Этот протокол позволит исследователям выполнять повторные измерения функции легких у отдельных мышей, уменьшая экспериментальную изменчивость и уменьшая количество мышей, необходимых для каждого эксперимента. Основным преимуществом этого протокола является то, что он не требует визуализации трахеи через полость рта или травматического вскрытия шеи для иноподия. Этот метод будет иметь особое значение для исследователей, изучающих хронические и прогрессирующие заболевания легких, такие как астма, ХОБЛ, эмфизема и фиброз легких.
Визуальная демонстрация этого протокола имеет решающее значение, поскольку понимание того, как определить трахею через кожу брюшной шеи имеет центральное значение для метода. Демонстрацией техники с Эндрю Нельсоном будет Кейт Нолан, ветеринар из моей лаборатории. Чтобы создать платформу intubation, сложите 15-20-сантиметровую длину 3-0 шелка пополам и склейте концы нити к верхней части трехдюймового трехковерного связующего.
Выберите канюлю соответствующего размера и длины и вырежьте скошен на дистальной кончике катетера. Гладкая поверхность разреза с абразивной бумагой, чтобы создать закругленный кончик и осторожно сделать небольшой изгиб в канюле примерно в одном сантиметре от скошенной. Когда материалы будут готовы, подтвердите отсутствие реакции на щепотку носа в анестезированную мышь и зацепите верхние резцы вокруг шелковой нити в верхней части угловой поверхности платформы, чтобы приостановить мышь в положении на спине.
После того, как мышь прямо расположена в спинной лежачих, осторожно схватить основание хвоста и втягивать хвост к столу. Поместите кусок ленты над основанием хвоста, чтобы обезопасить мышь и нанесите крем для депиляатора в область брюшной шейки матки. Через 30-45 секунд используйте сухую марлю, чтобы удалить сливки и тщательно промыть кожу солевой или дистиллированной водой.
Используя миппы в не доминирующей руке, аккуратно убирайте язык таким образом, чтобы достаточно открыть рот для введения канюли. С доминирующей рукой, заранее канюли в рот так, что конец, который является дистальной к небольшой изгиб против крыши рта животного. Отпустите язык и сдвиньте плоский край закрытых щипцы caudally вдоль брюшной шеи, пока манубриум не будет достигнут, чтобы боковой вытеснить слюнные железы и сгладить мышцы, покрывающие трахею.
Трахея будет выглядеть транскожно, как белая линия. При необходимости поверните типсы в черепно-мозговом направлении, сохраняя при этом напряжение на коже в хвостовом направлении, чтобы вызвать боковое вытеснение слюнных желез до пика и создать больше контраста вокруг трахеи. Предполагая доминирующую руку с одновременным сгибанием запястья, заранее канюли, одновременно рыбалка дистальный кончик канюли брюшной.
Если канюла была правильно помещена, она будет наблюдаться в трахее. Чтобы подтвердить правильное размещение, подключите лампу легочной инфляции к канюле и наблюдайте расширение грудной клетки с одновременной депрессией устройства. Не вытесняя канюлю, осторожно отцепив резцы мыши от платформы интубации и перенесите мышь на горизонтальную платформу, затем прикрепите канюлю к адаптеру на аппарате искусственной вентиляции легких и, после глубокой инфляции, проветрите мышь в течение 60 секунд перед измерением сопротивления дыхания.
Как только процедура завершена, перенесите мышь на прогретую платформу и обеспечьте постоянную стимуляцию через легкие щипщи или хвост, чтобы стимулировать спонтанное дыхание. После того, как спонтанное дыхание наблюдается, продолжать визуально контролировать животное. Когда скорость дыхания нормализуется, возьмите канюлю на уровне концентратора и аккуратно вытащите трубку черепико и от мыши до тех пор, пока канюла не будет полностью удалена из рта животного.
После extubated, передача мыши в чистую клетку восстановления с тепловой поддержкой с мониторингом до полного амбулаторного. В этом репрезентативном эксперименте сопротивление дыханию измерялось в дни 0, 3, 10 и 17, используя метод вынужденного колебания после глубокой инфляции до 25 сантиметров воды, уехав в течение пяти и 60 секунд механической вентиляции легких. Никаких существенных различий в измеренной респираторной устойчивости не наблюдалось между любой из точек времени в каждом штамме, предполагая, что отсутствие увеличения сопротивления дыхательных путей с течением времени указывает на отсутствие функционально значимых травм, связанных с воспалением в дыхательной системе в течение четырех последовательных точек времени.
Эта процедура инкубации может быть использована для обеспечения доступа к трахее для установки экспериментальных веществ и последовательного мониторинга дыхательной функции. Этот метод позволяет оценить функцию легких без инвазивной трахеостомы, облегчая мониторинг в несколько точек времени при хронических и прогрессирующих заболеваниях в пределах одной мыши.
