כמו הפרעה נוירוקוגניטיבית השכיחות עולה ללא הרף, המטרה שלנו היא להשיג, לאפיין ולאחסן דגימות רקמת מוח איכותיות כדי להשיג אבחון מדויק לשפוך אור על המנגנונים neurodegenerative. בהתחשב בא-סימטריה מוחית, מתודולוגיית הדגימה שלנו מאפשרת לבצע את כל מחקרי המטא על רקמות מוגדרות היטב מבחינה היסטולוגית משתי ההמיספרות ונתונים רבים ניתן לאסוף ולתאם באמצעות למידה עמוקה. השפעות תוסף על נזק מוחי על ידי פתולוגיות מרובות נצפו לעתים קרובות.
האבחנה המובהקת דורשת שילוב של תסמונת קלינית עם הממצאים הנוירופתולוגיים כדי לגלות פתוגנזה של מחלה, וטיפולים אפשריים. הליכי חיתוך טריים, כמו גם ניהול מקטע מאקרו הם מסובכים, אך הם גם חיוניים כדי להשיג תוצאות טובות. צוות מיומן ומגובשת הוא חיוני כדי להתגבר על קשיים אלה.
הפרוטוקול שלנו כולל סדרה של צעדים הנדרשים קריטריון יונקים, ולכן הדגמה חזותית יכולה להיות שימושית יותר מאשר טקסטים תיאוריים עבור חוקר המבקשים לשלוט בטכניקות אלה. לאחר אישור thanatography, להשתמש באזמל חד כדי להפוך חתך הקרקפת דרך עור השיער ואת הרקמה התת עורית על צלחת coronal מה קצה תהליך mastoid מצד אחד לשני, עובר מעל הקודקוד. מפרידים את שני קפלי הקרקפת בזהירות מהגולגולת וממשיכים את החתך עד שהשומן הצהוב במסלול העל הופך גלוי.
לשקף את הקרקפת באופן קשה ולמשוך את החלק השני של הרקמה האחורית. בעזרת אזמל וממטרים, קוצרים דגימה קטנה של שריר הזמן בכל צד של הגולגולת, ומניחים דגימה אחת ב-4% פורמלדהיד והדגימה השנייה בארבע מעלות צלזיוס. באמצעות מסור חשמלי לחתוך את הגולגולת בחתך V בצד הקדמי ולהסיר את הכיפה.
לאחר חיתוך קרום הרעם, לקצור חתיכה אחת של דורה עבור קיבעון ועוד להקפאה. הכנס מחט 20 מד 3.5 אינץ מחובר מזרק 10 מיליליטר דרך כפיס המוח כדי להגיע החדר השלישי ולחזור בוכנה כדי להשיג כ 10 מיליליטר של נוזל השדרה המוחי. להעריך את צבע המראה ואת turbidity של נוזל ולמדוד את ה- pH.
משוך בעדינות את שתי האונות הקדמיות כדי להרים את המוח ולחתוך את שני עצבי הראייה infundibulum, העורקים הראשיים הפנימיים ואת העצבים הגולגולתיים השלישי, הרביעי, החמישי והשישי. חותכים את הטנטוריום כדי להגיע לפוסה האחורית וחותכים את עורקי החוליות ואת עצבי הגולגולת התחתונים. ואז להכניס את האזמל עמוק ככל האפשר דרך מגנום foramen לחתוך את החלק caudal ביותר של medula בזהירות להסיר את המוח כולו.
השתמש באזמל כדי מופיע לעצם מעל המערה של מקל ולאסוף את הגנגליון Gasserian מכל צד לקיבעון והקפאה. השתמש פטיש כירורגי ואזמל לשבור את טורצ'יקה סלה גרמי ולהסיר את בלוטת יותרת המוח עבור קיבעון ב 4% פורמלדהיד. בדוק את הגולגולת ואת המוח כולו משינויים מקרוסקופיים ושינויים בכלי הדם.
השתמשו בקלטת מדידה כדי למדוד את קטר היציבה הרוחבי והנודד של המוח ולשקול את המוח בסולם. בזהירות לאחזר את המעגל של ויליס להערכה מקרוסקופית לנוכחות של גרסאות אנטומיות, נגעים, או הנטנוזה כלי. להפריד ולבדוק את המוח הקטן, המוח הקטן, ואת גזע המוח לפני שקילה של הרקמות בנפרד.
הסר אחד עד שניים, שניים עד ארבעה סנטימטרים בריבוע חתיכות של leptomeninges מן קמור ולשמר את הדגימות בינוני תרבות DMEM גלוקוז גבוהה מלאה בארבע מעלות צלזיוס. לקצור את בלוטת האצטרובל עבור קיבעון ב 4% פורמלדהיד ולהסיר את נורות הריח ואת עצבי הראייה עבור קיבעון והקפאה של אחד מכל זוג. מניחים את המוח הקטן, המוח הקטן, ואת גזע המוח על קרח בארבע מעלות צלזיוס.
כאשר כל הרקמות של עניין נקצרו להשתמש דבק דבק סופר לחבר מחדש את העצם ולהשתמש מחט כירורגית, תפרים שאינם נספגים כדי לתפור בחזרה את הקרקפת. עבור ניתוח בנק המוח להשתמש בסכין ניתוח כדי לחתוך את גזע המוח axially ולעשות את החתך הראשון ברמה של midbrain rostral דרך קוליקולוס מעולה כדי להשיג שתי פרוסות כדי לחשוף את ניגרה substantia. חותכים את גזע המוח לתוך 10, שמונה פרוסות מילימטר דואג לכלול חתכים העוברים דרך פונס rostral ליד השוליים העליונים של החדר הרביעי להתבונן caeruleus לוקוס ודרך medulla oblongata נחותים stria אקוסטי, ממש מעל השיא הנחות של החדר הרביעי כדי לקבל פרוסות כולל גרעין המנוע הגבי של vagus.
סמן את כל הפרוסות באופן סיבתי כ- BS עבור גזע המוח ואחריו ספרות ערביות. לאחר קטע גזע המוח האחרון, השתמש ב- SC הכינוי עבור חוט השדרה ואחריו ספרות ערביות. חותכים את המוח הקטן במישור הסגיטלי כדי להפריד בין שתי ההמיספרות המוחיות ברמת הוורמי ולבצע חתך קשתי כדי להשיג חמש פרוסות מכל חצי כדור.
תן שם לכל הפרוסות מהוורמיס כ- CBR או CBL עבור המוח הקטן הימני והשמאלי בהתאמה, ולהשתמש ספרות ערביות כדי לזהות כל מקטע. לאחר מכן, הפרד את שתי ההמיספרות של המוח הגדול דרך כפיס המוח במישור הסגיטל לפני חיתוך חצי הכדור באופן ייחודי לאורך המישור הקורונאלי העובר בין הצ'יאסם האופטי לבין הגופים המממיליים דרך עמוד הרקתי הקדמי של האונה הקדמית, צינגולציה קדמית, קומיסור קדמי, גרעין של גנגליה קטנה ובזלית. בצע חתך שני על סנטימטר אחד אחורי עובר דרך גופים mammillary וחשיפת גנגליה בסיסית, תלמוס תולמוס לפני, ואמיגדלה.
המשיכו לחתוך כדי לנתח את האזורים הקדמיים וה האחוריים עד שהושגו פרוסות של 15 עד 21 ס"מ עבור כל חצי כדור. מניחים את הפרוסה היא על משטח שטוח כפי שהם מושגים בעקבות המיקום המקורי שלהם בכיוון האחורי הקדמי מן הקדמי אל מוט העורף, עם החלק רציף עם השקופיות הקודמות פונה כלפי מעלה. כאשר כל הפרוסות הוצבו, בחר את החלקים העיקריים שיש לתקן עבור היסטופתולוגיה, כולל המקטעים שנרכשו בעבר ואת מקטעי ההיפוקמפוס, הפרקקודים וה העורפיים, ותייג את הפרוסות כ- L או R ואחריהן ספרות ערביות כולל תווית המציינת אם יש לתקן או להקפיא את הפרוסה.
כאשר כל הרקמות כבר חתוכו ותיוג, לקבל תמונה עבור כל סדרה של קטעים לפני קיבעון או הקפאה שלהם. כדי להקפיא את הדגימות מניחים את חלקי הרקמה החלופיים השמורים על מגש אלומיניום קפוא מראש ומכסים את החלקים בצלחת אלומיניום שלוחה כדי לשמור אותם שטוחים. לאחר מכן להקפיא את הפרוסות בחנקן נוזלי במשך שלוש דקות לפני הצבת דגימות קפוא בתוך שקית ניילון שכותרתו עם קודי הזיהוי המתאימים שלהם מספרי פרוסה לאחסון בתיבה קריוגנית המתאימה ב 80 מעלות צלזיוס.
כדי לתקן את הדגימות למקם את חלקי רקמה חלופיים שמורים חתיכות בודדות של גזה ולמקום את הפרוסות 10% פוספט תפתור פורמלין במאגר במשך חמישה ימים בחדר קר ארבע מעלות צלזיוס. 24 מתוך 27 מוחות שנקטפו קיבלו את האפיון הנוירופתולוגי המלא עם אבחנה פתולוגית קלינית מובהקת. ניתוח אלקטרונצפלוגרם כמותי ראשוני של סדרה של 36 תורמי מוח מצביע על כך שאחוז קצב האלפא העיקרי נמוך משמעותית בהפרעות נוירוקוגניטיביות עיקריות מאשר בהפרעה נוירוקוגניטיבית קלה של קשישים רגילים.
כאן דוגמה לפתולוגיה אסימטרית מוצגת עם ניוון בצד ימין ניכר מקרוסקופית עם תדלודים חדריים חמורים שנצפו בסעיף coronal הימני לעומת שמאל. מקרה אחר מציג אוטם של חצי הכדור הימני, בעוד דגימה אחרת מראה ניוון ברור של הגוף הימני mammillary. מקטעי מאקרו יכולים להיות מוכתמים כדי לזהות אובדן מירלין או התפלגות של אימונואקטיביות בתוך ההמיספרות.
דגימות אלה הן תאומים שהיו להם התפרצות קלינית של מחלת אלצהיימר במסגרות זמן שונות עקב גורמים אפיגנטיים וסביבתיים. עם זאת, הניתוח המיקרוסקופי חשף תמונה נוירופתולוגית דומה מאוד המצביעה על פתולוגיה גבוהה של מחלת אלצהיימר ואנגיופתיה עמילואיד. בשני חולים אלה עם זאת, אותה אבחנה קלינית של מחלת אלצהיימר לא בדיוק תאם את התכונות נוירופתולוגיות, אשר חשף צמד דמנציה באטיולוגיות מרובות.
ואכן, המקרה הראשון הציג גופי לוי בשקר יחיד gyrus ו substantia ניגרה. והמקרה השני הראה גופי לוי הקשורים לוי neurites באמיגדלה ובגרעין קטינים. צילום הפרוסות הוא בזהירות לזיהוי מדויק של האזורים האנטומיים במהלך הניתוח המיקרוסקופי.
קיבוע והקפאה של פרוסות סינגלים חשובים גם לשמירה על המיקרו-מבנה הרקמות Omics הטופוגרפיה של הפעלת גנים והפצה של חלבונים ותיאום נתונים אלה עם ההיסטופתולוגיה. תרבות תאים מרקמות מאופיינות היטב, גם חקירה של פתוגנזה המחלה. תמיד ללבוש ציוד מגן אישי נאותה כמו רקמת המוח מוקנים נחשב זיהומיות פוטנציאלית, כי השימוש בכלים מסוכנים כגון מכשירים חדים חנקן נוזלי נדרש.
