Biz çekimler sırasında yardımcı tavsiye ve yardım için Osman Kaftanoğlu teşekkür ederim. Biz anlayışlı yorumlar için anonim eleştirmenlerine teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma Norveç Araştırma Konseyi (180.504, 191.699, 213.976 ve hibe), Marie Curie/FP7 (proje ref. 238665), Yaşlanma (hibe NIA P01 AG22500) Ulusal Enstitüsü ve Pew Bağış Güven tarafından desteklenmiştir.

1.. Kronolojik Çağı&#39;na ihtiyarlama ayırımı Bu bölüm aynı kronolojik yaş (&quot;tek yaş kohort&quot;) ve yuva arıların bir grubu tespit paylaşan bireylerin bir kohort oluşan çift kohort kolonilerin, kurulumunu açıklar. Tek yaş grubu aynı yaştaki bireyler sonunda farklı yaşlanma dinamikleri farklı işçi tipe ayrı olacak - bu hızlandırılmış fonksiyonel düşüş yavaşladı ve toplayıcı arılar ile hemşire arılar vardır. Tüm prosedürler bir deney koloni için tarif edilmiştir. Biz böylece koloni etkileri (iki suret-tasarım) için kontrol edilebilir en az iki koloni için deneyler gerçekleştirmek için, ancak, çoğaltır öneriyoruz. <ol><li> Çift kohort sömürgeler için kovanı kutuları hazırlanıyor: bal ile iki gıda tarak alır normal bir kovan kutu, polen başka gıda tarak ve iki boş tarak hazırlayın. 3.000 &#39;den fazla olan bir evlendirdi kraliçe gibi bir donör koloni bulmak için emin olunyuva arılar. Her ikisi de daha sonra tanıtılacak (1.3). </li><li> Alınması ve benzeri kronolojik yaş ile bireylerin işaretleme: ortaya üzeredir mühürlü yavrularıyla tarak toplayın. Bir replikasını için 3.000-5.000 şapkalı kuluçka hücrelerinin toplam tarak toplamak için bekliyoruz. Her anne genotipleri (kovanı kökenli) çarpık dağılımları önlemek için en az üç farklı kovanı kaynaklardan damızlık dengeli miktarda kullanmak çoğaltmak için. <ol><li> % 60-70 bağıl nem ile 34 ° C&#39;ye ayarlanmış bir kuluçka makinesi içinde kuluçka tarak yerleştirin. Gelişmekte olan damızlık kaçamaz böyle bir şekilde tarak saklamak için emin olun. </li><li> Arılar iki gün boyunca ortaya edelim ve toraks (örneğin Uni Posca, Mitsubishi Pencil Co Ltd) üzerinde küçük bir boya etiketi ile bu arıları işaretlemek. Boya işareti tek yaş grubu (doğuşunun gün) arıları belirlenmesini sağlayacaktır, ve diğer çoğaltmak kolonilerden ayırt etmek. </li></ol></li><li> I kohort içeren bir çift kohort koloni kurmadentified, tek yaş arılar: gününde genç arılar işaretlenmiş, (bkz. (. Tartışma bölüm 1 karşılaştırmak), ve daha önce hazırlanan kovan kutusuna bu işaretlenmemiş arılar eklemek verici bir koloni yaklaşık 2,500-3,000 yuva arıları toplamak ) 1.1 adıma. İkinci bireyler tanımlanamayan yuva arı kohort teşkil edecektir. <ol><li> Başlangıçta bir kraliçe kafes (piyasada mevcut) sınırlı olacak kraliçeyi ekleyin. Yenilebilir şeker (örneğin Apifonda, Südzucker AG, Mannheim / Ochsenfurt, Almanya) işçi arıların kraliçe yavaşça serbest bırakmak yapmak ile kafesi kapatılmalıdır. </li><li> Tek yaş kohort teşkil edecek yeni ortaya çıkan ve işaretli arılar ekleyin. Bu arılar sadece işaretli kişiler vardır, ve tüm aşağıdaki adımları için odak grup vardır. </li></ol></li><li> Başlangıcı yem ve silaj işaretleme İzleme: başlangıcı ve tek yaş grubundaki hasta-hemşire forager geçiş dinamikleri değerlendirmek için, toplayıcı faaliyeti e demografik gelişimini izlemekHer koloninin çok gün. Koloniler (Şekil 1) kuruldu sonra beş gün saymaya başlayacaktır. <ol><li> Sabit zamanlarda 3 x 20 dk gözlem süreler içinde uçuşlar (giriş sayımları) kazarak dönen arıların toplam sayısını. (Tartışma) oryantasyon uçuş dönemlerinde arıları saymak değil emin olun. </li><li> Giriş sayısı (&gt; 100 giriş sayım / gün) başlaması için önemli bir yiyecek arama etkinliğini gösterir zaman, silaj işaretleme başlar. Bunu yapmak için, tek yaş grubunda (tek işaretli kişi) silaj ilk toplayıcı uçuşları dönen üzerine ikinci bir boya izi alırsınız. Bu boya işareti başlangıcını toplayıcı gününü belirler ve daha sonra her forager toplayıcı yaş tanımanızı sağlayacak. </li><li> Arıların yeterli sayıda işaretlenmiş kadar günlük işaretlerini tekrarlayın. Bu arı tipik olarak 14 gün sonra, yaş edildikten sonra işaretli toplayıcılar yeterli sayıda tahmin etmek için, en fazla 5-10% arasında bir alma oranı beklemekforaging. </li></ol></li><li> Örnekleme: Tüm başlangıçta işaretli arılar benzer bir kronolojik yaş olduğundan silaj ≥ 14 gün boyunca foraged ne zaman, hemşire ve eski arayıcıların yaştaki gruplar, aynı anda tahsil edilebilir. <ol><li> Tek belirgin hemşire arılar kovan içinde toplanır ve hemşirelik davranış (açık yavru hücrelere aşağı koymak başkanları ile besleme ve larva temizlik) ile tanımlanır. </li><li> Günlük toplayıcı aktivite başlamadan önce Çift işaretlenmiş silaj da kovan içinde toplanır. </li><li> Yeterli havalandırma sağlamak kafeslere (tüpler, kutular) arıların toplayın, ve daha fazla işlem kadar karanlık tutun. Alternatif olarak, Transkriptomik, epigenetik veya proteomik çalışmalar için, doğrudan sıvı nitrojen içinde dondurularak arılar oturtun. Tüm test gruplardan bireylerin dengeli numaralarını toplamak ve koloniler çoğaltmak. </li></ol></li></ol> 2. Hive Demografi &lt;değiştirme tarafından Slowed Yaşlanma ile İşçi Rapid ile İşçi iptali/ P&gt; Bu bölümde yavaşladı yaşlanma (hemşire arılar) ile işçilere hızlandırılmış yaşlanma (silaj) ile işçiler dönüş yapılır nasıl ayrıntıları. Silaj normalde yavru bakımı meşgul hemşire arıların eksikliği, karşılaştığınızda bu tür davranışsal ters, uyarılmaktadır. Hemşire arı fraksiyonu ile bir kovan (&quot;hemşire-türetilmiş&quot;), ve silaj fraksiyonu ile başka bir (&quot;toplayıcı-türetilmiş&quot;): reversiyon yordam tek bir koloni iki kurdeşen içine çoğaltmak ayrı olacaktır. Başarılı ters, plastik olası belirtileri ve ters yaşlanma döndürüldü işçiler, devam silaj, sürekli hemşire arılar ve yeni işe silaj ile tek yaş grubunda okudu olabilir sonra. Daha önce olduğu gibi, tek bir yaş grubunda, değil tanımlanamayan yuva arıların kohort arasında belirlenen arılar, deneysel odak grubu oluşturmaktadır. <ol><li> Hazırlanışı: Bir önceki bölümde açıklandığı gibi hemşireler (tek işaretli) ve silaj (çift işaretli) ile kovanlarını Çoğaltılamıyor hazır. Dönme tamamlandıktan sonra yeterli alınmasını sağlamak için tekrarlanan koloni başına en az 500 belirgin silaj ile reversiyonunu başlamak değil emin olun. <ol><li> Dönüşü sonrası test grupları güvenli bir kimlik için orijinal kovanında tüm silaj nüfus reversiyon öncesinde kapalı işaretlendiğini önemlidir. Aşağıdaki prosedür, bir örnek için açıklanmaktadır. </li><li> Reversiyon önce bir gün, silaj-türetilen kovanı için bir ek kovan kutusu (adım 1.1) hazırlamak. Donör kovandan iki kız ve iki kuluçka tarak bulun. Deneysel koloniler transferden önce bu taraklar Tüm yetişkin arıları uzak fırça. Bir kafesli kraliçe (adım 1.3) ve bir kuluçka tarak orijinal kovan kutusuna kraliçe ve kuluçka tarak yerini alacak. Kraliçe ve damızlık tarak diğer dizi yeni kovan kutusu için ertesi gün kullanılacaktır. Hem özgün ve yeni kovan emin olmak için tavsiye edilir yeni yavru taraklar ve yabancı kraliçelerin Benzer tahsisi ayrılmış yem ve hemşires eşit deneyimi kovan yardımlar (&quot;kovanı koku&quot;) değişmiş olacaktır. </li></ol></li><li> Reversion: Sabah, hemen reversion önce, toplayıcı-türetilmiş bir kısmını alacak yeni kutusuna kafesli kraliçe ve kuluçka tarak ekleyin. Zirve toplayıcı zaman başlayana kadar bekleyin. Sonra en az 100 m uzakta orijinal konumundan işaretlenmiş silaj ve hemşire arılar ile orijinal koloni taşıyın. <ol><li> Özgün konumda, damızlık ve sadece kraliçe ile toplayıcı-türetilmiş kovan için yeni bir kutu kurmak. </li><li> Silaj disloke orijinal kovan kutusunu bırakın ve özgün konumlarına geri başkanlık edecek. Silaj yuva arılar toplayıcı nüfusun ayrılmasını tamamlamak için bir sonraki ulaşmak için 2 saat boyunca özgün konumuna geri dönmek için izin verir. </li><li> Ardından, ayrılık sona orijinali kapatmak, şimdi kovanı &quot;hemşire-türetilmiş&quot;, ve en az 3 km uzaklıkta bir arılık aktarmak. </li></ol></li><li> Başarılı bir sosyal görev için kovan bakım ve izlemeters: Sağlıklı, açık damızlık düzenli deneysel kovanlarını kontrol edin. <ol><li> Koloni manipülasyonu sonrası ilk günlerinde potansiyel patojen yükünü azaltmak için gözetimsiz ve ölü yavru değiştirin. </li><li> Dönme deney (Şekil 2) tamamlandığında taraklar değiştirilmesi veya zaman yine bu tanıtmadan önce yavru peteklerin fotoğraf çekmek, ve, toplayıcı-türetilmiş kovanı içinde başarılı tersine doğrulamak için. Önceden değişkenliklidir yavrularıyla ve açık, canlı damızlık Alanları toplayıcı-türetilmiş koloniler hemşirelik faaliyet güvenilir göstergeleridir. </li></ol></li><li> Örnekleme: Sosyal ters eşlik fizyolojik etkileri 3-8 gün silaj ve hemşireler sonra tespit edilebilir ayrıldı. <ol><li> Biz ters başlatılan 8 gün sonra tüm test grupları, yani geri döndü işçi ve devam silaj (toplayıcı-türetilmiş kovan), hem de sürekli hemşire ve yeni işe silaj (hemşire-türetilmiş kovan) örnekleme öneriyoruz. </li><li> ColAdım 1.5 &#39;de tarif edildiği gibi lect örnekleri. </li></ol></li></ol> 3. Lipofusin Nicelik ile İşçi-tipi özel Hücresel Yaşlılık Desenler analiz Lipofusin Hücresel yaşlanma evrensel biyomarkerdir. Içsel bir birikim ürünü olarak, lipofusin spesifik otofloresan (emisyon max = 530-650 nm) tespiti 18 için kullanılabilir. <ol><li> Diseksiyon ve sabitleme: hareketsiz kadar buz üzerinde soğutun arılar, kaldırmak ve istenilen doku örneği teşrih. <ol><li> 4 ° C&#39;de gece boyunca inkübasyon için, sabitleyici içerisine (pH 7.2 fosfat tamponlu tuzlu su, PBS içinde% 4 paraformaldehid) aktarın </li><li> PBS içinde numuneleri 3 kez yıkayın. </li></ol></li><li> Doku işleme ve montaj: titreşimli bir bıçak mikrotom örneğin Leica VT 1000&#39;ler (Leica Biosystems, Nussloch, Almanya) kullanılarak, örneğin, en fazla 40 um &#39;den kalınlıkta bölümlere doku örnekleri kesin. <ol><li&gt; Temizleme için,% 30 gliserol (PBS) içinde bir gece boyunca inkübe doku bölümleri ve% 50 gliserol (PBS) içinde bir 2 hr. </li><li> % 50 gliserol (PBS) içinde mikroskopik slaytlar üzerine bölümlerini monte edin. Uzun süreli depolama mühür kapağı oje ile kayıyor. </li></ol></li><li> Görüntü edinimi: Lipofusin algılamak için, λ = 514, 561nm veya uyarma için benzer lazer çizgiler sağlayan bir lazer tarama konfokal mikroskop kullanılarak önermek ve dedektör bant genişliği 570-650 nm&#39;ye ayarlanmış. <ol><li> Lipofusin daha iyi tanımlanması için, ikinci bir kanal içerir ve kısa dalga boyu spektrumları bir eşzamanlı tarama yapmak (uyarım = 405 nm, emisyon = 410-450 nm). Uzun dalga boyu kanal nedeniyle autofluorescent trakea ve diğer non-taneli yapılara, granül Lipofusin hem de ortaya, ama aynı zamanda belirsiz &quot;arka plan&quot; olacak. Ikinci, daha kısa dalga boyu kanal sadece spesifik otoflüoresanı ortaya, ama değil lipofusin olacaktır. Bu durumda, kimlik lipofusin tesislerinin olabilir,<html> sadece bir tanesi lipofusin özel floresan ile granüller ortaya ile, her iki kanal sinyalleri karşılaştırarak tated. </li><li> Yüksek çözünürlüklü görüntülerin elde 40X büyütme veya daha yüksek, ve 1.25 veya daha yüksek, tercihen bir sayısal açıklığa sahip bir objektif kullanın. Tarama görüntü yaklaşık 100 x 100 x 10 mm boyutlarında 3 ile yığınlar. Her birey ve doku örneği, birden çok görüntü yığınlarının tarafından temsil edilmelidir. </li><li> Teknik varyasyonu neden içi bireysel ve bireyler arası farklılıkları azaltmak için, her zaman lazer güç ve dedektör hassasiyeti sabit tutmak. </li><li> Gün için günlük teknik varyasyonlar tarafından yanlılığı azaltmak için çeşitli tarama oturumları her tüm test grupları eşit örnek numaraları tarayın. </li></ol></li><li> Görüntü işleme: mikroskobik görüntü yığınlarının gelişmiş işleme izin modülleri ile yazılım paketleri kullanın, örneğin ImageJ (Sağlık, Bethesda, Maryland, ABD ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri,gej.nih.gov / ij / &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; http://imagej.nih.gov/ij/). <ol><li> 3D görüntü yığınlarının her biri için en fazla 2 boyutlu çıkıntı oluşturur. </li><li> Yüksek frekans gürültüyü azaltmak için, ve lipofusin granül boyutları ile yapıları korumak için bir miktar çekirdek büyüklüğüne sahip bir Gauss filtre uygulama. </li><li> Lipofusin kimlik (adım 3.2) kolaylaştırmak için her iki renk kanallarını birleştirme. </li></ol></li><li> Görüntü analizleri: sayısallaştırma adımları gerçekleştirmeden denek grubu kimliğini test kör olacak emin olun. <ol><li> Tüm görüntüler için, ilk olarak, ilgili yapıları kapsar ve diğer görüntüleri ROI&#39;ler benzer boyutlara sahip çıkar (ROI) bir bölge seçin. </li><li> Sonra her ROI temsil lipofusin granüllerinin istediğiniz numarayı seçin. Bir ROI içinde lipofusin granülleri seçerken, aşağıdaki kuralların uygulanması öznel önyargı azaltacaktır. <ol><li> İlk Granu seçmek için tutarlı bir konum seçinle. Bu durum, örneğin, bir ROI en sol kenar ve kenarına en yakın olan granül her zaman ilk seçim olacaktır olabilir. </li><li> Birbiri ardına, granüller önceki seçime (sonraki komşu) en yakın olduğu seçilir. </li><li> Sonraki komşusu seçerken, sadece bir önceki seçimden doğru arama, örneğin, sadece bir yöne doğru hareket ettirin. Bu kural seçim yoğun dolu granüller arada kümeleri hakimdir önler. </li><li> Seçme işlemi tamamlandığında, söz konusu granül alan ana hatlarını ve ölçülerek, her lipofusin parçacık boyutunu değerlendirmek. Farklı test grupları bireyleri karşılaştırmak uygun istatistiksel testler kullanın. </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Munch, D., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+curious+case+of+aging+plasticity+in+honey+bees.">The curious case of aging plasticity in honey bees.</a> FEBS Lett. 584, 2496-2503 (2010).</li><li>Buffenstein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Negligible+senescence+in+the+longest+living+rodent,+the+naked+mole-rat:+insights+from+a+successfully+aging+species.">Negligible senescence in the longest living rodent, the naked mole-rat: insights from a successfully aging species.</a> J Comp Physiol B. 178, 439-445 (2008).</li><li>Parker, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+are+social+insects+telling+us+about+aging?.">What are social insects telling us about aging?.</a> Myrmecological News. 13, 103-110 (2010).</li><li>Seeley, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Wisdom of the Hive. , (1995).</li><li>Amdam, G. V., Omholt, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulatory+anatomy+of+honeybee+lifespan.">The regulatory anatomy of honeybee lifespan.</a> J Theor Biol. 216, 209-228 (2002).</li><li>Amdam, G. V., Norberg, K., Hagen, A., Omholt, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+exploitation+of+vitellogenin.">Social exploitation of vitellogenin.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 1799-1802 (2003).</li><li>Guidugli, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitellogenin+regulates+hormonal+dynamics+in+the+worker+caste+of+a+eusocial+insect.">Vitellogenin regulates hormonal dynamics in the worker caste of a eusocial insect.</a> FEBS Lett. 579, 4961-4965 (2005).</li><li>Amdam, G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+reversal+of+immunosenescence+in+honey+bee+workers.">Social reversal of immunosenescence in honey bee workers.</a> Exp Gerontol. 40, 939-947 (2005).</li><li>Seehuus, S. C., Norberg, K., Gimsa, U., Krekling, T., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproductive+protein+protects+functionally+sterile+honey+bee+workers+from+oxidative+stress.">Reproductive protein protects functionally sterile honey bee workers from oxidative stress.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 962-967 (2006).</li><li>Scheiner, R., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+tactile+learning+is+related+to+social+role+in+honeybees.">Impaired tactile learning is related to social role in honeybees.</a> J Exp Biol. 212, 994-1002 (2009).</li><li>Behrends, A., Scheiner, R., Baker, N., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+aging+is+linked+to+social+role+in+honey+bees+(Apis+mellifera.">Cognitive aging is linked to social role in honey bees (Apis mellifera.</a> Exp Gerontol. 42, 1146-1153 (2007).</li><li>M&#252;nch, D., Baker, N., Kreibich, C. D., Braten, A. T., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+the+laboratory+and+during+free-flight:+old+honey+bees+reveal+learning+and+extinction+deficits+that+mirror+mammalian+functional+decline.">In the laboratory and during free-flight: old honey bees reveal learning and extinction deficits that mirror mammalian functional decline.</a> PLoS One. 5, e13504 (2010).</li><li>Vance, J. T., Williams, J. B., Elekonich, M. M., Roberts, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+age+and+behavioral+development+on+honey+bee+(Apis+mellifera)+flight+performance.">The effects of age and behavioral development on honey bee (Apis mellifera) flight performance.</a> J Exp Biol. 212, 2604-2611 (2009).</li><li>Dukas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mortality+rates+of+honey+bees+in+the+wild.">Mortality rates of honey bees in the wild.</a> Insect Soc. 55, (2008).</li><li>Behrends, A., Scheiner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+at+old+age:+a+study+on+winter+bees.">Learning at old age: a study on winter bees.</a> Front Behav Neurosci. 4, 15 (2010).</li><li>Huang, Z. -. Y., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Honeybee+colony+integration:+Worker-worker+interactions+mediate+hormonally+regulated+plasticity+in+division+of+labor.">Honeybee colony integration: Worker-worker interactions mediate hormonally regulated plasticity in division of labor.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 89, 11726-11729 (1992).</li><li>Huang, Z. Y., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+honey+bee+division+of+labor+by+colony+age+demography.">Regulation of honey bee division of labor by colony age demography.</a> Behavioral Ecology and Sociobiology. 39, 147-158 (1996).</li><li>Double, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comparative+biology+of+neuromelanin+and+lipofuscin+in+the+human+brain.">The comparative biology of neuromelanin and lipofuscin in the human brain.</a> Cell Mol Life Sci. 65, 1669-1682 (2008).</li><li>Fonseca, D. B., Brancato, C. L., Prior, A. E., Shelton, P. M., Sheehy, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Death+rates+reflect+accumulating+brain+damage+in+arthropods.">Death rates reflect accumulating brain damage in arthropods.</a> Proc Biol Sci. 272, 1941-1947 (2005).</li><li>Baker, N., Wolschin, F., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+learning+deficits+can+be+reversible+in+honeybees+Apis+mellifera.">Age-related learning deficits can be reversible in honeybees Apis mellifera.</a> Exp Gerontol. 47, 764-772 (2012).</li><li>Capaldi, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+orientation+flight+in+the+honeybee+revealed+by+harmonic+radar.">Ontogeny of orientation flight in the honeybee revealed by harmonic radar.</a> Nature. 403, 537-540 (2000).</li><li>Marco Antonio, D. S., Guidugli-Lazzarini, K. R., do Nascimento, A. M., Simoes, Z. L., Hartfelder, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi-mediated+silencing+of+vitellogenin+gene+function+turns+honeybee+(Apis+mellifera)+workers+into+extremely+precocious+foragers.">RNAi-mediated silencing of vitellogenin gene function turns honeybee (Apis mellifera) workers into extremely precocious foragers.</a> Naturwissenschaften. 95, 953-961 (2008).</li><li>Whitfield, C. W., Cziko, A. -. M., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiles+in+the+brain+predict+behavior+in+individual+honey+bees.">Gene expression profiles in the brain predict behavior in individual honey bees.</a> Science. 302, 296-299 (2003).</li><li>Schmidt, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attraction+of+reproductive+honey+bee+swarms+to+artificial+nests+by+Nasonov+pheromone.">Attraction of reproductive honey bee swarms to artificial nests by Nasonov pheromone.</a> Journal of Chemical Ecology. 20, 1053-1056 (1994).</li><li>De Moraes, R., Bowen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modes+of+cell+death+in+the+hypopharyngeal+gland+of+the+honey+bee+(Apis+mellifera+L).">Modes of cell death in the hypopharyngeal gland of the honey bee (Apis mellifera L).</a> Cell Biol Internat. 24, 737-743 (2000).</li><li>Sheehy, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+flow-cytometric+method+for+quantification+of+neurolipofuscin+and+comparison+with+existing+histological+and+biochemical+approaches.">A flow-cytometric method for quantification of neurolipofuscin and comparison with existing histological and biochemical approaches.</a> Arch Gerontol Geriatr. 34, 233-248 (2002).</li><li>Hsieh, Y. S., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Honeybee+trophocytes+and+fat+cells+as+target+cells+for+cellular+senescence+studies.">Honeybee trophocytes and fat cells as target cells for cellular senescence studies.</a> Exp Gerontol. 46, 233-240 (2011).</li><li>Wolschin, F., Munch, D., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+proteomic+analyses+reveal+regional+brain+differences+during+honeybee+aging.">Structural and proteomic analyses reveal regional brain differences during honeybee aging.</a> J Exp Biol. 212, 4027-4032 (2009).</li></ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Biz burada daha önce açıklanan 8,16,17,19,20 yaklaşımları benimsemek, bal arıları ve esnek yaşlanmayı okuyan kolaylaştıracak tek bir iş akışına entegre. Amacımız, ilgili örnek materyal elde etmek için ayarlanmış bir standart araç ile bu alana acemi bilim adamları sağlamak ve farklı araştırma ekipleri arasında deneysel tekrarlanabilirlik geliştirmektir. Bizim prosedürleri basitleştirilmiş ve (örneğin 8 karşılaştırmak) önceki açıklamalarında olduğu gibi öz...

Çok sosyal hayvanlar kompleks koloni yapıları üreme kastın etkileşimi yoluyla korunur ve farklı sosyal görev davranışları tipik olmayan-yenidenüretim işçilerin bir yardımcı kast. Farklı işçiler, belirli fizyolojik adaptasyonlar farklı sib bakım davranışlarını sağlamak ve aynı zamanda aşırı ömrü farklılıklara bağlıdır. Bal arıları ve körfareler toplumsallık hızlandırılmış, ihmal veya 1-3 yaşlanma ters kalıpları ile nasıl bağlantılı olduğunu incelemek için en gelişmiş hayvan modellerini temsil eder. Bal arısı kolonilerinde, bir tek yumurtlayan kraliçe gıda için damızlık, yem eğilimindedir binlerce işçi tarafından destekli, ve, termoregülasyon veya hijyenik davranışları 4 koruma meşgul. Bu işçiler arasında, son derece kısa ömürlü yem, ara ile hemşire arılar, ve uzun ömürlü kış (diutinus) arı vardır. Bireyler, ancak, belirli bir kalıcı wo bağlı değildirrker-tipi, ancak esnek bir davranış ontogenezini görüntüler: Onlar (&quot;temporal kastlara&quot;) bir sosyal görev davranışı değiştirmez. Toy arılar sonunda dışında toplayıcı değişebilir ki, yavru eğilimi hemşire arılar için değiştirebilirsiniz. Ancak, toy yuva arılar da uzun ömürlü kış arıları dönüşebilmektedir ve kısa ömürlü yem bile genellikle uzun ömürlü hemşire içine dönebilirsiniz. Aşırı (kış arılar) ve orta (hemşire arılar) ömrü ile İşçi bol kaynakları ile gıda üretim ve depolama organları iyi gelişmiştir - (1,5 gözden) kısa ömürlü aramayanlara aksine. Ancak, bireysel ömrü düzenleme bireyin kaynak dengesi basit değişiklikler ötesinde böyle jöle üretimi 6, hormonal kontrol 7, bağışıklık gibi olmayan çoğaltılması işçi kast çeşitli adapte işlevleri vardır, bir yumurta sarısı protein, üzerinde araştırma tarafından önerilmektedir 8 ve anti-oksidan savunma 9. F Desenlerkoku için kurulmuş, ve diğer beyin veya motor fonksiyonların 10-13 gibi Fonk düşüş (ihtiyarlık) işçiler arasında ayna ömrü eşitsizlikler,. Uzun ömürlü kış arı 15 saptanabilir bir düşüş (ihmal edilebilir ihtiyarlama) eksikliği karşı Spesifik olarak, toplayıcı sadece iki hafta sonra öğrenme fonksiyonunda önemli bir düşüş, toplayıcılar 14 benzer bir ölüm ilerlemesini eşleşir. Biz izleme ve yaşlanma-tip geçişler 8,16,17 işlemek için izin kurulan deneysel paradigmalar uyarlanmış esnek yaşlanmanın moleküler parmak izlerini tespit etmek. Kronolojik yaş ve yaşlanma üzerinde işçi-tipi belirli sosyal davranışların etkileri ayrılabilir hangi örnekleri edinme 1. ayrıntıları deneme. Deney 2 yavaşladı yaşlanma dinamikleri ile hemşire arılar içine hızlandırılmış ile arayıcıların tersine anlatılmaktadır. Deney 3 Anatomica tarafından hücresel yaşlanma etkilerini incelenmesi için bir yaklaşım sağlarHücresel yaşlanma (lipofusin) 18 için kurulmuş bir biyolojik belirteç l ölçümü.

<table><tbody><tr><td>Apifonda</td><td>S&amp;#252;dzucker AG, Mannheim/Ochsenfurt, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>paraformaldehyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>phosphate-buffered saline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Merck</td><td>1.04094.1000</td><td></td></tr></tbody></table>

obtaining specimens with slowed, accelerated and reversed aging in the honey bee model

Çok sosyal hayvanlar Dernekleri yakından ilgili bireyler arasında büyük farklılıklar ömrü bulunmaktadır. Sosyal böcekler arasında, bal arısı ömrü ve yaşlanmanın plastisite sosyal faktörler ile açıklanmaktadır nasıl çalışma için iyi kurulmuş bir modeldir. Bal arılarının işçi kast nektar ve polen toplamak damızlık eğilimi hemşire arılar, arılar ve silaj içerir. Önceki iş beyin fonksiyonları ve uçuş performans hemşireler daha silaj daha hızlı senesce göstermiştir. Silaj geri hemşirelik görevleri dönmek Ancak, beyin fonksiyonları, kurtarabilirsiniz. Hızlandırılmış yaşlanma ve ters fonksiyonel bu gibi desenler protein bolca değişikler ve bağışıklık fonksiyonu, değiştirilmiş metabolik kaynak seviyeleri ile bağlantılıdır. , Vitelogenin, hormonal kontrol ve hücresel savunma uyarlanmış işlevleri olan bir yumurta sarısı protein, işçi farklı yaşlanma dinamiklerini kontrol eden bir ağda önemli bir düzenleyici eleman olarak hizmet edebilir. Burada hemşire ve silaj ortaya çıkması izlenir, ve daha uzun ömürlü hemşire içine genellikle kısa ömürlü silaj ters dahil olmak üzere, nasıl manipüle edilebileceğini açıklar. Bizim temsilcisi sonuçları benzer kronolojik yaş ile bireylerin deneysel koşullar altında silaj ve hemşire arıların içine ayırt nasıl gösterebilir. Biz geri hemşirelerle silaj davranış tersine valide nasıl örneklemektedir. Son olarak, burada hücresel yaşlanma lipofusin birikimi, yaşlanma evrensel bir biyomarker ölçülerek değerlendirilebilir kadar farklı gösterir. Sosyal etkileri bağlantı olabilir mekanizmaları eğitim ve plastisite yaşlanma için, bu protokol, ilgili örnek malzeme elde etmek ve gelecekteki çalışmalar arasında veri karşılaştırılabilirliği artırmak için ayarlanmış standart bir araç sağlar.

Protokol bölüm 1 ve deney grupları hızlandırılmış niteliklerini incelemek için elde edilebilir nasıl 2 ayrıntı, yavaşladı ve tek bir yaş grubu ile koloniler yaşlanma tersine. (Şekil 1, bölüm 1 karşılaştırma) 6 koloni için silaj sayıları (&quot;giriş sayar&quot;) değerlendirilir, normal ontogenezini eşlik işçi-tipi farklılaşmasını izlemek için. Grafikler bireylerin daha 10 gün eski önce silaj devlete hemşire gelen önemli değişiklik, tipik olarak gözlenen olmadı...

Watch this Scientific Journal Video about Obtaining Specimens with Slowed, Accelerated and Reversed Aging in the Honey Bee Model at JoVE.com

Obtaining Specimens with Slowed, Accelerated and Reversed Aging in the Honey Bee Model

Bal arısı işçiler, yaşlanma sosyal davranışları ziyade kronolojik yaşına bağlıdır. Burada çok farklı yaşlanma desenleri ile işçi-tipleri elde edilmiş ve hücresel yaşlanma için analiz edilebilir göstermek.

, Yavaşlatıldı Hızlandırılmış ve Ters Honey Bee Model Yaşlanma ile Örneklerin Alınması

Societies of highly social animals feature vast lifespan differences between closely related individuals. Among social insects, the honey bee is the best ...

obtaining-specimens-with-slowed-accelerated-reversed-aging-honey-bee

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

11.2K Görüntüleme.  Norwegian University of Life Sciences.  Bal arısı işçiler, yaşlanma sosyal davranışları ziyade kronolojik yaşına bağlıdır. Burada çok farklı yaşlanma desenleri ile işçi-tipleri elde edilmiş ve hücresel yaşlanma için analiz edilebilir göstermek. 

Video: Obtaining Specimens with Slowed, Accelerated and Reversed Aging in the Honey Bee Model

Behavioural Pharmacology in Classical Conditioning of the Proboscis Extension Response in Honeybees (Apis mellifera)

Honeybees (Apis mellifera) are well known for their communication and orientation skills and for their impressive learning capability1,2. Because the survival of a honeybee colony depends on the exploitation of food sources, forager bees learn and memorize variable flower sites as well as their profitability. Forager bees can be easily trained in natural settings where they forage at a feeding site and learn the related signals such as odor or color. Appetitive associative learning can also be studied under controlled conditions in the laboratory by conditioning the proboscis extension response (PER) of individually harnessed honeybees3,4. This learning paradigm enables the study of the neuronal and molecular mechanisms that underlie learning and memory formation in a simple and highly reliable way5-12. A behavioral pharmacology approach is used to study molecular mechanisms. Drugs are injected systemically to interfere with the function of specific molecules during or after learning and memory formation13-16.
Here we demonstrate how to train harnessed honeybees in PER conditioning and how to apply drugs systemically by injection into the bee flight muscle.

Behavioural Pharmacology in Classical Conditioning of the Proboscis Extension Response in Honeybees Apis mellifera

We demonstrate how to implement a behavioral pharmacology method in an appetitive olfactory conditioning paradigm in honeybees (Apis mellifera) by systemic application of drugs. This method allows investigation of the mechanisms underlying learning and memory formation in a simple and reliable way.

Bal arısı burnumun Extension Tepki Klasik Koşullanma Davranış Farmakoloji ( Apis mellifera)

Honeybees (Apis mellifera) are well known for their communication and orientation skills and for their impressive learning capability1,2. Because the ...

Nörobilim

Evaluating the Effect of Environmental Chemicals on Honey Bee Development from the Individual to Colony Level

The presence of pesticides in the beekeeping environment is one of the most serious problems that impacts the life of a honey bee. Pesticides can be brought back to the beehive after the bees have foraged on flowers that have been sprayed with pesticides. Pesticide contaminated food can be exchanged between workers which then feed larvae and therefore can potentially affect the development of honey bees. Thus, residual pesticides in the environment can become a chronic damaging factor to honey bee populations and gradually lead to colony collapse. In the presented protocol, honey bee feeding methods are described and applied to either an individual honey bee or to a colony. Here, the insect growth regulator (IGR) pyriproxyfen (PPN), which is widely used to control pest insects and is harmful to the development of honey bee larvae and pupae, is used as the pesticide. The presenting procedure can be applied to other potentially harmful chemicals or honeybee pathogens for further studies.

Herein we present a method to feed pesticide contaminated food to both an individual honey bee and a beehive colony. The procedure evaluates the pesticide effect on individual honey bees by in vivo feeding of basic larval diet and also on the natural condition of beehive colony.

Koloni Düzeyde Bireysel olan Bal Arısı Kalkınma Çevre Kimyasalların Etkisinin Değerlendirilmesi

The presence of pesticides in the beekeeping environment is one of the most serious problems that impacts the life of a honey bee. Pesticides can be ...

Çevre

In Vitro Rearing of Solitary Bees: A Tool for Assessing Larval Risk Factors

Although solitary bees provide crucial pollination services for wild and managed crops, this species-rich group has been largely overlooked in pesticide regulation studies. The risk of exposure to fungicide residues is likely to be especially high if the spray occurs on, or near host plants while the bees are collecting pollen to provision their nests. For species of Osmia that consume pollen from a select group of plants (oligolecty), the inability to use pollen from non-host plants can increase their risk factor for fungicide-related toxicity. This manuscript describes protocols used to successfully rear oligolectic mason bees, Osmia ribifloris sensu lato, from egg to prepupal stage within cell culture plates under standardized laboratory conditions. The in vitro-reared bees are subsequently used to investigate the effects of fungicide exposure and pollen source on bee fitness. Based on a 2 &#215; 2 fully crossed factorial design, the experiment examines the main and interactive effects of fungicide exposure and pollen source on larval fitness, quantified by prepupal biomass, larval developmental time, and survivorship. A major advantage of this technique is that using in vitro-reared bees reduces natural background variability and allows the simultaneous manipulation of multiple experimental parameters. The described protocol presents a versatile tool for hypotheses testing involving the suite of factors affecting bee health. For conservation efforts to be met with significant, lasting success, such insights into the complex interplay of physiological and environmental factors driving bee declines will prove to be critical.

In Vitro Rearing of Solitary Bees: A Tool for Assessing Larval Risk Factors

Fungicide sprays on flowering plants may expose solitary bees to high concentrations of pollen-borne fungicide residues. Using laboratory-based experiments involving in vitro-reared bee larvae, this study investigates the interactive effects of consuming fungicide-treated pollen derived from host and non-host plants.

Vitro Yalnız arı yetiştirme: larva Risk faktörleri değerlendirmek için bir araç

Although solitary bees provide crucial pollination services for wild and managed crops, this species-rich group has been largely overlooked in pesticide ...

RNAi-mediated Double Gene Knockdown and Gustatory Perception Measurement in Honey Bees (Apis mellifera)

This video demonstrates novel techniques of RNA interference (RNAi) which downregulate two genes simultaneously in honey bees using double-stranded RNA (dsRNA) injections. It also presents a protocol of proboscis extension response (PER) assay for measuring gustatory perception.	
	RNAi-mediated gene knockdown is an effective technique downregulating target gene expression. This technique is usually used for single gene manipulation, but it has limitations to detect interactions and joint effects between genes. In the first part of this video, we present two strategies to simultaneously knock down two genes (called double gene knockdown). We show both strategies are able to effectively suppress two genes, vitellogenin (vg) and ultraspiracle (usp), which are in a regulatory feedback loop. This double gene knockdown approach can be used to dissect interrelationships between genes and can be readily applied in different insect species.	
	The second part of this video is a demonstration of proboscis extension response (PER) assay in honey bees after the treatment of double gene knockdown. The PER assay is a standard test for measuring gustatory perception in honey bees, which is a key predictor for how fast a honey bee's behavioral maturation is. Greater gustatory perception of nest bees indicates increased behavioral development which is often associated with an earlier age at onset of foraging and foraging specialization in pollen. In addition, PER assay can be applied to identify metabolic states of satiation or hunger in honey bees. Finally, PER assay combined with pairing different odor stimuli for conditioning the bees is also widely used for learning and memory studies in honey bees.

RNAi-mediated Double Gene Knockdown and Gustatory Perception Measurement in Honey Bees Apis mellifera

In this protocol, we describe two strategies that simultaneously suppress two genes (double gene knockdown) in honey bees. Then we present how to use the proboscis extension response (PER) assay to study the effect of double gene knockdown on honey bee gustatory perception.

Bal Arısı RNAi-aracılı Çift Gen demonte ve tat Algı Ölçüm (<em&gt; Apis mellifera</em&gt;)

This video demonstrates novel techniques of RNA  interference (RNAi) which downregulate two genes simultaneously in honey bees  using double-stranded RNA ...

A Proboscis Extension Response Protocol for Investigating Behavioral Plasticity in Insects: Application to Basic, Biomedical, and Agricultural Research

Insects modify their responses to stimuli through experience of associating those stimuli with events important for survival (e.g., food, mates, threats). There are several behavioral mechanisms through which an insect learns salient associations and relates them to these events. It is important to understand this behavioral plasticity for programs aimed toward assisting insects that are beneficial for agriculture. This understanding can also be used for discovering solutions to biomedical and agricultural problems created by insects that act as disease vectors and pests. The Proboscis Extension Response (PER) conditioning protocol was developed for honey bees (Apis mellifera) over 50 years ago to study how they perceive and learn about floral odors, which signal the nectar and pollen resources a colony needs for survival. The PER procedure provides a robust and easy-to-employ framework for studying several different ecologically relevant mechanisms of behavioral plasticity. It is easily adaptable for use with several other insect species and other behavioral reflexes. These protocols can be readily employed in conjunction with various means for monitoring neural activity in the CNS via electrophysiology or bioimaging, or for manipulating targeted neuromodulatory pathways. It is a robust assay for rapidly detecting sub-lethal effects on behavior caused by environmental stressors, toxins or pesticides.
We show how the PER protocol is straightforward to implement using two procedures. One is suitable as a laboratory exercise for students or for quick assays of the effect of an experimental treatment. The other provides more thorough control of variables, which is important for studies of behavioral conditioning. We show how several measures for the behavioral response ranging from binary yes/no to more continuous variable like latency and duration of proboscis extension can be used to test hypotheses. And, we discuss some pitfalls that researchers commonly encounter when they use the procedure for the first time.

The Proboscis Extension Response (PER) conditioning protocol, developed for the honey bee (Apis mellifera), provides an ecologically-relevant and easily quantifiable means for studying several different mechanisms of learning in many insect species.

Bir burnumun Extension Tepki Böcekler Davranış Plastisitesi incelenmesi için protokol: Basic, Biyomedikal Uygulama ve Tarımsal Araştırma

Insects modify their responses to stimuli through experience of associating those stimuli with events important for survival (e.g., food, mates, threats). ...

Preparation of Single-cohort Colonies and Hormone Treatment of Worker Honeybees to Analyze Physiology Associated with Role and/or Endocrine System

Honeybee workers are engaged in various tasks related to maintaining colony activity. The tasks of the workers change according to their age (age-related division of labor). Young workers are engaged in nursing the brood (nurse bees), while older workers are engaged in foraging for nectar and pollen (foragers). The physiology of the workers changes in association with this role shift. For example, the main function of the hypopharyngeal glands (HPGs) changes from the secretion of major royal jelly proteins (MRJPs) to the secretion of carbohydrate-metabolizing enzymes. Because worker tasks change as the workers age in typical colonies, it is difficult to discriminate the physiological changes that occur with aging from those that occur with the role shift. To study the physiological changes in worker tissues, including the HPGs, in association with the role shift, it would be useful to manipulate the honeybee colony population by preparing single-cohort colonies in which workers of almost the same age perform different tasks. Here we describe a detailed protocol for preparing single-cohort colonies for this analysis. Six to eight days after single-cohort colony preparation, precocious foragers that perform foraging tasks earlier than usual appear in the colony. Representative results indicated role-associated changes in HPG gene expression, suggesting role-associated HPG function. In addition to manipulating the colony population, analysis of the endocrine system is important for investigating role-associated physiology. Here, we also describe a detailed protocol for treating workers with 20-hydroxyecdysone (20E), an active form of ecdysone, and methoprene, a juvenile hormone analogue. The survival rate of treated bees was sufficient to examine gene expression in the HPGs. Gene expression changes were observed in response to 20E- and/or methoprene-treatment, suggesting that hormone treatments induce physiological changes of the HPGs. The protocol for hormone treatment described here is appropriate for examining hormonal effects on worker physiology.

Here we describe our detailed protocol for the preparation of single-cohort honeybee colonies&#160;&#8211; a useful tool for analyzing the role-associated worker physiology. We also describe detailed protocols for treating workers with juvenile hormone and ecdysone to evaluate the involvement of these hormones in the regulation of worker behavior and/or physiology.

Tek kohort Kolonileri ve İşçi arıların Hormon Tedavisi hazırlanması Rolü ve / veya Endokrin Sistemi Fizyolojisi İlişkili Analiz

Honeybee workers are engaged in various tasks related to maintaining colony activity. The tasks of the workers change according to their age (age-related ...

Monitoring Colony-level Effects of Sublethal Pesticide Exposure on Honey Bees

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment methods. Here we describe methods to measure the quantities of adult bees, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, by photographing frames, and by installing hives on scales and with internal sensors. Data from these periodic evaluations are then combined with running average and daily detrended data on hive weight and internal hive temperature. The resulting datasets have been used to detect colony-level effects of imidacloprid applied in a sugar syrup as low as 5 parts per billion. The methods are objective, require little training, and provide permanent records in the form of sensor output and photographs.

Sublethal doses of pesticides may affect colonies in ways that are difficult to detect using only periodic or visual methods. Methods to measure total adult bee mass, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, photographing frames, and installing sensors, are provided. Data analysis is also addressed.

Bal arıları üzerinde Sublethal pestisit pozlama koloni düzeyi etkilerinin izlenmesi

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment ...

Biyoloji

Preparation of Virus-Enriched Inoculum for Oral Infection of Honey Bees (Apis mellifera)

Honey bees are of great ecological and agricultural importance around the world but are also subject to a variety of pressures that negatively affect bee health, including exposure to viral pathogens. Such viruses can cause a wide variety of devastating effects and can often be challenging to study due to multiple factors that make it difficult to separate the effects of experimental treatments from preexisting background infection. Here we present a method to mass produce large quantities of virus particles along with a high throughput bioassay to test viral infection and effects. Necessitated by the current lack of a continuous, virus-free honey bee cell line, viral particles are amplified in vivo using honey bee pupae, which are extracted from the hive in large volumes using minimally stressful methodology. These virus particles can then be used in honey bee cage bioassays to test inocula viability, as well as various other virus infection dynamics, including interactions with nutrition, pesticides, and other pathogens. A major advantage of using such particles is that it greatly reduces the chances of introducing unknown variables in subsequent experimentation when compared to current alternatives, such as infection via infected bee hemolymph or homogenate, though care should still be taken when sourcing the bees, to minimize background virus contamination. The cage assays are not a substitute for large-scale, field-realistic experiments testing virus infection effects at a colony level, but instead function as a method to establish baseline viral responses that, in combination with the semi-pure virus particles, can serve as important tools to examine various dimensions of honey bee-virus physiological interactions.

Preparation of Virus-Enriched Inoculum for Oral Infection of Honey Bees Apis mellifera

Here we describe two protocols: first to propagate, extract, purify, and quantify large quantities of honey bee non-enveloped virus particles, including a method for removing honey bee pupae and second to test the effects of viral infection using a highly repeatable, high-throughput cage bioassay.

Bal Arılarının Oral Enfeksiyonu için Virüs Bakımından Zenginleştirilmiş İnokulum Hazırlanması (Apis mellifera)

Honey bees are of great ecological and agricultural importance around the world but are also subject to a variety of pressures that negatively affect bee ...

Assessing Agrochemical Risk to Mated Honey Bee Queens

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not accurately capture the effects of agrochemical exposure on honey bee queens. As the sole producer of fertilized eggs inside a honeybee colony, the queen is arguably the most important single member of a functioning colony unit. Therefore, understanding how agrochemicals affect queen health and productivity should be considered a critical aspect of pesticide risk assessment. Here, an adapted method is presented to expose honey bee queens and worker queen attendants to agrochemical stressors administered through a worker diet, followed by tracking egg production in the laboratory and assessing first instar eclosion using a specialized cage, referred to as a Queen Monitoring Cage. To illustrate the method&#39;s intended use, results of an experiment in which worker queen attendants were fed diet containing sublethal doses of imidacloprid and effects on queens were monitored are described.

This protocol was developed to enhance the understanding of how agrochemicals affect honey bee (Apis mellifera) reproduction by establishing methods to expose honey bee queens and their worker caretakers to agrochemicals in a controlled, laboratory setting and carefully monitoring their relevant responses.

ÇiftLeşme Bal Arısı Kraliçeleri için Tarımsal Kimyasal Riskin Değerlendirilmesi

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not ...

Histology Basics and Cell Death Detection in Honeybee Tissue

Honeybees (Apis mellifera L.) inside the hive (nurse workers and other hive bees) and outside the hive (foragers) are exposed to climate and weather changes, various pesticides, pathogens, and malnutrition, mainly entering through the mouth and primarily affecting the digestive tracts of adult bees. To understand and prevent the effects of such external and internal stressors on honeybees, one useful research method is the immunohistochemical method. A basic protocol is described to prepare the midgut (ventriculus) and hypopharyngeal glands (HPGs) of adult bees for histological analysis. A detailed methodology is described to assess the level of cell damage and distinguish necrosis from programmed cell death (apoptosis) as a natural process of tissue regeneration. The results of adult honeybee treatment with oxalic acid and pesticides (insecticide and acaricide) and the determination of cell death in the ventriculus and HPGs are presented. The pros and cons of the methodology are also discussed.

Immunohistochemical methods are useful in honeybee research to detect and assess the level of apoptosis and necrosis in the midgut and hypopharyngeal glands of adult bees.

Bal Arısı Dokusunda Histolojinin Temelleri ve Hücre Ölümü Tespiti

Honeybees (Apis mellifera L.) inside the hive (nurse workers and other hive bees) and outside the hive (foragers) are exposed to climate and weather ...