Name: a murine model of group b streptococcus vaginal colonization
Uploaded: 2016-11-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 19 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization at JoVE.com

We would like to thank the vivarium manager and staff at San Diego State University for support with animal husbandry. During this work, K.A.P. was supported by an ARCS scholarship and a fellowship from the Inamori Foundation. K.S.D. is supported by an R01 grant, NS051247, from the National Institutes of Health.

Tüm hayvan çalışmaları, San Diego Eyalet Üniversitesi Lab Hayvan Bakım Dairesi tarafından onaylanmış ve kabul edilmiş veteriner standartlar altında gerçekleştirilmiştir. Dişi fareler, yaş 8-16 hafta, bu yöntemin geliştirilmesi için kullanılmıştır. β-estradiyol hazırlanması 1. ve periton içi enjeksiyon <ol><li> Uygun kişisel koruyucu ekipman (KKE) giyerek kağıt tartmak üzerinde β-estradiol (0.5 mg / fare) dışarı ölçün. DİKKAT: β-estradiyol deri ve mukoza yüzeylerinden absorbe edilebilir. </li><li> Tüm topaklar kaldırıldı ve β-östradiol ince bir toz kadar 15 ml konik tüp ve vorteks β-östradiol aktarın. 10 ml&#39;lik bir şırınga içine susam yağı (100 ul / fare) hazırlayın. 0.45 um filtre kullanılarak β-estradiol ihtiva eden 15 ml&#39;lik konik bir tüp içine şırınga filtresi susam yağı. β-estradiyol susam yağı içinde, homojen bir süspansiyon olana kadar 15 ml konik tüp vorteksleyin. </li><li> β-es çizinYeni 10 ml&#39;lik enjektöre tradiol süspansiyon. 18 G, 1-in ile. İğne, kısım 1 ml tüberkülin şırınga içine süspansiyon 100 ul. Her fare için bir şırınga hazırlayın. Yeni, steril 26 G ½-in yerleştirin. Her tüberkülin şırınga iğnesi. </li><li> önce bakteriyel aşılama için her bir fare, 24 saat için, susam yağı (5 mg / ml) 100 ul içinde süspansiyon haline β-estradiyol 0.5 mg yönetme. Sadece sağa, alt karın kadran, periton boşluğuna içinde her fare enjekte veya daha önce 28 açıklandığı gibi, orta hat bıraktı. NOT: enjeksiyon yerinde hiçbir temizlik ya da kırpma gereklidir. </li></ol> GBS ile 2. Vajinal aşılama <ol><li> Bir gün inokülasyondan önce, 37 ° C&#39;de, Todd Hewitt brotu (THB), bu tür A909 (serotip Ia) halinde çıkar, bir GBS soyunun 5 ml gece boyunca sıvı bir kültürün büyür. </li><li> Taze THB içine 1:10 hacimde GBS gecede kültür altkültürü ve 37 ° C&#39;de inkübe edin. büyümekorta log fazına bakteriler (= 0.4-0.5 OD 600). NOT: - GBS gerginlik bağlı olarak, 3 saat Bu genellikle 2 alacaktır. </li><li> 5 dakika için 3000 x g &#39;de, steril bir 15 mL konik tüp ve topak bakterilere alt kültür aktarın. süpernatant aspire. Steril bir fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) 200 ul bakteri pelletini. </li><li> Yeni 5-ml kültür tüpü içinde 5 ml PBS (10 fare başına 1 mi) tam olarak OD 600 = 0.4 - topak, yeniden süspanse kullanılarak, 3 getir. Bu yaklaşık 1 x 10 8 koloni oluşturan birim (CFU) / ml bir konsantrasyon olacaktır. Yeni 15-ml konik tüp ve transfer 5 dakika boyunca 3.000 x g&#39;de bakteri yeniden pelet. süpernatant aspire. </li><li> 1/10 orijinal ses PBS içinde pelletini. Örneğin, OD 600 = 0.4, 3 ml pellet haline getirilmiştir, daha sonra PBS, 300 ul içinde tekrar süspansiyon. NOT: Bu hayvan aşılama için kullanılan nihai bakteriyel süspansiyon (~ 1 × 10 9 CFU / ml) &#39;dir. </li><li> RSeri seyreltme için bu süspansiyondan 50 ul eserve THB agar üzerine kaplama tesisinin inokulum belirlenmesi. </li><li> Bu durum, 1 x 10 7 cfu her fareye tatbik edilir, böylece nihai bakteriyel süspansiyonun 10 | il her bir fare inoküle. <ol><li> , Aşılamak, daha önce 28 açıklandığı gibi, eylemcinin başparmak ve işaret parmağı ve sonra kuyruk immobilize arasındaki ensesinden gevşek cilt güvence altına alarak elle fareyi dizginlemek için. </li><li> 200 ul jel yükleme pipet içine adım 2.6 hazırlanan GBS 10 ul hazırlayın. bir uca vajinal lümen içine 5 ila 10 mm takın ve inokulum 10 ul dağıtmak. NOT: Jel yükleme ipuçları özellikle genç veya daha küçük farelerde, organ travma ya da yaralanma riskini en aza indirmek için standart 200-ul ipuçları tercih edilir. </li><li> Hemen aşılama ardından kuyruk ve w ile fare kaldırma, boyun ense bırakın ve fare arka ucunu yükseltmek~ 1 dakika süreyle sert bir yüzeye ön pençeleri alking. </li><li> Görme inokulum herhangi backflow vajinal açıklık inceleyin. Geri tepme görülürse, taze bir pipet lümenine backflow alımını kolaylaştıran, manipüle veya vajinal açılış büyütmek için kullanılabilir. Ayrıca, geri tepme pipet aracılığıyla aspire edilebilir ve yeniden aşılandı. Not: topik maddeler, probiyotik organizmalar ya da ilgi duyulan proteinlerin tatbik için, fizyolojik tampon içinde 20 ul hacme kadar vajina sistemine verilebilir. </li></ol></li></ol> 3. GBS Load belirlememize Vajinal Lumen Swabbing <ol><li> 100 ul PBS ilave edilerek fare başına bir 1.5 ml mikro santrifüj tüpü hazırlayın. Sadece sürüntü önce, PBS içinde çubukla önceden ıslatın. </li><li> Adım 2.7.1 de açıklandığı gibi fare kısıtlamaktadır ve vajinal lümen içine çubukla 10 mm yerleştirin. Yavaşça 4 kez saat yönünde bez döndürmek ve 4 kez vajinal duvarın hafif baskı uygulayarak, saat yönünün aksine.</li><li> 100 ul PBS ile 1.5 ml mikrosantrifüj tüpüne bezi aktarın. kaplama öncesi, girdap sürüntü bakterilerin serbest bırakmak için 15 sn ~ için mikrosantrifüj tüpü. Seri olarak 1:10 ila 1 arasında, her PBS numune ve plaka dilüsyonları 20 ul seyreltilmiş: 10.000, üretici talimatlarına göre hazırlanmış farklı ortam agar plakaları üzerinde. 24 saat boyunca 37 ° C&#39;de inkübe edin. GBS kolonileri renkli parlak pembe veya leylak ya görünecektir. Diğer endojen florası inhibe olacak, ya da mavi, beyaz veya gri koloniler olarak görünecektir. </li></ol> 4. Toplama Vajinal Lavaj Sıvısı <ol><li> Adım 2.7.1 de açıklandığı gibi fare kısıtlamaktadır. 200 ul jel yükleme pipet, pipet vajinal lümen içine PBS 20 ul kullanma. Yavaşça lümen içinde tüm hacim yukarı ve aşağı 4 kez pipetlemeyin ve daha sonra aynı pipet tüm hacmi çekilme. NOT: lavaj sıvısı mukoza ile kalınsa, standart bir 200 ul pipetNihai lavaj sıvısı toplamak için kullanılabilir. </li><li> sitokin analizi veya CFU ölçümü için lavaj sıvısı tasarruf ise, 0,7 ml mikrosantrifüj tüp içine dağıtmak. kızışma aşamasını belirleyen ise, cam slayt üzerine lavaj sıvısının en az 5 ul dağıtmak ve bir ışık mikroskobu üzerinde 100X büyütme altında hücreleri gözlemlemek. NOT: östrus aşamalarında örnekler için bakınız Şekil 1. </li></ol> 5. Doku Diseksiyon ve Homojenizasyon <ol><li> Her fare için, üç 2 ml vidalı kapaklı tüpler (: vajina, serviks ve rahim her doku için bir tane) hazırlar. tüpünün konik şekilli alt kapak - (0.5 g 0,4) 1,0 mm zirkonyum boncukları geniş her tüp doldurun. </li><li> Bakteriyel yük miktarının, özellikle de 121 ° C &#39;de 30 dakika boyunca doku toplama öncesinde hazırlanan borular Otoklav. Her tüpe, steril PBS&#39;nin 500 ul ekle. kazanılan doku ağırlığını hesaplamak için ileride başvurmak üzere otoklav ve kayıt sonra her tüp tartılır. </li><li&gt; CO 2 boğulma ve servikal dislokasyon olarak kabul kurumsal yöntemler kullanılarak fare Kurban. % 70 EtOH ile ventral karın aşağı püskürtün. Steril makas, abdominopelvik boşluğu açmak arka deri ve karın kasları kaldırın ve üreme yolu açıkta kalacak şekilde bağırsakları yerinden. </li><li> % 70 EtOH ile makas sterilize gerekirse temizleyin ve her iki rahim boynuzları uterus gövdesi ve yumurtalıkların arasında orta uzunlukta kesilir. makas ve forseps, ayrı viseral yağ, membranlar ve uzak üreme yolundan mesane kullanarak, kaudal hareket. </li><li> Adım 5.4 açıklandığı gibi makas sterilize edin. Enine bedenden üreme yolu ayırmak için mümkün olduğunca vulva kadar yakın vajina kesti. Kaldırın ve bozulmamış üreme yolu kaldırmak ve steril Petri kabı yerleştirin. </li><li> Yeni bir jilet kullanarak, bir çapraz kesme serviks rahim ayırın. % 70 ile jilet sterilizeDaha sonra EtOH ve bir enine kesim vajinadan rahim ağzı ayırın. NOT: Hala serviks bağlı rahim dokusunun az miktarda olacaktır. hala serviks bağlı vajinal doku az miktarda olacaktır. </li><li> Steril forseps kullanarak, kendi 2-ml tüpler PBS içeren ve boncuk homojenize içine dokuların her aktarın. Her bir doku taşıma arasında% 70 EtOH ile forseps temizleyin. </li><li> Her bir 2-ml&#39;lik vida başlıklı bir tüp içerisinde tartılır ve doku ağırlığı belirlemek için borunun orijinal ağırlığının çıkartılması. 100 mg - Doku ağırlıkları tipik olarak 20 arasında değişmektedir. Sıkıca vidalı kapaklı tüp sızdırmaz bir doku homojenleştirici maksimum hızda 1 dakika boyunca doku homojen hale getirilir. </li><li> 10.000 diferansiyel orta agar plakaları üzerinde: bakteri yükü ölçmek için, seri doku Homojenat ve plaka seyreltileri 01:10 1 ile 25 ul sulandırmak. Adım 3.3 açıklandığı gibi inkübe edin. doku homojenatları dondurmak, sitokin ölçümü için numune saklamak için -20 ° C. </li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

ev sahibi kapsamında ana ve diğer mikropların iki GBS etkileşimlerinin anlaşılması ilerletilir, bir hayvan modeli gereklidir. Bu çalışma farelerde GBS vajinal kolonizasyonu kuran teknik yönlerini açıklar. Bu protokol, bakterilerin aşılanması veya aşının kalınlaşmasına vajinal ön yıkama ya da katkı maddeleri kolonizasyon etkinleştirme çubukla örnekleri, immün gidericiler toplamak için anestezi kullanılmadan farelerin&gt;% 90 kolonizasyon elde edilir. Ayrıca, bu model GBS sebat uzunluğu ve...

Streptococcus agalactiae Grup B Streptococcus (GBS), sıklıkla bağırsak ve sağlıklı yetişkin genitoüriner izole bir kapsüllenmiş, Gram pozitif bir bakteridir. 1970&#39;li yıllarda, GBS yılda yenidoğan hastalık 7.000 durumlarda 1 ile bulaşıcı neonatal mortalitenin önde gelen ajan olarak ortaya çıkmıştır. Erken başlangıçlı GBS hastalığı (EOD) pnömoni veya solunum sıkıntısı doğar, ilk saatlerde veya yaşam günlerinde ortaya çıkar ve genellikle geç başlangıçlı hastalık (LOD) ise, sepsis içine geliştirir birkaç ay sonra gelişir ve sıklıkla bakteriyemi, ile ortaya 2 menenjit ilerler. 2002 yılı itibariyle, Hastalık Kontrol ve Önleme Merkezleri GBS-pozitif annelere 1 geç gebelik ve intrapartum antibiyotik profilaksisi (IAP) GBS vajinal kolonizasyon için evrensel tarama önermektedir. yıllık IAP nedeniyle Amerika Birleşik Devletleri&#39;nde yaklaşık 1.000 durumlarda erken başlangıçlı hastalık azalmaya rağmen,GBS erken başlangıçlı neonatal sepsis başta gelen nedenidir ve geç başlangıçlı olay 1 etkilenmez. rahimde olsun, doğum sırasında, hatta geç başlangıçlı olgularda, GBS için yenidoğan maruz menenjit, yüksek düzenlenmiş kan-kesiştiği durumunda, ev sahibi ortamları ve engelleri, bağışıklık kaçırma bir numara ile hayatta kalma, enine gerektirir ve beyin bariyeri 2. Yenidoğanda olan bu öldürücü etkileşimlerin Memba anne vajinal kanalın ilk kolonizasyonu olduğunu. GBS vajinal kolonizasyon oranları% 12.7 3,4 olarak tahmin ortalama oranı ile gelişmiş ve gelişmekte olan ülkelerde 8-18% aralığında anne. Gebelik sırasında vajinal kanalın GBS kolonizasyonu bireysel kadınlar 5 arasında doğada, sabit aralıklı veya geçici olabilir. İlginçtir, bir anne yaşı&gt; 36 yıl kalıcı kolonizasyon 6 ile ilişkilidir. GBS vajinal kolonizasyon için çok sayıda biyolojik ve sosyo-ekonomik risk faktörleritespit edilmiştir. Biyolojik faktörler gastrointestinal GBS kolonizasyonu ve bağırsak içinde Lactobacillus yokluğunu içerir. Bununla birlikte, etnik köken, obezite, hijyen ve cinsel aktivitesi GBS vajinal taşıyıcı 7 ile ilişkilendirilmiştir. Yenidoğan enfeksiyonlara neden için kötü şöhretli olsa da, GBS de anne enfeksiyonları hem peripartum ve postpartum çeşitli neden olur. GBS taşıyıcılığı bile hastalık varlık 9 olabilir, bazı durumlarda, vajinit 8 ile başvuran kadınlarda artmış ve. Buna ek olarak, gebelik sırasında üreme sisteminin GBS yükseliş içi amniyotik enfeksiyon veya korioamnionit 10 ile sonuçlanabilir. Ayrıca, gebeliklerin% 3.5&#39;e varan, GBS bir idrar yolu enfeksiyonu ya da asemptomatik bakteriüri 11 neden mesaneye yaymaktadır. Hamilelik sırasında GBS bakteriüri İntrapartum ateş, korioamnionit, erken doğum ve prematür riski ile ilişkilidirmembranların 12 e rüptürü. Birlikte ele alındığında, vajinal kanalın içinde GBS varlığı birden çok ana bilgisayar dokuların enfeksiyona bağlı ve bu niş GBS ortadan kaldırmak için yeteneği hem anne ve yenidoğan sağlığı açısından zorunludur edilir. Yakın zamana kadar, servikovaginal yolu ile GBS etkileşimlerini incelemek çalışma çoğunluğu in vitro hücre modellerinin 13-15 sınırlıydı. Bu in vitro deneyler dahil olmak üzere yüzey proteinleri yapışma için önemli olan bakteriyel faktörler ortaya çıkarmıştır bir pili ve serin bakımından zengin tekrarlar 17,18 yanı sıra, iki bileşenli düzenleyici sistemler 15,19 ve vajinal epitelinin genel transkripsiyon yanıtı GBS 19. Bununla birlikte, tam olarak vajina yolu içinde ana Mikrop Etkileşimleri aydınlatmak için, sağlam bir hayvan modeli gereklidir. Erken çalışma GBS inoküle edilmiş fareler, 20,21 ve sıçanların vajinal kanalın elde edilebilir olduğunu göstermiştir &lt;sup&gt; hem gebe ve gebe olmayan koşullarda 22. 2005 yılında, kısa vadeli GBS vajinal kolonizasyon 24 saat süre üzerinde 23 vajinal GBS tedavisinde bir faj litik enzimin etkinliğini incelemek için farelerde modellenmiştir. Birkaç yıl sonra, uzun vadeli bir GBS vajinal kolonizasyon fare modeli GBS sebat yöneten ana ve bakteriyel faktörleri incelemek için geliştirilmiştir. Bu model yüzey uzantıları 17,18 ve GBS iki bileşenli sistemlerde 19,24 dahil kolonizasyon katkıda sayısız GBS faktörleri tespit etmiştir. Bu model konak yanıtı mekanizmalarının 19,25 belirlenmesine katkıda bulunmuş ve immünomodülatör peptidler 26 ve probiyotikler 27 dahil olmak üzere birçok tedavi stratejilerinin, test etmek için kullanıldı. Bu protokol, fare vajinal kanalın içine GBS aşılamak için ve daha sonra kolonizasyonu izlemek ve daha fazla analizler için numune toplamak için gerekli yönlendirmeyi verir.

<table><tbody><tr><td>Sesame oil&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S3547-250ML</td><td></td></tr><tr><td>&amp;beta;-Estradiol&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E8875-1G</td><td>CAUTION: Wear appropriate PPE. &amp;beta;-estradiol can be absorbed through the skin and mucosal surfaces.&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>200 &amp;mu;l gel loading pipette tips&amp;nbsp;</td><td>USA Scientific</td><td>1252-0610</td><td></td></tr><tr><td>Urethro-genital, sterile, calcium alginate swabs</td><td>Puritan</td><td>25-801 A 50</td><td></td></tr><tr><td>CHROMagar StrepB</td><td>DRG International</td><td>SB282</td><td></td></tr><tr><td>Todd Hewitt Broth</td><td>Hardy Diagnostics</td><td>7161C</td><td></td></tr><tr><td>18 G, 1.5 inch needles</td><td>BD</td><td>305199</td><td></td></tr><tr><td>26 G, 0.5 inch needles</td><td>BD</td><td>305111</td><td></td></tr><tr><td>10 ml syringes</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>1 ml syringes</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>0.45 &amp;mu;m PVDF syringe filters</td><td>Whatman</td><td>6900-2504</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&#039;s Phosphate-Buffered Salt Solution 1x</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr></tbody></table>

a murine model of group b streptococcus vaginal colonization

Yetişkin% 30 - Streptococcus agalactiae (Grup B Streptococcus, GBS), insan mide-bağırsak sistemi ve 10 vajinal kanalın bir Gram-pozitif asemptomatik colonizer olup. Bağışıklık tehlikeye bireyler de dahil olmak üzere yenidoğanlar, hamile kadınlar ve yaşlılar, GBS sepsis, artrit, pnömoni, ve menenjite neden olan istilacı patojene geçebilir. GBS yenidoğanlarda lider bakteriyel patojen olduğu için, mevcut profilaksi GBS vajinal kolonizasyon ve GBS-pozitif annelerin sonraki peripartum antibiyotik tedavisi için geç gebelik taraması oluşur. Ağır GBS vajinal yük yenidoğan hastalık ve kolonizasyon her ikisi için de risk faktörüdür. Ne yazık ki, çok az ev sahibi ve teşvik veya vajinal kolonizasyon GBS izin bakteriyel faktörler hakkında bilinmektedir. Bu protokol, bakteriyel uzunlu belirlemek için tek bir β-estradiyol, tedavi öncesi ve günlük olarak örnekleme yöntemiyle sürekli GBS vajinal kolonizasyonu kurulması için bir yöntem açıklanırd. Ayrıca ayrıntılar yöntemleri ek tedaviler veya ilgi reaktifler yönetmek ve vajinal lavaj sıvısı ve üreme yolu dokuları toplamak için. Bu fare modeli gebelik sırasında annenin vajinal kolonizasyonu kontrol etmek ve savunmasız bebeğe bulaşmasını önlemek için potansiyel terapötik hedeflere götürecek vajinal ortamında GBS-host etkileşimi, anlaşılması daha fazla olacaktır. Aynı zamanda kadın vajinal kanalın genel bakteriyel-konak etkileşimleri anlayışımızı artırmak ilgi olacaktır.

Bu modelin geliştirilmesi sırasında, birden gözlemler GBS vajinal kolonizasyon süresini etkileyen faktörler konusunda yapılmıştır. Aşılama etkiler GBS bakteriyel kalıcılık de nasıl östrus evresini belirlemek için, fareler vajinal lavaj sıvısının yoluyla aşılama günü sahnelenmiştir. Şekil 1 ile belirlendiği gibi, fare östrus döngüsü dört aşamadan göstermektedir ıslak montaj vajinal lavaj sıvısı, iyi kurulmuş bir yöntem 29.</s...

Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization at JoVE.com

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Bu protokolün amacı bir murin modelinde insan Grup B Streptococcus (GBS), vajinal kolonizasyonu taklit etmektir. Bu yöntem konak bağışıklık yanıtlarını ve GBS vajinal sebat katkıda bakteriyel faktörleri araştırmak için, yanı sıra tedavi stratejileri test etmek için kullanılabilir.

B Grubu bir murin modelinde<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vajinal Kolonizasyon

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

a-murine-model-of-group-b-streptococcus-vaginal-colonization

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

14.2K Görüntüleme.  University of California San Diego School of Medicine.  Bu protokolün amacı bir murin modelinde insan Grup B Streptococcus (GBS), vajinal kolonizasyonu taklit etmektir. Bu yöntem konak bağışıklık yanıtlarını ve GBS vajinal sebat katkıda bakteriyel faktörleri araştırmak için, yanı sıra tedavi stratejileri test etmek için kullanılabilir. 

Video: A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of otherwise healthy women during their reproductive years18,32-34. Predisposing factors include antibiotic usage, uncontrolled diabetes and disturbance in reproductive hormone levels due to pregnancy, oral contraceptives or hormone replacement therapies33,34. Recurrent VVC (RVVC), defined as three or more episodes per year, affects a separate 5 to 8% of women with no predisposing factors33.
An experimental mouse model of VVC has been established and used to study the pathogenesis and mucosal host response to Candida3,4,11,16,17,19,21,25,37. This model has also been employed to test potential antifungal therapies in vivo13,24. The model requires that the animals be maintained in a state of pseudoestrus for optimal Candida colonization/infection6,14,23. Under such conditions, inoculated animals will have detectable vaginal fungal burden for weeks to months. Past studies show an extremely high parallel between the animal model and human infection relative to immunological and physiological properties3,16,21. Differences, however, include a lack of Candida as normal vaginal flora and a neutral vaginal pH in the mice.
Here, we demonstrate a series of key methods in the mouse vaginitis model that include vaginal inoculation, rapid collection of vaginal specimens, assessment of vaginal fungal burden, and tissue preparations for cellular extraction/isolation. This is followed by representative results for constituents of vaginal lavage fluid, fungal burden, and draining lymph node leukocyte yields. With the use of anesthetics, lavage samples can be collected at multiple time points on the same mice for longitudinal evaluation of infection/colonization. Furthermore, this model requires no immunosuppressive agents to initiate infection, allowing immunological studies under defined host conditions. Finally, the model and each technique introduced here could potentially give rise to use of the methodologies to examine other infectious diseases of the lower female genital tract (bacterial, parasitic, viral) and respective local or systemic host defenses.

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Key techniques to be used in the evaluation of Candida vaginitis in an experimental animal model are described. The methods will allow rapid collection of vaginal specimens and lymphocytes from draining lumbar lymph nodes. These techniques could give rise to mouse models of other diseases in the female lower genital tract.

Deneysel Fare Modeli Vajinal Aşılama ve Örnek Toplama Protokolleri Candida Vajinit

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing the mucosal surface of the nasopharynx, where it can reside, multiply and eventually overcome host defences to invade to other tissues of the host. Establishment of an infection in the normally lower respiratory tract results in pneumonia. Alternatively, the bacteria can disseminate into the bloodstream causing bacteraemia, which is associated with high mortality rates2, or else lead directly to the development of pneumococcal meningitis. Understanding the kinetics of, and immune responses to, nasopharyngeal colonization is an important aspect of S. pneumoniae infection models.
Our mouse model of intranasal colonization is adapted from human models3 and has been used by multiple research groups in the study of host-pathogen responses in the nasopharynx4-7. In the first part of the model, we use a clinical isolate of S. pneumoniae to establish a self-limiting bacterial colonization that is similar to carriage events in human adults. The procedure detailed herein involves preparation of a bacterial inoculum, followed by the establishment of a colonization event through delivery of the inoculum via an intranasal route of administration. Resident macrophages are the predominant cell type in the nasopharynx during the steady state. Typically, there are few lymphocytes present in uninfected mice8, however mucosal colonization will lead to low- to high-grade inflammation (depending on the virulence of the bacterial species and strain) that will result in an immune response and the subsequent recruitment of host immune cells. These cells can be isolated by a lavage of the tracheal contents through the nares, and correlated to the density of colonization bacteria to better understand the kinetics of the infection.

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Colonization of the murine nasopharynx with Streptococcus pneumoniae and the subsequent extraction of adherent or recruited cells is described. This technique involves flushing the nasopharynx and collection of the fluid through the nares and is adaptable for various readouts, including differential cell quantification and analysis of mRNA expression in situ.

Streptococcus pneumoniae ile İntranazal Kolonizasyon Sırasında İnflamatuar Yanıtların Karakterizasyonu

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood vessels resulting in vascular leak, the development of purpuric rashes and eventual tissue necrosis. Studying the pathogenesis of this infection was previously limited by the human specificity of the bacteria, which makes in vivo models difficult. In this protocol, we describe a humanized model for this infection in which human skin, containing dermal microvessels, is grafted onto immunocompromised mice. These vessels anastomose with the mouse circulation while maintaining their human characteristics. Once introduced into this model, N. meningitidis adhere exclusively to the human vessels, resulting in extensive vascular damage, inflammation and in some cases the development of purpuric rash. This protocol describes the grafting, infection and evaluation steps of this model in the context of N. meningitidis infection. The technique may be applied to numerous human specific pathogens that infect the blood stream.

Neisseria meningitidis is a human specific pathogen that infects blood vessels. In this protocol human microvessels are introduced into a mouse by grafting human skin onto immunocompromised mice. Bacteria adhere extensively to the human vessels, leading to vascular damage and development of the purpuric rash typically observed in human cases.

Insanlaşmış Fare Modeli mikrovaskülatürde Hedefleme Bakteriyel Enfeksiyonlar Eğitim için

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including neoplastic, autoimmune, and chronic inflammatory diseases. Emerging evidence implicates pathogen-induced chronic inflammation in the development and progression of chronic diseases with a wide variety of clinical manifestations. Due to the complex and multifactorial etiology of chronic disease, designing experiments for proof of causality and the establishment of mechanistic links is nearly impossible in humans. An advantage of using animal models is that both genetic and environmental factors that may influence the course of a particular disease can be controlled. Thus, designing relevant animal models of infection represents a key step in identifying host and pathogen specific mechanisms that contribute to chronic inflammation.
Here we describe a mouse model of pathogen-induced chronic inflammation at local and systemic sites following infection with the oral pathogen Porphyromonas gingivalis, a bacterium closely associated with human periodontal disease. Oral infection of specific-pathogen free mice induces a local inflammatory response resulting in destruction of tooth supporting alveolar bone, a hallmark of periodontal disease. In an established mouse model of atherosclerosis, infection with P. gingivalis accelerates inflammatory plaque deposition within the aortic sinus and innominate artery, accompanied by activation of the vascular endothelium, an increased immune cell infiltrate, and elevated expression of inflammatory mediators within lesions. We detail methodologies for the assessment of inflammation at local and systemic sites. The use of transgenic mice and defined bacterial mutants makes this model particularly suitable for identifying both host and microbial factors involved in the initiation, progression, and outcome of disease. Additionally, the model can be used to screen for novel therapeutic strategies, including vaccination and pharmacological intervention.

Animal models have proven to be invaluable tools in defining host and pathogen specific mechanisms that contribute to the development of chronic inflammation. Here we describe a mouse model of oral infection with the human pathogen Porphyromonas gingivalis and detail methodologies to assess the progression of inflammation at local and systemic sites.

Lokal ve sistemik Yer de patojen kaynaklı kronik enflamasyon Fare Modeli

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal features of the natural infection. This protocol describes procedures for the establishment and evaluation of systemic infection due to neuropathogenic Escherichia coli K1 in the neonatal rat. Colonization of the gastrointestinal tract leads to dissemination of the pathogen along the gut-lymph-blood-brain course of infection and the model displays strong age dependency. A strain of E. coli O18:K1 with enhanced virulence for the neonatal rat produces exceptionally high rates of colonization, translocation to the blood compartment and invasion of the meninges following transit through the choroid plexus. As in the human host, penetration of the central nervous system is accompanied by local inflammation and an invariably lethal outcome. The model is of proven utility for studies of the mechanism of pathogenesis, for evaluation of therapeutic interventions and for assessment of bacterial virulence.

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Here, a procedure is described for the establishment of systemic infection in the neonatal rat with cultures of Escherichia coli K1. This non-invasive procedure permits colonization of the gastrointestinal tract, translocation of the pathogen to the systemic circulation, and invasion of the central nervous system at the choroid plexus.

Neuropathogenic olmayan İnvaziv Modeli<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Yenidoğan Sıçan Enfeksiyon

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

Recurrent urinary tract infections (rUTI) caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are common and costly. Previous articles describing models of UTI in male and female mice have illustrated the procedures for bacterial inoculation and enumeration in urine and tissues. During an initial bladder infection in C57BL/6 mice, UPEC establish latent reservoirs inside bladder epithelial cells that persist following clearance of UPEC bacteriuria. This model builds on these studies to examine rUTI caused by the emergence of UPEC from within latent bladder reservoirs. The urogenital bacterium Gardnerella vaginalis is used as the trigger of rUTI in this model because it is frequently present in the urogenital tracts of women, especially in the context of vaginal dysbiosis that has been associated with UTI. In addition, a method for in situ bladder fixation followed by scanning electron microscopy (SEM) analysis of bladder tissue is also described, with potential application to other studies involving the bladder.

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

A mouse model of uropathogenic E. coli (UPEC) transurethral inoculation to establish latent intracellular bladder reservoirs and subsequent bladder exposure to G. vaginalis to induce recurrent UPEC UTI is demonstrated. Also demonstrated are the enumeration of bacteria, urine cytology, and in situ bladder fixation and processing for scanning electron microscopy.

Farelerde Gardnerella vaginalis Mesane Maruziyeti Tarafından Tetiklenen Tekrarlayan Escherichia coli İdrar Yolu Enfeksiyonu

Recurrent urinary tract infections (rUTI) caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are common and costly. Previous articles describing models of ...

C-section of Preclinical Animal Model of Chorioamnionitis Triggered by Group B Streptococcus (GBS)

Group B Streptococcus (GBS) is one of the most common bacteria isolated during human pregnancy. It is a leading cause of placental infection/inflammation, termed chorioamnionitis. Chorioamnionitis exposes the developing fetus to a high risk of organ injuries, perinatal morbidity, and mortality, as well as life-long neurobehavioral impairments and other non-neurological developmental issues. The two most frequent subtypes of GBS isolates from maternal and fetal tissues are serotypes Ia (13%-23%) and III (25%-53%). Our lab has developed and characterized a rat model of GBS-induced chorioamnionitis to study subsequent impacts on the central nervous system of the developing fetus and to understand underlying mechanistic aspects. This article presents the design as well as uses of the preclinical rat model, which closely reproduces the hallmark of GBS-induced chorioamnionitis in humans. This article aims to help scientists reproduce the experimental design as well as to provide support through examples of troubleshooting. The present model may also contribute to potential discoveries through uncovering causes, mechanisms, and novel therapeutic avenues, which remain unsettled in many developmental impairments arising from chorioamnionitis. Furthermore, the use of this model may be extended to the studies of perinatal non-neurological common and severe morbidities affecting, for instance, the retina, bowel, lung, and kidney. The main interest of this research is in the field of GBS-induced fetal neurodevelopmental impairments such as cerebral palsy (CP), attention deficit hyperactivity disorder (ADHD), and autism spectrum disorder (ASD). The rationale supporting this model is presented in this article, followed by procedures and results.

C-section of Preclinical Animal Model of Chorioamnionitis Triggered by Group B Streptococcus GBS

The goal of this protocol is to describe a preclinical animal model of Group B Streptococcus (GBS)-induced chorioamnionitis. The study is designed to investigate mechanistic processes, potential causal links with developmental impairments, and finally to develop translational anti-inflammatory placento- and neuro-protective treatments.

Group B Streptococcus (GBS) is one of the most common bacteria isolated during human pregnancy. It is a leading cause of placental infection/inflammation, ...

Vajinal mikrobiyomu incelemek için mikroakışkan vajina çipi

Modeling Healthy and Dysbiotic Vaginal Microenvironments in a Human Vagina-on-a-Chip

Women's health, and particularly diseases of the female reproductive tract (FRT), have not received the attention they deserve, even though an unhealthy reproductive system may lead to life-threatening diseases, infertility, or adverse outcomes during pregnancy. One barrier in the field is that there has been a dearth of preclinical, experimental models that faithfully mimic the physiology and pathophysiology of the FRT. Current in vitro and animal models do not fully recapitulate the hormonal changes, microaerobic conditions, and interactions with the vaginal microbiome. The advent of Organ-on-a-Chip (Organ Chip) microfluidic culture technology that can mimic tissue-tissue interfaces, vascular perfusion, interstitial fluid flows, and the physical microenvironment of a major subunit of human organs can potentially serve as a solution to this problem. Recently, a human Vagina Chip that supports co-culture of human vaginal microbial consortia with primary human vaginal epithelium that is also interfaced with vaginal stroma and experiences dynamic fluid flow has been developed. This chip replicates the physiological responses of the human vagina to healthy and dysbiotic microbiomes. A detailed protocol for creating human Vagina Chips has been described in this article.

Yazar Spotlight: Vajinal Çip Kullanarak Vajinal Mikrobiyom Etkileşimleri Üzerine Araştırmada Devrim Yaratmak

This article describes a protocol for creating a microfluidic vagina-on-a-chip (Vagina Chip) culture device that enables the study of human host interactions with a living vaginal microbiome under microaerophilic conditions. This chip can be used as a tool to investigate vaginal diseases as well as to develop and test potential therapeutic countermeasures.

Bir İnsan Çip Üzerinde Vajinada Sağlıklı ve Disbiyotik Vajinal Mikro Ortamların Modellenmesi

Women's health, and particularly diseases of the female reproductive tract (FRT), have not received the attention they deserve, even though an unhealthy ...

B Grubu bir murin modelinde

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Deneysel Fare Modeli Vajinal Aşılama ve Örnek Toplama Protokolleri Candida Vajinit

Streptococcus pneumoniae ile İntranazal Kolonizasyon Sırasında İnflamatuar Yanıtların Karakterizasyonu

Insanlaşmış Fare Modeli mikrovaskülatürde Hedefleme Bakteriyel Enfeksiyonlar Eğitim için

Lokal ve sistemik Yer de patojen kaynaklı kronik enflamasyon Fare Modeli

Neuropathogenic olmayan İnvaziv Modeli

Farelerde Gardnerella vaginalis Mesane Maruziyeti Tarafından Tetiklenen Tekrarlayan Escherichia coli İdrar Yolu Enfeksiyonu

C-section of Preclinical Animal Model of Chorioamnionitis Triggered by Group B Streptococcus (GBS)

Bir İnsan Çip Üzerinde Vajinada Sağlıklı ve Disbiyotik Vajinal Mikro Ortamların Modellenmesi

Bir İnsan Çip Üzerinde Vajinada Sağlıklı ve Disbiyotik Vajinal Mikro Ortamların Modellenmesi

Bir İnsan Çip Üzerinde Vajinada Sağlıklı ve Disbiyotik Vajinal Mikro Ortamların Modellenmesi