to centrifugation, proteins and organelles in this non-native environment often inappropriately stick to each other. Here we describe a method to separate organelles by density in intact, living Drosophila embryos. Early embryos before cellularization are harvested from population cages, and their outer egg shells are removed by treatment with 50% bleach. Embryos are then transferred to a small agar plate and inserted, posterior end first, into small vertical holes in the agar. The plates containing embedded embryos are centrifuged for 30 min at 3000g. The agar supports the embryos and keeps them in a defined orientation. Afterwards, the embryos are dug out of the agar with a blunt needle. Centrifugation separates major organelles into distinct layers, a stratification easily visible by bright-field microscopy. A number of fluorescent markers are available to confirm successful stratification in living embryos. Proteins associated with certain organelles will be enriched in a particular layer, demonstrating colocalization. Individual layers can be recovered for biochemical analysis or transplantation into donor eggs. This technique is applicable for organelle separation in other large cells, including the eggs and oocytes of diverse species.

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

We describe a method to separate organelles by density in living Drosophila embryos. Embryos are embedded in agar and centrifuged. This technique yields reproducible separation of major organelles along the anterior-posterior embryo axis. This method facilitates colocalization experiments and yields organelle fractions for biochemical analysis and transplantation experiments.

In-vivo Drosophila Embriyolar Santrifüj

A major strategy for purifying and isolating different types of intracellular organelles is to separate them from each other based on differences in ...

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

The nematode C. elegans has emerged as an important model for the study of conserved genetic pathways regulating fat metabolism as it relates to human obesity and its associated pathologies. Several previous methodologies developed for the visualization of C. elegans triglyceride-rich fat stores have proven to be erroneous, highlighting cellular compartments other than lipid droplets. Other methods require specialized equipment, are time-consuming, or yield inconsistent results. We introduce a rapid, reproducible, fixative-based Nile red staining method for the accurate and rapid detection of neutral lipid droplets in C. elegans. A short fixation step in 40% isopropanol makes animals completely permeable to Nile red, which is then used to stain animals. Spectral properties of this lipophilic dye allow it to strongly and selectively fluoresce in the yellow-green spectrum only when in a lipid-rich environment, but not in more polar environments. Thus, lipid droplets can be visualized on a fluorescent microscope equipped with simple GFP imaging capability after only a brief Nile red staining step in isopropanol. The speed, affordability, and reproducibility of this protocol make it ideally suited for high throughput screens. We also demonstrate a paired method for the biochemical determination of triglycerides and phospholipids using gas chromatography mass-spectrometry. This more rigorous protocol should be used as confirmation of results obtained from the Nile red microscopic lipid determination. We anticipate that these techniques will become new standards in the field of C. elegans metabolic research.

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

We present robust biochemical and microscopic methods for studying Caenorhabditis elegans lipid stores. A rapid, simple, fixing-staining procedure for fluorescent lipid droplet imaging leverages the spectral properties of the lipophilic dye Nile red. We then present biochemical measurement of triglycerides and phospholipids using solid phase extraction and gas chromatography-mass spectrometry.

Fat Kütle Biyokimyasal ve Yüksek Verimli Mikroskobik Değerlendirme<em&gt; Caenorhabditis Elegans</em

The nematode C. elegans has emerged as an important  model for the study of conserved genetic pathways regulating fat metabolism as  it relates to human ...

An Improved Method for Accurate and Rapid Measurement of Flight Performance in Drosophila

Drosophila has proven to be a useful model system for analysis of behavior, including flight. The initial flight tester involved dropping flies into an oil-coated graduated cylinder; landing height provided a measure of flight performance by assessing how far flies will fall before producing enough thrust to make contact with the wall of the cylinder. Here we describe an updated version of the flight tester with four major improvements. First, we added a &#34;drop tube&#34; to ensure that all flies enter the flight cylinder at a similar velocity between trials, eliminating variability between users. Second, we replaced the oil coating with removable plastic sheets coated in Tangle-Trap, an adhesive designed to capture live insects. Third, we use a longer cylinder to enable more accurate discrimination of flight ability. Fourth we use a digital camera and imaging software to automate the scoring of flight performance. These improvements allow for the rapid, quantitative assessment of flight behavior, useful for large datasets and large-scale genetic screens.

An Improved Method for Accurate and Rapid Measurement of Flight Performance in Drosophila

Here we describe a method for rapid and accurate measurement of flight performance in Drosophila, enabling high-throughput screening.

Uçuş Performans Doğru ve hızlı ölçüm için geliştirilmiş Yöntemi<em&gt; Drosophila</em

Drosophila has proven to be a useful model system for analysis of behavior, including flight. The initial flight tester involved dropping flies into an ...

Measurement of Heme Synthesis Levels in Mammalian Cells

Heme serves as the prosthetic group for a wide variety of proteins known as hemoproteins, such as hemoglobin, myoglobin and cytochromes. It is involved in various molecular and cellular processes such as gene transcription, translation, cell differentiation and cell proliferation. The biosynthesis levels of heme vary across different tissues and cell types and is altered in diseased conditions such as anemia, neuropathy and cancer. This technique uses [4-14C] 5-aminolevulinic acid ([14C] 5-ALA), one of the early precursors in the heme biosynthesis pathway to measure the levels of heme synthesis in mammalian cells. This assay involves incubation of cells with [14C] 5-ALA followed by extraction of heme and measurement of the radioactivity incorporated into heme. This procedure is accurate and quick. This method measures the relative levels of heme biosynthesis rather than the total heme content. To demonstrate the use of this technique the levels of heme biosynthesis were measured in several mammalian cell lines.

Altered intracellular heme levels are associated with common diseases such as cancer. Thus, there is a need to measure heme biosynthesis levels in diverse cells. The goal of this protocol is to provide a fast and sensitive method to measure and compare the levels of heme synthesis in different cells.

Memeli Hücrelerde Heme Sentezi Düzeylerinin Ölçümü

Heme serves as the prosthetic group for a wide variety of proteins known as hemoproteins, such as hemoglobin, myoglobin and cytochromes. It is involved in ...

A Method of Permeabilization of Drosophila Embryos for Assays of Small Molecule Activity

The Drosophila embryo has long been a powerful laboratory model for elucidating molecular and genetic mechanisms that control development. The ease of genetic manipulations with this model has supplanted pharmacological approaches that are commonplace in other animal models and cell-based assays. Here we describe recent advances in a protocol that enables application of small molecules to the developing fruit fly embryo. The method details steps to overcome the impermeability of the eggshell while maintaining embryo viability. Eggshell permeabilization across a broad range of developmental stages is achieved by application of a previously described d-limonene embryo permeabilization solvent (EPS1) and by aging embryos at reduced temperature (18 &#176;C) prior to treatments. In addition, use of a far-red dye (CY5) as a permeabilization indicator is described, which is compatible with downstream applications involving standard red and green fluorescent dyes in live and fixed preparations. This protocol is applicable to studies using bioactive compounds to probe developmental mechanisms as well as for studies aimed at evaluating teratogenic or pharmacologic activity of uncharacterized small molecules.

A Method of Permeabilization of Drosophila Embryos for Assays of Small Molecule Activity

Introduction of small molecules to the developing Drosophila embryo offers great potential for characterizing biological activity of novel compounds, drugs, and toxins as well as for probing fundamental developmental pathways. Methods described herein outline steps that overcome natural barriers to this approach, expanding the utility of the Drosophila embryo model.

Geçirgenliği için bir yöntem<em&gt; Drosophila</emKüçük Molekül Faaliyet Tahliller için&gt; Embriyolar

The Drosophila embryo has long been a powerful laboratory model for elucidating molecular and genetic mechanisms that control development. The ease of ...

Quantitative Immunofluorescence Assay to Measure the Variation in Protein Levels at Centrosomes

Centrosomes are small but important organelles that serve as the poles of mitotic spindle to maintain genomic integrity or assemble primary cilia to facilitate sensory functions in cells. The level of a protein may be regulated differently at centrosomes than at other .cellular locations, and the variation in the centrosomal level of several proteins at different points of the cell cycle appears to be crucial for the proper regulation of centriole assembly. We developed a quantitative fluorescence microscopy assay that measures relative changes in the level of a protein at centrosomes in fixed cells from different samples, such as at different phases of the cell cycle or after treatment with various reagents. The principle of this assay lies in measuring the background corrected fluorescent intensity corresponding to a protein at a small region, and normalize that measurement against the same for another protein that does not vary under the chosen experimental condition. Utilizing this assay in combination with BrdU pulse and chase strategy to study unperturbed cell cycles, we have quantitatively validated our recent observation that the centrosomal pool of VDAC3 is regulated at centrosomes during the cell cycle, likely by proteasome-mediated degradation specifically at centrosomes.

Here, a novel quantitative fluorescence assay is developed to measure changes in the level of a protein specifically at centrosomes by normalizing that protein&#8217;s fluorescence intensity to that of an appropriate internal standard.

Kantitatif İmmünofloresan Deneyi sentrozomlar Protein Düzeyleri Varyasyon Tedbir

Centrosomes are small but important organelles that serve as the poles of mitotic spindle to maintain genomic integrity or assemble primary cilia to ...

Yağ Düzeylerinin Belirlenmesi A Yüzdürme tabanlı Yöntemi

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Drosophila (meyve sineği) Saldırganlık incelenmesi

Pyrosequencing: Doğru Genotiplendirme için Basit Bir Yöntem

Drosophila Uçuş sırasında Görme aracılığı Koku Takibi

, Epilepsi Mutants Nöbetler Neurocircuit Tahliller Drosophila

In-vivo Drosophila Embriyolar Santrifüj

Fat Kütle Biyokimyasal ve Yüksek Verimli Mikroskobik Değerlendirme

Uçuş Performans Doğru ve hızlı ölçüm için geliştirilmiş Yöntemi

Memeli Hücrelerde Heme Sentezi Düzeylerinin Ölçümü

Geçirgenliği için bir yöntem

Kantitatif İmmünofloresan Deneyi sentrozomlar Protein Düzeyleri Varyasyon Tedbir