Nosso protocolo é um teste de visão para ratos. É robusto e fácil de replicar. Embora muitos testes de visão do mouse estejam disponíveis, o experimento iminente é um dos poucos métodos para testar o caminho de formação de imagens, que não é um caminho de reflexo visual.
Embora muitos outros ensaios de comportamento visual exijam treinamento extensivo em cirurgia animal, a técnica iminente requer pouco treinamento experimental. Comece construindo um gabinete de tampa aberta retangular usando enquadramento de alumínio e painéis de PVC para abrigar o mouse durante a apresentação de estímulos visuais iminentes. Coloque uma folha de papel para cobrir todo o piso do gabinete para garantir uma limpeza fácil entre os ensaios.
Em seguida, adicione um abrigo opaco em um canto do recinto com uma entrada voltada para o centro da arena para fácil entrada e saída. Fixar uma câmera com uma lente grande angular em um suporte montado na mesa adjacente ao gabinete para capturar o comportamento do mouse. Em seguida, configure um monitor de computador em cima do gabinete.
Prepare um padrão iminente usando software experimental para codificar para um círculo negro em expansão. Defina o estímulo para começar no ângulo visual de dois graus e expandir para 50 graus ao longo de 250 milissegundos e definir o código para repetir o estímulo 10 vezes com um intervalo de um segundo. Comece selecionando um mouse para o experimento, bem como três ratos cegos para garantir que a resposta ao estímulo iminente fosse realmente um comportamento visualmente guiado.
Coloque o rato saudável no gabinete e deixe-o explorar livremente seus arredores por sete a 15 minutos antes do início do estímulo. 10 segundos antes da estimulação, inicie a captura de vídeo na câmera. Uma vez que o rato está longe do abrigo e movendo-se livremente na arena aberta, comece os estímulos visuais iminentes.
Finalmente, transfira o rato de volta para sua gaiola original. Limpe o gabinete para o próximo rato pulverizando as paredes e refugiando com 70% de etanol e limpando-o e substitua o forro de papel, se sujo. Reposicione o refúgio para o mesmo local inicial se movido durante a transferência de animais e limpeza do recinto.
No computador, salve o clipe de vídeo para cada mouse em formato AVI sem compactação de arquivos, a fim de garantir nenhuma perda de dados durante a transferência para o software de análise. Em seguida, use o software de análise para rastrear o movimento do animal ao redor da arena antes, durante e depois da apresentação de estímulo. Calcule a velocidade e a distância do rato do refúgio.
Se a imagem da arena estiver distorcida devido ao ângulo de vídeo, corrija a coordenação x e y antes do cálculo. Finalmente, compare os parâmetros antes e depois do início do estímulo iminente para determinar como o mouse respondeu aos estímulos. Seja congelando, fugindo ou não demonstrando nenhuma mudança de comportamento.
Clipes de vídeo capturados foram analisados usando um software de análise comercial com uma função de rastreamento manual. Usando o recurso de rastreamento, a posição do mouse foi identificada em cada quadro do vídeo antes, durante e depois dos estímulos iminentes. Quando ocorreu o voo, a velocidade aumentou abruptamente e a distância para o abrigo reduziu em conformidade.
Em contraste, a velocidade era de quase zero milímetros por segundo quando os ratos congelaram. A velocidade foi reduzida em comparação com o controle antes de se aproximar e a distância para a cúpula não mudou durante este período. É importante lembrar de obter uma linha de base de movimento antes do início do estímulo ou uma reação quantitativa ao estímulo não pode ser determinada.
É importante realizar vários testes para avaliação precisa da visão. O reflexo da luz da pupila é um método comumente usado, que garante que o rato tenha olhos saudáveis. O mecanismo de resposta iminente não é totalmente compreendido.
Essa técnica pode oferecer oportunidades para explorar mecanismos de reconhecimento de objetos em movimento e respostas de medo para neurocientistas.
