Общим преимуществом этой техники является то, что зрительные воспоминания могут быть изучены контролируемым образом в фиксированной, а не свободно движущихся древесных муравьев. Этот метод может быть использован для изучения нервной основы визуального обучения в очень устоявшейся модели навигации насекомых. Чтобы выбрать муравьев, которые мотивированы есть, поместите слайд с каплей сахарозы внутри небольшой коробки с флуоном, покрывающим стены.
Затем поместите каждого выбранного муравья в коробку и ждать, чтобы увидеть, если он питается капли сахарозы. Если муравей питается сахарозой падение немедленно передать его в пустую коробку. После этого перенесите каждого муравья в отдельную трубку и кратко поместите трубку в морозильную камеру, чтобы обездвижить муравьев.
Поместите обездвиженого муравья в держатель через разрез в картоне, схвяв его за сустав между головой и грудной клеткой. Затем используйте булавки насекомых, чтобы обеспечить антенны остаются на стороне головы. Используя изготовленный на заказ нагревательный элемент, растопить воск, чтобы прикрепить кончик булавки насекомого к голове муравья, параллельно картону.
После того, как воск высох, удалить насекомых булавки из антенн, и тщательно удалить муравья из держателя. Затем закрепите булавку с насекомыми, держащую муравья в глиняном цилиндре, и зафиксирует под ним пластиковый держатель на заказ. Убедитесь, что муравей поддерживает типичную осанку стоя и что все тело, кроме головы, может свободно двигаться.
Во-первых, поместите камеру с макрообъективом поверх белой акриловой коробки прямо над держатель муравья, и поместите муравья в держатель внутри коробки. Затем прикрепите иглу и заполненный сахарозой шприц, безусловный стимул, к ярко-голубому картону прямоугольника, условному стимулу, для использования в качестве визуального сигнала. Для парной подготовки начните записывать муравья за 10 секунд до представления условного стимула.
Если муравей выполняет Maxilla Labium Extension Reflex, или MaLER, в течение этого времени, отложить испытание на несколько секунд. Перемести шприц с условным стимулом перед муравьем на 10 секунд. Затем источать одну каплю сахарозы из шприца и кормить муравья в течение пяти секунд.
Повторите процедуру парной тренировки 10 раз с пятью минутами между каждой пробной версией. Для неоплаченных тренировок запустите видеозапись за 10 секунд до суда. Затем, представить условный стимул, как описано ранее.
Через 2,5 минуты, доставить безусловный стимул сахарозы непосредственно в рот муравья со шприцем без синего картона. После завершения учебных испытаний начните запись камеры за 10 секунд до этапа тестирования. Затем, представить условный стимул для муравья в течение 10 секунд.
После того, как тест закончился, доставить сахарозы безусловный стимул для муравья, чтобы подтвердить муравья по-прежнему мотивированы кормить. Используя запись, сделанную во время тренировок и тестирования, оценка ответов муравья в течение 10 секунд условного представления стимула. Наконец, отделить ответы муравья во время условной презентации стимула на три категории, полное расширение с движением, как будто кормления, полное расширение без движения, или частичное расширение челюсти лабия или челюсти palps.
В этом протоколе, муравьи, которые прошли парную подготовку выполняется все более MaLER в ответ на условный стимул. Напротив, неспареные муравьи не показали значительного увеличения MaLER во время обучения. Чтобы изучить их краткое и среднесрочное воспоминание, муравьи были протестированы либо через 10 минут или через час после последнего учебного испытания.
Для обоих тестов, доля муравьев, выполняющих MaLER в ответ на условный стимул был выше, когда они прошли парную подготовку. Ответы MaLER были разделены на три категории: FEM, FE и PE. Как правило, муравьи выполняют FEM или PE чаще, чем FE. Тем не менее, лишь немногие муравьи последовательно продемонстрировали тот же тип ответа. При попытке этой процедуры, важно помнить, чтобы обращаться с муравьи тщательно, чтобы уменьшить уровень стресса и любой потенциальный ущерб, особенно во время использования.
Адаптируя эту процедуру, различные визуальные стимулы могут быть использованы для того, чтобы исследовать свойства древесных муравьев использовать для формирования зрительных воспоминаний. После своего развития, этот метод прокладывает путь для исследователей в области насекомых неврологии и навигации для изучения визуальных ассоциативных воспоминаний с древесными муравьи для микрофа.
