Мышиная модель с ножевым ранением для изучения кровотечения и воспаления при черепно-мозговой травме

Мы заинтересованы в разработке метода остановки кровотечения и подавления воспаления при TVI, поэтому мы разработали протокол, позволяющий легко сделать массовую модель TVI с помощью только иглы. Наша модель TVI с ножевыми ранениями выгодна тем, что смазывает кровотечение и активацию серого цвета. Наш протокол имеет три основных преимущества по сравнению с другими методами.

Никакого специального оборудования или инструментов не требуется. Это можно сделать легко и быстро, а рана настолько мала, что не влияет на поведение мыши, поэтому любой может выполнить это с высокой воспроизводимостью. Наша лаборатория сосредоточится на коммуникации нейронов, серых и глиальных клеток, а также паразитов во время восстановления черепно-мозговой травмы.

Коммуникация играет решающую роль в ремонте. Однако до конца она не изучена. Наш протокол очень полезен для анализа общения.

Для начала положите мышь под наркозом на брюшную сторону на бумажное полотенце. Подтвердите, что мышь глубоко обезболивается, с помощью теста на защемление пальца ноги. Продезинфицируйте операционное место, чередуя циклы приема бетадина и скраба с 70% этанолом три раза каждый.

Теперь захватите затылочную кожу тупыми щипцами и сделайте разрез шириной от одного до 1,5 миллиметра, чтобы обнажить затылочную кость, не повреждая череп или какой-либо другой орган. Затем аккуратно и медленно откройте разрез, чтобы увидеть границу между корой головного мозга и мозжечком через череп. Чтобы выполнить трепанацию черепа мыши, необходимо создать небольшое отверстие в правом полушарии затылочной кости с помощью иглы.

Осторожно поверните иглу, чтобы сделать точку введения для иглоукалывания колотой раны, стараясь не повредить паренхиму мозга. Для колотого ранения введите соответствующую иглу из точки введения и проколите кору головного мозга вдоль ростральной каудальной оси. Наконец, зашите разрез кожи с помощью нейлонового шва 3-0 с иглой полукруглой формы.

Рана после процедуры была подтверждена с помощью микроскопии. Экстравазация IGG достигла пика через день после травмы, за которым последовало прогрессирующее восстановление и снижение интенсивности окрашивания через три, пять и семь дней. Утечка синего красителя Эвана в паренхиму мозга произошла сразу после травмы, при этом его концентрация достигла пика через час.

Концентрация красителя постепенно снижалась через один и три дня. Пиковое накопление IBA1-положительной микроглии и GFAP-положительных астроцитов произошло через пять и три дня после травмы соответственно, при этом их присутствие уменьшилось на семь дней. Воспалительные цитокины, включая фактор некроза опухоли альфа, интерлейкин 6 и интерлейкин 1 бета, показали пик экспрессии мРНК через один день после травмы, в то время как трансформирующий фактор роста бета 1 достиг пика через три дня после травмы.