Вентилируемая хирургия ишемии-реперфузии легких может быть использована для изучения специфической для легких патофизиологии множественных процессов, включая трансплантацию легких, легочную эмболию и повреждение легких после геморрагической травмы с реанимацией. Эта модель сводит к минимуму воспалительный вклад ателектаза, искусственной вентиляции легких и гипоксии. Он поддерживает неповрежденную иммунную систему кровообращения in vivo и позволяет проводить долгосрочные исследования.
Эта модель может дать представление о том, как стерильное воспаление контролируется и регулируется в легких. Микрохирургическая техника сначала требует часов практики. Тщательная организация и планирование важны перед началом.
Кроме того, он может быть первоначально практикуем усыпленной мышью без отвлечения сердечной деятельности и движения, которое она вызывает. Застой крови в левой ПА позволяет легче визуализировать и манипулировать ею. Для начала осторожно поместите волоконно-оптический гибкий свет на трахею анестезированной мыши, немного ниже голосовых связок.
Отрегулируйте уровни освещенности таким образом, чтобы при взгляде в ротовую глоток мыши было видно только темное поле, за исключением красного света, исходящего из-под голосовых связок. Для интубации держите пинцет доминирующей рукой и используйте их, чтобы осторожно схватить и вытянуть язык из ротовой полости. Откройте нижнюю челюсть с помощью щипцов, удерживаемых недоминирующей рукой, и протолкните щипцы в гортань, чтобы поднять надгортанник.
В этот момент отпустите язык от пинцета. Понаблюдайте за голосовыми связками. Они должны открываться и закрываться в соответствии с каждым вдохом.
Удерживая канюлю с предварительно заряженной направляющей проволокой, вставьте наконечник проволоки через голосовые связки. Затем, будучи очень осторожным, чтобы не перемещать проволоку, удерживая ее часть, которая находится за пределами канюли, но чуть выше голосовых связок, отведите канюлю, оставив только проволоку на месте с дистальным концом внутри трахеи. В этот момент выполните вторую визуализацию голосовых связок, чтобы подтвердить, что дистальный кончик провода остается прошедшим через освещенные голосовые связки и в трахею, и не находится в незажженном пищеводе.
Затем держите проволоку за пределами рта с изогнутыми щипцами в левой руке, стабилизированными на твердой поверхности, и осторожно продвигайте катетер 20 калибра с ленточными крыльями над проволокой. Как только дистальный конец проволоки выходит из заднего конца катетера или эндотрахеальной трубки, удерживайте этот конец изогнутыми щипцами и плавно продвигаете катетер в трахею. Далее аккуратно снимите проволоку с дистального конца катетера изогнутыми щипцами, не смещая размещение катетера.
Затем кратко подключите катетер к вентилятору, прежде чем закрепить его, чтобы подтвердить правильное размещение в трахее, а не в пищеводе. Подтверждают расположение трахеи путем наблюдения за искусственной вентиляцией легких, зависимых от двусторонних движений грудной стенки и отсутствия надувания желудка. После интубации подключите катетер к вентилятору, установленному при объеме от 0,2 до 0,225 миллилитра, а частота дыхания от 120 до 150 вдохов в минуту для подтверждения правильного расположения трахеи оротрахеальной трубки.
Затем отсоединитесь с мышью, самопроизвольно дышащей через оротрахеальную трубку. Сбрите волосы мыши над областью левой грудной клетки до левой лопатки. Удалите лишние выбритые волосы с помощью спиртовых тампонов и продезинфицируйте хирургическую область.
Затем поместите мышь на согревающую подушку в левое боковое или на три четверти повернутое положение. Подключите трахеальную трубку к вентилятору. После изготовления разреза кожи вставьте три стерилизованных ретрактора под мышечный слой.
Затем определите второе межреберное пространство и удерживайте второе ребро дополнительными тонкими щипцами. Затем, потянув ребро вверх, используйте стерильный номер 12 изогнутого лезвия скальпеля, чтобы войти во множественное пространство, разделив и разрезав через второе-третье промежутки межреберные мышцы. Рассмотрите возможность приостановки вентиляции, чтобы уменьшить повреждение вершины левого легкого.
Используйте самый маленький, самый узкий втягивающий цефаладный вдоль ориентации ребер, и втягивающий ректор среднего размера влево вдоль третьего ребра, и самый большой втягивающий вправо вдоль поверхности второго ребра. Откройте грудную клетку с медленным и прогрессивным втягиванием с помощью эластичных втягивающих шнуров. Обнажите и идентифицируйте левую легочную артерию или ПА, отодвинув верхушку левого легкого стерильным тампоном или хирургической губкой.
Используйте микрощипцы ультратонкие щипцы в правой руке и ПА или расширяющие сосуды щипцы в левой руке, чтобы мягко обнажить и создать поле, в котором видны левый ПА и бронх. Используя щипцы ПА, поднимите левый ПА и осторожно, но твердо потяните вверх и цефаладу, чтобы визуализировать прозрачный бронх внизу. Увеличьте увеличение на рассеченном микроскопе до четырех X.При втягивании ПА подальше от бронха осторожно пропустите замкнутые ультратонкие щипцы через пространство между левым ПА и бронхом.
Затем используйте эти щипцы, чтобы удержать и вытащить 7-0 или 8-0 проленовый шов через пространство между левой легочной артерией сверху и бронхом внизу. Затем окружить левый ПА, завязав скользящий узел, чтобы создать окклюзию в ПА. Прерывание кровотока легко визуализируется в этот момент, отмечая начало ишемического периода. Экстернализируйте свободный конец узла через другую точку входа в переднюю левую грудную клетку с помощью иглы 24-28 калибра и закрепите конец шва небольшим кусочком ленты для более легкой идентификации в дальнейшем.
Затем, используя клапан положительного и выдоха или трубку на вентиляторе грызунов, повторно надувайте легкое, чтобы вытеснить как можно больше воздуха из грудной полости. Затем закройте грудную клетку двумя прерванными 4-0 нейлоновыми швами с последующим закрытием мышечного и кожного слоя и нанесением местной анестезии. Отсоедините мышь от аппарата ИВЛ и аккуратно поместите ее на согревающую прокладку для послеоперационного ухода для поддержания температуры тела во время восстановления.
Убедитесь, что внешний скользящий узел контролируется и четко визуализируется во время движения мыши. Осторожно потяните экстернализованный скользящий узел в конце ишемического периода. Здесь показана гистология легочных срезов у мышей дикого типа штаммов C3H и C57 черной шестерки.
После одного часа ишемии и трехчасовой реперфузии у обоих штаммов наблюдалась интенсивная нейтрофильная инфильтрация в левой ткани легкого. Тем не менее, штамм C3H показал заметно более высокие уровни воспаления по сравнению с C57 черной шестеркой. Ошибки при прохождении мононити между левым ПА и левым бронхом могут привести к неспасительной операции с катастрофическим кровотечением левого ПА или необратимой травмой левого бронха.
Это шаг, который является наиболее технически сложным и требует повторной практики при первом изучении этой процедуры. После выздоровления мыши после операции по ишемии-реперфузии легких примерно через час или менее после реперфузии интратрахеальная инстилляция живых бактерий может быть введена через три часа или 24-48 часов для имитации инфекции, которая следует за стерильным повреждением легких, вызванным ишемией-реперфузией. Внутритрахеальная установка других агентов, которые могут модулировать стерильное воспаление, также может быть выполнена после ишемии-реперфузии аналогичным образом.
Этот метод помог обнаружить и подтвердить поэтапный трафик и активацию нейтрофилов в ответ на стерильное повреждение и инфекцию в легких.
