Montagem e Operação de um Estágio de Resfriamento para Imobilização de C. elegans em Suas Placas de Cultura

Estamos desenvolvendo uma abordagem simples que pode imobilizar toda a população de Caenorhabditis elegans diretamente em placas de cultivo. Essa estratégia acelera significativamente os experimentos relacionados à imagem. A imobilização de azida sódica tipicamente usada para imagens de alta resolução da população de C.elegans é extremamente trabalhosa, exigindo montagem e manuseio individual de animais.

Esse método também pode reduzir a vida útil e a viabilidade dos animais, o que pode confundir os dados. O método de resfriamento tradicional usava temperaturas relativamente baixas, de dois a quatro graus Celsius, do microfluido empregado, o que requer treinamento extensivo do usuário. Descobrimos que, com o estágio de resfriamento, temperaturas quentes, como seis graus Celsius, imobilizam mais fortemente os animais para imagens de alta rotação.

A imobilização de resfriamento de C.elegans não é amplamente utilizada, mas quando usada, geralmente é combinada com microfluídica complexa que requer treinamento significativo do usuário. Devido à deficiência da metodologia típica de imobilização, nosso aprimoramento da mobilização e acessibilidade do resfriamento permite alto rendimento e imagens de maior resolução para os pesquisadores. Em comparação com a montagem e anestesia trabalhosas de animais individuais, nossa abordagem de resfriamento pode imobilizar reversivelmente grandes populações de C.elegans, eliminando 98% do tempo de processamento.

A falta de anestésicos químicos também minimiza a exposição nociva aos animais e pesquisadores. Um estágio de resfriamento permite imagens de alto rendimento e alta resolução diretamente nas placas de cultivo. A simplicidade desse projeto permite que outros pesquisadores construam facilmente seus próprios dispositivos e os integrem em suas configurações existentes, para revolucionar o escopo e o ritmo de seus estudos biológicos.

Nosso laboratório adaptará o estágio de resfriamento para várias configurações de microscópios. Diferentes projetos trabalharão com microscópios invertidos, microscópios verticais compostos, bem como diferentes plataformas de imagem.