Поскольку распространенность нейрокогнитивного расстройства постоянно растет, наша цель состоит в том, чтобы получить, охарактеризовать и хранить качественные образцы тканей мозга для достижения точной диагностики и пролить свет на нейродегенеративные механизмы. Учитывая ассиметрию мозга, наша методология отбора проб позволяет проводить все мета-исследования на гисто логически четко определенных тканях обоих полушарий, и многие данные могут быть собраны и коррелированы через глубокое обучение. Часто наблюдается аддитивное воздействие на повреждение мозга множественными патологиями.
Определенный диагноз требует сочетания клинического синдрома с невропатологическими выводами для обнаружения патогенеза заболевания и возможной терапии. Свежие процедуры резки, а также макро-раздел управления сложно, но также имеют важное значение для достижения хороших результатов. Обученная и сплоченная команда имеет решающее значение для преодоления этих трудностей.
Наш протокол включает в себя ряд шагов, которые требуют ловкости млекопитающих, поэтому визуальная демонстрация может быть более полезной, чем описательные тексты для исследователя, желающего освоить эти методы. После подтверждения чематографии, используйте острый скальпель, чтобы сделать разрез кожи головы через кожу волос и подкожной ткани на корональной пластине от кончика мастоидного процесса с одной стороны на другую, проходя через вершину. Отделить две складки кожи головы тщательно от черепа и продолжать разрез, пока желтый супер орбитальный жир становится видимым.
Отражение кожи головы передней и тянуть другой раздел ткани задним. Используя скальпель и типсы, собрать небольшой образец височной мышцы с каждой стороны черепа, поместив один образец в 4%формальдегид, а другой образец на четыре градуса по Цельсию. С помощью электрической пилы вырезать череп в V вырезать на лобной стороне и удалить тюбетейку.
После резки околения, урожай один кусок дуры для фиксации, а другой для замораживания. Вставьте 20 калибровочных 3,5 дюймовый иглы прилагается к 10 миллилитров шприц через корпус мозоля для достижения третьего желудочка и втягивать поршень, чтобы получить около 10 миллилитров спинномозговой жидкости. Оцените цвет внешнего вида и мутность жидкости и измерьте рН.
Аккуратно потяните на обе лобные доли, чтобы поднять мозг и сократить как зрительные нервы infundibulum, внутренние сонные артерии и третий, четвертый, пятый и шестой черепных нервов. Вырезать тенторий для достижения задней ямки и сократить позвоночных артерий и нижних черепных нервов. Затем вставьте скальпель как можно глубже через foramen magnum, чтобы сократить наиболее caudal часть медулы и тщательно удалить весь мозг.
Используйте скальпель, чтобы появиться к кости над пещерой Мекеля и собирать гассерианский ганглия с каждой стороны для фиксации и замораживания. Используйте хирургический молоток и стамеску, чтобы сломать костлявую селла turcica и удалить гипофиз для фиксации в 4%формальдегида. Осмотрите череп и весь мозг от макроскопических изменений и сосудистых изменений.
Используйте измерительную ленту для измерения поперечных и передних диаметров осанки мозга и взвешивания мозга по шкале. Тщательно извлекайте круг Уиллиса для макроскопической оценки наличия анатомиических вариантов, поражений или стеноза сосудов. Отделите и осмотрите мозжечок, мозжечок и ствол мозга перед взвешиванием тканей индивидуально.
Удалите один-два, два-четыре сантиметра в квадрате кусочки лептоменинга из вытяженности и сохранить образцы в полной высокой глюкозы DMEM культуры среды на четыре градуса по Цельсию. Урожай шишковидной железы для фиксации в 4%формальдегида и удалить обонятельные луковицы и зрительные нервы для фиксации и замораживания одной из каждой пары. Поместите мозжечок, мозжечок и ствол мозга на лед при четырех градусах по Цельсию.
Когда все ткани, представляющие интерес были собраны использовать супер клей, чтобы прикрепить кости и использовать хирургическую иглу, и неаспасаемые швы, чтобы сшить обратно кожу головы. Для вскрытия банка мозга использовать рассечение ножа, чтобы сократить ствол мозга аксиально и сделать первый разрез на уровне рострального среднего мозга через верхний колликул, чтобы получить два ломтика подвергать substantia nigra. Вырезать ствол мозга на 10, восемь миллиметров ломтиков заботясь включить разрезы, проходящие через ростральные пончики вблизи верхних окраин четвертого желудочка наблюдать локус caeruleus и через medulla продолговатой уступает акустической стрии, чуть выше нижней вершины четвертого желудочка, чтобы получить ломтики, включая спинное моторное ядро блуждающего.
Этикетка всех ломтиков в ростральной хвостовой манере, как BS для ствола мозга следуют арабские цифры. После последнего раздела ствола мозга используйте обозначение SC для спинного мозга, а затем арабские цифры. Вырезать мозжечок на сагиттаальной плоскости, чтобы отделить два мозжечковых полушария на уровне вермы и выполнять sagittal секционирования, чтобы получить пять ломтиков от каждого полушария.
Назовите все срезы из вермы как CBR или CBL для правого и левого мозжечка соответственно, и используйте арабские цифры для идентификации каждого раздела. Далее, отделить два полушария головного мозга через корпус мозоли на sagittal плоскости до нарезки полушария, как сингулярно вдоль корональной плоскости, проходящей между оптической chiasm и млекопитающих органов через лобной доли височного полюса, передней cingulate, передней комиссарии, ядро несовершеннолетних, и базальных ганглиев. Сделайте второй разрез около одного сантиметра задним ходом, проходя через маммиллярные тела и обнажая базальные ганглии, передний таламус суб таламус и миндалины.
Продолжайте нарезку, чтобы вскрыть передние и задние области до тех пор, пока для каждого полушария не будут получены ломтики от 15 до 21 сантиметра. Поместите срез на плоскую поверхность, как они достигли после их первоначального положения в передней задней направлении от фронтального до затылочной полюса, с частью непрерывной с предыдущими слайдами, обращенными вверх. Когда все ломтики были помещены выберите основные разделы, которые будут установлены для гистопатологии, включая ранее приобретенные разделы и гиппокампа, теменной и затылочной разделов, и этикетки ломтики, как L или R следуют арабские цифры, включая этикетку с указанием того, ломтик должен быть фиксированной или замороженные.
Когда все ткани были раздельными и помечены, получить изображение для каждой серии разделов до их фиксации или замораживания. Для замораживания образцов поместите зарезервированные альтернативные секции ткани на предварительно замороженный алюминиевый лоток и накройте секции взаимосвязанной алюминиевой пластиной, чтобы держать их плоскими. Затем заморозить ломтики в жидком азоте в течение трех минут, прежде чем поместить замороженные образцы внутри полиэтиленовый пакет помечены с их соответствующими идентификационными кодами и ломтик номера для хранения в соответствующей криогенной коробке при 80 градусов по Цельсию.
Для фиксации образцов поместите зарезервированные альтернативные секции ткани в отдельные кусочки марли и поместите ломтики в 10%фосфат буферный раствор формалина в течение пяти дней в четырех градусах по Цельсию холодной комнате. 24 из 27 собранных мозгов получили полную невропатологическую характеристику с определенным клиническим патологическим диагнозом. Предварительный количественный анализ электроэнцефалограммы ряда из 36 доноров мозга показывает, что основной процент альфа-ритма значительно ниже при основных нейрокогнитивных расстройствах, чем при нормальном пожилом легком нейрокогнитивном расстройстве.
Здесь показан пример асимметричной патологии с атрофией правой стороны, очевидной макроскопически с тяжелыми желудочковыми расширениями, наблюдаемыми в правой корональной секции по сравнению с левой. Другой случай показывает инфаркт правого полушария, в то время как другой образец показывает явную атрофию правого маммильного тела. Макро разделы могут быть окрашены для выявления потери миелина или распределения иммунореактивности в полушариях.
Эти образцы от близнецов, которые имели клиническое начало болезни Альцгеймера в разные сроки из-за эпигенетических и экологических факторов. Тем не менее, микроскопический анализ выявил очень похожую невропатологическую картину, указывая на высокую патологию болезни Альцгеймера и амилоидную ангиопатию. У этих двух пациентов, однако, тот же клинический диагноз болезни Альцгеймера не совсем соответствует невропатологических особенностей, которые показали деменции дуэт в нескольких этиологий.
Действительно, первый случай представил Тела Леви в извилине одной лжи и substantia nigra. А второй случай показал тела Леви, связанные с невритами Леви в миндалинах и в ядре несовершеннолетних. Фотография ломтиков тщательно для точной идентификации анатомических областей во время микроскопического анализа.
Фиксация и замораживание ломтиков синглов также важны для сохранения микроструктуры тканей Omics топографии активации генов и распределения белка и коррелируют эти данные с гистопатологией. Клеточные культуры из хорошо охарактеризованных тканей, а также исследование патогенеза болезни. Всегда носите адекватное личное защитное оборудование, как жилет ткани мозга считается потенциально инфекционным и потому, что использование опасных инструментов, таких как острые инструменты и жидкий азот не требуется.
