Biz larva tarama verilerinin üretilmesi için Astha Maltare teşekkür etmek istiyorum. Biz el yazması üzerine yaptığı yorum vermek için Dr Nicholas Lanson Jr teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma Johns Hopkins ALS Robert Packard Merkezi (UBP) ve Amyotrofik Lateral Skleroz Derneği (UBP) tarafından desteklenen ve Ruh Sağlığı Ulusal Enstitüsü (CDN) den R01MH083689.

A. Larva sürünüyor Testi 1. Larva Koleksiyonu <ol><li> Sinekler (10-15 erkek + 10-15 kadın) bir 8 ons şişe ayarlayın. </li><li> Sinekler sonra 24 saat boyunca yumurta, sineklerin net şişe inşa edelim. (Yeni bir şişeye aktarın ve yetişkinlerin uygun şekilde tekrarlayınız). </li><li> 3-4 gün inkübe şişe, ya da üçüncü evre larvaları görünür olana kadar. </li><li> Larvaları ile şişeye% 20 sakkaroz, 100 ml ve 20 dakika bekletin - 50 ekleyin. Larva başına yüzer. </li><li> Uçlu bir 25 ml serolojik pipet kullanarak toplayın larva kesti ve bir mesh sepet içine yer. </li><li> Iki kez deiyonize H 2 O ile örgü sepet içinde larva yıkayın Larva artık deneyler için hazır. </li></ol> 2. Ilaç ile larva tedavisi için <ol><li> Bir çözüm% 5 sakkaroz + ilaç içeren 5 ml&#39;lik behere larva İstediğiniz numaraya taşımak için bir fırça kullanın. </li><li> En azından 15 dakika süreyle larvaları besleme sağlar.</li><li> Bir örgü sepet içine ilaç ile tedavi edilen larva dökün ve durulayın. Onlar artık kullanıma hazır. </li></ol> 3. Lokomotor Assay (toplam mesafe ölçme seyahat veya vücut duvarı kasılmaları) <ol><li> Bir tek tek larva taşımak için bir fırça kullanın: <ol><li> 0,2 cm 2 ızgara ile milimetrik kağıt üzerinde% 2 agaroz (daha önce dökülür ve sertleşmesine izin) içeren 15 cm Petri. <ol><li> 1 dakika içinde geçti çizgileri sayısını sayın. </li></ol></li><li> Seyreltilmiş maya hamur çözeltisi içeren bir cam diseksiyon çanağı iyi. <ol><li> Bir diseksiyon mikroskobu altında gözlemlerken bir dakika içinde peristaltizm kasılmalar (posterior hareketi = 1 daralma tam anterior) sayın. </li></ol></li></ol></li><li> Larva istenilen sayıda sayılmış kadar tekrarlayın. </li></ol> B. Hızlı negatif geotaxis (HALKA) Protokol iteratif Bu test aslında kaldırdığımızda edildiGargano ark 5 tarafından tarif edildiği. <ol><li> Standart bir flakon içeren yiyecekler (veya gıda + ilaç) içine ışık CO 2 anesthetization ve yer altında yeni ortaya çıkan yetişkin erkek sinekleri toplayın. </li><li> Oda sıcaklığında sinekler Koru (tezgah üstünde. ~ 22 ° C) CO 2 kurtarma (ve kararlı durum ilaç düzeyleri birikimi uygunsa) izin vermek için 2-3 gün. </li><li> Hazırlanan polistiren şişelere anestezi olmadan 25 sinekler hakkında aktarın. </li><li> HALKA aparatı (Şekil 1) içine sinekler şişeleri birleştirin. </li><li> Sinekler 15-20 dakika boyunca rahatsız edilmeden çevre, gelmesini bekleyin. </li><li> Bu süre yerde dijital kamera sırasında ~ cihazları önünde 1 m (bir platform flakon orta yükseklikte lensin merkezine hizalamak için gerekirse üzerine), odaklanma ve aparat üzerine kamera, zum ve bir zamanlayıcı ayarlamak 3.0 saniye. </li><li> Dikkatle dist için sol elinizle HALKA aygıtının tutun şekilde alamayızurb sinekler ve sağ elinizle zamanlayıcı tutun. </li><li> Keskin musluk şişe altına tüm sinekler yıkmak yeterince zor sağlanması, tezgah yüzeyinin üç kez aparatı aşağı dokunun. </li><li> Aynı zamanda üçüncü kademe tamamlanması ile birlikte, 3 saniyelik geri sayım sayacını başlatmak. </li><li> Üç saniyede bir resim çekin. </li><li> 1 dakika zamanlayıcı sıfırlayın ve başlayın. Bu süre boyunca cihaz üzerindeki kamera ve odak sıfırlamak ve üç saniye sayacı başka bir kanala ayarlayın. </li><li> 1 dakika sonra tekrar 1,7-1,10 adımlar </li><li> 5-6 denemenin toplamı sonra, bir bilgisayara resim yüklemek ve açmak için favori resim görüntüleyici kullanın ve ortalama yüksekliği her flakon için tırmandı puan. </li><li> Tırmandı ortalama yüksekliği karşılaştırırken, farklı grup üzerinde istatistiksel analiz. </li></ol> C. Kur yapma ve çiftleşme Testi <ol><li> Sabah ilk iş, fli net iyi üreten şişeleres kullanılır. </li><li> Gün içerisinde (her 3-4 saat) içinde, yeni ortaya çıkan cinsel naif erkek ve kadın toplamak: <ol><li> Orta şişelerde veya tüpleri tek tek erkeklerde yerleştirin. </li><li> Şişe / tüp başına birlikte 5-6 dişi koyun. </li><li> 5 gün boyunca karanlık 12 saat ışık altında / 25 ° C &#39;de toplanan sinekler kesin. </li><li> Bir çiftleşme tekerleğin odasına bir kadın aktarın. </li><li> Bir çiftleşme tekerleğin odasına bir erkek aktarın. </li><li> Aşağıdaki davranışlardan bir diseksiyon mikroskobu altında çifti gözlemleyin: <ol><li> Oryantasyon (kadın doğru erkek yönlendirir) </li><li> (Erkek kadın yararlanıyor) dokunulduğunda </li><li> Kanat şarkı (erkek genişletir ve bir kanat titreşir) </li><li> (Erkek yalıyor kadın genital organlarının) Licking </li><li> Curling (erkek kendisi altında karnı kıvrılıyor) </li><li> (Kadın monte çalışırken aktivite Curling) birleşme girişimi </li></ol></li></ol></li><li> 1 dikkat0 dakika veya daha başarılı bir birleşme kadar, her davranışın meydana geldiği zaman not (gecikme), kur birleşme kadar davranış (kur endeksi hesaplamak için) yanı sıra, başarılı bir şekilde belirli bir davranışı gerçekleştirmek çiftlerinin numarası yapan toplam süre ( frekans). Vahşi tip çiftlerinin% 100 genellikle 5 dakika içinde çiftleşirler olacaktır. </li><li> Hesaplamak zaman bölerek bir kur endeksine (CI) çiftleşmeye kadar toplam süre bölünmesiyle kur geçirdi. Vahşi tip çiftleri için bu genellikle 0.6-0.8 arasında değişmektedir. </li></ol> D. Örnek Sonuçlar Assay Crawling Normal vahşi tip larva ~ 3 cm / dakika ve sergi ~ bir dakika içinde 40-50 vücut duvarı kasılmaları başıboş dolaşırlar. Biz son zamanlarda larva sürünen, kusur, düşük kullanım ömrü ve değer düşüklüğü 6 tırmanma yetişkin gösterir FUS / TLS ile ilgili Amyotrofik lateral skleroz bir Drosophila modeli geliştirdik. Biz ifadesi o hedefMotor nöronların (OK-371-gal4 sürücü) ve f yabani tip ve FUS / TLS mutant formları bir larva tarama testi yapıldı. Aşağıda görüldüğü gibi vahşi tip FUS ifadesi yaklaşık 6 cm larva tarama yeteneği azalmış ise, vahşi tip larva, en fazla 12 cm sürün. FUS / TLS ALS neden olan mutasyon R521C ifade Hayvanlar sadece yaklaşık 1 cm / dakika, emekleme, onların tarama hareketi çok ciddi bozulma (Şekil 1) göstermektedir. Negatif geotaxis HALKA assay Genç vahşi tip ergin sinek 3 saniyelik bir zaman diliminde ~ 4-5 cm (zaman belirli bir için belirli bir ortalama yüksekliği tanımlamak için farklı suşları veya aktivite seviyelerini karşılamak için 3 saniye arasında ayarlanabilir ortalama tırmanma yükseklikte olmalıdır / tedavi) süzün. Altta kalan sinekler 0 değeri tahsis edilir. Onu daha sonra yüksekliğini ölçmek için her bir sinek yerini belirlemek zor olur, çünkü vialde 25&#39;ten fazla sinek kullanılması tavsiye edilmez. No duyarsızlaştırma istihdam ediyor olması dışında 1 dakika aralıklı 6 ardışık denemeler için yukarı görülmüştür. Bu kullanılan vialler içine yerleştirilen yeni sinekler taze şişeler içerisine aynı ölçüde tırmanmaya çünkü toplanmış veri kümesi başlangıç ​​sonra bu tahlilde test polistiren şişeleri yeniden edilmeyen kritik önem taşır. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3795/3795fig1.jpg" /> Şekil 1. HALKA Assay Kur. Odaklanma ve aparat üzerine kamera yakınlaştırmak;; dijital kamera polistiren flakonlarda sinekler içeren cihazları önünde ~ 1 m yerleştirilir ve 3.0 saniye için zamanlayıcıyı ayarlayabilirsiniz. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3795/3795fig2.jpg" /> Kullanarak larva tarama testte Şekil 2. Temsilcisi veri ektopik UAS-FUS WT ifade ve motor nöron sürücüsü (OK371-gal4) kontrolü altında UAS-FUS R521C sinekleri. <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt;

<ol>
	<li>Pandey, U. B., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+disease+models+in+Drosophila+melanogaster+and+the+role+of+the+fly+in+therapeutic+drug+discovery.">Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery.</a> Pharmacol. Rev. 63 (2), 411-436 (2011).</li><li>Feany, M. B., Bender, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+of+Parkinson's+disease.">A Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Nature Mar. 23 (6776), 394-398 (2000).</li><li>Auluck, P. K., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+prevention+of+Parkinson+disease+in+Drosophila.">Pharmacological prevention of Parkinson disease in Drosophila.</a> Nat. Med. 8 (11), 1185-1186 (2000).</li><li>Whitworth, A. J., Theodore, D. A., Greene, J. C., Benes, H., Wes, P. D., Pallanck, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glutathione+Stransferase+activity+rescues+dopaminergic+neuron+loss+in+a+Drosophila+model+of+Parkinson's+disease.">Increased glutathione Stransferase activity rescues dopaminergic neuron loss in a Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102 (22), 8024-8029 (2005).</li><li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+iterative+negative+geotaxis+(RING):+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila.">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp. Gerontol. 40 (5), 386-395 (2005).</li><li>Lanson, N. A., Maltare, A., King, H., Smith, R., Kim, J. H., Taylor, J. P., Lloyd, T. E., Pandey, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+of+FUS-related+neurodegeneration+reveals+genetic+interaction+between+FUS+and+TDP-43.">A Drosophila model of FUS-related neurodegeneration reveals genetic interaction between FUS and TDP-43.</a> Hum. Mol. Genet. 20 (13), 2510-2523 (2011).</li><li>Batlevi, Y., Martin, D. N., Pandey, U. B., Simon, C. R., Powers, C. M., Taylor, J. P., Baehrecke, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynein+light+chain+1+is+required+for+autophagy,+protein+clearance,+and+cell+death+in+Drosophila.">Dynein light chain 1 is required for autophagy, protein clearance, and cell death in Drosophila.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107 (2), 742-747 (2010).</li><li>Sang, T. K., Chang, H. Y., Lawless, G. M., Ratnaparkhi, A., Mee, L., Ackerson, L. C., Maidment, N. T., Krantz, D. E., Jackson, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+of+mutant+human+parkin-induced+toxicity+demonstrates+selective+loss+of+dopaminergic+neurons+and+dependence+on+cellular+dopamine.">A Drosophila model of mutant human parkin-induced toxicity demonstrates selective loss of dopaminergic neurons and dependence on cellular dopamine.</a> J. Neurosci. 27 (5), 981-992 (2007).</li><li>Stacey, S. M., Muraro, N. I., Peco, E., Labb&#233;, A., Thomas, G. B., Baines, R. A., van Meyel, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+glial+glutamate+transporter+Eaat1+is+regulated+by+fringe-mediated+notch+signaling+and+is+essential+for+larval+locomotion.">Drosophila glial glutamate transporter Eaat1 is regulated by fringe-mediated notch signaling and is essential for larval locomotion.</a> J. Neurosci. 30 (43), 14446-14457 (2010).</li><li>Repnikova, E., Koles, K., Nakamura, M., Pitts, J., Li, H., Ambavane, A., Zoran, M. J., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sialyltransferase+regulates+nervous+system+function+in+Drosophila.">Sialyltransferase regulates nervous system function in Drosophila.</a> J. Neurosci. 30 (18), 6466-6476 (2010).</li><li>Repnikova, E., Koles, K., Nakamura, M., Pitts, J., Li, H., Ambavane, A., Zoran, M. J., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sialyltransferase+regulates+nervous+system+function+in+Drosophila.">Sialyltransferase regulates nervous system function in Drosophila.</a> J. Neurosci. 30 (18), 6466-6476 (2010).</li><li>Nedelsky, N. B., Pennuto, M., Smith, R. B., Palazzolo, I., Moore, J., Nie, Z., Neale, G., Taylor, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Native+functions+of+the+androgen+receptor+are+essential+to+pathogenesis+in+a+Drosophila+model+of+spinobulbar+muscular+atrophy.">Native functions of the androgen receptor are essential to pathogenesis in a Drosophila model of spinobulbar muscular atrophy.</a> Neuron. 67 (6), 936-952 (2010).</li><li>Lorenzo, D. N., Li, M. G., Mische, S. E., Armbrust, K. R., Ranum, L. P., Hays, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectrin+mutations+that+cause+spinocerebellar+ataxia+type+5+impair+axonal+transport+and+induce+neurodegeneration+in+Drosophila.">Spectrin mutations that cause spinocerebellar ataxia type 5 impair axonal transport and induce neurodegeneration in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 189 (1), 143-158 (2010).</li><li>Wang, J. W., Brent, J. R., Tomlinson, A., Shneider, N. A., McCabe, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ALS-associated+proteins+FUS+and+TDP-43+function+together+to+affect+Drosophila+locomotion+and+life+span.">The ALS-associated proteins FUS and TDP-43 function together to affect Drosophila locomotion and life span.</a> J. Clin. Invest. , (2011).</li><li>Choi, J. K., Jeon, Y. C., Lee, D. W., Oh, J. M., Lee, H. P., Jeong, B. H., Carp, R. I., Koh, Y. H., Kim, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+of+GSS+syndrome+suggests+defects+in+active+zones+are+responsible+for+pathogenesis+of+GSS+syndrome.">A Drosophila model of GSS syndrome suggests defects in active zones are responsible for pathogenesis of GSS syndrome.</a> Hum. Mol. Genet. 19 (22), 4474-4489 (2010).</li><li>Ruan, H., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+interaction-mediated+lifespan+extension+of+Drosophila+Cu/Zn+superoxide+dismutase+mutants.">Social interaction-mediated lifespan extension of Drosophila Cu/Zn superoxide dismutase mutants.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (21), (2008).</li><li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+video+tracking+of+locomotion+in+adult+Drosophila+melanogaster.">High-resolution video tracking of locomotion in adult Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (24), (2009).</li><li>Becnel, J., Johnson, O., Luo, J., N&#228;ssel, D. R., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+serotonin+5-HT7+Dro+receptor+is+expressed+in+the+brain+of+Drosophila,+and+is+essential+for+normal+courtship+and+mating.">The serotonin 5-HT7 Dro receptor is expressed in the brain of Drosophila, and is essential for normal courtship and mating.</a> PLoS One. 6 (6), e20800 (2011).</li><li>Johnson, O., Becnel, J., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+5-HT(2)+and+5-HT(1A)-like+receptors+differentially+modulate+aggressive+behaviors+in+Drosophila+melanoga-+ster.">Serotonin 5-HT(2) and 5-HT(1A)-like receptors differentially modulate aggressive behaviors in Drosophila melanoga- ster.</a> Neuroscience. 158 (2), 1292-1300 (2009).</li><li>Bastock, M., Manning, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Courtship+of+Drosophila+Melanogaster.">The Courtship of Drosophila Melanogaster.</a> Behaviour. , 85-111 (1955).</li><li>Greenspan, R. J., Ferveur, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Courtship+in+Drosophila.">Courtship in Drosophila.</a> Annu. Rev. Genet. 34, 205-232 (2000).</li><li>Villella, A., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenetics+of+courtship+and+mating+in+Drosophila.">Neurogenetics of courtship and mating in Drosophila.</a> Adv. Genet. 62, 67-184 (2008).</li></ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Drosophila davranış sıkı genetik ve çevresel faktörler tarafından düzenlenir. Biz ve diğerleri, daha önce davranış ve Drosophila 5-19 modellenmiş insan nörodejeneratif hastalıklar uçmak için ilgili genler incelemek için veri toplamak için burada açıklanan testleri kullandılar. Tarama testi için, 3. Larvalar dikkatli seçimi kritik bir adımdır. Bir ilaç ile tedavi etmek, bu da iyi bir erime kabiliyetine sahip olmadığını maksimal etkisi elde etmek için...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Sakaroz </td><td> Fisher Scientific </td><td> S5-500 </td></tr><tr><td> Agaroz </td><td> Invitrogen </td><td> 16500-500 </td></tr><tr><td> 6 oz Drosophila şişe </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 32-130 </td></tr><tr><td> Boya Fırçası (# 1) </td><td> Ted Pella, Inc </td><td> 11859 </td></tr><tr><td> Gıda bileşenleri Fly </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Mısır unu </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9109741 </td></tr><tr><td> Agar </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 66-104 </td></tr><tr><td> Melas </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9349176 </td></tr><tr><td> Propiyonik asit </td><td> Acros </td><td> 14930-0010 </td></tr><tr><td> Tegosept </td><td> Tepe </td><td> 20-258 </td></tr><tr><td> Etanol </td><td> BalıkçıBilimsel </td><td> BP2818-4 </td></tr><tr><td> Maya </td><td> Genesee Bilimsel </td><td> 62-107 </td></tr></tbody></table>

methods to assay drosophila behavior

Drosophila melanogaster, meyve sineği, kanser, kardiyovasküler hastalıklar ve bazı nörolojik hastalıklar 1. sıra insan hastalıklarının geniş bir moleküler mekanizmaları incelemek için kullanılmıştır. Biz larva hareket, yetişkin tırmanma yeteneği (HALKA testi), ve Drosophila kur davranışlarının belirlenmesi için basit ve sağlam davranışsal testler optimize edilmiştir. Bu davranış testleri sinek davranışı üzerinde genetik ve çevresel faktörlerin rolünü incelemek için yaygın olarak uygulanabilir. Larva tarama yeteneği güvenilir ve aynı zamanda lokomosyon ilaçlar ya da genetik hastalık etkisi (transgenik sineklerde) incelenmesi için Drosophila larva tarama yetenekleri erken evre değişiklikleri belirlemek için kullanılabilir. Aksi takdirde değerlendirilebilir nerede bu sinekler yetişkinliğe hayatta yok gibi bir genin ifadesi veya kaldırılması, pupa veya ergin dönemlerinde ölümcül neden olursa larva tarama testi daha uygun olur. Bu temel birssay Drosophila larva ek davranışsal tepkileri incelemek için parlak ışık veya stres ile birlikte de kullanılabilir. Kur davranışı yaygın cinsel davranış genetik temeli araştırmak için kullanılmıştır ve aynı zamanda da öğrenme ve bellek gibi, etkinlik ve koordinasyon incelemek için kullanılabilir. Drosophila Kur davranışı görsel, işitsel ve duyusal sinyaller dahil olmak üzere çeşitli uyarımlar değişimi içerir erkek ve başarılı cinsel birleşme sonuçlanan iyi karakterize motor hareketlerin karmaşık bir dizi neden kadınlar arasında. Geleneksel yetişkin tırmanma testler (negatif geotaxis) farklı çalışmalarda 2-4 arasında belirgin bir farklılaşma ile sıkıcı, yoğun emek ve zaman alıcı vardır. Hızlı (HALKA) testi 5 yetişkin lokomotor ve negatif geotaxis b ölçmek için, tekrarlanabilir duyarlı ve yüksek verimlilik yaklaşımı sağlayan, yaygın kullanılan protokolleri üzerinden pek çok avantajı vardır negatif geotaxis iteratifehaviors. HALKA deneyde, birkaç genotiplerinin veya ilaç tedavileri yüksek verimli tarama deneyleri yaklaşımı için daha uygun hale ile birlikte, aynı zamanda hayvanları, çok sayıda kullanılarak test edilebilir.

Watch this Scientific Journal Video about Methods to Assay Drosophila Behavior at JoVE.com

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster bir yüzyıl 1 aşkın süredir birçok önemli biyolojik işlemlerin moleküler ve hücresel temelini anlamak için kullanılan bir genetik ve davranışsal uysal modeli sistemidir. Drosophila iyi sinek davranışının genetik temeli içgörü kazanmak için istismar edilmiştir.

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Methods to Assay Drosophila Behavior

42.8K Görüntüleme.  Louisiana State University Health Sciences Center. Drosophila melanogaster bir yüzyıl 1 aşkın süredir birçok önemli biyolojik işlemlerin moleküler ve hücresel temelini anlamak için kullanılan bir genetik ve davranışsal uysal modeli sistemidir. Drosophila iyi sinek davranışının genetik temeli içgörü kazanmak için istismar edilmiştir.

Video: Methods to Assay Drosophila Behavior

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster. In a light-tight box illuminated by red light that is invisible to fruit flies, a camera linked to custom data acquisition software monitors the position of six flies simultaneously. Each fly is confined to walk in individual arenas containing a food odor at the center. The testing arenas rest on a porous floor that functions to prevent odor accumulation. Latency to locate the odor source, a metric that reflects olfactory sensitivity under different physiological states, is determined by software analysis. Here, we discuss the critical mechanics of running this behavioral paradigm and cover specific issues regarding fly loading, odor contamination, assay temperature, data quality, and statistical analysis.

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster.

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi<em&gt; Drosophila</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Nörobilim

An Adjustable High-Definition Imaging System for Behavioral Studies of Drosophila Adults

Drosophila melanogaster is a very powerful model in biological research, but a bad model for photography or videography. This paper describes a simple but effective method to observe and document the behavior or morphology of flies. Flies were placed in a translucent observation chamber c.a. &#216;15 x 5mm (no food inside) or &#216;15 x 12 mm (with an 8 mm-high piece of food inside). After covering with an ultraviolet (UV)/clear filter with high light transmittance, the chamber was placed under a 5-50x zoom stereo microscope, and mini light-emitting diode (LED) video lights were placed on both sides of the microscope to illuminate the chamber to obtain uniform, soft, bright, and nearly shadow-free light. Then, a compact digital camera with 3-5x optical zoom, which can record 1080 P high-definition or higher resolution video (at a frame rate of &#8805;30 fps), was connected to the eyepiece of microscope through a bracket, and photographs or videos were taken through the eyepiece. By adjusting the zoom knob of the zoom stereo microscope, it was very easy to track the flies and take panoramic or detailed close-up images as needed, while the camera recorded everything under the microscope. Because the flies can stay at any position in the chamber, they can be observed and recorded from all directions. The photographs or videos taken are of good image quality. This method can be used both for scientific research and teaching.

An Adjustable High-Definition Imaging System for Behavioral Studies of Drosophila Adults

This protocol describes how to make a simple adult Drosophila behavior observation chamber, and how to take high-definition photographs/videos of the morphology or behavior of different types of fruit flies in the observation chamber through relatively simple and affordable methods.

Drosophila Yetişkinlerinin Davranışsal Çalışmaları için Ayarlanabilir Yüksek Çözünürlüklü Görüntüleme Sistemi

Drosophila melanogaster is a very powerful model in biological research, but a bad model for photography or videography. This paper describes a simple but ...

Davranış

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such behavior is spontaneous locomotor activity. Here we describe our protocol that utilizes Drosophila population monitors and a tracking system that allows continuous monitoring of the spontaneous locomotor activity of flies for several days at a time. This method is simple, reliable, and objective and can be used to examine the effects of aging, sex, changes in caloric content of food, addition of drugs, or genetic manipulations that mimic human diseases.

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster are useful in studying genetic or environmental manipulations that affect behaviors such as spontaneous locomotor activity.&#160; Here we describe a protocol that utilizes monitors with infrared beams and data analysis software to quantify spontaneous locomotor activity.&#160;

Olarak spontan lokomotor aktivitenin belirlenmesi<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

A Simple Technique to Assay Locomotor Activity in Drosophila

Drosophila melanogaster is an ideal model organism for studying various diseases due to its abundance of advanced genetic manipulation techniques and diverse behavioral features. Identifying behavioral deficiency in animal models is a crucial measure of disease severity, for example, in neurodegenerative diseases where patients often experience impairments in motor function. However, with the availability of various systems to track and assess motor deficits in fly models, such as drug-treated or transgenic individuals, an economical and user-friendly system for precise evaluation from multiple angles is still lacking. A method based on the AnimalTracker application programming interface (API) is developed here, which is compatible with the Fiji image processing program, to systematically evaluate the movement activities of both adult and larval individuals from recorded video, thus allowing for the analysis of their tracking behavior. This method requires only a high-definition camera and a computer peripheral hardware integration to record and analyze behavior, making it an affordable and effective approach for screening fly models with transgenic or environmental behavioral deficiencies. Examples of behavioral tests using pharmacologically treated flies are given to show how the techniques can detect behavioral changes in both adult flies and larvae in a highly repeatable manner.

A Simple Technique to Assay Locomotor Activity in Drosophila

The present protocol assesses the locomotor activity of Drosophila by tracking and analyzing the movement of flies in a hand-made arena using open-source software Fiji, compatible with plugins to segment pixels of each frame based on high-definition video recording to calculate parameters of speed, distance, etc.

Drosophila'da Lokomotor Aktiviteyi Test Etmek İçin Basit Bir Teknik

Drosophila melanogaster is an ideal model organism for studying various diseases due to its abundance of advanced genetic manipulation techniques and ...

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an excellent model system for such investigations due to its complex behaviors, powerful genetic techniques, and compact nervous system. Laboratory behavioral assays have long been used with Drosophila to simulate properties of the natural environment and study the neural mechanisms underlying the corresponding behaviors (e.g. phototaxis, chemotaxis, sensory learning and memory)1-3. With the recent availability of large collections of transgenic Drosophila lines that label specific neural subsets, behavioral assays have taken on a prominent role to link neurons with behaviors4-11. Versatile and reproducible paradigms, together with the underlying computational routines for data analysis, are indispensable for rapid tests of candidate fly lines with various genotypes. Particularly useful are setups that are flexible in the number of animals tested, duration of experiments and nature of presented stimuli. The assay of choice should also generate reproducible data that is easy to acquire and analyze. Here, we present a detailed description of a system and protocol for assaying behavioral responses of Drosophila flies in a large four-field arena. The setup is used here to assay responses of flies to a single olfactory stimulus; however, the same setup may be modified to test multiple olfactory, visual or optogenetic stimuli, or a combination of these. The olfactometer setup records the activity of fly populations responding to odors, and computational analytical methods are applied to quantify fly behaviors. The collected data are analyzed to get a quick read-out of an experimental run, which is essential for efficient data collection and the optimization of experimental conditions.

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

We describe here a behavioral setup and data analysis method for assaying olfactory responses of up to 100 vinegar flies (Drosophila melanogaster). This system may be used with single or multiple olfactory stimuli, and adaptable for optogenetic activation or silencing of neuronal subsets.

Of Bilgisayar İzleme tarafından Analiz Edilmiş Olfaktor Davranışlar<em&gt; Drosophila</em&gt; Dört kadranda olfactometer içinde

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an ...

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a considerable amount of information has been generated regarding ORN responses to odorants, the role of specific ORNs in driving behavioral responses remains poorly understood. Complications in behavior analyses arise due to different volatilities of odorants that activate individual ORNs, multiple ORNs activated by single odorants, and the difficulty in replicating naturally observed temporal variations in olfactory stimuli using conventional odor-delivery methods in the laboratory. Here, we describe a protocol that analyzes Drosophila larval behavior in response to simultaneous optogenetic stimulation of its ORNs. The optogenetic technology used here allows for specificity of ORN activation and precise control of temporal patterns of ORN activation. Corresponding larval movement is tracked, digitally recorded, and analyzed using custom written software. By replacing odor stimuli with light stimuli, this method allows for a more precise control of individual ORN activation in order to study its impact on larval behavior. Our method could be further extended to study the impact of second-order projection neurons (PNs) as well as local neurons (LNs) on larval behavior. This method will thus enable a comprehensive dissection of olfactory circuit function and complement studies on how olfactory neuron activities translate in to behavior responses.

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

This protocol analyzes navigational behavior of Drosophila larva in response to simultaneous optogenetic stimulation of its olfactory neurons. Light of 630 nm wavelength is used to activate individual olfactory neurons expressing a red-shifted channel rhodopsin. Larval movement is simultaneously tracked, digitally recorded, and analyzed using custom-written software.

Yanıt koku nöronlar Optogenetic uyarılması olarak Drosophila larva davranışını izlemek

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a ...

An Improved Method for Accurate and Rapid Measurement of Flight Performance in Drosophila

Drosophila has proven to be a useful model system for analysis of behavior, including flight. The initial flight tester involved dropping flies into an oil-coated graduated cylinder; landing height provided a measure of flight performance by assessing how far flies will fall before producing enough thrust to make contact with the wall of the cylinder. Here we describe an updated version of the flight tester with four major improvements. First, we added a &#34;drop tube&#34; to ensure that all flies enter the flight cylinder at a similar velocity between trials, eliminating variability between users. Second, we replaced the oil coating with removable plastic sheets coated in Tangle-Trap, an adhesive designed to capture live insects. Third, we use a longer cylinder to enable more accurate discrimination of flight ability. Fourth we use a digital camera and imaging software to automate the scoring of flight performance. These improvements allow for the rapid, quantitative assessment of flight behavior, useful for large datasets and large-scale genetic screens.

An Improved Method for Accurate and Rapid Measurement of Flight Performance in Drosophila

Here we describe a method for rapid and accurate measurement of flight performance in Drosophila, enabling high-throughput screening.

Uçuş Performans Doğru ve hızlı ölçüm için geliştirilmiş Yöntemi<em&gt; Drosophila</em

Drosophila has proven to be a useful model system for analysis of behavior, including flight. The initial flight tester involved dropping flies into an ...

Biyoloji

Drosophila Otizm Spektrum Bozukluğunun Genetik ve Davranışsal Özelliklerine İlişkin Modeller

Paradigms for Behavioral Assessment in Drosophila Model of Autism Spectrum Disorder

Autism Spectrum Disorder (ASD) encompasses a heterogeneous group of neurodevelopmental disorders with common behavioral symptoms including deficits in social interaction and ability for communication, enhanced restricted or repetitive behaviors, and also, in some cases, learning disability and motor deficit. Drosophila has served as an unparalleled model organism for modeling a great number of human diseases. As many genes have been implicated in ASD, fruit flies have emerged as a powerful and efficient way to test the genes putatively involved with the disorder. As hundreds of genes, with varied functional roles, are implicated in ASD, a single genetic fly model of ASD is unfeasible; instead, individual genetic mutants, gene knockdowns, or overexpression-based studies of the fly homologs of ASD-associated genes are the common means for gaining insight regarding molecular pathways underlying these gene products. A host of behavioral techniques are available in Drosophila which provide easy readout of deficits in specific behavioral components. Social space assay and aggression and courtship assays in flies have been shown to be useful in assessing defects in social interaction or communication. Grooming behavior in flies is an excellent readout of repetitive behavior. Habituation assay is used in flies to estimate the ability for habituation learning, which is found to be affected in some ASD patients. A combination of these behavioral paradigms can be utilized to make a thorough assessment of the human ASD-like disease state in flies. Using Fmr1 mutant flies, recapitulating Fragile-X syndrome in humans, and POGZ-homolog row knockdown in fly neurons, we have shown quantifiable deficits in social spacing, aggression, courtship behavior, grooming behavior, and habituation. These behavioral paradigms are demonstrated here in their simplest and straightforward forms with an assumption that it would facilitate their widespread use for research on ASD and other neurodevelopmental disorders in fly models.

Yazar Spotlight: Meyve Sineklerinde Otizm Spektrum Bozukluğu Belirtilerini Keşfetmek — Genetik Modeller ve Davranışsal Testler

Autism Spectrum Disorder (ASD) is associated with impaired social and communicative behavior and the emergence of repetitive behavior. For studying the interrelation between ASD genes and behavioral deficits in the Drosophila model, five behavioral paradigms are described in this paper for assaying social spacing, aggression, courtship, grooming, and habituation behavior.

Otizm Spektrum Bozukluğunun Drosophila Modelinde Davranışsal Değerlendirme Paradigmaları

Autism Spectrum Disorder (ASD) encompasses a heterogeneous group of neurodevelopmental disorders with common behavioral symptoms including deficits in ...

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi

Drosophila Yetişkinlerinin Davranışsal Çalışmaları için Ayarlanabilir Yüksek Çözünürlüklü Görüntüleme Sistemi

Olarak spontan lokomotor aktivitenin belirlenmesi

Drosophila'da Lokomotor Aktiviteyi Test Etmek İçin Basit Bir Teknik

Of Bilgisayar İzleme tarafından Analiz Edilmiş Olfaktor Davranışlar

Yanıt koku nöronlar Optogenetic uyarılması olarak Drosophila larva davranışını izlemek

Uçuş Performans Doğru ve hızlı ölçüm için geliştirilmiş Yöntemi

Otizm Spektrum Bozukluğunun Drosophila Modelinde Davranışsal Değerlendirme Paradigmaları

Otizm Spektrum Bozukluğunun Drosophila Modelinde Davranışsal Değerlendirme Paradigmaları

Otizm Spektrum Bozukluğunun Drosophila Modelinde Davranışsal Değerlendirme Paradigmaları