Isso funciona foi apoiada através de subsídios da Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (RGPIN 238382-2011) e Canadian Institutes of Health Research (MOP115076). Heather Paul foi apoiada por uma Ciências Naturais e do Conselho de Investigação do Canadá Engenharia de Bolsas de Pós-graduação e uma bolsa Alberta inova Health Solutions. Megan Hallam foi apoiado por uma bolsa de estudos em Ciências Naturais e Engenharia do Conselho de Pesquisa de Pós-Graduação, um Scholarship Frederick Banting e Charles Best Canadá graduação, e Prêmio de Crianças Alberta Hospital Research Institute Formação em Genética, Desenvolvimento Infantil e Saúde.

Este protocolo foi aprovado pelo Comitê da Universidade de Calgary Animal Care e conformado com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório. 1. Dam Separe Offspring <ol><li> Separa-se a barragem de sua prole para um mínimo de 5 min antes da ordenha 12. NOTA: A represa pode ser ordenhadas até 5-6 horas após a separação 1,6,13, no entanto períodos de separação mais do que 4 horas podem alterar a composição do leite 14. Enquanto tempo de separação não parece afetar coleção volume de leite 12, é aconselhável que um tempo de separação consistentes ser mantida durante todo o estudo. A composição do leite pode mudar ao longo da lactação 15, portanto, devem ser feitas tentativas para manter o dia da coleta de leite consistente. Máxima produção de leite é sugerida para ocorrer no dia 14 de lactação 12. </li><li> Usando uma câmara de aquecimento, garantir os filhotes são capazes de manter temperatu do corpo adequadare sem a presença da mãe durante a duração do procedimento de ordenha. NOTA: No estudo apresentado a seguir, ordenha foi realizada ao desmame, quando as barragens eram aproximadamente 22 semanas de idade e The Offspring 21 dias de idade, portanto, nenhuma câmara de aquecimento foi utilizado. </li></ol> 2. Set-up e Preparação <ol><li> Colete todos os materiais necessários para o procedimento de ordenha. NOTA: Todos os materiais pode ser encontrada na tabela de materiais e equipamento. </li><li> Coloque uma almofada de aquecimento no banco onde a ordenha terá lugar e cobrir a almofada com um banco absorvente sob-pad. </li><li> Configure o sistema anestésico. Assegure-se que o sistema tem de oxigénio e isoflurano antes do início suficiente. Fixar o anestésico máscara que irá ser utilizada para a indução da anestesia inicial para a máquina. Coloque a máscara que irá ser utilizado para a manutenção da anestesia nas proximidades se for diferente do que a máscara de anestesia inicial. </li><li> Coloque uma agulha 25 G para uma seringa de 1 ml para ocitocinainjecção utilizando uma técnica asséptica. </li><li> Ligue a almofada de aquecimento para que a temperatura do corpo materno é mantida durante o processo de ordenha. NOTA: Monitorar a temperatura da almofada de aquecimento para assegurar a almofada não se torna muito quente e causar queimaduras. Em alternativa, usar uma fonte de calor, tal como uma mesa de operações aquecida, que pode ser ajustado para uma temperatura específica. </li></ol> 3. anestesiar o Dam Usando Isoflurane <ol><li> Abra o tanque de oxigênio e virar o fluxo de 1 L (1000 cc) por min. Ligue o fluxo de isoflurano e ajustado para 5%. CUIDADO: Evite inalação direta de anestésico e evitar a acumulação de vapores anestésicos. </li><li> Anestesiar a barragem. </li><li> Mudar para a máscara de manutenção, se necessário, colocando o supino barragem no banco almofada absorvente. Confirme anesthetization por falta de pedal reflexo. </li><li> Reduzir o fluxo de isoflurano a 2-3% para manutenção da anestesia. Monitorar continuamente barragem durante todo o processo para garantir depressão da respiração não ocorre. NOTA: Uma vez sob anestesia, os olhos da represa devem ser protegidos com um lubrificante de olho estéril para evitar que os olhos sequem ou tornar-se riscado. </li></ol> 4. A oxitocina injeção <ol><li> Garantir a ocitocina (20 USP Unidades / ml) não passou da data de validade. Desinfetar o frasco de ocitocina com um álcool estéril limpar / álcool de limpeza pad. </li><li> Utilizando uma técnica asséptica, elaborar 2 UI (0,1 ml) de ocitocina para a seringa. Utilize uma nova agulha e seringa para cada barragem que vai ser ordenhadas. NOTA: A oxitocina doses variam geralmente de injecções individuais de 1 a 5 IU 1,6,12,16. Alternativamente, uma dose de 4 UI / kg de peso corporal pode ser utilizado 12. Uma dose única de 2 Ul pode ser repetida uma vez, se a ordenha for encontrada dificuldade. </li><li> Injectar a oxitocina por via intraperitoneal. Insira a agulha no quadrante inferior direito do abdômen com a agulha apontando para a cabeça, em um ângulode 15-30 °, cerca de 0,5 cm de profundidade. </li><li> Puxe o êmbolo para garantir pressão negativa antes da injeção. Se qualquer líquido (sangue, urina, conteúdo intestinal, etc.) é aspirada para a seringa, a agulha e remover tentar a injecção com uma agulha e seringa. Se nenhum fluido é aspirado injetar a oxitocina e descarte a agulha e seringa imediatamente em um recipiente de risco biológico. </li><li> Aguarde cerca de 5-15 min para a ocitocina para estimular a descida do leite. </li></ol> 5. Preparação de Sites de ordenha <ol><li> Escolha os sites / tetos de leite serão coletadas. O leite pode ser recolhida a partir de qualquer tetina 12. </li><li> Remova suavemente a pele ao redor dos tetos de ser ordenhadas com os trimmers, como a pele pode causar dificuldade na coleta de amostra devido à absorção da do leite. Seja gentil - a pele ao redor dos bicos é extremamente sensível e pode ser seca e, como tal, é suscetível a arranhões e lágrimas. </li><li> Esterilização do i tetinaNão é necessário, mas opcionalmente, limpar a tetina com água morna após a pele é removida. Preparar pelo menos dois locais como mais do que um sítio possa ser necessária para a recolha de leite. NOTA: Se a análise do leite inclui perfis de microbiana, a área de tetina pode exigir a esterilização com iodo 5. </li></ol> Coleção 6. Leite <ol><li> Espremer suavemente a base da teta, expulsando o leite manualmente para recolha. NOTA: Se a análise do leite inclui perfis de microbiana, as primeiras gotas de leite devem ser descartados. </li><li> Recolher as gotas de leite para um tubo capilar, o enchimento do tubo capilar. Tubos capilares, que podem acomodar volumes maiores (por exemplo, 50 ul) facilitar o processo. NOTA: Se houver dificuldade na coleta de leite é encontrado, uma segunda dose de oxitocina pode ser administrado. Recomenda-se a dose não deve exceder 4 IU total. </li><li> Repartir o leite a partir do tubo capilar para um tubo de microcentrífuga esterilizadotocar a extremidade do tubo que foi utilizado para desenhar a partir do leite da teta para o lado do tubo de microcentrífuga - observar o leite a ser desenhada para fora do tubo capilar por meio de acção capilar. NOTA: &#39;funda para fora &quot;do leite que não é puxado para dentro do tubo, usando uma agulha de 18 G ligada a uma seringa de 1 ml. </li><li> Monitorar continuamente a barragem para sinais de dor ou depressão respiratória e ajustar o fluxo de isoflurano em conformidade. </li><li> Continuar a recolher o leite como descrito nesta seção até que o leite suficiente tiver sido coletado para a análise de leite escolhido. Para a determinação da concentração de proteína e crematócrito descrito abaixo, recolher 0,25 ml de leite. NOTA: Use um local de ordenha diferente se a descida do leite diminui ou o local escolhido não expulsar leite suficiente. Um máximo de cerca de 2,5 ml de leite por animais pode ser recolhida 17, ou até 0,5 ml por tetina. Os autores recomendam que o tempo total sob anestesia ser limitado a aproximadamente 45-60 min, oR 45 min de ordenha. </li><li> Recolha do leite para um tubo de micro-hematócrito para medição crematócrito a partir de amostras de leite fresco, e vedar a extremidade do tubo com vedante argila. Rotular o tubo de microhematócrito com o ID barragem e armazenar a amostra de leite na posição vertical. </li><li> Quando a ordenha é completa, desligue o fluxo de isoflurano e oxigênio. Retire a máscara da barragem e continuará a acompanhar barragem até acordado. Recomenda-se que se não totalmente consciente, a barragem deve ser colocada sobre uma almofada absorvente banco durante o período de recuperação, ao invés de diretamente na cama gaiola, para evitar que a roupa de cama de ser aspirado ou coçar os olhos da represa durante a recuperação. NOTA: Não deixe a barragem autônoma até que tenha recuperado a consciência suficiente para manter recumbancy esternal. </li><li> Se não forem necessárias análises adicionais, congelar o leite à temperatura de -80 ° C. Outros têm sugerido que o leite possa ser armazenado durante até 3 horas a 4 ° C ou 5 meses a -20 ° C 18. </li></ol> 7. Medição crematócrito <ol><li> Estimar o teor de gordura do leite por meio do cálculo do crematócrito leite (a percentagem de creme na amostra de leite) 19. NOTA: As medições com leite humano demonstraram que o leite fresco ou congelado pode ser utilizado para uma medição crematócrito, no entanto leite fresco é mais altamente correlacionados (r = 0,92 versus R = 0,90) com a concentração lipídica 11. O uso de leite fresco ou congelado para medições crematócrito deve ser mantido consistente em todo o estudo, como o leite descongelado está associado a uma pequena diminuição no crematócrito valores 11. </li><li> Para o leite fresco, recolher uma amostra de leite da teta em um tubo de microhematócrito; preencher pelo menos ¾ cheio (cerca de 15-20 mL). Alternativamente, extrair leite fresco a partir da amostra recolhida para dentro do tubo capilar depois de misturar bem. Selar o fim com selante de barro. </li><li> Colocar o tubo capilar para hematócrito da fieira, com aextremidade vedada apontando para o exterior, garantindo a centrífuga é equilibrada. </li><li> Comece o spin hematócrito (120 segundos a 13.700 xg). NOTA: O tempo da rotação ou velocidade pode mudar, dependendo do modelo de centrífuga utilizada. </li><li> Remover o tubo da centrifugadora depois da rotação é completo e realizar as medições para calcular o crematócrito. Observar separação da amostra numa camada de creme e uma camada clara. </li><li> Medir e registar o comprimento total de fluido no tubo e o comprimento da gordura (creme) camada usando compassos de calibre ou uma régua. NOTA: O crematócrito é expressa como a percentagem da camada de creme na amostra de leite a 19, calculada como (comprimento da camada de nata / comprimento total da coluna de leite) x 100 (Figura 1A). Calcular os valores de concentração e de energia a partir da medição de gordura crematócrito como se segue: concentração de gordura (g / L) = (crematócrito (%) - 0,59) /0.146 (Figura 1B) 19; Valor energético (kcai / L) = 290 + (* crematócrito 66,8 (%) (Figura 1C) 19. </li></ol> 8. Proteína Concentração Determinação <ol><li> Utilizando albumina de soro bovino como padrão de proteína, determinar a concentração total de proteína do leite, utilizando um ensaio de proteína padrão, tal como ensaio de proteínas de Lowry um 6. NOTA: A diluição do leite pode ser necessária para as medições de proteínas de leite a cair dentro da curva padrão do ensaio. </li></ol>

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Os autores não têm conflitos de interesse a declarar. Todos os experimentos com animais foram realizados em conformidade com os protocolos do CCAC aprovado.

Investigations into maternal milk components have increased as interest in early life development research rises. As the sole source of nutrition during the neonatal period, the bioactive compounds in milk are essential for ideal growth and development, especially in the context of intestinal and immune health3. The method presented here is a simple, non-invasive method of collecting milk from the lactating rat in amounts sufficient for downstream analysis, such as oligosaccharide profiling6. The me...

O leite é a única fonte de nutrição para mamíferos recém-nascidos, fornecendo energia e nutrientes para o crescimento e desenvolvimento infantil 1,2. Quando o leite é constituído principalmente por células, lípidos e proteína 1, que também contém uma pletora de compostos bioactivos que modulam o desenvolvimento vida precoce da descendência, incluindo enzimas, hidratos de carbono, hormonas, anticorpos, factores de crescimento, citocinas, exossomas, microvesículas, e pequenos RNAs tais como microARN 1,2. O papel fundamental do leite materno na criação da prole imunitário e saúde intestinal 3, juntamente com evidências de que crianças amamentadas são menos suscetíveis à doença 2, destaca a importância de identificar os constituintes do leite associados a processos de doenças no início da vida e os mecanismos moleculares envolvidos em suas ações. O rato é o desenvolvimento de um modelo popular para investigar o efeito de vários nutricional, fisiológico e intervenções químicas no iníciodesenvolvimento -life 4. A análise do leite do rato podem, portanto, proporcionar novos insights sobre a saúde materna e prole. Avanços científicos atuais fornecem agora aumentar as oportunidades para investigações aprofundadas sobre os efeitos de constituintes do leite específicos na saúde e na doença. Por exemplo, a sequenciação de leite perfis bacterianas elucidou o seu papel na colonização intestinal precoce do intestino infantil 5, análise de espectrometria de massa de oligossacarídeos do leite forneceram uma visão sobre a alteração dos perfis de oligossacarídeos do leite via dieta materna 6 e profunda seqüenciamento de microRNA secretada em os glóbulos de gordura do leite materno destaca possíveis papéis na transcrição do gene, o metabolismo e a função imunológica 7. Modelos de ratos representam um dos organismos modelo mais populares usados ​​em estudos materno 8,9. Uma vantagem é seus períodos de gestação e aleitamento curtas, durando apenas approximatEly 21 dias cada; Por conseguinte, o tempo total a partir do início da gravidez até lactação representa um curto período de tempo em que os dados valiosos podem ser gerados. Quanto maior o tamanho de ratos em comparação com os ratinhos, no contexto de recolha do leite, pode proporcionar uma vantagem significativa no que diz respeito ao volume de leite e facilidade de recolha do leite; produção de leite no rato, por exemplo, parece ser dependente do peso corporal total com os ratos mais pesados ​​que produzem mais leite 10. Aqui, uma descrição geral para a coleta manual de leite de ratas lactantes é fornecido. Este protocolo requer um equipamento mínimo, é não-invasiva e de baixo custo, e podem ser usadas para recolher os volumes adequados de leite para análises adicionais a jusante. Em breve, a barragem é anestesiados com isoflurano, a descida do leite é estimulada pela oxitocina, e de leite são recolhidas em tubos capilares por meio de extracção manual do leite. Finalmente, como dois principais componentes de leite são proteínas e gordura, uma breve description de estimar o teor de gordura do leite por meio de medidas crematócrito 11 e quantificação da concentração total de proteínas usando um ensaio de proteína padrão é apresentada.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;Equipment - Milking&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 ml syringes</td><td>BD-Canada</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>25 G needles</td><td>BD-Canada</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>18 G needles</td><td>BD-Canada</td><td>305196</td><td></td></tr><tr><td>50 &amp;mu;l Microdispenser Capillary Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>21-169D</td><td></td></tr><tr><td>Oxytocin (20 USP Units/ml)</td><td>Bimeda-MTC</td><td>1OXY015</td><td></td></tr><tr><td>PPC Vet Isoflurane Inhalation Anesthetic, 250 ml</td><td>Fresenius Kabi</td><td>M60302</td><td>Used on the order of a veterinarian</td></tr><tr><td>Sterile Alcohol Prep Pad</td><td>Dukal</td><td>853</td><td></td></tr><tr><td>Absorbent Bench Underpad</td><td>VWR</td><td>82020-845</td><td></td></tr><tr><td>Maxi-Therm Hyper/Hypothermia Blanket</td><td>Cincinnati Sub-Zero</td><td>274</td><td></td></tr><tr><td>Rodent Anesthesia Machine with Vaporizer</td><td>Benson Medical Industries Inc.</td><td></td><td>Subject to individual laboratory needs</td></tr><tr><td>Animal Masks</td><td>Benson Medical Industries Inc.</td><td>50100/50102</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge Tubes</td><td>Axygen</td><td>MCT-060-C</td><td></td></tr><tr><td>ChroMini Professional Trimmer</td><td>Wahl</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;Equipment - Creamatocrit&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>StatSpin SafeCrit Plastic Microhematocrit Tubes (Untreated)</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-274-914</td><td></td></tr><tr><td>Critoseal Capillary Tube Sealant Tray</td><td>VWR</td><td>470161-478</td><td></td></tr><tr><td>StatSpin CritSpin Microhematocrit Centrifuge</td><td>Beckman Coulter, Inc</td><td>X00-004999-001</td><td></td></tr></tbody></table>

milk collection in the rat using capillary tubes and estimation of milk fat content by creamatocrit

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also contains a vast number of bioactive compounds that greatly affect the development of the neonate. The analysis of milk components will help elucidate key factors that link maternal metabolism and health with offspring growth and development. The laboratory rat represents a popular model organism for maternal studies, and rat milk can be used to examine the effect of various maternal physiological, nutritional, and pharmacological interventions on milk components, which may then impact offspring health. Here a simple method of manually collecting milk from the lactating rat that can be performed by a single investigator, does not require specialized vacuum or suction equipment, and provides sufficient milk for subsequent downstream analysis is described. A method for estimating the fat content of milk by measuring the percentage of cream within the milk sample, known as the creamatocrit, is also presented. These methods can ultimately be used to increase insight into maternal-child health and to elucidate maternal factors that are involved in proper growth and development of offspring.

O leite foi recolhido como descrito no desmame de fêmeas Wistar (cerca de 22 semanas de idade, pesando 350 a 400 g) que consumiram um controlo (AIN-93G, n = 5), elevado teor de proteínas (40% de caseína p / p, n = 5) , ou alta fibra pré-biótica (21,6% p / p, 1: 1 razão de oligofrutose e inulina, n = 4) dieta durante a gravidez e lactação. A dose de oxitocina foi de 2 UI. O leite foi recolhido utilizando tubos capilares, e um tubo foi centrifugado usando um spinner hematócrito para determinar crematócrito <stro...

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Milk Collection in the Rat Using Capillary Tubes and Estimation of Milk Fat Content by Creamatocrit

Milk is a primary source of nutrition for the neonate. Analysis of milk components may provide insight into maternal factors that affect offspring health. This protocol describes a manual method of collecting milk samples from the lactating rat, which can then be used for further downstream analysis.

Coleta de Leite no Rato Usando Capilar Tubos e Estimativa da gordura do leite por conteúdo crematócrito

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also ...

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Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

12.3K visualizações.  University of Calgary. Milk is a primary source of nutrition for the neonate. Analysis of milk components may provide insight into maternal factors that affect offspring health. This protocol describes a manual method of collecting milk samples from the lactating rat, which can then be used for further downstream analysis.

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The Use of Gas Chromatography to Analyze Compositional Changes of Fatty Acids in Rat Liver Tissue during Pregnancy

Gas chromatography (GC) is a highly sensitive method used to identify and quantify the fatty acid content of lipids from tissues, cells, and plasma/serum, yielding results with high accuracy and high reproducibility. In metabolic and nutrition studies GC allows assessment of changes in fatty acid concentrations following interventions or during changes in physiological state such as pregnancy. Solid phase extraction (SPE) using aminopropyl silica cartridges allows separation of the major lipid classes including triacylglycerols, different phospholipids, and cholesteryl esters (CE). GC combined with SPE was used to analyze the changes in fatty acid composition of the CE fraction in the livers of virgin and pregnant rats that had been fed various high and low fat diets. There are significant diet/pregnancy interaction effects upon the omega-3 and omega-6 fatty acid content of liver CE, indicating that pregnant females have a different response to dietary manipulation than is seen among virgin females.

Pregnancy leads to significant changes to the fatty acid composition of maternal tissues. Lipid profiles can be obtained via gas chromatography to allow identification and quantification of fatty acids in individual lipid classes among rats fed various high and low fat diets during pregnancy.

O uso de cromatografia gasosa para analisar composicional Alterações de ácidos graxos no tecido de fígado de rato durante a gravidez

Gas chromatography (GC) is a highly sensitive method used to identify and quantify the fatty acid content of lipids from tissues, cells, and plasma/serum, ...

Química

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary epithelium using transplantation techniques takes advantage of the hormonal environment provided by the adolescent rodent host. These studies are ideally suited to explore the impact of various biological manipulations on mammary gland development and dissect many aspects of mammary gland biology. A common, but limiting, feature is that transplanted epithelial cells are strongly influenced by the surrounding stroma and outcompeted by endogenous epithelium; to utilize native mammary tissue, the abdominal-inguinal white fat pad must be cleared to remove host mammary epithelium prior to the transplantation. A major obstacle when using the rat model organism is that clearing the developing mammary tree in post-weaned rats is not efficient. When transplanted into gland-free fat pads, donor epithelial cells can repopulate the cleared host fat pad and form a functional mammary gland. The interscapular fat pad is an alternative location for these grafts. A major advantage is that it lacks ductal structures yet provides the normal stroma that is necessary to promote epithelial outgrowth and is easily accessible in the rat. Another major advantage of this technique is that it is minimally invasive, because it eliminates the need to cauterize and remove the growing endogenous mammary tree. Additionally, the interscapular fat pad contains a medial blood vessel that can be used to separate sites for grafting. Because the endogenous glands remain intact, this technique can also be used for studies comparing the endogenous mammary gland to the transplanted gland. This paper describes the method of mammary epithelial cell transplantation into the interscapular white fat pad of rats.

This article describes a transplantation method to graft donor rat mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of recipient animals. This method can be used to examine host and/or donor effects on mammary epithelium development and eliminates the need for pre-clearing, thereby extending the usefulness of this technique.

Transplante de células epiteliais mamárias no Bloco de Gordura Branca Interscapular

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Pesquisa do câncer

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

This study was designed to evaluate the protective effect of the Bacillus subtilis strain against complications related to heat stress. Thirty-two Sprague-Dawley rats were used in this study. Animals were orally treated twice a day for two days with B. subtilis BSB3 strain or PBS. The next day after the last treatment, each group was divided and two experimental groups (one treated with PBS and one treated with B. subtilis) were placed at 45 oC for 25 min. Two control groups stayed for 25 min at room temperature. All rats were euthanized and different parameters were analyzed in all groups. Adverse effects of heat stress are registered by the decrease of villi height and total mucosal thickness in the intestinal epithelium; translocation of bacteria from the lumen; increased vesiculation of erythrocytes and elevation of the lipopolysaccharides (LPS) level in the blood. The protective efficacy of treatment is evaluated by prevention of these side effects. The protocol was set up for the oral treatment of rats with bacteria for prevention of heat stress complications, but this protocol can be modified and used for other routes of administration and for analysis of different compounds.

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

We described a protocol for prevention of heat stress effects in rats by oral pre-treatment with beneficial bacteria. This protocol can be modified and used for various routes of administration and for analysis of different compounds.

Prevenção de estresse térmico efeitos adversos em ratos pela<em&gt; Bacillus subtilis</em&gt; Strain

This study was designed to evaluate the protective effect of the Bacillus subtilis strain against complications related to heat stress. Thirty-two ...

Imunologia e Infecção

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the tail vein is thin so that it is sometimes hard to puncture. In addition, the tail vein has low blood flow and requires a long sampling time to get sufficient blood. The present report describes a simple blood sampling method, the vacuum blood collection method, which is usually used to obtain blood samples from patients, here used for non-anesthetized rats. The 22 G butterfly needle tip was inserted into one of the lateral tail veins approximately 2-3 cm from the tip of the tail at an angle of approximately 20&#176;, and blood was collected in the vacuum collection tube by inserting the rubber end of the butterfly needle into the vacuum blood collection tube. The present experimental results show that the success rate was 95% in the experimental group and 90% in the beginner group. The success rate and puncture times were similar between two groups. The sampling duration was significantly shorter in the experimental group compared to beginner group. In conclusion, this vacuum blood collection method for sequential blood sampling from the tail vein of non- anesthetized rats is feasible and easy-to-learn, which might serve as a reliable alternative to other conventionally used blood sampling techniques for rats.

Here, we describe a simple tail vein blood sampling method in non-anesthetized rats using a vacuum extraction tube system. This method reduces the risk of direct exposure to blood and simplifies taking multiple samples from a single venipuncture.

Repetiu a coleta de sangue da veia da cauda de ratos não anestesiados com um sistema de coleta de sangue do vácuo

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

Medicina

Three-Dimensional Culture of Vascularized Thermogenic Adipose Tissue from Microvascular Fragments

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for the design of personalized microtissues for health screening and drug testing. Current strategies are often quite complex and fail to accurately fully depict the multicellular and functional properties of thermogenic adipose tissue. Microvascular fragments, small intact microvessels comprised of arteriole, venules, and capillaries isolated from adipose tissue, serve as a single autologous source of cells that enable vascularization and adipose tissue formation. This article describes methods for optimizing culture conditions to enable the generation of three-dimensional, vascularized, and functional thermogenic adipose tissues from microvascular fragments, including protocols for isolating microvascular fragments from adipose tissue and culture conditions. Additionally, best practices are discussed, as are techniques for characterizing the engineered tissues, and sample results from both rodent and human microvascular fragments are provided. This approach has the potential to be utilized for the understanding and development of treatments for obesity and metabolic disease.

Here, we present a detailed protocol outlining the use of microvascular fragments isolated from rodent or human fat tissue as a straightforward approach to engineer functional, vascularized beige adipose tissue.

Cultura Tridimensional de Tecido Adiposo Termogênico Vascularizado a partir de Fragmentos Microvasculares

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for ...

Bioengenharia

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits (Oryctolagus cuniculus)

Due to similarities in placentation and antibody transfer with humans, rabbits are an excellent model of maternal immunization. Additional advantages of this research model are the ease of breeding and sample collection, relatively short gestation period, and large litter sizes. Commonly assessed routes of immunization include subcutaneous, intramuscular, intranasal, and intradermal. Nonterminal sample collection for the chronological detection of the immunologic responses to these immunizations include the collection of blood, from both dams and kits, and milk from the lactating does. In this article, we will demonstrate techniques our lab has utilized in studies of maternal immunization in New Zealand White rabbits (Oryctolagus cuniculus), including intranasal immunization and milk collection.

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits Oryctolagus cuniculus

This article describes and demonstrates the administration of intranasal vaccines and the collection of milk from lactating rabbits (Oryctolagus cuniculus) as a means to assess mucosal immunity in a translationally appropriate model of maternal immunization.

Imunização Intranasal e Coleta de Leite em Estudos de Imunização Materna em Coelhos Brancos da Nova Zelândia (Oryctolagus cuniculus)

Due to similarities in placentation and antibody transfer with humans, rabbits are an excellent model of maternal immunization. Additional advantages of ...

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer.

Métodos de coleta de leite para Ratos e Reeves Muntjac cervos

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

Biologia

Preparation of Rat Serum Suitable for Mammalian Whole Embryo Culture

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for investigating the mechanisms of developmental processes. Immediately centrifuged (IC) rat serum is commonly used for WEC and is essential for the growth and development of cultured mouse and rat embryos ex vivo. For the culture of midgestation embryos (i.e., E8.0-12.5 for the mouse, and E10.0-14.5 for the rat), 100% rat serum is the best media for supporting the growth of the embryo ex vivo. To prepare rat serum suitable for WEC, the collected blood should be centrifuged immediately to separate the blood cells from the plasma fraction. After centrifugation, the fibrin clot forms in the upper layer; this clot should be squeezed gently using a pair of sterile forceps and subsequently centrifuged to completely separate the blood cells from the serum. In this video article, we demonstrate our standard protocol for the preparation of optimal IC rat serum, including blood collection from the abdominal aorta of male rats and extraction of the serum by centrifugation.

Mammalian whole embryo culture (WEC) is widely used in teratology and developmental biology. Immediately centrifuged rat serum is commonly provided as a medium for both mouse and rat WEC. In this video, we demonstrate our standard protocol for the preparation of high-quality rat serum suitable for mammalian WEC.

Preparação de Rat Serum Indicado para cultura de embriões de mamíferos Whole

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for ...

Líquido cefalorraquidiano e retirada de sangue de ratos com registro simultâneo de EEG

Sampling Cerebrospinal Fluid and Blood from Lateral Tail Vein in Rats During EEG Recordings

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure molecules of interest, such as hormones, growth factors, proteins, or small non-coding RNAs. A specific example is the sampling of biological liquids in the research of biomarkers for epilepsy. In these studies, it is desirable to compare the levels of molecules in cerebrospinal fluid (CSF) and in plasma, by withdrawing CSF and plasma in parallel and considering the time distance of the sampling from and to seizures. The combined CSF and plasma sampling, coupled with video-EEG monitoring in epileptic animals, is a promising approach for the validation of putative diagnostic and prognostic biomarkers. Here, a procedure of combined CSF withdrawal from cisterna magna and blood sampling from the lateral tail vein in epileptic rats that are continuously video-EEG monitored is described. This procedure offers significant advantages over other commonly used techniques. It permits rapid sampling with minimal pain or invasiveness, and reduced time of anesthesia. Additionally, it can be used to obtain CSF and plasma samples in both tethered and telemetry EEG recorded rats, and it may be used repeatedly across multiple days of experiment. By minimizing the stress due to sampling by shortening isoflurane anesthesia, measures are expected to reflect more accurately the true levels of investigated molecules in biofluids. Depending on the availability of an appropriate analytical assay, this technique may be used to measure the levels of multiple, different molecules while performing EEG recording at the same time.

Autor em destaque: Obtenção de amostras de sangue e LCR de alta qualidade para descoberta de biomarcadores de epilepsia 

The protocol shows repeated cerebrospinal fluid and blood collections from epileptic rats performed in parallel with continuous video-electroencephalogram (EEG) monitoring. These are instrumental for exploring possible links between changes in various body fluid molecules and seizure activity.

Amostragem de líquido cefalorraquidiano e sangue da veia lateral da cauda em ratos durante registros de EEG

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many ...

Coleta de Leite no Rato Usando Capilar Tubos e Estimativa da gordura do leite por conteúdo crematócrito

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O uso de cromatografia gasosa para analisar composicional Alterações de ácidos graxos no tecido de fígado de rato durante a gravidez

Transplante de células epiteliais mamárias no Bloco de Gordura Branca Interscapular

Prevenção de estresse térmico efeitos adversos em ratos pela

Repetiu a coleta de sangue da veia da cauda de ratos não anestesiados com um sistema de coleta de sangue do vácuo

Cultura Tridimensional de Tecido Adiposo Termogênico Vascularizado a partir de Fragmentos Microvasculares

Imunização Intranasal e Coleta de Leite em Estudos de Imunização Materna em Coelhos Brancos da Nova Zelândia (Oryctolagus cuniculus)

Métodos de coleta de leite para Ratos e Reeves Muntjac cervos

Preparação de Rat Serum Indicado para cultura de embriões de mamíferos Whole

Amostragem de líquido cefalorraquidiano e sangue da veia lateral da cauda em ratos durante registros de EEG

Amostragem de líquido cefalorraquidiano e sangue da veia lateral da cauda em ratos durante registros de EEG