Bu eserler Doğa Bilimleri ve Kanada&#39;nın Mühendislik Araştırma Konseyi (RGPIN 238382-2011) ve Sağlık Araştırması (MOP115076) Kanada Enstitüleri hibe yoluyla destek verdi. Heather Paul Doğa Bilimleri ve Kanada&#39;nın Mühendislik Araştırma Konseyi Lisansüstü Burs ve Alberta yeniliklerin Health Solutions burs tarafından desteklenmiştir. Megan Hallam Doğal Bilimler ve Mühendislik Araştırma Konseyi Lisansüstü Bursu, bir Frederick Banting ve Charles Best Kanada Yüksek Lisans Bursu ve bir Alberta Çocuk Hastanesi Araştırma Enstitüsü Eğitim Genetik Ödülü, Çocuk Gelişimi ve Sağlık tarafından desteklenmiştir.

Bu protokol Calgary Hayvan Bakım Komitesi Üniversitesi tarafından onaylanmış ve Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Kılavuzu conformed oldu. Offspring 1. Ayrı Barajı <ol><li> Önce 12 sağma 5 dakika, en az onun soyundan gelen baraj ayırın. NOT: Baraj ancak uzun 4 saat daha ayrılık dönemleri süt bileşimini 14 değiştirebilir, ayrılık 1,6,13 sonra 5-6 saat kadar Sağılan edilebilir. Ayırma zaman süt toplama hacmi 12 darbe görünmüyor olsa da, tutarlı bir ayırma zamanı çalışma boyunca muhafaza edilmesi tavsiye edilir. Laktasyon 15 boyunca değişebilir Süt bileşimi, bu nedenle girişimleri tutarlı süt toplama gününü tutmak için yapılmalıdır. Maksimum süt üretimi laktasyon günde 14 12 oluştuğu ileri sürülmektedir. </li><li> Bir ısınma odasını kullanarak, yavrular uygun vücut temperatu muhafaza edebiliyoruz sağlamaksağma prosedür süresince annelerinin olmaksızın yeniden. NOT: Aşağıda sunulan çalışmada, sağım nedenle hiçbir ısınma odası kullanıldı, barajlar yaklaşık 22 haftalık ve yavru 21 gün eski zaman, sütten gerçekleştirildi. </li></ol> 2. Set-up ve Hazırlık <ol><li> Sağım işlemi için gerekli olan tüm malzemeleri toplayın. NOT: Tüm malzemeler malzeme ve ekipman tabloda bulunabilir. </li><li> Sağım gerçekleşecek ve altı-pad emici tezgah pedi kapsayacak bankta bir ısıtma yastığı yerleştirin. </li><li> Anestezik sistemini ayarlayın. Sistemi yeterli oksijen ve başlamadan önce izofluran olduğundan emin olun. Makineye ilk anestezi indüksiyonu için kullanılacak anestezi maskesi takın. Yakınlarda ilk anestezik maske farklı ise anestezi bakımı için kullanılacak maske yerleştirin. </li><li> Oksitosin için 1 ml şırınga 25 G iğne takınaseptik teknik kullanılarak enjeksiyonu. </li><li> Maternal vücut sıcaklığı sağma işlemi sırasında muhafaza edilir, böylece, ısıtma yastığı açın. NOT: Çok ısınırlar ve yanıklara neden olmaz pedi sağlamak için ısıtma pedi sıcaklığını izleyin. Alternatif olarak, belirli bir sıcaklık için ayarlanabilir bir ısıtılmış cerrahi tablosu olarak, bir ısı kaynağı kullanır. </li></ol> 3. Baraj kullanma izofluran anestezisi <ol><li> Oksijen tankı açın ve min başına 1 L (1000 cc) akışını çevirin. Izofluran akışı açın ve% 5 olarak ayarlanmış. DİKKAT: anestetik doğrudan solumaktan kaçının ve anestezik buharların birikmesini önler. </li><li> Baraj anestezisi. </li><li> Gerekirse emici tezgah pad üzerinde baraj sırtüstü yerleştirerek, bakım maskesi üzerinden geçiş. Pedal refleksi eksikliği anesthetization onaylayın. </li><li> Anestezi idamesi için% 2-3 izofluran akışını azaltın. Sürekli de emin olmak için prosedür boyunca baraj izlemeksolunum pression oluşmaz. NOT: anestezi altında, barajın gözleri kuruma veya çizik olma gözleri önlemek için steril bir göz yağlama kullanılarak korunmalıdır kez. </li></ol> 4. Oksitosin Enjeksiyon <ol><li> Oksitosin emin olun (20 USP Birimleri / ml) son kullanma tarihi geçmedi. / Alkol temizleme pedi silin steril alkol ile oksitosin flakon dezenfekte edin. </li><li> Aseptik teknik kullanarak, enjektöre oksitosin 2 IU (0.1 ml) hazırlamak. Sağılan olacak her baraj için yeni bir iğne ve şırınga kullanın. NOT: Oksitosin dozlar genellikle 1 tek enjeksiyondan 5 IU 1,6,12,16 değişir. Alternatif olarak, 4 lU / kg vücut ağırlığı kadar bir doz 12 kullanılabilir. Zorluk sağma karşılaşılırsa 2 IU tek bir dozu günde bir kez tekrar edilebilir. </li><li> Intraperitoneal oksitosinin enjekte edilir. Bir açıda, baş doğru iğne işaret ile karın sağ alt kadranda içine iğne takın15-30 °, 0.5 cm derinliğindedir. </li><li> Enjeksiyondan önce negatif basınç sağlamak için pistonu geri çekin. Herhangi bir sıvı (kan, idrar, bağırsak içeriği gibi) enjektöre aspire edilir ise, iğneyi çıkarın ve yeni bir iğne ve şırınga ile enjeksiyon girişimi. Hiçbir sıvı oksitosinin enjekte ve biyolojik tehlikeli kabına hemen iğne ve şırınga atmak aspire edilirse. </li><li> Süt boşaltma uyarma oksitosin yaklaşık 5-15 dakika bekleyin. </li></ol> Sağım Siteleri 5. Hazırlık <ol><li> Süt tahsil edilecektir hangi siteleri / emzikleri seçin. Süt herhangi emzik 12 alınabilir. </li><li> Kürk numune toplama zorluk neden olabilir hafifçe nedeniyle süt fitilleme için, makasları ile Sağılan edilecek emzikleri etrafında kürk çıkarın. Nazik olun - emzikleri çevresindeki deri çok hassastır ve kuru olabilir ve gibi çizik ve gözyaşları duyarlıdır. </li><li> Meme i SterilizasyonGerekli değil, ancak kürk çıkarıldıktan sonra, isteğe bağlı olarak, ılık suyla emziği temizleyin. Birden fazla site süt toplama için gerekli olabilir, en az iki site hazırlayın. NOT: Süt analizi mikrobiyal profilleme içeriyorsa, emzik alan iyot 5 ile sterilizasyon gerekebilir. </li></ol> 6. Süt Toplama <ol><li> Yavaşça elle toplama süt kovma, emzik tabanını sıkmak. NOT: Süt analizi mikrobiyal profilleme içeriyorsa, sütün ilk birkaç damla atılmalıdır. </li><li> Kılcal tüp dolum, bir kılcal tüp içine süt damlacıkları toplayın. Daha büyük hacimli (örneğin, 50 ul) sürecini kolaylaştırmak uyum Kılcal borular. Not: süt toplama zorluğu ile karşılaşılırsa, oksitosin ikinci bir doz uygulanabilir. Bu doz 4 IU toplam geçmemesi tavsiye edilir. </li><li> Steril bir mikrosantrifüj tüp ile içine kılcal tüpten süt koyunmikrosantrifüj tüpü yan meme sütü çekmek için kullanılan tüpün bitiş ucunu da dokunarak - Süt, kılcal hareket aracılığı kılcal tüp üzerinden çekilmesini dikkate alınmalıdır. NOT: 1 ml şırınga bağlı 18 G iğne kullanılarak tüp içine çekilir değil süt &#39;söndür&#39;. </li><li> Sürekli ağrı veya solunum depresyonu belirtileri için baraj izlemek ve buna göre izofluran akışını ayarlamak. </li><li> Yeterli süt seçilen süt analizi için toplanan kadar bu bölümde tarif edildiği gibi süt toplamak için devam edin. Creamatocrit ve protein konsantrasyonu belirlenmesi için aşağıda tarif edilen, süt 0,25 ml toplar. NOT: Süt hayal kırıklığı yavaşlatır veya seçilen sitesi yeterince süt sınırdışı etmezse, farklı bir sağım sitesini kullanın. Hayvan başına süt, yaklaşık 2,5 ml en fazla 17 toplanabilir veya meme başına 0.5 ml&#39;ye kadar olabilir. Yazarlar o anestezi altında toplam süresi yaklaşık 45-60 dakika ile sınırlı tavsiyer sağım 45 dk. </li><li> Taze süt örneklerinden creamatocrit ölçümü için bir mikrohematokrit tüp içine süt toplamak ve kil dolgu ile tüpün ucunu mühür. Baraj kimliği ile mikrohematokrit tüp Etiket ve dik süt örneği saklayın. </li><li> Sağma tamamlandığında, izofluran ve oksijen akışını kapatın. Baraj maskeyi çıkarın ve uyanık kadar baraj izlemeye devam. Tamamen bilinçli değilse, baraj, yerine doğrudan kafes yatak üzerinde daha iyileşme döneminde bir emici ped tezgah üzerine konulmalıdır aspire veya kurtarma sırasında baraj gözleri kaşıma olmaktan yatak önlemek için tavsiye edilir. NOT: sternum recumbancy korumak için yeterli bilinci yerine kadar sahipsiz baraj bırakmayın. </li><li> Başka analizler gerekiyorsa, -80 ° C süt dondurma. Diğer süt, -20 ° C 18 &#39;deki 3 saatin kadar 4 ° C de veya 5 ay boyunca saklanabilir olduğunu ileri sürmüşlerdir. </li></ol> 7. Creamatocrit Ölçümü <ol><li> Süt creamatocrit (süt örneğinde krem yüzdesi) 19 hesaplayarak sütündeki yağ içeriği tahmin edin. NOT: insan sütü ile ölçümler taze veya dondurulmuş ya süt, ancak taze süt daha çok ilişkili olduğu, bir creamatocrit ölçümü için kullanılabilir olduğunu göstermiştir (r r = 0.90 = 0.92 karşı) lipit konsantrasyonuna 11. Çözülmüş süt creamatocrit küçük bir azalma ile ilişkili olarak creamatocrit ölçümleri için taze veya dondurulmuş süt kullanımı 11 değerleri, çalışma boyunca tutarlı olmalıdır. </li><li> Taze süt için, bir mikrohematokrit tüp içine emziğin süt örneği toplamak; En azından doldurun ¾ dolu (yaklaşık 15-20 ul). Alternatif olarak, iyi karıştırıldıktan sonra kılcal tüpe toplanan örnekten taze süt çizin. Kil dolgu ile sonuna mühür. </li><li> Ile, hematokrit spinere kapiller tüp yerleştirinmühürlü uç santrifüj sağlanması dışarıya bakacak dengelidir. </li><li> Hematokrit dönüşünü (13.700 xg&#39;de 120 sn) başlayın. NOT: Sıkma süresi veya hız kullanılan santrifüj modeline bağlı olarak değişebilir. </li><li> Spin tamamlandıktan sonra santrifüj tüpü çıkarın ve creamatocrit hesaplanması için ölçümler yapmak. Bir krem ​​tabakası ve net bir tabaka haline numunenin ayrımını dikkate alınız. </li><li> Ölçüm ve akışkanın boru içindeki toplam uzunluğu ve yağ (krem) uzunluğunu çap pergeli ya bir cetvel kullanarak katman kaydedin. Not: creamatocrit olarak hesaplanan süt numunesi 19 olan krem tabakasının yüzdesi olarak ifade edilir (krem tabakanın uzunluk / süt sütununun toplam uzunluğu) 100 (Şekil 1A) x. Şöyle creamatocrit ölçümünden yağ konsantrasyon ve enerji değerlerini hesapla: Yağ konsantrasyonunun (g / L) = (creamatocrit (%) - 0.59) /0.146 (Şekil 1B) 19; Enerji değeri (kcal / L) = 290 + (66,8 * creamatocrit (%) (Şekil 1C) 19. </li></ol> 8. Protein Konsantrasyonu Tayini <ol><li> Bir protein standardı olarak sığır serum albümini kullanılarak, örneğin, bir Lowry protein testi 6 gibi standart protein deneyi kullanılarak toplam süt protein konsantrasyonunu belirleyin. Not: Süt protein ölçümleri deneyde standart eğri içine düşmesi süt seyreltilmesi gerekli olabilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Izumi, H., Kosaka, N., Shimizu, T., Sekine, K., Ochiya, T., Takase, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-dependent+expression+profiles+of+microRNAs+and+mRNAs+in+rat+milk+whey.">Time-dependent expression profiles of microRNAs and mRNAs in rat milk whey.</a> PLoS ONE. 9 (2), e0088843 (2014).</li><li>Hsieh, C. C., Hern&#225;ndez-Ledesma, B., Fern&#225;ndez-Tom&#233;, S., Weinborn, V., Barile, D., de Moura Bell, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Milk+Proteins,+Peptides,+and+Oligosaccharides:+Effects+against+the+21st+Century+Disorders.">Milk Proteins, Peptides, and Oligosaccharides: Effects against the 21st Century Disorders.</a> BioMed Res. Int. , (2015).</li><li>Rogier, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+from+mother:+Long-term+impact+of+antibodies+in+breast+milk+on+the+gut+microbiota+and+intestinal+immune+system+of+breastfed+offspring.">Lessons from mother: Long-term impact of antibodies in breast milk on the gut microbiota and intestinal immune system of breastfed offspring.</a> Gut Microbes. 5 (5), 663-668 (2014).</li><li>Keen, C. L., L&#246;nnerdal, B., Clegg, M., Hurley, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+changes+in+composition+of+rat+milk:+trace+elements,+minerals,+protein,+carbohydrate+and+fat.">Developmental changes in composition of rat milk: trace elements, minerals, protein, carbohydrate and fat.</a> J. of Nutr. 111 (2), 226-236 (1981).</li><li>Cabrera-Rubio, R., Collado, M. C., Laitinen, K., Salminen, S., Isolauri, E., Mira, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+milk+microbiome+changes+over+lactation+and+is+shaped+by+maternal+weight+and+mode+of+delivery.">The human milk microbiome changes over lactation and is shaped by maternal weight and mode of delivery.</a> Am. J. Clin. Nutr. 96 (3), 544-551 (2012).</li><li>Hallam, M. C., Barile, D., Meyrand, M., German, J. B., Reimer, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+high-protein+or+high-prebiotic-fiber+diets+affect+maternal+milk+composition+and+gut+microbiota+in+rat+dams+and+their+offspring.">Maternal high-protein or high-prebiotic-fiber diets affect maternal milk composition and gut microbiota in rat dams and their offspring.</a> Obesity. 22 (11), 2344-2351 (2014).</li><li>Munch, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+Profiling+of+microRNA+by+Next-Gen+Deep+Sequencing+Reveals+Known+and+Novel+miRNA+Species+in+the+Lipid+Fraction+of+Human+Breast+Milk.">Transcriptome Profiling of microRNA by Next-Gen Deep Sequencing Reveals Known and Novel miRNA Species in the Lipid Fraction of Human Breast Milk.</a> PLoS ONE. 8 (2), e50564 (2013).</li><li>Li, M., Sloboda, D. M., Vickers, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+obesity+and+developmental+programming+of+metabolic+disorders+in+offspring:+Evidence+from+animal+models.">Maternal obesity and developmental programming of metabolic disorders in offspring: Evidence from animal models.</a> Exp Diabetes Res. 2011, (2011).</li><li>Ellis, P. J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrifty+metabolic+programming+in+rats+is+induced+by+both+maternal+undernutrition+and+postnatal+leptin+treatment,+but+masked+in+the+presence+of+both:+implications+for+models+of+developmental+programming.">Thrifty metabolic programming in rats is induced by both maternal undernutrition and postnatal leptin treatment, but masked in the presence of both: implications for models of developmental programming.</a> BMC Genomics. 15, 49 (2014).</li><li>Gomez-Gallago, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+to+collect+high+volumes+of+milk+from+mice+(Mus+musculus).">A method to collect high volumes of milk from mice (Mus musculus).</a> An. Vet. Murcia. 29, 55-61 (2013).</li><li>Wang, C. D., Chu, P. S., Mellen, B. G., Shenai, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creamatocrit+and+the+nutrient+composition+of+human+milk.">Creamatocrit and the nutrient composition of human milk.</a> J. Perinatol. 19 (5), 343-346 (1999).</li><li>Rodgers, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+aspects+of+milk+collection+in+the+rat.">Practical aspects of milk collection in the rat.</a> Lab. Anim. 29 (4), 450-455 (1995).</li><li>Godbole, V. Y., Grundleger, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Composition+of+rat+milk+from+day+5+to+20+of+lactation+and+milk+intake+of+lean+and+preobese+zucker+pups.">Composition of rat milk from day 5 to 20 of lactation and milk intake of lean and preobese zucker pups.</a> J. Nutr. 111 (3), 480-487 (1981).</li><li>Del Prado, M., Delgado, G., Villalpando, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+lipid+intake+during+pregnancy+and+lactation+alters+milk+composition+and+production+and+litter+growth+in+rats.">Maternal lipid intake during pregnancy and lactation alters milk composition and production and litter growth in rats.</a> J. Nutr. 127 (3), 458-462 (1997).</li><li>Nicholas, K. R., Hartmann, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Milk+secretion+in+the+rat:+progressive+changes+in+milk+composition+during+lactation+and+weaning+and+the+effect+of+diet.">Milk secretion in the rat: progressive changes in milk composition during lactation and weaning and the effect of diet.</a> Comp. Biochem. Physiol. A. Comp. Physiol. 98 (3-4), 533-542 (1991).</li><li>Azara, C. R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+intake+during+lactation+alters+milk+nutrient+composition+and+growth+and+mineral+status+of+rat+pups.">Ethanol intake during lactation alters milk nutrient composition and growth and mineral status of rat pups.</a> Biol. Res. 41 (3), 317-330 (2008).</li><li>Keen, C. L., L&#246;nnerdal, B., Sloan, M. V., Hurley, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+milking+procedure+on+rat+milk+composition.">Effects of milking procedure on rat milk composition.</a> Physiol. Behav. 24 (3), 613-615 (1980).</li><li>Romeu-Nadal, M., Castellote, A. I., L&#242;pez-Sabater, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+cold+storage+on+vitamins+C+and+E+and+fatty+acids+in+human+milk.">Effect of cold storage on vitamins C and E and fatty acids in human milk.</a> Food Chem. 106 (1), 65-70 (2008).</li><li>Lucas, A., Gibbs, J. A., Lyster, R. L., Baum, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creamatocrit:+simple+clinical+technique+for+estimating+fat+concentration+and+energy+value+of+human+milk.">Creamatocrit: simple clinical technique for estimating fat concentration and energy value of human milk.</a> Br. Med. J. 1 (6119), 1018-1020 (1978).</li><li>Furtado, K., Andrade, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+beneficial+and+adverse+effects+of+inhalable+and+injectable+anaesthetics+in+animal+models:+a+mini-review.">Comparison of the beneficial and adverse effects of inhalable and injectable anaesthetics in animal models: a mini-review.</a> OA Anaesthetics. 1 (2), 20 (2013).</li><li>Hausman Kedem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+advanced+maternal+age+upon+human+milk+fat+content.">The effect of advanced maternal age upon human milk fat content.</a> Breastfeed. Med. 8 (1), 116-119 (2013).</li><li>Mandel, D., Lubetzky, R., Dollberg, S., Barak, S., Mimouni, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+and+energy+contents+of+expressed+human+breast+milk+in+prolonged+lactation.">Fat and energy contents of expressed human breast milk in prolonged lactation.</a> Pediatrics. 116 (3), e432-e435 (2005).</li></ol>

Yazarlar ifşa etmek Çıkar çatışması var. Tüm hayvan deneyleri CCAC onaylı protokoller çerçevesinde yapılmıştır.

Investigations into maternal milk components have increased as interest in early life development research rises. As the sole source of nutrition during the neonatal period, the bioactive compounds in milk are essential for ideal growth and development, especially in the context of intestinal and immune health3. The method presented here is a simple, non-invasive method of collecting milk from the lactating rat in amounts sufficient for downstream analysis, such as oligosaccharide profiling6. The me...

Süt yenidoğan memeliler, bebek büyüme ve gelişme 1,2 için enerji ve besin sağlamak için beslenme tek kaynağıdır. Süt esas hücrelerde, lipid ve protein 1 oluşur, aynı zamanda enzimler, karbohidratlar, hormonlar, antikorlar, büyüme faktörleri, sitokinler, eksozom, microvesicles ve küçük RNA&#39;ların bu dahil olmak üzere, yavruların erken yaşam gelişmesini ayarlayabilen biyolojik olarak aktif bileşiklerin bir bolluk içerir microRNA 1,2 olarak. Bebeklerin hastalığa 2 daha az hassas olan anne sütüyle beslenen kanıtlarla ile birleştiğinde bağışıklık yavruları ve bağırsak sağlığı 3 kuruluşunda anne sütünün temel rolü, yaşamın erken döneminde hastalık süreçleri ile ilişkili süt bileşenleri ve ilgili moleküler mekanizmaları tanımlamanın önemini vurgulamaktadır eylemlerinde. Gelişmekte olan sıçan çeşitli beslenme, fizyolojik etkisini araştırmak için popüler bir modeldir ve erken kimyasal müdahaleler-Hayat gelişim 4. Sıçan süt analizi, bu nedenle anne ve yavru sağlığı içine yeni bilgiler sağlayabilir. Güncel bilimsel gelişmeler artık sağlık ve hastalık ile ilgili özel süt bileşenlerinin etkileri derinlemesine araştırmalar için olanaklarının artırılması sağlamak. Örneğin, süt bakteriyel profillerin dizi bebek gut 5 erken intestinal kolonizasyonunda kendi rolünü açıklamıştır, süt oligosakaritlerinin kütle spektrometresi analizi anne diyet 6 ve salgılanan microRNA derin sekanslama yoluyla süt oligosakarit profillerini değiştirilmesi fikir sağladı Anne sütünün yağ globülleri gen transkripsiyonu, metabolizma ve bağışıklık fonksiyonu 7&#39;de olası rollerini vurgular. Sıçan modelleri anne çalışmalarda 8,9 kullanılan en popüler model organizmaların birini temsil etmektedir. Bir avantajı sadece approximat süren kısa gebelik ve doğum dönemleri olduğunuely 21 gün, her; Bu nedenle emzirme gebelik başlangıcından itibaren toplam süresi değerli veriler elde edilebilir hangi kısa bir dönemi temsil eder. Farelere kıyasla farelerin büyük boyutlu, süt toplama bağlamında, süt ve süt toplama kolaylığı hacmine göre belirgin bir avantaj sağlayabilir; fare süt üretimi, örneğin, daha fazla süt üreten 10 ağır farelerin toplam vücut ağırlığına bağlı gibi görünüyor. Burada, emziren sıçanların sütüne elle toplanması için genel bir açıklama sağlanır. Bu protokol, düşük ekipman gerektiren ucuz, invazif olmayan ve daha sonraki alt akış analizler için yeterli miktarda süt toplamak için kullanılabilir. Kısaca, baraj süt boşaltma oksitosin tarafından uyarılan, izofluran ile anestezi edilir ve süt süt el ekspresyonu yoluyla kılcal tüpler içine toplanır. Son olarak, süt iki temel bileşenleri olarak proteinler, kısa bir TANIMI şişman vecreamatocrit ölçümleri 11 ve standart bir protein deneyi kullanılarak toplam protein konsantrasyonu ölçümü kullanılarak süt yağı içeriği tahmin n sunulmuştur.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;Equipment - Milking&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 ml syringes</td><td>BD-Canada</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>25 G needles</td><td>BD-Canada</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>18 G needles</td><td>BD-Canada</td><td>305196</td><td></td></tr><tr><td>50 &amp;mu;l Microdispenser Capillary Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>21-169D</td><td></td></tr><tr><td>Oxytocin (20 USP Units/ml)</td><td>Bimeda-MTC</td><td>1OXY015</td><td></td></tr><tr><td>PPC Vet Isoflurane Inhalation Anesthetic, 250 ml</td><td>Fresenius Kabi</td><td>M60302</td><td>Used on the order of a veterinarian</td></tr><tr><td>Sterile Alcohol Prep Pad</td><td>Dukal</td><td>853</td><td></td></tr><tr><td>Absorbent Bench Underpad</td><td>VWR</td><td>82020-845</td><td></td></tr><tr><td>Maxi-Therm Hyper/Hypothermia Blanket</td><td>Cincinnati Sub-Zero</td><td>274</td><td></td></tr><tr><td>Rodent Anesthesia Machine with Vaporizer</td><td>Benson Medical Industries Inc.</td><td></td><td>Subject to individual laboratory needs</td></tr><tr><td>Animal Masks</td><td>Benson Medical Industries Inc.</td><td>50100/50102</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge Tubes</td><td>Axygen</td><td>MCT-060-C</td><td></td></tr><tr><td>ChroMini Professional Trimmer</td><td>Wahl</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;Equipment - Creamatocrit&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>StatSpin SafeCrit Plastic Microhematocrit Tubes (Untreated)</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-274-914</td><td></td></tr><tr><td>Critoseal Capillary Tube Sealant Tray</td><td>VWR</td><td>470161-478</td><td></td></tr><tr><td>StatSpin CritSpin Microhematocrit Centrifuge</td><td>Beckman Coulter, Inc</td><td>X00-004999-001</td><td></td></tr></tbody></table>

milk collection in the rat using capillary tubes and estimation of milk fat content by creamatocrit

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also contains a vast number of bioactive compounds that greatly affect the development of the neonate. The analysis of milk components will help elucidate key factors that link maternal metabolism and health with offspring growth and development. The laboratory rat represents a popular model organism for maternal studies, and rat milk can be used to examine the effect of various maternal physiological, nutritional, and pharmacological interventions on milk components, which may then impact offspring health. Here a simple method of manually collecting milk from the lactating rat that can be performed by a single investigator, does not require specialized vacuum or suction equipment, and provides sufficient milk for subsequent downstream analysis is described. A method for estimating the fat content of milk by measuring the percentage of cream within the milk sample, known as the creamatocrit, is also presented. These methods can ultimately be used to increase insight into maternal-child health and to elucidate maternal factors that are involved in proper growth and development of offspring.

Wistar baraj çıkışta tarif edildiği gibi süt toplandı, yüksek protein bir denetim tüketilen (5 AIN-93 g, n =) ki (ağırlığında yaklaşık 22 haftalık 350 ila 400 g) (% 40 kazein ağırlık / ağırlık, n = 5) ya da yüksek prebiyotik lif (% 21.6 wt / wt, 1: oligofruktoz ve inülin, n = 4: 1 oran), gebelik ve emzirme döneminde, diyet. Oksitosin dozu IU 2 oldu. Süt kılcal borular kullanılarak toplandı ve daha sonra bir boru göre yağ konsantrasyonu ve enerji değerini tahmin etmek için kullanıldı c...

Watch this Scientific Journal Video about Milk Collection in the Rat Using Capillary Tubes and Estimation of Milk Fat Content by Creamatocrit at JoVE.com

Milk Collection in the Rat Using Capillary Tubes and Estimation of Milk Fat Content by Creamatocrit

Milk is a primary source of nutrition for the neonate. Analysis of milk components may provide insight into maternal factors that affect offspring health. This protocol describes a manual method of collecting milk samples from the lactating rat, which can then be used for further downstream analysis.

Kılcal Tüpler ve Creamatocrit Süt Yağ İçeriğinin Tahmin kullanarak Rat Süt Toplama

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also ...

milk-collection-rat-using-capillary-tubes-estimation-milk-fat-content

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

12.3K Görüntüleme.  University of Calgary. Milk is a primary source of nutrition for the neonate. Analysis of milk components may provide insight into maternal factors that affect offspring health. This protocol describes a manual method of collecting milk samples from the lactating rat, which can then be used for further downstream analysis.

Video: Milk Collection in the Rat Using Capillary Tubes and Estimation of Milk Fat Content by Creamatocrit

The Use of Gas Chromatography to Analyze Compositional Changes of Fatty Acids in Rat Liver Tissue during Pregnancy

Gas chromatography (GC) is a highly sensitive method used to identify and quantify the fatty acid content of lipids from tissues, cells, and plasma/serum, yielding results with high accuracy and high reproducibility. In metabolic and nutrition studies GC allows assessment of changes in fatty acid concentrations following interventions or during changes in physiological state such as pregnancy. Solid phase extraction (SPE) using aminopropyl silica cartridges allows separation of the major lipid classes including triacylglycerols, different phospholipids, and cholesteryl esters (CE). GC combined with SPE was used to analyze the changes in fatty acid composition of the CE fraction in the livers of virgin and pregnant rats that had been fed various high and low fat diets. There are significant diet/pregnancy interaction effects upon the omega-3 and omega-6 fatty acid content of liver CE, indicating that pregnant females have a different response to dietary manipulation than is seen among virgin females.

Pregnancy leads to significant changes to the fatty acid composition of maternal tissues. Lipid profiles can be obtained via gas chromatography to allow identification and quantification of fatty acids in individual lipid classes among rats fed various high and low fat diets during pregnancy.

Hamilelik sırasında Sıçan Karaciğer dokusunda yağ asitleri arasında kompozisyon değişiklikleri analiz Gaz Kromatografi Kullanımı

Gas chromatography (GC) is a highly sensitive method used to identify and quantify the fatty acid content of lipids from tissues, cells, and plasma/serum, ...

Kimya

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary epithelium using transplantation techniques takes advantage of the hormonal environment provided by the adolescent rodent host. These studies are ideally suited to explore the impact of various biological manipulations on mammary gland development and dissect many aspects of mammary gland biology. A common, but limiting, feature is that transplanted epithelial cells are strongly influenced by the surrounding stroma and outcompeted by endogenous epithelium; to utilize native mammary tissue, the abdominal-inguinal white fat pad must be cleared to remove host mammary epithelium prior to the transplantation. A major obstacle when using the rat model organism is that clearing the developing mammary tree in post-weaned rats is not efficient. When transplanted into gland-free fat pads, donor epithelial cells can repopulate the cleared host fat pad and form a functional mammary gland. The interscapular fat pad is an alternative location for these grafts. A major advantage is that it lacks ductal structures yet provides the normal stroma that is necessary to promote epithelial outgrowth and is easily accessible in the rat. Another major advantage of this technique is that it is minimally invasive, because it eliminates the need to cauterize and remove the growing endogenous mammary tree. Additionally, the interscapular fat pad contains a medial blood vessel that can be used to separate sites for grafting. Because the endogenous glands remain intact, this technique can also be used for studies comparing the endogenous mammary gland to the transplanted gland. This paper describes the method of mammary epithelial cell transplantation into the interscapular white fat pad of rats.

This article describes a transplantation method to graft donor rat mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of recipient animals. This method can be used to examine host and/or donor effects on mammary epithelium development and eliminates the need for pre-clearing, thereby extending the usefulness of this technique.

Interscapular Beyaz Yağ Ped içine Rat Mammary Epitel Hücre Nakli

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Kanser Araştırmaları

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

This study was designed to evaluate the protective effect of the Bacillus subtilis strain against complications related to heat stress. Thirty-two Sprague-Dawley rats were used in this study. Animals were orally treated twice a day for two days with B. subtilis BSB3 strain or PBS. The next day after the last treatment, each group was divided and two experimental groups (one treated with PBS and one treated with B. subtilis) were placed at 45 oC for 25 min. Two control groups stayed for 25 min at room temperature. All rats were euthanized and different parameters were analyzed in all groups. Adverse effects of heat stress are registered by the decrease of villi height and total mucosal thickness in the intestinal epithelium; translocation of bacteria from the lumen; increased vesiculation of erythrocytes and elevation of the lipopolysaccharides (LPS) level in the blood. The protective efficacy of treatment is evaluated by prevention of these side effects. The protocol was set up for the oral treatment of rats with bacteria for prevention of heat stress complications, but this protocol can be modified and used for other routes of administration and for analysis of different compounds.

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

We described a protocol for prevention of heat stress effects in rats by oral pre-treatment with beneficial bacteria. This protocol can be modified and used for various routes of administration and for analysis of different compounds.

Isı Önlenmesi ile Sıçanlarda Olumsuz Etkileri Stres<em&gt; Bacillus subtilis</em&gt; Gerilme

This study was designed to evaluate the protective effect of the Bacillus subtilis strain against complications related to heat stress. Thirty-two ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the tail vein is thin so that it is sometimes hard to puncture. In addition, the tail vein has low blood flow and requires a long sampling time to get sufficient blood. The present report describes a simple blood sampling method, the vacuum blood collection method, which is usually used to obtain blood samples from patients, here used for non-anesthetized rats. The 22 G butterfly needle tip was inserted into one of the lateral tail veins approximately 2-3 cm from the tip of the tail at an angle of approximately 20&#176;, and blood was collected in the vacuum collection tube by inserting the rubber end of the butterfly needle into the vacuum blood collection tube. The present experimental results show that the success rate was 95% in the experimental group and 90% in the beginner group. The success rate and puncture times were similar between two groups. The sampling duration was significantly shorter in the experimental group compared to beginner group. In conclusion, this vacuum blood collection method for sequential blood sampling from the tail vein of non- anesthetized rats is feasible and easy-to-learn, which might serve as a reliable alternative to other conventionally used blood sampling techniques for rats.

Here, we describe a simple tail vein blood sampling method in non-anesthetized rats using a vacuum extraction tube system. This method reduces the risk of direct exposure to blood and simplifies taking multiple samples from a single venipuncture.

Kuyruk damar anestezi sıçan bir vakum kan toplama sistemi ile kan koleksiyonundan tekrarlanan

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

Tıp

Three-Dimensional Culture of Vascularized Thermogenic Adipose Tissue from Microvascular Fragments

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for the design of personalized microtissues for health screening and drug testing. Current strategies are often quite complex and fail to accurately fully depict the multicellular and functional properties of thermogenic adipose tissue. Microvascular fragments, small intact microvessels comprised of arteriole, venules, and capillaries isolated from adipose tissue, serve as a single autologous source of cells that enable vascularization and adipose tissue formation. This article describes methods for optimizing culture conditions to enable the generation of three-dimensional, vascularized, and functional thermogenic adipose tissues from microvascular fragments, including protocols for isolating microvascular fragments from adipose tissue and culture conditions. Additionally, best practices are discussed, as are techniques for characterizing the engineered tissues, and sample results from both rodent and human microvascular fragments are provided. This approach has the potential to be utilized for the understanding and development of treatments for obesity and metabolic disease.

Here, we present a detailed protocol outlining the use of microvascular fragments isolated from rodent or human fat tissue as a straightforward approach to engineer functional, vascularized beige adipose tissue.

Mikrovasküler Fragmanlardan Vaskülarize Termojenik Yağ Dokusunun Üç Boyutlu Kültürü

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for ...

Biyomühendislik

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits (Oryctolagus cuniculus)

Due to similarities in placentation and antibody transfer with humans, rabbits are an excellent model of maternal immunization. Additional advantages of this research model are the ease of breeding and sample collection, relatively short gestation period, and large litter sizes. Commonly assessed routes of immunization include subcutaneous, intramuscular, intranasal, and intradermal. Nonterminal sample collection for the chronological detection of the immunologic responses to these immunizations include the collection of blood, from both dams and kits, and milk from the lactating does. In this article, we will demonstrate techniques our lab has utilized in studies of maternal immunization in New Zealand White rabbits (Oryctolagus cuniculus), including intranasal immunization and milk collection.

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits Oryctolagus cuniculus

This article describes and demonstrates the administration of intranasal vaccines and the collection of milk from lactating rabbits (Oryctolagus cuniculus) as a means to assess mucosal immunity in a translationally appropriate model of maternal immunization.

Yeni Zelanda Beyaz Tavşanlarında Anne Bağışıklama Çalışmalarında İntranazal Bağışıklama ve Süt Toplama (Oryctolagus cuniculus)

Due to similarities in placentation and antibody transfer with humans, rabbits are an excellent model of maternal immunization. Additional advantages of ...

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer.

Fareler ve Reeves &#39;munçağı Deer için Süt Toplama Yöntemleri

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

Biyoloji

Preparation of Rat Serum Suitable for Mammalian Whole Embryo Culture

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for investigating the mechanisms of developmental processes. Immediately centrifuged (IC) rat serum is commonly used for WEC and is essential for the growth and development of cultured mouse and rat embryos ex vivo. For the culture of midgestation embryos (i.e., E8.0-12.5 for the mouse, and E10.0-14.5 for the rat), 100% rat serum is the best media for supporting the growth of the embryo ex vivo. To prepare rat serum suitable for WEC, the collected blood should be centrifuged immediately to separate the blood cells from the plasma fraction. After centrifugation, the fibrin clot forms in the upper layer; this clot should be squeezed gently using a pair of sterile forceps and subsequently centrifuged to completely separate the blood cells from the serum. In this video article, we demonstrate our standard protocol for the preparation of optimal IC rat serum, including blood collection from the abdominal aorta of male rats and extraction of the serum by centrifugation.

Mammalian whole embryo culture (WEC) is widely used in teratology and developmental biology. Immediately centrifuged rat serum is commonly provided as a medium for both mouse and rat WEC. In this video, we demonstrate our standard protocol for the preparation of high-quality rat serum suitable for mammalian WEC.

Memeli Tüm Embriyo Kültürü için uygun Rat Serum hazırlanması

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for ...

Eş Zamanlı EEG Kaydı ile Sıçanlardan Beyin Omurilik Sıvısı ve Kan Çekilmesi

Sampling Cerebrospinal Fluid and Blood from Lateral Tail Vein in Rats During EEG Recordings

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure molecules of interest, such as hormones, growth factors, proteins, or small non-coding RNAs. A specific example is the sampling of biological liquids in the research of biomarkers for epilepsy. In these studies, it is desirable to compare the levels of molecules in cerebrospinal fluid (CSF) and in plasma, by withdrawing CSF and plasma in parallel and considering the time distance of the sampling from and to seizures. The combined CSF and plasma sampling, coupled with video-EEG monitoring in epileptic animals, is a promising approach for the validation of putative diagnostic and prognostic biomarkers. Here, a procedure of combined CSF withdrawal from cisterna magna and blood sampling from the lateral tail vein in epileptic rats that are continuously video-EEG monitored is described. This procedure offers significant advantages over other commonly used techniques. It permits rapid sampling with minimal pain or invasiveness, and reduced time of anesthesia. Additionally, it can be used to obtain CSF and plasma samples in both tethered and telemetry EEG recorded rats, and it may be used repeatedly across multiple days of experiment. By minimizing the stress due to sampling by shortening isoflurane anesthesia, measures are expected to reflect more accurately the true levels of investigated molecules in biofluids. Depending on the availability of an appropriate analytical assay, this technique may be used to measure the levels of multiple, different molecules while performing EEG recording at the same time.

Yazar Spotlight: Epilepsi Biyobelirteç Keşfi için Yüksek Kaliteli BOS ve Kan Örnekleri Alma 

The protocol shows repeated cerebrospinal fluid and blood collections from epileptic rats performed in parallel with continuous video-electroencephalogram (EEG) monitoring. These are instrumental for exploring possible links between changes in various body fluid molecules and seizure activity.

EEG Kayıtları Sırasında Sıçanlarda Lateral Kuyruk Veninden Beyin Omurilik Sıvısı ve Kan Örneği Alınması

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many ...

Kılcal Tüpler ve Creamatocrit Süt Yağ İçeriğinin Tahmin kullanarak Rat Süt Toplama

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Hamilelik sırasında Sıçan Karaciğer dokusunda yağ asitleri arasında kompozisyon değişiklikleri analiz Gaz Kromatografi Kullanımı

Interscapular Beyaz Yağ Ped içine Rat Mammary Epitel Hücre Nakli

Isı Önlenmesi ile Sıçanlarda Olumsuz Etkileri Stres

Kuyruk damar anestezi sıçan bir vakum kan toplama sistemi ile kan koleksiyonundan tekrarlanan

Mikrovasküler Fragmanlardan Vaskülarize Termojenik Yağ Dokusunun Üç Boyutlu Kültürü

Yeni Zelanda Beyaz Tavşanlarında Anne Bağışıklama Çalışmalarında İntranazal Bağışıklama ve Süt Toplama (Oryctolagus cuniculus)

Fareler ve Reeves 'munçağı Deer için Süt Toplama Yöntemleri

Memeli Tüm Embriyo Kültürü için uygun Rat Serum hazırlanması

EEG Kayıtları Sırasında Sıçanlarda Lateral Kuyruk Veninden Beyin Omurilik Sıvısı ve Kan Örneği Alınması

EEG Kayıtları Sırasında Sıçanlarda Lateral Kuyruk Veninden Beyin Omurilik Sıvısı ve Kan Örneği Alınması