Этот метод основывается на установленных крыс квалифицированных протоколов достижения для автоматизации обучения и тестирования, обеспечивая эффективные средства для приобретения больших наборов данных относительно быстро. Это сводит к минимуму экспериментатор усилия, позволяя трехмерной реконструкции forelimb кинематики. Кинематика может быть использована для оценки воздействия точно приученных вмешательств или коррелирует с физиологическими записями.
С некоторыми корректировками, этот метод также может быть применен у мышей. Начните с включением света и поместите крысу в квалифицированную камеру достижения. Используйте типсы, чтобы держать гранулы через достижение слот в передней части коробки.
Разрешить крысы съесть три гранулы из типсов. Потяните гранулы обратно в следующий раз крыса пытается съесть гранулы из типсов и повторить, пока крыса достигает гранулы с одной лапой наиболее из 11 достигает с указанием лапы предпочтения. Далее, выровнять гранулы доставки стержня со стороны достижения слот контралатеральной к предпочтительной лапы крысы.
Поместите гранулы на удилище доставки. Затем используйте типсы для приманки крысы с гранулами, но направить крысу к доставке стержня так, что его лапа попадает гранулы на стержень. После того, как крыса попыталась 10 достигает доставки стержня без приманки, заранее крысы на следующий этап.
Далее, положение гранулы доставки стержня на основе предпочтений лапы крысы и установить его на позицию два. Установите высоту стержня доставки гранул с помощью пульта дистанционного управления. Как только стержень доставки находится на правильной высоте, удерживайте нужное число до тех пор, пока свет не моргнет красным, чтобы установить.
Затем поместите крысу в камеру и приманки крысы к спине с гранулами. Когда крыса движется достаточно далеко в задней части камеры, что он нарушит инфракрасный луч, если автоматизированная версия работает, переместить гранулы доставки стержня на позицию три. Наконец, подождите, пока крыса достигнет гранулы, а затем переместить гранулы доставки стержня обратно в положение два.
Поместите новую гранулу на удилище доставки, если сбил. Повторите эти шаги постепенно травли крысы все меньше и меньше, пока крыса начинает один, перейти к спине просить гранулы, не будучи приманкой, и два, сразу же перейти к передней после запроса гранулы в спину. После того, как крыса сделала это 10 раз, начать обучение по автоматизированной задаче.
Чтобы настроить автоматизированную систему, включите свет в камере и пополнить резервуар гранул. Распоить стержень доставки гранул в соответствии с предпочтением лапы крысы. Убедитесь, что позиции привода установлены правильно.
Затем включите компьютер и откройте квалифицированную программу достижения. Введите идентификационный номер крысы под предметом и выберите предпочтение лапы из меню высадки рук. Укажите путь сохранения для видео.
Затем установите время сеанса и количество максимальных видео. Установите длительность подъема гранул, а также и обеспечить раннее достижение казни. Далее, чтобы сделать калибровочные изображения, поместите руку помощи внутри достигающих камеры и ткните аллигатора клип через достижение слот.
Держите куб перед достижением слот с аллигатора клип. Затем распоимить куб так, чтобы красная сторона появилась в верхнем зеркале, зеленая сторона в левом зеркале и синяя сторона в правом зеркале. В поведенческой программе убедитесь, что порог окупаемости инвестиций установлен на очень большое значение.
Нажмите кнопку запуска и как только камера инициализированной кнопки становится зеленым, нажмите начать, чтобы начать видео приобретения. Нажмите Cal Mode затем принять изображение, нажав Take Cal изображения. Слегка перемести кубик и сделай другое изображение.
Повторите еще раз в общей сложности три изображения. Наконец, остановите программу, нажав стоп, а затем нажмите кнопку знака стоп. Удалите руку помощи и куб из коробки.
Будьте осторожны, чтобы не ударить что-нибудь в поведенческой камере после калибровки изображения были приняты в тот день. Во-первых, поместите крысу в квалифицированную достигающих камеру. Нажмите на белую стрелку, чтобы запустить программу.
Затем установите положение ROI для обнаружения лап, регулируя x смещение, у смещения, ширину рентабельности инвестиций и высоту рентабельности инвестиций. Распоитите roi в боковом зеркале, которое показывает спинку лапы прямо перед достигающих слот и нажмите кнопку начать, чтобы начать программу. Пока крыса не достигает, отрегулируйте низкое пороговое значение рентабельности инвестиций до тех пор, пока значение триггера живой рентабельности не будет колебаться между нулем и одним.
Затем установите порог окупаемости инвестиций, чтобы быть значительно больше, чем живой ROI триггер значение во время носа тыкает и ниже, чем живой ROI триггер значение, когда крыса достигает. Отрегулируйте до тех пор, пока видео постоянно срабатывает, когда крыса достигает, но не тогда, когда он тыкает носом через слот. Мониторинг первых нескольких испытаний, чтобы убедиться, что все работает правильно.
Когда крыса достигает, прежде чем просить гранулы, наблюдать рано достигает увеличения числа. Когда крыса достигает после запроса гранулы, наблюдать видео число увеличивается в то время как копия видео сохраняется в виде файла бен. Наконец, после того, как время сеанса или максимальное количество видео будет достигнуто, нажмите кнопку знака стопа.
Результаты показывают, что через 20 дней крысы приобретают квалифицированную задачу достижения. Здесь показаны траектории достижения из одной сессии. Это представляет собой только начальное продвижение лапы для удобства представления.
Кроме того, если триггер обнаружения лапы точно не установлен, в кадре имеется значительная изменчивость, при которой лапа нарушает достигающих слот, что может привести к изменчивости, когда вмешательства срабатывают во время достижения движений. Помимо тщательного обращения с животными, никаких мер предосторожности не будет принято в этом протоколе. Наиболее важно правильно установить порог рентабельности инвестиций, чтобы видео или другие мероприятия запускаются в соответствующие моменты.
Этот метод может быть в паре с несколькими другими методами, такими как оптогенетика, визуализация кальция, и генетические модели, которые могут решать вопросы, начиная от базового управления двигателем патофизиологии расстройства движения. Этот метод позволяет корреляции детального охвата и понять кинематики с физиологическими записями или вмешательства, что позволяет исследователям ответить не только, если, но как движения меняются с изменениями нейронных схем.
