Иммунотерапия в сочетании с химиотерапией представляет собой инновационный подход к разработке эффективной терапии рака. Основными целями являются достижение синергетического, терапевтического эффекта, снижения дозы и токсичности, а также минимизация или задержка индукции лекарственной устойчивости. Однако, по практическим и этическим соображениям, невозможно определить синергизм у пациентов. Таким образом, до прямого сочетания в клинических испытаниях, Prenicaptor комбинированных исследований, in vitro, и / или у животных, должны быть проведены для получения обоснования для клинических исследований. Простой надежный метод количественной оценки синергизма между препаратами основан на уравнении комбинированного индекса, разработанном Шуаном Талале, как показано в этом видео. Используя этот метод, и его компьютеризированное моделирование, мы свидетельствуем здесь, синергизм между моноклональным антителом 8B6, который специфичен для O-Acetyl-GD2 Ganglioside нейробластомы антигена и химиотерапевтического препарата Топотекан на нейробластомных клетках. Короче говоря, после определения эффективной дозы 50 значений каждого соединения в человеке ИМО, 5 нейробластомы клеточной линии, эти клетки были интубированы с справедливыми соотношениями двух соединений, и значения комбинированного индекса были рассчитаны с помощью автоматизированного компьютерного моделирования. Затем мы подтвердили эти результаты в Vivo, в ИМО, 5 опухолевых ксенографных моделей. Мы выращивали клетки IMR-5 в колбе T75, наблюдали за ними под микроскопом, чтобы проверить слияние клеток. Асперат клеточной среды из колбы, мыть с 5 мл PBS. Добавьте 3 мл решения 0.05%EDTA/PBS. Верните колбу в инкубатор на 3 минуты. Изучите культуру клеток под микроскопом для клеточного отслоения. Добавьте 10 мл полной клеточной среды в колбу и перенесите подвесную клетку в стерильную коническую трубку 15 мл. Центрифуга в течение пяти минут при 300 g.Count клетки с помощью гемоцитометра. Удалите и отбросьте супернатант. Re приостановить клетки в в полный рост Medium.Adjust среднего объема, чтобы получить окончательную концентрацию 100000 клеток / mL.Seed 84 скважин, 96 хорошо культуры пластины с 10000 клеток каждый, что составляет 100 микролитров клеточной подвески. Инкубационные клетки в течение 18 часов в клеточном инкубаторе.Разбавить моноклональные антитела в 500 микролитров полного роста среднего для получения антител рабочего решения с моноклональной концентрации антител 240 микро-граммов на mL.Perform 5 двукратный серийный бред, как указано в протоколе. Разбавить препарат в 500 микролитров полного роста среднего для получения препарата рабочий раствор с окончательной концентрацией 120 наномоляров. Выполните 5, двукратных серийных заблуждений, как указано в протоколе. Разбавить так же, как препарат плюс растворы моноклональных анибоди. Чтобы прийти к окончательной концентрации, перенесите 50 микролитров каждого лекарственного раствора в соответствующие скважины, как показано на этой экспериментальной компоновке. Инкубировать клетки в течение 72 часов в инкубаторе. Добавьте в каждую колодец 10 микролитров раствора реагентов МТТ. Инкубировать при 37 градусах по Цельсию в течение 4 часов. Добавьте 100 микролитров раствора лицина в каждую колодец с помощью многоканальной пипетки и тщательно перемешайте с помощью пипетки. Инкубировать при 37 градусах по Цельсию в течение 4 часов в увлажненной камере. Избавьте абсорбенты на 570 и 620 нанометров с помощью спектрофотометра. Рассчитайте жизнеспособность ячейки следующим образом. Рассчитайте значения, затронутые фракцией, используя следующее уравнение. Запустите программное обеспечение моделирования, нажмите на новую кнопку эксперимента, чтобы получить главное окно. Ввемите название эксперимента. Нажмите на новый один препарат. Ввемите имя. Ввейте аббревиатуру. Введи единицу концентрации наркотиков. Введите данные 1 доза и значение FA. Нажмите Enter.Repeat этот шаг до тех пор, пока не будут введены все точки данных. Нажмите Finished.Follow те же шаги, чтобы войти Моноклональные точки данных антител. Нажмите Новый препарат Combo.Select наркотиков и моноклональных антител. Выберите Постоянный Ratio.Click OK. Ввемите имя. Ввейте аббревиатуру. Введи препарат моноклональный коэффициент антител. Введите данные 1 доза. Нажмите Enter.The программа будет автоматически рассчитывать дозы моноклональных антител 8B6 и комбо. Введите данные 1 значение FA.Нажмите Enter.Repeat этот шаг до тех пор, пока не будут введены все точки данных. Нажмите Finished.Then, нажмите Создать Report.Select наркотиков и моноклональных антител, а затем нажмите OK. Выберите Combo, а затем нажмите OK. Выберите заголовок, таблицу CI и сводную таблицу, а затем нажмите OK. Ввените имя файла и анализ и нажмите сохранить для создания отчета. Отчет автоматически открывается в веб-браузере по умолчанию. Отчет содержит сводный раздел таблицы, который включает в себя название, дату, окончательное название, описание записки, м, Dm, и r параметров, эффективная доза 50 для любого агента, используемого в качестве монотерапии или в комбинации, и комбинация индексная таблица для каждой комбинации в эффективной дозе 50, 75, 90, и 95.A значение комбинированного индекса меньше, чем 1 указывает синергизм. Значение, равное одному, указывает на дополнительную способность. Значение, большее 1, указывает на антагонизм. Оттепель подвал мембраны матрицы на ночь, погружая флакон во льду в 4 градуса C холодильник перед использованием. Вся культура износа, или средств массовой информации в контакте с цокольной мембраны метрики должны быть prechilled. Урожай культуры IMR5. Перенесите клетки в коническую трубку и центрифугу 15 мл при 300 г в течение 5 минут. Откажитесь от супернатанта. Вымойте клетки с 15 мл ледяной PBS в два раза. Подготовка клеточной подвески для 5 миллионов клеток на мл в ледяной PBS. Перенесите подвеску ячейки в микротрубки 1,5 мл. Swivel подвале мембраны матричный флакон. Добавьте 1 том матричного реагента мембраны подвала, смешанного трубоустановки для получения клеточной подвески 2,5 миллиона клеток на mL.Keep подвеска клетки на льду. Бритье фланг, где инъекция будет сделано. Смешайте клетки и тщательно нарисуйте подвесную клетку в шприц 1 мл, установленный с иглой 21 г. Убедитесь, что в шприце нет пузырьков воздуха. Дезинфицировать область прививки мышей антисептическим раствором. Аккуратно сожмите кожу мыши на фланге между пальцами в месте инъекции. Вставьте иглу точно в кожу. Не поместите иглу глубоко в ткань, чтобы застраховать подкожные инъекции. Впрыснуть 100 микролитров подкожной подвески ячейки IMR5. Поверните шприц, чтобы предотвратить распространение жидкости и снять иглу. Мониторинг мышей для массы тела и роста опухоли. Измерьте длину и ширину опухоли калибром. Рассчитайте объем опухоли с помощью этой формулы. Начало терапии, когда опухоли достигли среднего объема от 50 до 60 мм
