Эта модель субарахноидального кровоизлияния помогает нам лучше понять патофизиологические механизмы и последствия. Мы надеемся, что это приведет к созданию методов лечения, снижающих бремя болезней у страдающих пациентов. Основным преимуществом этой методики является ее высокая воспроизводимость, так как вводится фиксированное количество крови.
Кроме того, по ключевым параметрам он напоминает субарахноидальное кровоизлияние человека. Чтобы сделать зонд ICP, сожгите один конец 20-миллиметрового куска полиэтиленовой трубки, сделав круглую пластину и оставив просвет открытым. Затем наденьте кольцо силиконовой трубки длиной в один миллиметр на полиэтиленовую трубку, прежде чем соединить 10-миллиметровый кусок силиконовой трубки с концом полиэтиленовой трубки.
Затем обезболивают, интубируют и катетеризируют крысу Sprague Dawley, прежде чем поместить ее в стереотаксическую рамку. После введения местной анестезии сделайте восьмимиллиметровый разрез кожи каудально от прокола иглы по средней линии. Под рассекающим микроскопом тупо рассекают все мышцы слоями, чтобы идентифицировать атлантозатылочную мембрану.
Затем используйте рычаг втягивания, чтобы сдержать мускулатуру шеи, при необходимости размещая втягивающее устройство каудально. Убедившись, что стерильный зонд ВЧД подключен к датчику ВЧД, промойте зонд ВЧД физиологическим раствором, убедившись, что в зонде нет пузырьков воздуха. Используя иглу 23 калибра, надрежьте атлантозатылочную мембрану, сделав отверстие, чтобы аккуратно пропустить зонд ICP через мембрану.
Слегка потяните зонд и убедитесь, что он показывает пульсирующую кривую в диапазоне от нуля до пяти миллиметров ртутного столба. Если нет, снимите щуп, еще раз проверьте соединение с преобразователем и подтвердите поток через просвет. В область, где атлантозатылочная мембрана оборачивается вокруг зонда, нанесите две капли тканевого клея.
Затем переместите силиконовую трубку длиной в один миллиметр вперед к мембране, прежде чем наносить дополнительный клей, чтобы свести к минимуму риск смещения зонда ICP. После того, как щуп ICP приклеен, снимите втягивающее устройство. Затем, используя нерассасывающийся монофиламентный шов 4-0, наложите один горизонтальный шов матраса на каудальный конец разреза и один простой прерывистый шов на головной конец.
Чтобы установить лазерно-допплеровский зонд, сделайте 15-миллиметровый разрез каудально по средней линии, начиная спереди от глаз. После удаления соединительной ткани и мышц щипцами используйте конец стерильного ватного тампона в качестве румяна для идентификации брегмы и коронарных швов. После размещения вооруженного втягивающего устройства поместите спинномозговую иглу 25 калибра в стереотаксическую рамку точно на брегму и запишите положение.
Далее извлеките иглу из брегмы. Сдвиньте рамку вперед на 6,5 миллиметров. Затем замените иглу по средней линии, чтобы отметить сторону сверления.
Сверлите до тех пор, пока твердая мозговая оболочка не будет определена ниже кости. С помощью прямых щипцов аккуратно удалите костные отломки. Затем заполните полость костным воском.
Далее на три-четыре миллиметра сбоку справа от брегмы и чуть спереди от коронарного шва для лазера-допплера просверлите еще одно отверстие. Следите за тем, чтобы не проникнуть в твердую мозговую оболочку. Ищите сосуды, где лазер-допплер может измерить кровоток.
Установите лазерный допплер и проверьте значения. Требуется минимальное значение 100 единиц потока. Если значения остаются приемлемыми после снятия микроскопа, добавьте одну каплю клея, чтобы зафиксировать зонд.
Еще раз проверьте, не превышает ли значение 80 единиц потока. Чтобы вызвать субарахноидальное кровоизлияние, осторожно введите иглу через череп по средней линии между полушариями, пока не почувствуется сопротивление из-за основания черепа. Втяните иглу на один миллиметр, чтобы обеспечить правильное расположение прямо перед хиазмой зрительного нерва.
Чтобы обеспечить максимально однородный результат при введении крови, поверните иглу по часовой стрелке на 90 градусов так, чтобы кончик иглы указывал вправо. Затем снимите шпильку. После 15-минутного уравновешивания отрегулируйте уровень анестезии, чтобы получить среднее артериальное давление в диапазоне от 80 до 100 миллиметров ртутного столба.
Затем проводят анализ газов крови, чтобы подтвердить, что рН, парциальное давление углекислого газа и парциальное давление кислорода находятся в пределах физиологических параметров. Далее с помощью одномиллилитрового шприца с тупой иглой 23 калибра извлеките 500 микролитров крови из хвостового катетера. Чтобы избежать впрыска воздуха, заполните мертвое пространство спинномозговой игольчатой камеры кровью.
Отрегулировав объем крови в шприце до 300 микролитров, подсоедините шприц к спинномозговой игле. Затем, крепко обхватив шприц, введите кровь вручную, чтобы превзойти среднее артериальное давление. Наблюдайте резкое повышение внутримозгового давления и одновременное резкое падение мозгового кровотока.
Через 30 минут после индукции субарахноидального кровоизлияния извлеките иглу и лазерно-допплеровский зонд. И заполнить полости костным воском. Используя нерассасывающийся монофиламентный шов 4-0, закройте разрез двумя горизонтальными матрасными швами.
Чтобы использовать зонд ICP для инъекций в большой бачок, снимите силиконовую трубку и вставьте адаптер для штифтового порта в полиэтиленовую трубку. Чтобы выполнить интратекальное введение, пока животное бодрствует, поместите инъектор с контактным портом на прецизионный шприц. Затем проведите лечение через адаптер контактного порта.
Если интратекальное введение не требуется, разрежьте простой прерванный шов. Затем с помощью ножниц максимально укоротите зонд ВЧД и приклейте конец, чтобы предотвратить утечку спинномозговой жидкости. Закройте разрез нерассасывающимся монофиламентным швом 4-0.
При оценке грубой сенсорно-моторной функции с использованием теста с вращающимся полюсом крысы с экспериментально индуцированным субарахноидальным кровоизлиянием показали значительно худшие результаты через 24 и 48 часов после операции по сравнению с фиктивными животными. Чувствительность к эндотелину-1, агонисту семейства рецепторов эндотелина-1, значительно увеличилась через два дня после субарахноидального кровоизлияния в базилярную и среднюю мозговые артерии экспериментальных крыс по сравнению с таковой у фиктивной контрольной группы. Обе артерии экспериментальных крыс также показали аналогичное повышение чувствительности к 5-карбоксамидотриптамину, агонисту семейства рецепторов 5-гидрокситриптамина.
После процедуры могут быть выполнены нейроповеденческие тесты, а также анализ тканей, включая иммуногистохимию, ПЦР, анализатор вестерн-блоттинга для анализа последствий и механизмов.
