Этот протокол может помочь поддерживать стабильность груза, который может быть как небольшие молекулы и белки, с помощью полипуббл, который, в свою очередь, может уменьшить углеродное взаимодействие с растворителем. Этот новый метод может быть использован для улучшения охвата вакцинами в развивающихся странах, поскольку функциональные возможности вакцин часто могут быть скомпрометированы из-за неэффективной транспортировки и хранения. Чтобы изготовить полигублы, сначала используйте одноми миллилитровую трубку для передачи, чтобы добавить 800 микролитров 10%CMC в стеклянный флакон 0,92 миллилитров.
Для синтеза PCLTA смешайте 1000 граммов на миллилитр 14 килодальтонных ПКЛ в 200 микролитров DCM. Для синтеза PLGADA смешайте 1000 граммов на миллилитр пятикилограммового PLGADA в 200 микролитров хлороформа. Смешайте фотоинициатор с полимерной смесью интереса в соотношении 0,005 к 1 и загрузите 200 микролитров полученного раствора в один миллилитровый стеклянный шприц, установленный на шприц-насосе, подключенном к дозирующей трубке из нержавеющей стали с внутренним диаметром 0,016 дюйма.
Используя микродвигатель для управления движением вперед и назад полимерной трубки, ввиснуть полимер в 10%CMC в стеклянный флакон, чтобы сформировать полигублы и вылечить полипублы под ультрафиолетовым светом на длине волны 254 нанометров в течение 60 секунд при двух ваттах на квадратный сантиметр, затем вспышки замораживают полипублы в жидком азоте в течение 30 секунд и лиофилизируют носителей на ночь при 0,01 миллибар вакуума в минус 85 градусов по Цельсию. Для центраирования груза, представляющих интерес в полибубл, смешать груз с 5%CMC в ротатор на ночь, чтобы увеличить вязкость груза, прежде чем вручную инъекционных двух микролитров грузовой смеси в полипуббл. Когда все грузы были введены, повторно вылечить, флэш-заморозки, и лиофилизировать вводили полибуббл, как только что продемонстрировали.
На следующее утро используйте типсы, чтобы отделить полипуббл от высушенного CMC и промыть полибуббл с деионизированной водой, чтобы удалить любые остаточные CMC. Затем разрежьте полибуббл пополам и известите половинки конфокаликовой микроскопией, чтобы гарантировать, что груз по центру. Для небольшой молекулы грузового выпуска инкубировать полибублы с центром acriflavine в 400 микролитров PBS при 37 градусов по Цельсию для соответствующей длины инкубации.
В каждой экспериментальной точке времени, собирать супернатант и добавить 400 микролитров свежего PBS на флакон. Затем используйте считыватель пластин для количественной оценки интенсивности флуоресценции собранного супернатанта. Для почти инфракрасной активации смешайте полимерный раствор с гидрофобными золотыми наноузлами в соотношении один к девяти и добавьте инициатора фото в соотношении 0,005 к 1.
Введите полученную смесь в стеклянный флакон 0,92 миллилитров, содержащий 800 микролитров 10%CMC, и излечите полипублы под ультрафиолетовым светом, как это было продемонстрировано. После флэш-замораживания и лиофилии, как попродемонстрировано, мыть полипублы с деионизированной водой и инкубировать носителей в 400 микролитров PBS при 37 градусов по Цельсию для соответствующего инкубационный период. В конце инкубации, получить перспективных инфракрасное изображение полибюбл до и после активации полигубблов с 801 нанометров ближнего инфракрасного лазера на восемь усилителей в течение пяти минут три раза в неделю в течение четырех недель для PLGADA полигублы и 14 недель для PL-PCLTA полигублы.
В каждой экспериментальной точке времени, собирать супернатант и добавить 400 микролитров свежего PBS на флакон. Затем рассчитайте температурные различия между полигубблами до и после лазерной активации на основе температурных значений от перспективных инфракрасных изображений. Добавление 10%CMC основе aqueous решение приводит к полной подвески polybubble для успешного обслуживания сферичности полибуббл.
Инъекция груза в полигуббл в отсутствие CMC приводит к утечке и последующей нехватке груза в полигубле. Для решения этой утечки, вязкость PCLTA может быть увеличена с помощью карбоната калия изолированы после окончания укупорки поликарлактона с триакрилатом и вязкость груза может быть увеличена путем смешивания груза с 5%CMC. Вязкость полибубблов PLGADA достаточна для облегчения центрирования груза и не требует модуляции через карбонат калия.
Обратите внимание, что статистически значимой разницы в связывающей эффективности антитела не наблюдается после смешивания антигена ВИЧ gp120/41 с трегалозой и без нее до инъекции полипубля. Задержки взрыв релизы наблюдаются в PLGADA polybubbles с acriflavine в середине дня 19 для polybubbles инкубируется при 37 градусов по Цельсию и на пятый день для полипубблов инкубируется при 50 градусов по Цельсию. Кроме того, plGADA polybubbles и PCL и PCLTA polybubbles, содержащие золотые нано стержни могут быть успешно активированы лазером несколько раз.
При формировании полигублов, пожалуйста, позаботьтесь, чтобы защитить реагенты от света, а также использовать решения немедленно. После разработки этой технологии, мы также хотели бы изучить автоматизации этого процесса для масштабирования производства polybubble.
