The authors would like to thank Katrin Bossmann, Anett Neumann and Eike Wolter (German Environment Agency) for their valuable preparatory work.

NOT: Bu protokol, sekonder antikor -etiketli Bet v 1, ana huş poleni antijeni bileşeni, artı bir alofikosiyanin (APC) karşı bir monoklonal antikor ile PM10 partiküllerinin dolaylı boyama (monoklonal, fare IgG1 antikoru, klon MA-3B4) tarif (anti -fare IgG1 antikoru, klon A85-1) ve bir akış sitometresi üzerinde sonraki analiz. Uygun diğer antikorlar mevcut, bu yöntem, çevre hava taneciklerine bağlanmış diğer antijenlerin tespiti da kapsayacak şekilde genişletilebilir. 1. PM10 Örnekleme <ol><li> Politetrafloroetilen (PTFE) ile çevre havası arasında PM10 toplamak 2.3 m3 / saat olarak (Şekil 1) &#39;in bir akış oranı ile, bir düşük ses örnekleyici kullanılarak filtreler. Burada tarif edilen deneyler için kullanılan numune bir karakterizasyonu, 16 bulunur. çalışma süresi gerekli PM10 miktarı (genellikle 1 ila 10 gün) bağlıdır. </li><li> İnkübasyon süresi sonunda, örnekleyici filtreyi kaldırmak ve en dondurmak-20 ° C kadar kullanılması. </li></ol><img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54721/54721fig1.jpg" /> Şekil 1. Düşük hacimli PM10 örnekleyici. Düşük hacimli PM10 numune örneği. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54721/54721fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> 2. PM10 Kaldırma ve Partikül Sayımı <ol><li> yaklaşık 5 dakika boyunca PTFE filtre çözülme edelim. Sonra temiz bir polistirol Petri kabı (Şekil 2A) filtreyi koydu. birden fazla filtre işleme durumunda, her filtre için yeni bir Petri çanağı. </li><li> Daha sonra, fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile PTFE filtresi kaplaması. Bu protokol ml başına 8x10 6 parçacıkların bir nihai PM10 konsantrasyon için kurulmuştur (adım 3.3). en azından konsantrasyonu elde etmek için, filtreyi bindirmek için PBS aşağıdaki ampirik hacmini kullanın: PM10 toplama zamanı olsaydı &lt;<html> 2 gün, 2 ml kullanın. İnkübasyon süreleri ≥2 gün boyunca, 4 ml kullanın. Not: Bu, uygun ise, PM10 süspansiyonunun parçacık konsantrasyonunu arttırmak için, farklı filtreler arasında süspansiyonlar, havuza. </li><li> 1 dakika için duyarlı bir fırça kafası (Şekil 2b, 2c) olan bir elektrik diş fırçası ile cımbız ve fırça ile PTFE filtresi tutun. Temiz bir reaksiyon tüpüne, parçacık-PBS-süspansiyon, bundan sonra adlandırılan PM10 süspansiyon aktarın. </li></ol><img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54721/54721fig2.jpg" /> Elektrikli bir diş fırçasının Şekil 2. PM10 çıkarılması. Örneklenmiş PM10 ile politetrafluoroetilen filtresi polistirol Petri kabı (A) içine yerleştirilmiş ve 4 mL PBS ile kaplanır. Ardından, PM10 bir elektrik diş fırçası ile çıkarılır (B: 1 dakika fırçalama sonra: fırçalama ve C öncesi).= &quot;Http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54721/54721fig2large.jpg&quot; target = &quot;_ blank&quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. <ol start="4"><li> Bir tanecik sayacı kullanımı ile, örneğin, PM10 parçacıkların konsantrasyonu ölçümü. , PM10 süspansiyon 10 ml izotonik ölçüm tamponunda gibi 50 ul yeterli bir hacmi sulandırmak üç kez ölçmek ve ml başına partiküllerin ortalama toplam sayısını hesaplayın. İlgili boyutta parçacıkları tespit edebilen bir parçacık sayacı kullandığınızdan emin olun. </li></ol> 3. Bet v 1 Boyama <ol><li> örnek analiz için gerekli reaksiyon tüpleri sayısını hesaplayın: en az üç, reaksiyon tüpleri gereklidir: (i) örnek, yalnızca (yerel kontrol) ile birlikte bir boru numunesinin ve ikincil antikor (negatif kontrol) ile birlikte, (ii) bir boru ve ( iii) örnek ve primer ve sekonder antikor (spesifik numune) ile bir boru. İlk kez ölçülür ise, (I) için en az iki reaksiyon tüpleri hazırlanması, (ii),ve (iii) düzgün ayarlarla sitometre ayarlamak için yeterli malzeme var (adım 4.1). </li><li> Reaksiyon tüplerin sayısı için gerekli PM10 süspansiyon miktarını hesaplayın. Her bir reaksiyon tüpü süspansiyonuna 50 ul gerektirir. </li><li> PBS, uygun bir miktarda eklenmesi ile, ml başına 8x10 6 partiküllerin nihai bir konsantrasyona kadar adım 3.2 hesaplanan süspansiyon hacminin Aşama 2.4&#39;te ölçülen partikül konsantrasyonu ayarlayın. NOT: Bu protokol için yeni hazırlanmış PM10 süspansiyon önerilir rağmen kalan PM10 süspansiyon, gelecek deneyler için -20 ° C&#39;de donmuş olabilir. </li><li> Blok,% 1 BSA PBS ile hazırlanan bir stok çözeltisi,% 0.02 nihai konsantrasyonu, sığır serum albümini (BSA) ile PM10 süspansiyonu ilave ile spesifik olmayan bağlanma. Vorteks kısa ve oda sıcaklığında 20 dakika inkübe edilir. </li><li> Her bir numune, akış sitometrisi ile analiz edilmesi için, AC adım 3.4 süspansiyon 50 ul transferyalın reaksiyon tüpü. Kısaca, belirli boyama, girdap için belirlenmiş reaksiyon tüpleri 0.02 ug / ul bir son konsantrasyonda Bet v 1 karşı bir monoklonal fare antikoru ilave edin ve oda sıcaklığında 60 dakika inkübe edilir. <ol><li> Yerel kontrol ve negatif kontrol de, oda sıcaklığında 60 dakika boyunca kalacak için belirlenmiş PM10-BSA süspansiyonu ile reaksiyon tüpleri olsun. </li></ol></li><li> PBS, oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 4,700 x g&#39;de numuneler daha sonra her bir reaksiyon tüpüne, girdap kısaca ve santrifüj% 0.02 BSA ile takviye edilmiş 500 ul ilave edilerek tüm örnekler yıkayın. bir vakum pompası kullanılarak dikkatli bir şekilde süpernatant atın. </li><li> Adımı tekrarlayın 3.6. </li><li> PBS Reaksiyon tüp başına% 0.02 BSA ile takviye edilmiş 50 ul içinde çözülmüş 1 mg antikor gerekli APC etiketli ikincil anti-fare IgG1 antikoru toplam miktarını belirler. % 0.02 BSA ile takviye edilmiş PBS ilgili hacmi, antikorun uygun miktarda seyreltilir. </li><li> Yerel kontrol için belirlenmiş reaksiyon tüpü hariç tüm reaksiyon tüpleri seyreltilmiş sekonder antikor, 50 ul ekle. PBS,% 0.02 BSA ile takviye edilmiş 50 ul ikincisi Ek. Girdap birkaç saniye için tüm örnekler. </li><li> Karanlıkta 30 dakika için tüm örnekler inkübe edin. </li><li> Adımı yineleyin 3.6 kez. </li><li> her bir reaksiyon tüpü, girdaba 50 ul PBS ilave edin ve bir akış sitometresi üzerinde analiz örnekleri. </li></ol> 4. Akım Sitometrisi Analizi <ol><li> parametreler sitometri aşağıdaki yerli kontrolü adjust kullanarak veri analizi optimize etmek. <ol><li> aygıt kontrol gemide görüntülenen ileri saçılım (FSC) eşik denetleyicisi kullanarak, en düşük değer (200) de FSC eşik ayarlamak ve analiz başlatın. </li><li> dağılım gerilim kontrolörü kullanılarak, tüm PM10 parçacıkları tespit edilebilir bu şekilde FSC ve yana saçılma (SSC) ayarlamak ve parçacıkların nüfusu th takriben olduğuFSC ekseninin ve SSC ekseninin alt yarısında e orta. </li><li> Floresan gerilim kontrolörü kullanılarak APC gerilim ve gerektiğinde, APC gibi aynı dalga uzunluğunda yaymaz flöresin izotiyosiyanat (FITC), gibi bir floresan gerilimini ayarlamak. tüm parçacıkların hem floresan eksenleri alt yarısında görünür olduğundan emin olun. </li></ol></li><li> Ardışık, yerli kontrolü dahil olmak üzere her örnek incelemek ve örnek başına en az 10.000 parçacıkların FSC, SSC, APC ve FITC veri depolamak. </li><li> İlgili yazılım ile verileri değerlendirmek. Belirli numunedeki adsorbe allerjen içeriği iki şekilde belirlenebilir: <ol><li> Tüm PM10 parçacıkları üzerinde Bet v 1 yükünün bir ölçüsü olarak, tüm partiküllerin (ortalama değer) APC floresan yoğunluğu analiz edin. NOT: Belirli örnek alerjen içeriyorsa, APC floresan yoğunluğu negatif kontrole kıyasla spesifik numunede artmalıdır. Buna karşın, diğer florEscence yoğunlukları (örn., FITC floresan yoğunluk) önemli bir değişiklik gerekir. </li><li> bağlı anti-Bet v 1 antikoru ile PM10 partikülleri yüzdesini hesaplayın. Böylece, negatif kontrol olarak, kopyalama ve özel numune içine bu kapıyı yapıştırın ve belirli numune APC pozitif parçacıkların yüzde negatif kontrol APC pozitif partiküllerin yüzdesini çıkarmak, APC pozitif kabul parçacıklar etrafında bir kapı ayarlayın. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Cakmak, S., Dales, R. E., Coates, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+air+pollution+increase+the+effect+of+aeroallergens+on+hospitalization+for+asthma?.">Does air pollution increase the effect of aeroallergens on hospitalization for asthma?.</a> J Allergy Clin Immunol. 129 (1), 228-231 (2012).</li><li>Barraza-Villarreal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Air+pollution,+airway+inflammation,+and+lung+function+in+a+cohort+study+of+Mexico+City+schoolchildren.">Air pollution, airway inflammation, and lung function in a cohort study of Mexico City schoolchildren.</a> Environ Health Perspect. 116 (6), 832-838 (2008).</li><li>Chen, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+association+of+ambient+air+pollution+with+airway+inflammation+in+schoolchildren.">The association of ambient air pollution with airway inflammation in schoolchildren.</a> Am J Epidemiol. 175 (8), 764-774 (2012).</li><li>Cyprowski, M., Buczynska, A., Szadkowska-Stanczyk, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indoor+allergens+in+settled+dust+from+kindergartens+in+city+of+Lodz,+Poland.">Indoor allergens in settled dust from kindergartens in city of Lodz, Poland.</a> Int J Occup Med Environ Health. 26 (6), 890-899 (2013).</li><li>Brough, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+peanut+protein+in+the+home+environment.">Distribution of peanut protein in the home environment.</a> J Allergy Clin Immunol. 132 (3), 623-629 (2013).</li><li>Galli, S. J., Tsai, M., Piliponsky, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+allergic+inflammation.">The development of allergic inflammation.</a> Nature. 454 (7203), 445-454 (2008).</li><li> World Health Organisation, R. O. f. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenology+and+human+health:+allergic+disorders:+report+on+WHO+meeting+Rome,+Italy.">Phenology and human health: allergic disorders: report on WHO meeting Rome, Italy.</a> , 256 (2003).</li><li>Wuthrich, B., Schindler, C., Leuenberger, P., Ackermann-Liebrich, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+atopy+and+pollinosis+in+the+adult+population+of+Switzerland+(SAPALDIA+study).+Swiss+Study+on+Air+Pollution+and+Lung+Diseases+in+Adults.">Prevalence of atopy and pollinosis in the adult population of Switzerland (SAPALDIA study). Swiss Study on Air Pollution and Lung Diseases in Adults.</a> Int Arch Allergy Immunol. 106 (2), 149-156 (1995).</li><li>Grote, M., Valenta, R., Reichelt, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abortive+pollen+germination:+a+mechanism+of+allergen+release+in+birch,+alder,+and+hazel+revealed+by+immunogold+electron+microscopy.">Abortive pollen germination: a mechanism of allergen release in birch, alder, and hazel revealed by immunogold electron microscopy.</a> J Allergy Clin Immunol. 111 (5), 1017-1023 (2003).</li><li>Namork, E., Johansen, B. V., Lovik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+allergens+adsorbed+to+ambient+air+particles+collected+in+four+European+cities.">Detection of allergens adsorbed to ambient air particles collected in four European cities.</a> Toxicol Lett. 165 (1), 71-78 (2006).</li><li>S&#252;ring, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PM10+contains+particle-bound+allergens:+Dust+analysis+by+Flow+Cytometry.">PM10 contains particle-bound allergens: Dust analysis by Flow Cytometry.</a> Env Technol Inn. 5, 60-66 (2016).</li><li>Schappi, G. F., Suphioglu, C., Taylor, P. E., Knox, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concentrations+of+the+major+birch+tree+allergen+Bet+v+1+in+pollen+and+respirable+fine+particles+in+the+atmosphere.">Concentrations of the major birch tree allergen Bet v 1 in pollen and respirable fine particles in the atmosphere.</a> J Allergy Clin Immunol. 100 (5), 656-661 (1997).</li><li>Buters, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+allergen+Bet+v+1+in+fractions+of+ambient+air+deviates+from+birch+pollen+counts.">The allergen Bet v 1 in fractions of ambient air deviates from birch pollen counts.</a> Allergy. 65 (7), 850-858 (2010).</li><li>Buters, J. T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Release+of+Bet+v+1+from+birch+pollen+from+5+European+countries.+Results+from+the+HIALINE+study.">Release of Bet v 1 from birch pollen from 5 European countries. Results from the HIALINE study.</a> Atmos Environ. 55, 496-505 (2012).</li><li>Ormstad, H., Johansen, B. V., Gaarder, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Airborne+house+dust+particles+and+diesel+exhaust+particles+as+allergen+carriers.">Airborne house dust particles and diesel exhaust particles as allergen carriers.</a> Clin Exp Allergy. 28 (6), 702-708 (1998).</li><li>Brough, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peanut+protein+in+household+dust+is+related+to+household+peanut+consumption+and+is+biologically+active.">Peanut protein in household dust is related to household peanut consumption and is biologically active.</a> J Allergy Clin Immunol. 132 (3), 630-638 (2013).</li><li>Jochner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seasonal+variation+of+birch+and+grass+pollen+loads+and+allergen+release+at+two+sites+in+the+German+Alps.">Seasonal variation of birch and grass pollen loads and allergen release at two sites in the German Alps.</a> Atmos Env. , (2015).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

protokol kritik bir safha, çevredeki havadan PM10 partiküllerinin toplanması için uygun bir filtre kullanımı (adım 1.1). Filtre bir elektrik diş fırçası ile fırçalama katlanmak için yeterince güçlü olmak zorunda değil, tüm filtre malzemeleri bu şartı yerine getirmek. Boyama protokolü ml başına 8x10 6 parçacık, bir PM10 partikül konsantrasyonu ile kurulmuştur. materyal sınırlıdır ve numunelerin havuzu uygun değildir, ancak eğer yöntem muhtemelen de işlev görecektir, ancak antikor konsantrasyonları ayarlanması gerekebilir (adımlarını 3.5 ve 3.8 bakınız). PM10 parçacıkların Bet v 1 boyama pozitif ve negatif boyanmış parçacıkların farklı popülasyonlarda sonuçlanmamıştır. Bu kadar çok az bir miktarda yüksek arasında değişen partiküller her adsorbe Bet v 1 alerjen değişen miktarlarda neden olabilir. Bu nedenle nüfus doğru kayması APC sinyali genişlemesine neden olabilirAPC pozitifliği. Tüm parçacıkların ortalama APC floresans yoğunluğunu ölçülmesi ile (I) &#39;e göre miktar: negatif parçacıklardan pozitif ayırmak zor olduğu için, iki belirleme yöntemi PM10&gt; 0.5 örneklerin Bet v 1 içeriğine farklılıkları belirlemek için kullanıldı ve (ii) APC pozitif parçacıkların oranının belirlenmesini içerir. Düşük ve yüksek polen sezonu PM10&gt; 0.5 parçacıkların Bet v 1 yükü ile ilgili olarak, her iki yöntem de benzer sonuçlar ortaya koydu. bu nedenle kapıyı yerleştirme bağımsız ve olduğu gibi Yine de, tüm parçacıkların ortalama floresan yoğunluğu göreceli ölçümü önerilmektedir muhtemelen daha az hata eğilimli. Bugüne kadar birçok çalışma ELISA 5,12-14,17 ile ilgili alerjen ve sonraki ölçümü çıkartarak ortam hava partiküler madde alerjen içeriğini incelemek. Burada anlatılan prosedürü ve quantificatio arasında temel bir fark vardırn ELISA ile: akış sitometri parçacık bağlı antijen analizleri ise ELISA, ayıklanır ve çözünmüş antijeni rakamlarla. ELISA vasıtasıyla test PM10 örneklerin Bet v 1 yük (n = 8) 1.2 ng / ml teşhis sınırının altında olduğunu (veriler gösterilmemiştir). Benzer şekilde, Buters ve diğerleri PM &lt;2.5 mikron fraksiyonu ve 10 um sadece yaklaşık% 7&gt; PM&gt; 2.5 mikron fraksiyonu, ancak PM ortam havasının 13&gt; 10 mikron kesir fazla% 93 hiçbir Bahis v 1 belirledi. Bir taraftan ve diğer taraftan da, FACS analizi, ELISA zıt sonuçları, birbirinden farklı hassasiyet ile bağlantılı olarak saptama yöntemi farklılıklardan kaynaklanabilir. Daha fazla araştırma ancak tam olarak bu farkı anlamak için gereklidir. Bir yöntem parçacık bağlı antijen elektron mikroskobu 10,14 tarıyor görselleştirmek için. Taramalı elektron mikroskopisi, Ormstad ve ark., Asılı partikül mat yüzeyi görsel Bet v 1r kurum parçacıkları yüksek polen mevsimi ve düşük polen sezon 15 örneklenmiş parçacıklar üzerinde daha az bir ölçüde örneklenmiş. Buna ek olarak, polen, lateks ve β-glukan alerjenleri, ortam havası 10 yanma parçacıklarına bulunmuştur. Bu yöntem, bununla birlikte, partikül bağlı allerjen miktarının izin vermez. akış sitometrisi kullanılmasıyla parçacık bağlı Bet v 1 alerjen nicelendirilebilir. Böylece, yandan diğer uygun antikorlar gibi PM10 10 ile 0,5 um biyolojik fraksiyonu karakterize etmek için yeni bir yol sunabilir akış sitometri, bu yöntem, ortam hava partiküllerinin, örneğin, kalıp, toz akarı diğer antijenlerin tespiti için uzatılabilir olabilir alerjenler veya LPS. PM10 partikülleri oldukça kolay da kimyasallar ve metaller sadece biyolojik madde absorbe, ancak, antikorların bağlanma belirsiz, ancak bir sorun teşkil edebilir. Yeni bir antikor test edilirse, kritik bir adımdır belirli bağlama kanıtlamak içining. Bu 11 boyanmadan önce ilgili antijen ile spesifik antikor bağlanma kapasitesini bloke örneğin yapılabilir. 14,18 saymak Bet v olarak ortam havasının 1 içerik huş poleni sayısı 12,13,18 farklı olabilir, alerjik belirtiler belki polen ile daha alerjen düzeyi ile daha iyi ilişki olabilir. Bu nedenle, klinik verilerle birlikte sunulan yöntem huş alerjik reaksiyonlar PM10&gt; 0.5 Bet v 1 alerjen yükü uygun olup olmadığını gelecek deneylerde incelemek için olanak sağlar.

Hava kirliliği son yıllarda 1-3 gözlenen solunum alerji artan insidansı ve şiddeti önemli bir çevre nedeni olarak kabul ediliyor. Ayrıca, toz 4,5&#39;ten ortak allerjenlerin dağılımında giderek artan bir ilgi vardı. Huş ağacı polen saman nezlesi sebep olabilir ama aynı zamanda alerjik astım 6-8 önemli bir tetikleyicisi olabilir. Tüm huş poleni alt solunum yoluna veya boyutu (çapı 22 mm) bir sonucu olarak, PM10 bulunabilir olası değildir. Ancak, Bet v 1, büyük huş poleni alerjen bileşeni gibi huş ağacı poleni alerjenler polen rüptürü 9 sonra serbest bırakılabilir ve alt solunum yollarını böylece muhtemelen, ortam hava partiküllerinin 10 bağlanan girebilirsiniz. Gerçekten de, bir polen alerjisi Probandın 11 bazofil in vitro aktivasyonu ile gösterildiği gibi PM10 biyolojik olarak aktif alerjenler içerebilir gösterilmiştir </sus&gt;. PM10 örneklerinde Bet v 1 allerjen içeriği ELISA 12-14 ile ilgili alerjen ve sonraki ölçümü ayıklanması tarafından incelenmiştir. ELISA tekniği ile, çözünmüş alerjen ölçüldü, ancak allerjen yüklü parçacıkların miktarı hala bilinmemektedir. Taramalı elektron mikroskobu alerjen yüklü parçacıklar açığa ama miktarının 10,15 izin vermedi. Bu çalışma ortam havası örneklerinde Bet v 1-yüklü PM10 partikülleri oranını ölçmek için flow sitometri kullanır. akış saptama sınırının dolayı, sadece daha büyük 0,5 um incelenebilir parçacıkları sitometresi. PM10&gt; 0.5 mikron fraksiyon PM10 olarak&gt; 0.5 sevk edilecektir.

<table><tbody><tr><td>Teflon filter</td><td>Pall Life Sciences, USA</td><td>R2PL047</td><td>47 mm, 1.0 &amp;micro;m</td></tr><tr><td>low volume sampler</td><td>Sven Leckel Ingenieur B&amp;uuml;ro GmbH, Germany</td><td>LVS3</td><td>air flow of 2.3 m&lt;sup&gt;3&lt;/sup&gt;/hr</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline</td><td>Biochrom, Germany</td><td>L1825</td><td>without Ca/Mg, low endotoxin</td></tr><tr><td>electrical toothbrush&amp;nbsp;</td><td>Braun, Germany</td><td>Oral-B Vitality Sensitive</td><td></td></tr><tr><td>Casy cell counter&amp;nbsp;</td><td>Sch&amp;auml;rfe System GmbH, Germany</td><td>Model TTC</td><td>range of detectable particle size: 0.7 &amp;micro;m to 45&amp;nbsp;&amp;micro;m</td></tr><tr><td>FACSCanto II&amp;nbsp;</td><td>Becton Dickinson, USA</td><td>3-laser, 8-color (4-2-2)</td><td></td></tr><tr><td>FACS Diva Software v6.1.3&amp;nbsp;</td><td>Becton Dickinson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>bovine serum albumin (BSA)&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>A2153-10G</td><td></td></tr><tr><td>monoclonal mouse IgG1 antibody against Bet v 1</td><td>Indoor Biotechnologies, UK</td><td>&amp;nbsp;MA-3B4</td><td>clone MA-3B4</td></tr><tr><td>APC (Allophycocyanin)-labeled secondary anti-Mouse IgG1 antibody&amp;nbsp;</td><td>Becton Dickinson</td><td>560089</td><td>clone A85-1</td></tr><tr><td>SPSSTM software version 18&amp;nbsp;</td><td>PASW Statistics 18, Hongkong, China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Petri Dish</td><td>Gosselin, France</td><td>BP50-02</td><td>D 55&amp;nbsp;mm, H 15&amp;nbsp;mm</td></tr><tr><td>FACS Tube&amp;nbsp;</td><td>Becton Dickinson, USA</td><td>REF 352054</td><td>5 ml Polystyrene</td></tr><tr><td>CASYton</td><td>Roche&lt;br/&gt; Germany</td><td>REF 05651808001</td><td></td></tr><tr><td>Matrix Blank Tubes</td><td>Thermo Scientific, USA</td><td>4140</td><td>1.4 ml, PP</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Heraeus, Thermo Scientific</td><td>Megafuge 40R</td><td></td></tr><tr><td>Vacuum Pump</td><td>INTEGRA Biosciences AG, Switzerland</td><td>Model 158 320</td><td>Inetrgra Vacusafe</td></tr><tr><td>recombinant Bet v 1a antigen&amp;nbsp;</td><td>Indoor Biotechnologies, UK</td><td>LTR-BV1A-1</td><td>Concentration: 2.0 mg/ml</td></tr></tbody></table>

flow cytometric analysis of particle-bound bet v 1 allergen in pm10

Akış sitometri yaygın olarak 0.5 ila çapı onlarca mikrometre büyüklüğünde bir boyut aralığında hücreleri ya da bakteri gibi askıda katı madde miktarını belirlemek için kullanılan bir yöntemdir. ileri ve yana saçılma özellikleri bir karakterizasyonu ek olarak, ilgili yapıların tespit etmek için antikorlar gibi flüoresan etiketli markerlerin kullanımı sağlar. dolaylı bir antikor lekelemesi kullanılarak, huş polen alerjeni ölçmek için sitometrisi Burada kullanıldığı akış solunabilir parçacık halinde madde (PM10, parçacık boyutu çapı ≤10 um) çapı 0.5 ila 10 um parçacıklar -yüklü (tam olarak v, 1 BET). adsorbe olan alerjenlerin taşıyıcısı muhtemelen onlar alerjik reaksiyonlara yol açabileceğini alt solunum yollarının, onları taşımak olarak PM10 partikülleri hareket edebilir. Şimdiye kadar PM10 alerjen içeriği enzim bağlı immünosorbent deneyleri (ELISA) ve taramalı elektron mikroskobu ile incelenmiştir. ELISA parçacık çözündürüldü olup ölçerTT-bağlı allerjen. Alerjen yüklü parçacıklar görselleştirmek ayrıca onları ölçmek olabilir sitometrisi akabilir taramalı elektron mikroskobu ile karşılaştırıldığında. ortam havasının alerjen içeriği huş ağacı polen sayımı sapabilir gibi alerjik belirtiler belki polen sayımı daha alerjene maruz daha iyi korelasyon olabilir. klinik veriler ile birlikte, sunulan yöntem alerjik reaksiyonlar polen antijenleri PM10 partikülleri&gt; 0.5 um Bet v 1 allerjen içeriği ile ilişkilidir huş edip gelecek deneylerde test etmek için bir fırsat sunmaktadır.

PM10&gt; 0.5 parçacıklara Bet v 1 alerjen adsorpsiyon bir akış sitometresi üzerinde dolaylı bir antikor boyama ve daha sonra analizi ile nicelleştirilmiştir. yüksek polen mevsimi A PM10 örnek şablon olarak görev yaptı. Adım 3.1&#39;de belirtildiği gibi, negatif kontrol yalnızca sekonder antikor (Şekil 3A) etiketli APC ile inkübe PM10 parçacıklardan oluşur. Anti-Bet v 1 antikoru ve ikincil antikor ile boyandı PM10 parçacıkları alerjen yüklü parçacıklar (Şekil 3B) gösterilir. Aşama 4.3&#39;te tarif edildiği gibi, allerjen yükü miktarının iki yolu kullanılmıştır: Bir yandan, tüm partiküllerin APC floresan yoğunluğunun medyan değeri belirli bir numune için negatif kontrol için 137 ve 904 olmak analiz edilmiştir. Diğer tarafta, bağlanan bir anti-Bet v 1 antikoru olan partiküllerin yüzdesi tespit edilmiştir: bir kapı negatif kontrol APC pozitif partiküller etrafında yer alan ve daha sonra da kopied ve özel numune yapıştırılan. Negatif kontrol olarak, PM10&gt; 0.5 partiküllerin% 3 APC pozitif kabul edildi. Yanlış pozitif parçacıkların Bu yüzde, böylece% 77.5 APC pozitif PM10 ile sonuçlanan belirli bir numune pozitif partiküllerin yüzdesi&gt; Belirli örnek 0.5 partiküller çıkartılmıştır. gözlenen anti-Bet bağlayıcı v 1 antikor özel olduğunu kanıtlamak için, bağlama kapasitesi boyamadan önce ilgili antijen ile bloke edilmiştir. Bet v 1 pozitif PM10&gt; 0.5 partikülleri (Şekil 3C) yüzdesi ile belirlenir halinde APC floresan yoğunluğu ile belirlenir ve% 84 oranında, bu,% 69, anti-Bet v 1 antikorun azaldı. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54721/54721fig3.jpg" /> Şekil 3. Parçacık bağlı 1 alerjen yüksek po bir PM10 numune akışı sitometri. APC floresan yoğunluğu tarafından görüntülenmiştir olabilir Bet vSadece APC ile lekelenmiş llen sezonu ve rekombinant Bet v 1 antijen ile birincil antikor engelleme sonra ikincil antikor (B) etiketli anti-Bet v 1, birincil antikor, ve daha sonra da APC ile lekeli ikincil antikoru (A) işaretli (Cı ). Geçitli, P APC + APC pozitif kabul parçacıkların çevresinde kurulmuştur (kırmızı gösterilir) ve ilgili yüzdeler verilmiştir. Bu rakam biraz 11&#39;den modifiye edilmiştir. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54721/54721fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Bu yöntem, yüksek gelen ve düşük polen sezon PM10&gt; 0.5 örneklerin adsorbe Bet v 1 içerik miktarı farklılıkları ortaya çıkarmak için kabul edilebilir olup olmadığını test etmek için, yüksek 13 PM10 örnekleri ve düşük polen mevsimi 6 PM10 örnekleri analiz edildi. Şekil 4APC floresan ve Bet v 1 pozitif PM10&gt; düşük polen sezon PM10 örneklere göre yüksek polen sezon PM10 örneklerinin 0.5 parçacıkların oranında önemli farklılıklar göstermektedir. Hem miktar yöntemleri burada benzer sonuçlar göstermiştir. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54721/54721fig4.jpg" /> Düşük ve yüksek polen mevsimi gelen Şekil 4. PM10 örnekleri (1. Düşük polen sezonu PM10 sonbahar / kış 2013 örneklenmiş (n = 6), yüksek polen sezonu PM10 Mayıs 2012 ile 2013 yılında oldu adsorbe Bet v kendi miktarında farklılık n = 13). (A) PM10 APC floresan yoğunluğu&gt; yüksek polen mevsimi 0.5 parçacıklar düşük polen mevsimi (medyan / min / max yüksek polen sezonu dan anlamlı olarak daha yüksek olduğu: 796/313/1097; medyan / min / max düşük polen sezonu: 197 / 85/277). (B) PM10 yüksek polen mevsimi gelen significan içeriyorduDüşük polen sezon PM10 daha tly fazla Bet v 1-pozitif PM10&gt; 0.5 partiküller (medyan / min / max yüksek polen sezonu: 45.2 / 18.5 / 74.5; medyan / min / max düşük polen sezon: 11.8 / 4.4 / 19.8). Kutu grafiği sırasıyla medyan değerleri (kutunun iç hat), 25. ve 75. yüzdelik (kutunun alt ve üst sınırları) ve minimum ve maksimum değerler (bıyık) göstermektedir. *** Düşük polen mevsimi karşı p &lt;0.001, Mann Whitney U testi. Bu rakam biraz 11&#39;den modifiye edilmiştir. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54721/54721fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Flow Cytometric Analysis of Particle-bound Bet v 1 Allergen in PM10 at JoVE.com

Flow Cytometric Analysis of Particle-bound Bet v 1 Allergen in PM10

Burada, flow sitometri alerjen yüklü parçacıklar ölçmek için bir protokol mevcut. Ortam partiküler madde parçacıkları adsorbe alerjenlerin taşıyıcıları olarak hareket edebilir. Bu akış sitometrisi, bir yöntem olup çok çapı 0.5 um, bu alerjene yüklü parçacıkları ölçmek için kullanılabilir&gt; askıda katı madde karakterize etmek için kullanılan burada gösterir.

PM10 parçacık bağlı Bet v 1 Allergen Akışı Sitometrik Analizi

Flow cytometry is a method widely used to quantify suspended solids such as cells or bacteria in a size range from 0.5 to several tens of micrometers in ...

flow-cytometric-analysis-of-particle-bound-bet-v-1-allergen-in-pm10

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

7.5K Görüntüleme.  Federal Environment Agency.  Burada, flow sitometri alerjen yüklü parçacıklar ölçmek için bir protokol mevcut. Ortam partiküler madde parçacıkları adsorbe alerjenlerin taşıyıcıları olarak hareket edebilir. Bu akış sitometrisi, bir yöntem olup çok çapı 0.5 um, bu alerjene yüklü parçacıkları ölçmek için kullanılabilir> askıda katı madde karakterize etmek için kullanılan burada gösterir. 

Video: Flow Cytometric Analysis of Particle-bound Bet v 1 Allergen in PM10

Harvesting Murine Alveolar Macrophages and Evaluating Cellular Activation Induced by Polyanhydride Nanoparticles

Biodegradable nanoparticles have emerged as a versatile platform for the design and implementation of new intranasal vaccines against respiratory infectious diseases. Specifically, polyanhydride nanoparticles composed of the aliphatic sebacic acid (SA), the aromatic 1,6-bis(p-carboxyphenoxy)hexane (CPH), or the amphiphilic 1,8-bis(p-carboxyphenoxy)-3,6-dioxaoctane (CPTEG) display unique bulk and surface erosion kinetics1,2 and can be exploited to slowly release functional biomolecules (e.g., protein antigens, immunoglobulins, etc.) in vivo3,4,5. These nanoparticles also possess intrinsic adjuvant activity, making them an excellent choice for a vaccine delivery platform6,7,8.
	In order to elucidate the mechanisms governing the activation of innate immunity following intranasal mucosal vaccination, one must evaluate the molecular and cellular responses of the antigen presenting cells (APCs) responsible for initiating immune responses. Dendritic cells are the principal APCs found in conducting airways, while alveolar macrophages (AM&#632;) predominate in the lung parenchyma9,10,11. AM&#632; are highly efficient in clearing the lungs of microbial pathogens and cell debris12,13. In addition, this cell type plays a valuable role in the transport of microbial antigens to the draining lymph nodes, which is an important first step in the initiation of an adaptive immune response9. AM&#632; also express elevated levels of innate pattern recognition and scavenger receptors, secrete pro-inflammatory mediators, and prime na&iuml;ve T cells12,14. A relatively pure population of AM&#632; (e.g., greater than 80%) can easily be obtained via lung lavage for study in the laboratory. Resident AM&#632; harvested from immune competent animals provide a representative phenotype of the macrophages that will encounter the particle-based vaccine in vivo. Herein, we describe the protocols used to harvest and culture AM&#632; from mice and examine the activation phenotype of the macrophages following treatment with polyanhydride nanoparticles in vitro.

Herein, we describe protocols for harvesting murine alveolar macrophages, which are resident innate immune cells in the lung, and examining their activation in response to co-culture with polyanhydride nanoparticles.

Polianhidrid Nanopartiküller Bağlı Mürin Alveoler Makrofajlar Hasat ve Değerlendirme Hücresel Etkinleştirme

Biodegradable nanoparticles have emerged as a  versatile platform for the design and implementation of new intranasal vaccines  against respiratory ...

Biyomühendislik

Murine Model of Allergen Induced Asthma

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, with the prevalence increasing.2 As with other diseases, animal models of allergic airway disease greatly facilitate understanding of the underlying pathophysiology, help identify potential therapeutic targets, and allow preclinical testing of possible new therapies. Models of allergic airway disease have been developed in several animal species, but murine models are particularly attractive due to the low cost, ready availability, and well-characterized immune systems of these animals.3 Availability of a variety of transgenic strains further increases the attractiveness of these models.4 Here we describe two murine models of allergic airway disease, both employing ovalbumin as the antigen. Following initial sensitization by intraperitoneal injection, one model delivers the antigen challenge by nebulization, the other by intratracheal delivery. These two models offer complementary advantages, with each mimicking the major features of human asthma.5
The major features of acute asthma include an exaggerated airway response to stimuli such as methacholine (airway hyperresponsiveness; AHR) and eosinophil-rich airway inflammation. These are also prominent effects of allergen challenge in our murine models,5,6 and we describe techniques for measuring them and thus evaluating the effects of experimental manipulation. Specifically, we describe both invasive7 and non-invasive8 techniques for measuring airway hyperresponsiveness as well as methods for assessing infiltration of inflammatory cells into the airways and the lung. Airway inflammatory cells are collected by bronchoalveolar lavage while lung histopathology is used to assess markers of inflammation throughout the organ. These techniques provide powerful tools for studying asthma in ways that would not be possible in humans.

Experimental mouse models of allergic asthma offer new possibilities for studying disease pathogenesis and developing new therapeutics. These models are well suited to measuring factors governing the allergic immune response, airway inflammation, and pulmonary pathophysiology.

Alerjen Bağlı Astım murin Modeli

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in peripheral tissues in steady state; however in response to antigen stimulation, DCs take up the antigen and rapidly migrate to the draining lymph nodes where they initiate T cell response against the antigen1,2. Additionally, DCs also play a key role in initiating autoimmune as well as allergic immune response3.
DCs play an essential role in both initiation of immune response and induction of tolerance in the setting of lung environment4. Lung environment is largely tolerogenic, owing to the exposure to vast array of environmental antigens5. However, in some individuals there is a break in tolerance, which leads to induction of allergy and asthma. In this study, we describe a strategy, which can be used to monitor airway DC maturation and migration in response to the antigen used for sensitization. The measurement of airway DC maturation and migration allows for assessment of the kinetics of immune response during airway allergic inflammation and also assists in understanding the magnitude of the subsequent immune response along with the underlying mechanisms.
Our strategy is based on the use of ovalbumin as a sensitizing agent. Ovalbumin-induced allergic asthma is a widely used model to reproduce the airway eosinophilia, pulmonary inflammation and elevated IgE levels found during asthma6,7. After sensitization, mice are challenged by intranasal delivery of FITC labeled ovalbumin, which allows for specific labeling of airway DCs which uptake ovalbumin. Next, using several DC specific markers, we can assess the maturation of these DCs and can also assess their migration to the draining lymph nodes by employing flow cytometry.

We describe a strategy to monitor maturation and migration of pulmonary dendritic cells in response to ovalbumin in the setting of ovalbumin induced allergic airway inflammation. This strategy can be modified to assess migration of pulmonary dendritic cells in settings of infection.

Alerjik Havayolu Enflamasyon sırasındaki solunum Dendritik Hücre olgunlaşması ve Göç Analizi

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

Composition and Distribution Analysis of Bioaerosols Under Different Environmental Conditions

Variable microorganisms in particulate matter (PM) under different environmental conditions may have significant impacts on human health. In this study, we described a protocol for multiple analyses of the biological compositions in environmental PM. Five experiments are presented: (1) PM number monitoring by using a laser particle counter; (2) PM collection by using a cyclonic aerosol sampler; (3) PM collection by using a high-volume air sampler with filters; (4) culturable microbes collection by the Andersen six-stage sampler; and (5) detection of biological composition of environmental PM by bacterial 16SrDNA and fungal ITS region sequencing. We selected hazy days and a livestock farm as two typical examples of the application in this protocol. In this study, these two sampling methods, cyclonic aerosol sampler and filter sampler, showed different sampling efficiency. The cyclonic aerosol sampler performed much better in terms of collecting bacteria, while these two methods showed the same efficiency in collecting fungi. Filter samplers can work under low temperature conditions while cyclonic aerosol samplers have a sampling limitation for temperature. A solid impacting sampler, such as an Andersen six-stage sampler, can be used to sample bioaerosols directly into the culture medium, which increases the survival rate of culturable microorganisms. However, this method mainly relies on culture while more than 99% of microbes cannot be cultured. DNA extracted from the culturable bacteria collected by the Andersen six-stage sampler and samples collected by cyclonic aerosol sampler and filter sampler were detected by bacterial 16S rDNA and fungal ITS region sequencing.All the methods above may have wide application in many fields of study, such as environmental monitoring and airborne pathogen detection. From these results, we can conclude that these methods can be used under different conditions and may help other researchers further explore the health impacts of environmental bioaerosols.

Understanding the biological composition of environmental particulate matter is important for the study of its significant impacts on human health and disease spread. Here, we used three types of bioaerosol sampling methods and a biological analysis of airborne microbes to better explore airborne microbial communities under different environmental conditions.

Kompozisyon ve Bioaerosols farklı çevresel koşullar altında dağıtım Analizi

Variable microorganisms in particulate matter (PM) under different environmental conditions may have significant impacts on human health. In this study, ...

Çevre

Visualizing Field Data Collection Procedures of Exposure and Biomarker Assessments for the Household Air Pollution Intervention Network Trial in India

Here, we present a visual representation of standard procedures to collect population-level data on personal exposures to household air pollution (HAP) from two different study sites in a resource-constrained setting of Tamil Nadu, India. Particulate matter PM2.5 (particles smaller than 2.5 microns in aerodynamic diameter), carbon monoxide (CO), and black carbon (BC) were measured in pregnant mothers (M), other adult women (OAW), and children (C) at various times over a 4 year period. In addition, stove usage monitoring (SUMs) with data-logging thermometers and ambient measurements of air pollution were carried out. Furthermore, the feasibility of collecting biological samples (urine and dried blood spots [DBSs]) from study participants at the field sites was successfully demonstrated. Based on findings from this and earlier studies, the methods used here have enhanced the data quality and avoided issues with household air pollution and biological sample collection in resource-constrained situations. The procedures established may be a valuable educational tool and resource for researchers conducting similar air pollution and health studies in India and other low- and middle-income countries (LMICs).

We detail the consistent, high-quality procedures used throughout air and biological sampling processes at Indian field sites during a large randomized controlled trial. Insights gathered from the oversight of applications of innovative technologies, adapted for exposure assessment in rural regions, enable better field data collection practices with more reliable outcomes.

Hindistan'da Hanehalkı Hava Kirliliği Müdahale Ağı Denemesi için Maruz Kalma ve Biyobelirteç Değerlendirmelerinin Saha Veri Toplama Prosedürlerinin Görselleştirilmesi

Here, we present a visual representation of standard procedures to collect population-level data on personal exposures to household air pollution (HAP) ...

<meta charset="utf8"></head><body>İndüklenmiş Balgam Analizi ile Pulmoner Makrofajlarda Karbon Miktarının Belirlenmesi

Measuring Carbon Content in Airway Macrophages Exposed to Carbon-Containing Particulate Matters

Pulmonary macrophages exhibit a dose-dependent pattern in phagocytizing particles. Following engulfment, these macrophages are subsequently excreted with sputum, rendering macrophages and particles visible and quantifiable under light microscopy. Notably, elemental carbon within the mammalian body originates exclusively from external contaminants. Consequently, the carbon content in airway macrophages (CCAM) serves as a valid exposure biomarker, accurately estimating individual exposure to carbon-containing particulate matter (PM). This article delineates a protocol involving sputum collection, preservation, processing, slide preparation, and staining, as well as macrophage photo acquisition and analysis. After removing the macrophage nuclei, the proportion of cytoplasm area occupied by carbon particles (PCOC) was calculated to quantify carbon content in each macrophage. The results indicate an elevation in CCAM levels after exposure to carbon-containing PM. In summary, this non-invasive, precise, reliable, and standardized method enables the direct measurement of carbon particles within target cells and is utilized for large-scale quantification of individual CCAM through induced sputum.

<meta charset="utf8"></head><body>Karbon İçeren Partikül Maddelere Maruz Kalan Hava Yolu Makrofajlarındaki Karbon İçeriğinin Ölçülmesi

This article describes a detailed experimental protocol for measuring the carbon content of airway macrophages with the aim of assessing the internal exposure dose at the level of individual particulate matter exposure.

Karbon İçeren Partikül Maddelere Maruz Kalan Hava Yolu Makrofajlarındaki Karbon İçeriğinin Ölçülmesi

Pulmonary macrophages exhibit a dose-dependent pattern in phagocytizing particles. Following engulfment, these macrophages are subsequently excreted with ...

A Component-resolved Diagnostic Approach for a Study on Grass Pollen Allergens in Chinese Southerners with Allergic Rhinitis and/or Asthma

Sensitization to grass pollen imposes a global risk for allergic airway diseases. Although prevention relies on local investigation of the pollen allergens, data on this topic are limited in southern China. Any available data were obtained by self-report questionnaires, skin prick tests, and total or specific IgE tests using crude extracts. For many reasons, these methods are unreliable. Serum sIgE reactivity to Bermuda grass, Timothy grass, and Humulus scandens allergens in a cohort of patients from Greater Guangzhou (southern China&#39;s largest city and its outskirts) with allergic rhinitis and/or asthma were examined using a fully-automated immunoassay analyzer as a component-resolved diagnostics (CRD) tool.
For the first time, a considerably high prevalence of Bermuda grass sIgE positivity was demonstrated in Chinese southerners with allergic rhinitis and/or asthma. In these patients, a subtle prevalence of sensitization to Timothy grass and Humulus scandens was also noted, which may arise from cross-reactivity, as the latter two are not common in the region. This was also supported by the detection of allergen components.
Fully-automated immunoassay analyzers may offer satisfactory consistency between regions, laboratories, and institutions and over time. The automaticity of the instrument may enable a standardized detection that would not have been readily revealed before the advent of CRD.
This is a study that uses a CRD approach to investigate sensitization to grass pollen allergens in southern China. It adds to current evidence in the literature. Future studies are needed to validate these findings. However, although CRD is a useful tool, the findings made with the fully-automated immunoassay analyzer should not substitute for other laboratory investigations, clinical evaluations, and physician expertise.

This work describes a protocol that uses a component-resolved approach to study sensitization to grass pollen allergens in a cohort of patients from southern China with allergic rhinitis and/or asthma.

Allerjik Rinit ve / veya Astımı olan Çinlilerin Çimen Poleni Allerjenleri Üzerine Bir Çalışma İçin Bileşen ile Çözümlenmiş Bir Teşhis Yaklaşımı

Sensitization to grass pollen imposes a global risk for allergic airway diseases. Although prevention relies on local investigation of the pollen ...

Tıp

Identification and Characterization of Immunogenic RNA Species in HDM Allergens that Modulate Eosinophilic Lung Inflammation

Environmental allergens such as house dust mites (HDM) are often in complex forms containing both allergic proteins that drive aberrant type 2 responses and microbial substances that induce innate immune responses. These allergen-associated microbial components play an important role in regulating the development of type 2 inflammatory conditions such as allergic asthma. However, the underlying mechanisms remain largely undefined. The protocol presented here determines the structural characteristics and in vivo activity of allergen-associated immunostimulatory RNA. Specifically, common allergens are examined for the presence of double-stranded RNA (dsRNA) species that can stimulate IFN responses in lungs and restrain&#160;the development of severe lung eosinophilia in a mouse model of HDM-induced allergic asthma. Here, we have included the following three assays: Dot blot to show the dsRNA structures in total RNA isolated from allergens including HDM species, RT-qPCR to measure the activities of HDM RNA in interferon stimulating genes (ISGs) expression in mouse lungs and FACS analysis to determine the effects of HDM RNA on the number of eosinophils in BAL and lung, respectively.

Environmental allergens such as house dust mites (HDM) often contain microbial substances that activate innate immune responses to regulate allergic inflammation. The protocol presented here demonstrates the identification of dsRNA species in HDM allergens and characterization of their immunogenic activities in modulating eosinophilic lung inflammation.

Eozinofilik Akciğer İltihabını Modüle Eden HDM Alerjenlerinde İmmünojenik RNA Türlerinin Tanımlanması ve Karakterizasyonu

Environmental allergens such as house dust mites (HDM) are often in complex forms containing both allergic proteins that drive aberrant type 2 responses ...

PM10 parçacık bağlı Bet v 1 Allergen Akışı Sitometrik Analizi

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Polianhidrid Nanopartiküller Bağlı Mürin Alveoler Makrofajlar Hasat ve Değerlendirme Hücresel Etkinleştirme

Alerjen Bağlı Astım murin Modeli

Alerjik Havayolu Enflamasyon sırasındaki solunum Dendritik Hücre olgunlaşması ve Göç Analizi

Kompozisyon ve Bioaerosols farklı çevresel koşullar altında dağıtım Analizi

Hindistan'da Hanehalkı Hava Kirliliği Müdahale Ağı Denemesi için Maruz Kalma ve Biyobelirteç Değerlendirmelerinin Saha Veri Toplama Prosedürlerinin Görselleştirilmesi

Karbon İçeren Partikül Maddelere Maruz Kalan Hava Yolu Makrofajlarındaki Karbon İçeriğinin Ölçülmesi

Karbon İçeren Partikül Maddelere Maruz Kalan Hava Yolu Makrofajlarındaki Karbon İçeriğinin Ölçülmesi

Karbon İçeren Partikül Maddelere Maruz Kalan Hava Yolu Makrofajlarındaki Karbon İçeriğinin Ölçülmesi

Allerjik Rinit ve / veya Astımı olan Çinlilerin Çimen Poleni Allerjenleri Üzerine Bir Çalışma İçin Bileşen ile Çözümlenmiş Bir Teşhis Yaklaşımı

Eozinofilik Akciğer İltihabını Modüle Eden HDM Alerjenlerinde İmmünojenik RNA Türlerinin Tanımlanması ve Karakterizasyonu