Nossa pesquisa se concentra em tumores cerebrais adultos. Isso inclui glioblastoma, glioma primário, bem como metástase cerebral. Desenvolvemos modelos de camundongos com tumor cerebral para identificar tratamentos mais eficazes para pacientes com essas condições fatais.
O glioblastoma é o tumor cerebral primário mais grave e mais frequente. Em mais de 20% dos pacientes com glioblastoma, esse tumor cerebral não pode ser removido cirurgicamente. Nesses casos, a Terapia Térmica Intersticial a Laser, em suma, LITT, é usada clinicamente para atingir esses tumores cerebrais agressivos.
LITT é uma tecnologia de ablação térmica de tecidos que é clinicamente aplicada para tumores cerebrais cirurgicamente inacessíveis. Nossa pesquisa usando modelos de camundongos LITT fornecerá informações importantes sobre as respostas do tecido e das células ao tratamento térmico no tumor e no tecido cerebral circundante. Uma melhor compreensão das alterações moleculares e celulares causadas pelo LITT no cérebro nos permitirá usar o LITT de forma mais eficaz para melhorar os resultados para pacientes com tumor cerebral.
O desafio experimental mais crítico é o direcionamento e o tratamento precisos do tumor. Ao contrário da cirurgia LITT, usada clinicamente em pacientes humanos, a maioria dos modelos não possui imagens de ressonância magnética em tempo real, dificultando o direcionamento do tumor sem qualquer auxílio visual. Para começar, registre o peso do camundongo anestesiado para calcular a dosagem correta do medicamento.
Depile cuidadosamente a área cirúrgica, evitando os olhos, orelhas e bigodes. Posicione os incisivos do mouse no orifício da barra de mordida e ajuste o cone do nariz de uma estrutura estereotáxica até que ele se encaixe perfeitamente e, em seguida, aperte o parafuso de retenção para prendê-lo no lugar. Verifique a profundidade da anestesia realizando pinças bilaterais dos dedos dos pés dos membros posteriores.
Assim que o mouse estiver devidamente anestesiado, prenda o crânio usando alfinetes de orelha e ajuste a cabeça para uma posição de plano de nível neutro. Aplique pomada oftálmica generosamente em ambos os olhos para evitar o ressecamento. Usando uma seringa de calibre 28 de meia polegada, injete meloxicam por via subcutânea como analgésico.
Reduza a taxa anestésica para manter a taxa de respiração alvo. Em seguida, coloque o mouse assepticamente. Usando um cotonete estéril, aplique a solução desinfetante de clorexidina começando medialmente e trabalhando para fora.
Em seguida, usando um cotonete estéril fresco, aplique etanol 70% da mesma maneira. Verifique novamente a profundidade do anestésico monitorando a frequência respiratória. Em seguida, usando um bisturi de lâmina número 15, faça uma incisão sagital média de 1,0 a 1,5 centímetro, começando ligeiramente posterior aos olhos na direção do mimo.
Agora, usando um cotonete estéril, reflita as bordas da ferida para visualizar o crânio. Esfregue suavemente qualquer tecido conjuntivo da área. Se necessário, use um cotonete estéril embebido em peróxido de hidrogênio para expor a superfície do crânio e visualizar as suturas lambda.
Localize o bregma onde as suturas da córnea esquerda e direita encontram a sutura sagital. Opcionalmente, para facilitar a realocação do bregma durante a cirurgia LITT, use uma resina acrílica colorida não tóxica e um palito de madeira estéril e faça uma pequena marca sobre o bregma. Com a seringa de microlitro no quadro, zere as coordenadas estereotáxicas com a ponta tocando bregma.
A coordenada X refere-se ao movimento no plano lateral medial, a coordenada Y para o movimento anterior posterior e a coordenada Z para o plano ventral dorsal. Certifique-se de que lambda esteja no mesmo plano ventral dorsal que o bregma, onde Z é igual a zero em ambos os pontos de referência. Se forem necessários ajustes, certifique-se de que o crânio ainda esteja fixado com segurança aplicando uma leve pressão com um cotonete estéril.
Posicione a ponta da agulha sobre a área-alvo nas coordenadas mais 2,0 milímetros de mídia lateral e mais 0,5 milímetros anteroposterior de bregma. Abaixe cuidadosamente a ponta da broca até que ela entre em contato com o crânio. Levante levemente a ponta da agulha e faça um pequeno ponto no local do orifício da rebarba usando um marcador cirúrgico estéril.
Em seguida, levante a agulha ligeiramente para que fique fora do caminho e faça um furo no local marcado, tomando cuidado para rebarbar apenas o crânio sem danificar as meninges abaixo. Crie um segundo orifício de rebarba a mais 3,0 milímetros medial lateral e mais 0,5 milímetros anteroposterior, ou estenda o orifício original até esta coordenada para acomodar o termopar durante o procedimento LITT. Em seguida, remova o tubo de microcentrífuga contendo células de glioma de camundongo CT2A do gelo e sacuda suavemente o tubo com a ponta do dedo para ressuspender as células.
Usando uma seringa de cinco ou 10 microlitros, aspire suavemente aproximadamente dois microlitros da suspensão celular. Expresse 0,5 microlitros da seringa para remover qualquer ar. Limpe a haste da agulha com um cotonete embebido em álcool para remover qualquer fluido ou células residuais.
Abaixe lentamente a agulha até a profundidade em Z igual a menos três milímetros e faça uma pausa por um minuto. Em seguida, retraia lentamente a agulha 0,5 milímetros e injete células a uma velocidade de 0,5 microlitros por minuto. Após a conclusão da injeção, aguarde dois minutos antes de retrair lentamente a seringa ao longo de três a quatro minutos.
Pausar por até um minuto após os primeiros intervalos de 100 a 250 micrômetros ajudará a evitar o deslocamento celular. Para fechar a incisão da ferida, aproxime novamente as bordas da incisão. Usando três pontos interrompidos com uma sutura de 50, feche a ferida enquanto inverte levemente as bordas da ferida para garantir que a derme subjacente toque.
Aplique a solução de iodopovidona na ferida fechada e transfira o mouse para uma gaiola de recuperação forrada de papel em uma almofada de aquecimento ajustada para 37 graus Celsius. Uma vez que o animal tenha recuperado a decúbito esternal, ele pode ser transferido de volta para sua gaiola de origem. Nove dias após a injeção da suspensão de células de glioma de camundongo CT2A, prenda o camundongo anestesiado no quadro estereotáxico.
Recrie uma incisão na linha média e use um cotonete estéril para limpar o crânio e remover qualquer tecido que obscureça a bregma. Com a Terapia Térmica Intersticial a Laser ou o acessório LITT instalado na estrutura estereotáxica, zere as coordenadas no bregma para a ponta da fibra do laser. Em seguida, levante ligeiramente a ponta da fibra do laser e mova-se para as coordenadas medial lateral e ântero-posterior desejadas.
Em seguida, abaixe lentamente a sonda até a coordenada ventral dorsal alvo para chegar ao alvo. Defina os parâmetros de tratamento LITT para o modo contínuo e alimente um que. Em seguida, alterne o laser do modo de espera para o ativo e acione o laser por 60 segundos usando o pedal.
Se a temperatura subir além de 46 graus Celsius, faça uma breve pausa e depois volte a ativar, com o objetivo de manter a temperatura próxima a 46 graus Celsius. Por fim, retraia lentamente o conjunto do laser. Limpe suavemente a fibra do laser e o termopar com um cotonete embebido em álcool.
Gire o conjunto para fora do caminho, garantindo que as sondas não entrem em contato com a estrutura. As imagens de ressonância magnética cornal ponderadas em T2 mostraram implante tumoral bem-sucedido com taxas de quase 100% de captura e formação consistente de tumor esférico. O tratamento com LITT resultou em ablações consistentes com áreas pretas hiperintensas definidas, indicando necrose tecidual no núcleo central e uma área branca hiperintensa circundante mostrando edema perioperatório.
