Наш протокол является тестом зрения для мышей. Он является одновременно надежным и простым в репликации. Хотя многие тесты мыши видение доступны, надвигающийся эксперимент является одним из немногих методов, чтобы проверить образ формирования пути, который не является визуальным рефлекторным путем.
В то время как многие другие визуальные анализы поведения требуют обширной подготовки в хирургии животных, надвигающийся метод требует небольшой экспериментальной подготовки. Начните со построения прямоугольного открытого корпуса крышки с использованием алюминиевого обрамления и ПВХ панелей для дома мыши во время надвигающейся визуальной презентации стимулов. Положите лист бумаги, чтобы покрыть весь пол корпуса, чтобы обеспечить легкую очистку между испытаниями.
Затем добавьте непрозрачное укрытие в углу корпуса с входом, выходящим на центр арены для легкого входа и выхода. Защитите камеру с широкоугольным объективом к столу, установленную рядом с корпусом для захвата поведения мыши. Затем установите монитор компьютера поверх корпуса.
Подготовьте надвигающийся шаблон с использованием экспериментального программного обеспечения для кода для расширяющегося черного круга. Установите стимул, чтобы начать под визуальным углом в два градуса и расширить до 50 градусов в течение 250 миллисекунд и установить код, чтобы повторить стимул 10 раз с интервалом в одну секунду. Начните с выбора мыши для эксперимента, а также трех слепых мышей, чтобы обеспечить ответ на надвигающийся стимул был действительно визуально управляемое поведение.
Поместите здоровую мышь в корпус и дайте ей свободно исследовать его окрестности в течение семи-пяти минут до начала стимула. За 10 секунд до стимуляции запустите видеозапись на камеру. Как только мышь находится вдали от укрытия и свободно движется на открытой арене, начните надвигающиеся визуальные стимулы.
Наконец, перенесите мышь обратно в исходную клетку. Очистите корпус для следующей мыши, распыляя стены и убежище с 70% этанола и вытирая его и заменить бумажный пол лайнера, если загрязненные. Переместите убежище в то же первоначальное место, если переехал во время передачи животных и очистки корпуса.
За компьютером сохраните видеоклип для каждой мыши в формате AVI без сжатия файлов, чтобы обеспечить отсутствие потери данных при передаче программного обеспечения для анализа. Затем используйте программное обеспечение для анализа, чтобы отслеживать движение животного вокруг арены до, во время и после презентации стимула. Рассчитайте скорость и расстояние мыши от убежища.
Если изображение арены искажено из-за угла видео, исправь х и у координации до расчета. Наконец, сравните параметры до и после надвигающегося начала стимула, чтобы определить, как мышь ответила на раздражители. Будь то замораживание, бегство, или не демонстрируя никаких изменений в поведении.
Захваченные видеоклипы были проанализированы с помощью программного обеспечения коммерческой аналитики с функцией ручного отслеживания. Используя функцию отслеживания, положение мыши было определено в каждом кадре видео до, во время и после надвигающихся раздражителей. При полете скорость резко увеличивалась, и расстояние до укрытия соответственно увеличивалась.
В отличие от этого, скорость была около нуля миллиметров в секунду, когда мыши замерзли. Скорость была уменьшена по сравнению с управлением до надвигающейся и расстояние до купола не изменилось в течение этого периода. Важно помнить, чтобы получить базовый уровень движения до начала стимула или количественной реакции на стимул не может быть определена.
Важно провести несколько тестов для точной оценки зрения. Ученик свет рефлекс является одним из широко используемых методов, который гарантирует, что мышь имеет здоровые глаза. Механизм надвигающейся реакции до конца не понятен.
Этот метод может предоставить возможности для изучения механизмов распознавания движущихся объектов и реакции страха для нейробиологов.
