TGK reconhece a Escola Internacional de Ciências e Engenharia (IGGSE) da Technische Universität München pelo apoio financeiro. HK reconhece o Centro de Proteína Integrada Ciência Munique (CIPSM) pelo seu apoio.

Nota: Todos os reagentes e solventes foram obtidos de fornecedores comerciais e foram utilizados sem purificação adicional. Atenção: Por favor, consulte todas as folhas de dados de segurança pertinentes (MSDS) antes do uso. Utilize todos os equipamentos de segurança adequada ao realizar sínteses químicas (por exemplo, da hotte, óculos de protecção, luvas, revestimento do laboratório, calças de comprimento total, e sapatos fechados). 1. Síntese de precursores Guanidinylation <ol><li> espécies alquilados <ol><li> espécies metiladas <ol><li> Dissolve-se 1,0 g de N, N &#39;-di-Boc-1 H-pirazole-1-carboxamidina (3,2 mmol, 1 eq.) E 1,0 g de trifenilfosfina (PPh3, 3,8 mmol, 1,2 eq.) Em 10 mL de seco tetra-hidrofurano (THF) num balão de fundo redondo de 50 mL sob uma atmosfera inerte usando um septo de borracha, à temperatura ambiente (RT). Adicionar 194 mL de metanol seco usando uma seringa (4,8 mmol, 1,5 eq.) E let-lo agitar temperatura ambiente. </li><li> Separadamente, preparar uma solução com 747 mL de azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD, 3,8 mmol, 1,2 eq.) Em 2 mL de THF seco num frasco pequeno de vidro. Enquanto se agita, adicionar a solução de DIAD em THF gota a gota à solução de N, W-di-Boc-1 H-pirazole-1-carboxamidina N &#39;, PPh3, e metanol, utilizando uma seringa (ao longo de 15 min). Deixe a solução agitar durante 2 h à TA. </li><li> Remover o solvente sob pressão reduzida utilizando um evaporador rotativo e dissolve-se o produto em bruto em 1 mL de diclorometano (DCM). Carregar uma coluna de flash (2,5 cm x 20 cm) com 100 g de sílica em 10% de acetato de etilo (EtOAc) em uma solução de pentano. Carregar o produto bruto dissolvido na coluna e adicionar o solvente sob pressão (1,5 bar). </li><li> Recolher as fracções (sistema solvente: isocrico 10% de EtOAc em pentano), identificar o ponto composto desejado por cromatografia em camada fina (TLC), e recolhê-la (R f = 0,4, EtOAc / pentano 1: 9, UV). Combine o desejadofracções e evapora-se o solvente sob pressão reduzida utilizando um evaporador rotativo para se obter 0,85 g do composto do título como um óleo amarelo, viscoso (rendimento de 2,6 mmol, 81%). Armazenar o composto originou à temperatura ambiente para utilização posterior. </li></ol></li><li> Espécies modificadas-hexilamina <ol><li> Dissolve-se 1,0 g de N, N &#39;-di-Boc-1 H-pirazole-1-carboxamidina (3,2 mmol, 1,0 eq.), 0,9 g de Dde-6-amino-hexanol (3,8 mmol, 1,2 eq.), E 1,0 g de PPh3 (3,8 mmol, 1,2 eq.) em 10 mL de THF seco num frasco de fundo redondo de 50 ml, em atmosfera inerte usando um septo de borracha, à TA. </li><li> Separadamente, preparar uma solução com 747 mL de DIAD (3,8 mmol, 1,2 eq.) Em 2 mL de THF seco num frasco pequeno de vidro. Enquanto se agita, adicionar a solução de DIAD em THF gota a gota à solução de N, N &#39;-di-Boc-1 H-pirazole-1-carboxamidina, PPh3, e Dde-6-amino-hexanol utilizando uma seringa (ao longo de 15 min) . Deixe a solução agitar durante 2 h à TA. </li><li>Remover o solvente sob pressão reduzida utilizando um evaporador rotativo e tomar o produto bruto acima em 1 mL de DCM. Carregar uma coluna de flash (2,5 cm x 20 cm) com 100 g de sílica em uma solução de pentano / EtOAc (2: 1). Aplicar o produto bruto dissolvido na coluna e adicionar solvente sob pressão (1,5 bar). </li><li> Recolher as fracções (sistema solvente: isocrática 2: 1 pentano / EtOAc), identificar as fracções desejadas com TLC, e recolhê-las (Rf = 0,66, 2: 1 pentano / EtOAc, UV). Combinam-se as fracções desejadas e evapora-se o solvente sob pressão reduzida utilizando um evaporador rotativo para se obter 1,6 g do composto do título como um óleo amarelo, viscoso (rendimento de 2,8 mmol, 88%). Armazenar o composto originou à temperatura ambiente para utilização posterior. </li></ol></li></ol></li><li> Espécies acilados (2 passos reaccionais) <ol><li> Dissolve-se 1,4 g de S hemissulfato -methylisothiuronium (10 mmol, 1,0 eq.) E 2,2 g de dicarbonato de di (terc-butil) dicarbonato (10 mmol, 1,0 eq.) Em uma vigorosamente agitaranel solução bifásica de DCM / sat. aq. De NaHCO 3 e deixá-lo agita-se durante 24 h à TA. </li><li> Separaram-se as camadas numa ampola de decantação e extrai-se a fase aquosa três vezes com DCM. Combinam-se as fases orgânicas, secam-se com Na 2 SO 4, e remover o solvente sob pressão reduzida utilizando um evaporador rotativo. Tome-se o produto em bruto em 1 mL de hexano. </li><li> Carregar uma coluna de flash (2,5 cm x 20 cm) com 100 g de sílica em uma solução de 4: 1 hexano / EtOAc. Carregar o produto bruto dissolvido na coluna. Adicionar o solvente sob pressão. Identificar as fracções desejadas com TLC (sistema solvente: 4: 1 isocrático hexano / EtOAc (detecção por UV: 254 nm), e recolher-los (Rf = 0,30). </li><li> Combinam-se as fracções desejadas e evapora-se o solvente sob pressão reduzida utilizando um evaporador rotativo para se obter 1,1 g do composto do título como um óleo amarelo, viscoso (rendimento de 5,8 mmol, 58%). Armazenar o reagente, N - (terc-butoxicarbonil) - S -methylisothiourea, à temperatura ambiente para utilização posterior. </li><li> Dissolve-se 250 mg de N - (terc-butoxicarbonil) - S-metilisotioureia (1,3 mmol, 1,0 eq.) Em 10 mL de N, N- dimetilformamida seca (DMF) num balão de fundo redondo de 50 mL sob uma atmosfera inerte, a RT. Adicionar 440 uL de N, N-diisopropiletilamina (DIPEA) (2,6 mmol, 2 eq.), Utilizando uma seringa. Enquanto se agita, adicionar 245 mL de Ac2O (5,2 mmol, 4,0 eq.) Gota a gota usando uma seringa e deixá-lo agitar durante 1 h à TA. </li><li> Adicionar um excesso de metanol (2 mL) à mistura, utilizando uma seringa e deixá-lo agita-se durante 15 min à temperatura ambiente. Remover o solvente sob pressão reduzida utilizando um evaporador rotativo. Tome-se o produto em bruto em 1 ml de DCM. </li><li> Carregar uma coluna de flash (2,5 cm x 20 cm) com 60 g de sílica em uma solução de 3: 1 hexano / EtOAc a 3: 1. Aplicar o produto em bruto dissolvido para a coluna. Adicionar solvente (3: 1 hexano / EtOAc) e pressão (1,5 bar). Identificar as fracções desejadas por TLC (3: 1 hexano / EtOAc, UV: 220 nm), e colLect los (Rf = 0,62). </li><li> Combinam-se as fracções desejadas e evapora-se o solvente sob pressão reduzida utilizando um evaporador rotativo para se obter 210 mg do composto do título como um sólido branco (rendimento 0,9 mmol, 70%). Armazenar o composto à temperatura ambiente para utilização posterior. </li></ol></li></ol> 2. Síntese de Peptídeos Cíclicos Precursores <ol><li> Carregamento e nivelamento resina TCP <ol><li> Adicionar 1,00 g de cloreto de (CTC) de resina 2-chlortriyl (0,9 mmol / g) e 320 mg de Fmoc-Gli-OH (1,2 eq.) Em uma seringa de plástico de 20 ml com uma frita. Prepara-se uma solução de 313 ul de DIPEA (2 eq.) Em 5 mL de DCM seco e adicioná-lo à seringa. Deixá-lo girar durante 1 hora a RT utilizando um aparelho rotativo. </li><li> Enquanto isso, preparar uma solução de 2 ml de 5: 1 de metanol / DIPEA (v / v; solução capping). Adicionar a solução de capeamento para a seringa e deixá-lo girar durante mais 15 min. Lava-se a resina com DCM (5x) e DMF (3x). </li></ol></li><li> Por desprotecção de Fmoc-resina<ol><li> Tratar o ligado a resina Fmoc-Gly com 20% de piperidina em DMF durante 10 min e, em seguida, durante 5 min. Lava-se a resina com DMF (3x). </li></ol></li><li> Sobre resina de acoplamento de Fmoc-Orn (Dde) -OH <ol><li> Adicionar 934 mg de Fmoc-L-Orn (Dde) -OH (2 eq.), 684 mg de 1- [bis (dimetilamino) metileno] -1H-1,2,3-triazolo [4,5-b] piridínio hexafluorofosfato de 3-óxido (HATU) (2 eq.), e 245 mg de 1-hidroxi-7-azabenzotriazole (HOAt) (2 eq.) para um frasco pequeno de vidro e dissolvê-la em 5 mL de DMF. Adicionar 814 ul de DIPEA. </li><li> Adicionar esta solução ao Gli Fmoc-desprotegida, lavado, e ligado a resina e deixá-lo girar durante 1 h. Lava-se a resina com DMF (3x). </li></ol></li><li> Por desprotecção de Fmoc-resina <ol><li> Tratar o ligado a resina de Fmoc-Orn (Dde) -Gly com 20% de piperidina em DMF durante 10 min e, em seguida, durante 5 min. Lava-se a resina com DMF (3x). </li></ol></li><li> Acoplamento em resina de Fmoc-Val-OH <ol><li> Adicionar 610 mg de Fmoc-Val-OH (2 eq.), 684 mg de HATU (2 eq.), E 245 mg de HOAt (2 eq.) Para um frasco pequeno de vidro e dissolvê-la em 5 mL de DMF. Adicionar 814 ul de DIPEA. </li><li> Adicionar esta solução à Fmoc-desprotegida, lavado, e Orn ligado a resina (Dde) -Gly e deixá-lo girar durante 1 h. </li></ol></li><li> Por desprotecção de Fmoc-resina <ol><li> Tratar o ligado a resina de Fmoc-Val-Orn (Dde) -Gly com 20% de piperidina em DMF durante 10 min e, em seguida, durante 5 min. Lava-se a resina com DMF (3x). </li></ol></li><li> Em-resina N- metilação <ol><li> Lava-se a resina com DCM (3x). Dissolve-se 887 mg de 2-nitrobenzenossulfonilo (o -NBS-Cl, 4 eq.) Em DCM e adicionar 1,2 mL de 2,4,6-colidina (10 eq.). </li><li> Adicionar a solução do péptido ligado à resina e deixou-se incubar durante 20 minutos à temperatura ambiente. </li><li> Lava-se a resina com CH 2 Cl 2 (3x) e com THF (5x). Prepara-se uma solução com 1,18 g de PPh3 (5 eq.) E 365 uL de metanol em THF. Adicione esta solução para oseringa. </li><li> Prepara-se uma solução com 883 mL de DIAD em 2 mL de THF e adicioná-lo à seringa. Deixe que incube durante 15 min. Lava-se a resina com THF (5x) e com DMF (5x). </li></ol></li><li> O -ns desprotecção <ol><li> Prepara-se uma solução com 570 mL de mercaptoetanol (10,0 eq.) E 672 uL de diazabicycloundecen (DBU) em 2 mL de DMF. Adicionar esta solução para a seringa e deixá-lo incubar durante 5 min. </li><li> Repetir o passo de desprotecção e, em seguida, lava-se a resina com DMF (5x). </li></ol></li><li> Acoplamento em resina de Fmoc-d-Phe-OH <ol><li> Adicionar 697 mg de Fmoc-D-Phe-OH (2 eq.), 684 mg de HATU (2 eq.), E 245 mg de HOAt (2 eq.) Para um frasco pequeno de vidro e dissolvê-la em 5 mL de DMF . Adicionar 814 ul de DIPEA. </li><li> Adicionar esta solução para o péptido Fmoc-desprotegida, lavado, e ligado a resina e deixá-lo girar durante 1 h. </li></ol></li><li> Por desprotecção de Fmoc-resina <ol><li> Tratar a resina-bound péptido com 20% de piperidina em DMF durante 10 min e, em seguida, durante 5 min. Lava-se a resina com DMF (3x). </li></ol></li><li> Acoplamento em resina de Fmoc-Asp (OtBu) -OH <ol><li> Adicionar 741 mg de Fmoc-Asp (OtBu) -OH (2 eq.), 684 mg de HATU (2 eq.), E 245 mg de HOAt (2 eq.) Para um frasco pequeno de vidro e dissolvê-la em 5 mL de DMF. Adicionar 814 ul de DIPEA. </li><li> Adicionar esta solução para o péptido Fmoc-desprotegida, lavado, e ligado a resina e deixá-lo girar durante 1 h. </li></ol></li><li> A clivagem do péptido linear da resina <ol><li> Lava-se a resina com DCM (3x) e subsequentemente preparar 10 mL de uma solução de hexafluoroisopropanol (HFIP) em DCM (1: 4; v / v). </li><li> Adicionar a solução para a resina e deixá-lo girar durante 15 min. Recolher a solução em um balão de fundo redondo. Repetir a clivagem e evapora-se o solvente usando um evaporador rotativo. </li></ol></li><li> A ciclização do peptídeo linear <ol><li> dissolve 384 mg de NaHCO3 (5,0 eq.) e 582 ul de azida de difenilfosforilo (DPPA) (3,0 eq.) em 50 mL de DMF e adicionar-se ao produto bruto. Deixe que agitar durante a noite ou até que nenhum péptido linear é observado com ESI-MS (10 h) 17. </li><li> Sob pressão reduzida, reduzir o solvente para um pequeno volume usando um evaporador rotativo. Prepara-se uma solução aquosa saturada de NaCl (salmoura). Usando uma pipeta de Pasteur, adicionar gota a gota o péptido ciclizado para 40 mL de solução aquosa saturada de NaCl em um tubo de centrífuga. </li><li> Centrifugar a suspensão (5000 xg, 5 min) e lavar o precipitado com água de grau HPLC (2x). Liofiliza o produto. </li></ol></li></ol> 3. Guanidinylation e desprotecção em Solução <ol><li> Guanidinylation com os precursores sob medida <ol><li> Dissolve-se uma pequena quantidade (por exemplo, 25 mg) do péptido cíclico desprotegido ortogonalmente num pequeno volume de DMF (por exemplo, 2 mEU). Adicionar 2 eq. do precursor guanidinylation e 2 eq. de DIPEA para a solução e deixá-lo agita-se durante 2 h à TA. </li><li> Monitorizar o progresso da reaco por HPLC-MS. Depois da reacção estar completa, remover o, re-dissolve-se o péptido cíclico guanidinylated solvente em acetonitrilo, e realizar a purificação por HPLC semi-preparativa de 16. </li></ol></li><li> A remoção dos grupos de protecção ácido lábil cadeia lateral <ol><li> Preparar 2 ml de uma solução contendo ácido trifluoroacético (TFA), água, e triisopropilsilano (TIPS) (95 / 2,5 / 2,5; v / v / v). Adicionar esta solução para o produto purificado num pequeno frasco de vidro e deixou-agitar temperatura ambiente durante pelo menos 1 h. Observar a desprotecção completa com ESI-MS 17. </li><li> Evapora-se o solvente sob pressão reduzida para um pequeno volume. Prepare éter arrefecido com gelo e adicionar 10 ml num tubo de centrífuga de 50 mL. Precipitar o péptido desprotegido em éter arrefecido em gelo, utilizando uma pipeta Pasteur, adicionando-gota a gota. Centrifugar a suspensão (5000 xg, 5 min) para obter um pelete. </li><li> Lavar o precipitado com éter arrefecido com gelo e centrifugar-lo (5000 xg, 5 min, 2x). Dissolve-se o produto em 2 mL de água de grau HPLC e purificá-lo por HPLC semi-preparativa de 16. </li></ol></li></ol> 4. Dados e Parâmetros para purificação Analítica <ol><li> CLAP analítica-EM-IEP <ol><li> Executar analítica de HPLC-ESI-MS com um espectretro de massa LCQ utilizando uma coluna C18 (tamanho de 12 nm de poro, o tamanho de partículas 3 mícrons, 125 milímetros x 2,1 milímetros) ou uma coluna C8 (tamanho de poro de 20 nm, de partícula de 5 mícrons tamanho, 250 mm x 2,1 milímetros), com H2O (0,1% v / v ácido fórmico) / acetonitrilo (0,1% v / v ácido fórmico) como eluentes. </li></ol></li><li> HPLC semi-preparativa <ol><li> Realizar HPLC semi-preparativa usando um instrumento de HPLC preparativa com uma coluna ODS-A (20 x 250 mm, 5), uma taxa de fluxo de 8 mL / min, e os gradientes linearesde H 2 O (0,1% v / v de TFA) e acetonitrilo (0,1% v / v de TFA). </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Saczewski, F., Balewski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+activities+of+guanidine+compounds.">Biological activities of guanidine compounds.</a> Exp. Opin. Ther. Patents. 19 (10), 1417-1448 (2009).</li><li>Saczewski, F., Balewski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+activities+of+guanidine+compounds,+2008-2012+update.">Biological activities of guanidine compounds, 2008-2012 update.</a> Exp. Opin. Ther. Patents. 23 (8), 965-995 (2013).</li><li>Wirth, T. H., Davidson, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mercury+(II)+Comlexes+of+Guanidine+and+Ammonia,+and+a+general+discussion+of+the+Complexing+of+Mercury+(II)+by+Nitrogen+Bases.">Mercury (II) Comlexes of Guanidine and Ammonia, and a general discussion of the Complexing of Mercury (II) by Nitrogen Bases.</a> J. Am. Chem. Soc. 86 (20), 4325-4329 (1964).</li><li>Berlinck, R. G., Burtoloso, A. C., Kossuga, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemistry+and+biology+of+organic+guanidine+derivatives.">The chemistry and biology of organic guanidine derivatives.</a> Nat. Prod. Rep. 25, 919-954 (2008).</li><li>Peterlin-Ma&#353;i&#269;, L., Kikelj, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arginine+mimetics.">Arginine mimetics.</a> Tetrahedron. 57 (33), 7073-7105 (2001).</li><li>Peterlin-Ma&#353;i&#269;, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arginine+mimetic+structures+in+biologically+active+antagonists+and+inhibitors.">Arginine mimetic structures in biologically active antagonists and inhibitors.</a> Curr. Med. Chem. 13 (30), 3627-3648 (2006).</li><li>Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrins:+bidirectional,+allosteric+signaling+machines.">Integrins: bidirectional, allosteric signaling machines.</a> Cell. 110 (6), 673-687 (2002).</li><li>Liddington, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+aspects+of+integrins.">Structural aspects of integrins.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 819, 111-126 (2014).</li><li>Plow, E. F., Haas, T. A., Zhang, L., Loftusi, J., Smith, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligand+binding+to+integrins.">Ligand binding to integrins.</a> J. Biol. Chem. 275 (29), 21785-21788 (2000).</li><li>Kapp, T. G., Fottner, M., Maltsev, O. V., Kessler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+cause,+great+impact+-+modification+of+guanidine+group+in+RGD+controls+subtype+selectivity.">Small cause, great impact - modification of guanidine group in RGD controls subtype selectivity.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 55, 1540-1543 (2016).</li><li>Xiong, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+the+extracellular+segment+of+integrin+alpha+Vbeta3.">Crystal structure of the extracellular segment of integrin alpha Vbeta3.</a> Science. 294, 339-345 (2001).</li><li>Xiong, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+the+extracellular+segment+of+integrin+alpha+Vbeta3+in+complex+with+an+Arg-Gly-Asp+ligand.">Crystal structure of the extracellular segment of integrin alpha Vbeta3 in complex with an Arg-Gly-Asp ligand.</a> Science. 296 (5565), 151-155 (2002).</li><li>Nagae, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+&#945;5&#946;1+integrin+ectodomain:+atomic+details+of+the+fibronectin+receptor.">Crystal structure of &#945;5&#946;1 integrin ectodomain: atomic details of the fibronectin receptor.</a> J. Cell Biol. 197 (1), 131-140 (2012).</li><li>Hersel, U., Dahmen, C., Kessler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RGD+modified+polymers:+biomaterials+for+stimulated+cell+adhesion+and+beyond.">RGD modified polymers: biomaterials for stimulated cell adhesion and beyond.</a> Biomaterials. 24 (24), 4385-4415 (2003).</li><li>Auernheimer, J., Dahmen, C., Hersel, U., Bausch, A., Kessler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoswitched+Cell+Adhesion+on+Surfaces+with+RGD+Peptides.">Photoswitched Cell Adhesion on Surfaces with RGD Peptides.</a> J. Am. Chem. Soc. 127 (46), 16107-16110 (2005).</li><li>Corradini, D., Eksteen, E., Eksteen, R., Schoenmakers, P., Miller, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of HPLC. , (2011).</li><li>de Hoffmann, E., Stroobant, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mass Spectrometry: Principles and Applications. , (2007).</li><li>Frank, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conformational+Control+of+Integrin-Subtype+Selectivity+in+isoDGR+Peptide+Motifs:+A+Biological+Switch.">Conformational Control of Integrin-Subtype Selectivity in isoDGR Peptide Motifs: A Biological Switch.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 49 (48), 9278-9281 (2010).</li><li>Rossiter, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+substrate-based+inhibitors+of+mammalian+dimethylarginine+dimethylaminohydrolase.">Selective substrate-based inhibitors of mammalian dimethylarginine dimethylaminohydrolase.</a> J. Med. Chem. 48 (14), 4670-4678 (2005).</li><li>Weiss, S., Keller, M., Bernhardt, G., Buschauer, A., K&#246;nig, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N(G)-Acyl-argininamides+as+NPY+Y(1)+receptor+antagonists:+Influence+of+structurally+diverse+acyl+substituents+on+stability+and+affinity.">N(G)-Acyl-argininamides as NPY Y(1) receptor antagonists: Influence of structurally diverse acyl substituents on stability and affinity.</a> Bioorg. Med. Chem. 18 (17), 6292-6304 (2010).</li><li>Hammerschmidt, F., Kvaternik, H., Schweifer, A., Mereiter, K., Aigner, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Synthesis+of+No-Carrier-Added+[*I]MIBG+and+Its+Precursor.">Improved Synthesis of No-Carrier-Added [*I]MIBG and Its Precursor.</a> Synthesis. 44 (21), 3387-3391 (2012).</li></ol>

Os autores não têm nada a revelar.

O precursor para guanidinylation é um derivado de péptido cíclico desprotegido ortogonalmente, (C (OrnD (OtBu) Gf (N Me) V)), que é sintetizado por um protocolo Fmoc padrão de síntese de péptidos em fase sólida (SPPS). Ornithin foi utilizada como o derivado protegido ortogonalmente, (Fmoc-Orn (Dde) -OH), que pode ser desprotegido com hidrazina em DMF, após a ciclização do esqueleto de péptido. O precursor do péptido é purificado por precipitação do composto e pela subsequente l...

Entre os grupos farmacofóricos mais abundantes em ligandos naturais é o grupo guanidina, o qual está envolvido em várias interacções 1, 2. Por exemplo, ele serve como um potencial dador de hidrogénio de quatro vezes em interacções de ligações de hidrogénio e está envolvido em interacções electrostáticas, tais como as pontes salinas ou interacções catiões π. Em química medicinal, este grupo é frequentemente encontrada em drogas e candidatos a fármacos 4, embora, muitas vezes, como mimicos de guanidina 5, 6. A razão para o desenvolvimento de mimicos de guanidina é a remoção do grupo guanidina ubíqua, carregado positivamente, assim como o ajuste da lipofilicidade do ligando. Em ligandos peptídicos, o único aminoácido contendo um grupo guanidina é arginina, que é, portanto, muitas vezes encontrado na região bioactiva de ligandos peptídicos. Um muito prominent exemplo para uma família de ligandos contendo arginina é a subfamília das integrinas RGD de ligação. Em geral, as integrinas são uma classe de receptores de adesão celular, as quais assumem funções importantes em todos os organismos superiores. Algumas dessas funções envolvem a adesão celular, migração e sobrevivência das células. Assim, eles também estão envolvidos em indicações patológicos, tais como cancro e fibrose. As integrinas são proteínas transmembranares heterodiméricas que consistem de um α- e uma subunidade-β que formam 24 subtipos de integrina actualmente conhecidas; 8 deles reconhece a sequência tripeptídica Arg-Gli-Asp (RGD =) nos seus ligandos 7. A região de ligação localiza-se na interface entre estes dois subtipos na parte extracelular, o chamado grupo de cabeça 8 integrina. RGD é reconhecido por duas interacções comuns: o sítio de adesão de metal-dependente de iões região (MIDAS), que está localizado na subunidade beta e que se liga ao ácido carboxílico nos ligandos (cha lateraisna de Asp); e o grupo guanidina nos ligandos, que está localizado na subunidade alfa. A maioria dos subtipos de integrina são promíscuo e partilham pelo menos uma parte da sua matriz extracelular naturais (ECM) ligandos 9. Assim, para o desenvolvimento de ligandos de integrina artificiais, o foco principal é, além de uma elevada afinidade de ligação, a selectividade do subtipo. Recentemente, nós fomos capazes de revelar um elemento-chave para a geração de ligandos do subtipo selectivo: o grupo guanidina. Através de modificações distintos, os ligandos para o biselective αv- e α5 contendo subtipos de integrina pode ser transformado em compostos selectivos por modificações simples no grupo guanidina, o qual pode, em seguida, a discriminar diferentes α-subunidades 10. No bolso de aV, o grupo guanidina interage lado-a através de uma ponte salina com o Asp218 bidentado 11, 12. Esta interacção cum também ser observada em α5β1 (aqui, com o Asp227 em α5), mas, adicionalmente, é observado um fim-de interacção do grupo guanidina com um resíduo Gln (Gln221) lá 13. Assim, modificou o grupo guanidina de duas formas opostas: num caso, através do bloqueio do lado-a interacção com a metilação do δ N do grupo guanidina, e, no outro caso, com a metilação do ω guanidina N, bloqueando a interacção fim-em. Surpreendentemente, esta pequena modificação levou a uma mudança completa selectividade nos ligandos. Para além da alquilação, um novo método de funcionalização foi introduzido nesta publicação. O método clássico de funcionalização para este tipo de ligando é pentapeptidic através da conjugação da cadeia lateral de um aminoácido que não estão envolvidos na ligação (por exemplo, K em C (RGDfK)) 14, 15. Aqui,mostramos que funcionalização também é possível pela modificação da guanidina - que é crucial para a ligação - com um grupo acilo ou um ligante alquilado. A carga positiva que é essencial para a ligação é retida, e modelos sugerem que as longas pontos de cadeia para fora da bolsa de ligação, proporcionando, assim, uma possibilidade ideal para a fixação de outros ligantes e rotulagem de unidades (por exemplo, um marcador fluorescente ou um quelante para molecular imagiologia). Neste trabalho, nós concentrar-se nos passos preparativos para a modificação do grupo guanidina em ligandos contendo arginina. Isto envolve a síntese de N-metilada ω espécies, assim como guanidinas com unidades ligantes mais longas. As diferentes modificações compreendem grupos acilo e alquilo.

<table><tbody><tr><td>&lt;em&gt;N,N&amp;prime;&lt;/em&gt;-Di-Boc-1H-pyrazole-1-carboxamidine, 98%&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>434167&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Triphenylphosphine, 99%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T84409&amp;nbsp;SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Tetrahydrofuran, &gt;99.5%</td><td>Carl Roth</td><td>4745</td><td></td></tr><tr><td>Tetrahydrofuran anhydrous, 99.8%</td><td>Carl Roth</td><td>5182</td><td></td></tr><tr><td>Methanol anhydrous, 99.8%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>322415&amp;nbsp;SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Diisopropyl azodicarboxylate, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>225541&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Dichlormethan, for synthesis, 99.5%</td><td>Carl Roth</td><td>8424</td><td></td></tr><tr><td>Silica gel for flash chromtaography</td><td>Sigma Aldrich</td><td>60738&amp;nbsp;SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>n-Pentane, 99%</td><td>Carl Roth</td><td>8720</td><td></td></tr><tr><td>n-Hexane, 99%</td><td>Carl Roth</td><td>CP47</td><td></td></tr><tr><td>Ethylacetate, 99.5%</td><td>Carl Roth</td><td>7338</td><td></td></tr><tr><td>Aminohexanol, 95%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A56353&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;S&lt;/em&gt;-Methylisothiourea hemisulfate, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M84445 ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Di-&lt;em&gt;tert&lt;/em&gt;-butyl dicarbonate, 99%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>205249&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;N,N&lt;/em&gt;-Dimethylformamid, 99.8%</td><td>Carl Roth</td><td>A529</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;N,N&lt;/em&gt;-Diisopropylethylamin, 99.5%</td><td>Carl Roth</td><td>2474</td><td></td></tr><tr><td>Acetic anhydrid, 99%</td><td>Carl Roth</td><td>4483</td><td></td></tr><tr><td>Chlortrityl resin</td><td>Carbolution</td><td>CC11006</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Gly-OH, 98%</td><td>Carbolution</td><td>CC05014</td><td></td></tr><tr><td>Piperidin, 99%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>104094&amp;nbsp;SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Orn(Dde)-OH</td><td>Iris-Biotech</td><td>FAA1502</td><td></td></tr><tr><td>HATU, 99%</td><td>Carbolution</td><td>CC01011</td><td></td></tr><tr><td>HOAt, 99%</td><td>Carbolution</td><td>CC01004</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Val-OH</td><td>Carbolution</td><td>CC05028</td><td></td></tr><tr><td>2-Nitrobenzenesulfonyl chloride, 97%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N11507&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>2,4,6-Collidine, 99%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>27690&amp;nbsp;SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Mercaptoethanol, 99%&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M6250&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Diazabicycloundecen, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>139009&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-D-Phe-OH, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>47378&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Asp(OtBu)-OH, 98%</td><td>Carbolution</td><td>CC05008</td><td></td></tr><tr><td>Hexafluoroisopropanol</td><td>Carbolution</td><td>CC03056</td><td></td></tr><tr><td>Diphenylphosphoryl azide, 97%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>178756&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>TFA, 99.9%</td><td>Carl Roth</td><td>P088</td><td></td></tr><tr><td>Triisopropylsilan, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>233781&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrile, HPLC grade</td><td>Carl Roth</td><td>HN44</td><td></td></tr></tbody></table>

modification and functionalization of the guanidine group by tailor-made precursors

O grupo guanidina é um dos grupos farmacofóricos mais importantes em química medicinal. O único aminoácido que contém um grupo guanidina é arginina. Neste artigo, um método fácil para a modificação do grupo guanidina em ligandos peptidicos é fornecido, com um exemplo de ligandos de integrina de ligao a RGD. Foi recentemente demonstrado que a modificação distinto do grupo guanidina nesses ligandos permite a modulação selectiva do subtipo (por exemplo, entre os subtipos aV e α5). Além disso, uma estratégia anteriormente desconhecido para a funcionalização através do grupo guanidina foi demonstrada, e a abordagem sintética foi avaliada neste documento. As modificações aqui descritas envolvem terminalmente (N ω) grupos guanidina alquilados e acetilados. Para a síntese, moléculas precursoras feitas por medida são sintetizados, os quais são, em seguida, submetido a uma reacção com uma amina desprotegida de modo ortogonal para transferir o prégrupo guanidina -Modified. Para a síntese de guanidinas alquilados, precursores à base de N, N &#39;-di-Boc-1 H-pirazole-1-carboxamidina são utilizados para sintetizar compostos acilados, o precursor de escolha sendo um derivado acilado correspondente de N-Boc-S - metilisotioureia, o qual pode ser obtido em reacções de um e de dois passos.

O precursor peptico clico foi sintetizado como um péptido linear, ciclizado, e ortogonalmente Dde-desprotegido. Após a precipitação, a pureza do composto foi analisada com HPLC-MS (Figura 1). Para monitorizar o progresso da reacção, a análise por HPLC foi realizada após o tempo de reacção de 2 h (Figura 2). Para resíduos maiores no grupo guanidina, o tempo de reacção de 2 h muitas...

Watch this Scientific Journal Video about Modification and Functionalization of the Guanidine Group by Tailor-made Precursors at JoVE.com

Modification and Functionalization of the Guanidine Group by Tailor-made Precursors

Um protocolo para a síntese de guanidinas modificada-alquilo baseados na utilização dos precursores correspondentes é apresentada.

Modificação e funcionalização do Grupo de guanidina por precursores sob medida

The guanidine group is one of the most important pharmacophoric groups in medicinal chemistry. The only amino acid carrying a guanidine group is arginine. ...

modification-functionalization-guanidine-group-tailor-made

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biochemistry

10.5K visualizações.  Technische Universität München.  Um protocolo para a síntese de guanidinas modificada-alquilo baseados na utilização dos precursores correspondentes é apresentada. 

Vídeo: Modification and Functionalization of the Guanidine Group by Tailor-made Precursors

Microwave-assisted Functionalization of Poly(ethylene glycol) and On-resin Peptides for Use in Chain Polymerizations and Hydrogel Formation

One of the main benefits to using poly(ethylene glycol) (PEG) macromers in hydrogel formation is synthetic versatility. The ability to draw from a large variety of PEG molecular weights and configurations (arm number, arm length, and branching pattern) affords researchers tight control over resulting hydrogel structures and properties, including Young&#8217;s modulus and mesh size. This video will illustrate a rapid, efficient, solvent-free, microwave-assisted method to methacrylate PEG precursors into poly(ethylene glycol) dimethacrylate (PEGDM). This synthetic method provides much-needed starting materials for applications in drug delivery and regenerative medicine. The demonstrated method is superior to traditional methacrylation methods as it is significantly faster and simpler, as well as more economical and environmentally friendly, using smaller amounts of reagents and solvents. We will also demonstrate an adaptation of this technique for on-resin methacrylamide functionalization of peptides. This on-resin method allows the N-terminus of peptides to be functionalized with methacrylamide groups prior to deprotection and cleavage from resin. This allows for selective addition of methacrylamide groups to the N-termini of the peptides while amino acids with reactive side groups (e.g.&#160;primary amine of lysine, primary alcohol of serine, secondary alcohols of threonine, and phenol of tyrosine) remain protected, preventing functionalization at multiple sites. This article will detail common analytical methods (proton Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy (;H-NMR) and Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight mass spectrometry (MALDI-ToF)) to assess the efficiency of the functionalizations. Common pitfalls and suggested troubleshooting methods will be addressed, as will modifications of the technique which can be used to further tune macromer functionality and resulting hydrogel physical and chemical properties. Use of synthesized products for the formation of hydrogels for drug delivery and cell-material interaction studies will be demonstrated, with particular attention paid to modifying hydrogel composition to affect mesh size, controlling hydrogel stiffness and drug release.

Microwave-assisted Functionalization of Polyethylene glycol and On-resin Peptides for Use in Chain Polymerizations and Hydrogel Formation

This video will illustrate a rapid, efficient method to methacrylate poly(ethylene glycol), enabling chain polymerizations and hydrogel synthesis. It will demonstrate how to similarly introduce methacrylamide functionalities into peptides, detail common analytical methods to assess functionalization efficiency, provide suggestions for troubleshooting and advanced modifications, and demonstrate typical hydrogel characterization techniques.

A funcionalização assistida por microondas, de poli (etileno glicol) e Peptídeos On-resina para uso em Polimerizações cadeia e formação de hidrogel

One of the main benefits to using poly(ethylene glycol) (PEG) macromers in hydrogel formation is synthetic versatility. The ability to draw from a large ...

Química

Nucleoside Triphosphates - From Synthesis to Biochemical Characterization

The traditional strategy for the introduction of chemical functionalities is the use of solid-phase synthesis by appending suitably modified phosphoramidite precursors to the nascent chain. However, the conditions used during the synthesis and the restriction to rather short sequences hamper the applicability of this methodology. On the other hand, modified nucleoside triphosphates are activated building blocks that have been employed for the mild introduction of numerous functional groups into nucleic acids, a strategy that paves the way for the use of modified nucleic acids in a wide-ranging palette of practical applications such as functional tagging and generation of ribozymes and DNAzymes. One of the major challenges resides in the intricacy of the methodology leading to the isolation and characterization of these nucleoside analogues.
	
	In this video article, we present a detailed protocol for the synthesis of these modified analogues using phosphorous(III)-based reagents. In addition, the procedure for their biochemical characterization is divulged, with a special emphasis on primer extension reactions and TdT tailing polymerization. This detailed protocol will be of use for the crafting of modified dNTPs and their further use in chemical biology.

The protocol described herein aims to explain and abridge the numerous obstacles in the way of the intricate route leading to modified nucleoside triphosphates. Consequently, this protocol facilitates both the synthesis of these activated building-blocks and their availability for practical applications.

Nucleosídeos Trisfosfatos - Da síntese à Caracterização Bioquímica

The  traditional strategy for the introduction of chemical functionalities is the  use of solid-phase synthesis by appending suitably modified ...

High-throughput Synthesis of Carbohydrates and Functionalization of Polyanhydride Nanoparticles

Transdisciplinary approaches involving areas such as material design, nanotechnology, chemistry, and immunology have to be utilized to rationally design efficacious vaccines carriers. Nanoparticle-based platforms can prolong the persistence of vaccine antigens, which could improve vaccine immunogenicity1. Several biodegradable polymers have been studied as vaccine delivery vehicles1; in particular, polyanhydride particles have demonstrated the ability to provide sustained release of stable protein antigens and to activate antigen presenting cells and modulate immune responses2-12.
The molecular design of these vaccine carriers needs to integrate the rational selection of polymer properties as well as the incorporation of appropriate targeting agents. High throughput automated fabrication of targeting ligands and functionalized particles is a powerful tool that will enhance the ability to study a wide range of properties and will lead to the design of reproducible vaccine delivery devices.
The addition of targeting ligands capable of being recognized by specific receptors on immune cells has been shown to modulate and tailor immune responses10,11,13 C-type lectin receptors (CLRs) are pattern recognition receptors (PRRs) that recognize carbohydrates present on the surface of pathogens. The stimulation of immune cells via CLRs allows for enhanced internalization of antigen and subsequent presentation for further T cell activation14,15. Therefore, carbohydrate molecules play an important role in the study of immune responses; however, the use of these biomolecules often suffers from the lack of availability of structurally well-defined and pure carbohydrates. An automation platform based on iterative solution-phase reactions can enable rapid and controlled synthesis of these synthetically challenging molecules using significantly lower building block quantities than traditional solid-phase methods16,17.
Herein we report a protocol for the automated solution-phase synthesis of oligosaccharides such as mannose-based targeting ligands with fluorous solid-phase extraction for intermediate purification. After development of automated methods to make the carbohydrate-based targeting agent, we describe methods for their attachment on the surface of polyanhydride nanoparticles employing an automated robotic set up operated by LabVIEW as previously described10. Surface functionalization with carbohydrates has shown efficacy in targeting CLRs10,11 and increasing the throughput of the fabrication method to unearth the complexities associated with a multi-parametric system will be of great value (Figure 1a).

In this article, a high throughput method is presented for the synthesis of oligosaccharides and their attachment to the surface of polyanhydride nanoparticles for further use in targeting specific receptors on antigen presenting cells.

Alta capacidade de síntese de hidratos de carbono e funcionalização de nanopartículas polianidrido

Transdisciplinary approaches involving areas such as material design, nanotechnology, chemistry, and immunology have to be utilized to rationally design ...

Bioengenharia

A Direct, Early Stage Guanidinylation Protocol for the Synthesis of Complex Aminoguanidine-containing Natural Products

The guanidine functional group, displayed most prominently in the amino acid arginine, one of the fundamental building blocks of life, is an important structural element found in many complex natural products and pharmaceuticals. Owing to the continual discovery of new guanidine-containing natural products and designed small molecules, rapid and efficient guanidinylation methods are of keen interest to synthetic and medicinal organic chemists. Because the nucleophilicity and basicity of guanidines can affect subsequent chemical transformations, traditional, indirect guanidinylation is typically pursued. Indirect methods commonly employ multiple protection steps involving a latent amine precursor, such as an azide, phthalimide, or carbamate. By circumventing these circuitous methods and employing a direct guanidinylation reaction early in the synthetic sequence, it was possible to forge the linear terminal guanidine containing backbone of clavatadine A to realize a short and streamlined synthesis of this potent factor XIa inhibitor. In practice, guanidine hydrochloride is elaborated with a carefully constructed protecting array that is optimized to survive the synthetic steps to come. In the preparation of clavatadine A, direct guanidinylation of a commercially available diamine eliminated two unnecessary steps from its synthesis. Coupled with the wide variety of known guanidine protecting groups, direct guanidinylation evinces a succinct and efficient practicality inherent to methods that find a home in a synthetic chemist&#39;s toolbox.

Here, we present a protocol for direct, early stage guanidinylation that enables rapid total synthesis of aminoguanidine-containing small organic molecules. An advanced synthetic intermediate used in the synthesis of a blood coagulation factor XIa inhibitor was prepared using this protocol.

Um direto, Early Stage Guanidinylation Protocolo para a Síntese de complexos contendo aminoguanidina Produtos Naturais

The guanidine functional group, displayed most prominently in the amino acid arginine, one of the fundamental building blocks of life, is an important ...

Facile Preparation of 4-Substituted Quinazoline Derivatives

Reported in this paper is a very simple method for direct preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from a reaction between substituted 2-aminobenzophenones and thiourea in the presence of dimethyl sulfoxide (DMSO). This is a unique complementary reaction system in which thiourea undergoes thermal decomposition to form carbodiimide and hydrogen sulfide, where the former reacts with 2-aminobenzophenone to form 4-phenylquinazolin-2(1H)-imine intermediate, whilst hydrogen sulfide reacts with DMSO to give methanethiol or other sulfur-containing molecule which then functions as a complementary reducing agent to reduce 4-phenylquinazolin-2(1H)-imine intermediate into 4-phenyl-1,2-dihydroquinazolin-2-amine. Subsequently, the elimination of ammonia from 4-phenyl-1,2-dihydroquinazolin-2-amine affords substituted quinazoline derivative. This reaction usually gives quinazoline derivative as a single product arising from 2-aminobenzophenone as monitored by GC/MS analysis, along with small amount of sulfur-containing molecules such as dimethyl disulfide, dimethyl trisulfide, etc. The reaction usually completes in 4-6 hr at 160 &#186;C in small scale but may last over 24 hr when carried out in large scale. The reaction product can be easily purified by means of washing off DMSO with water followed by column chromatography or thin layer chromatography.

A protocol for facile preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from 2-aminobenzophenones, thiourea and dimethyl sulfoxide is presented.

Preparação Facile de derivados de quinazolina 4-substituída

Reported in this paper is a very simple method for direct preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from a reaction between substituted ...

Chemoselective Modification of Viral Surfaces via Bioorthogonal Click Chemistry

The modification of virus particles has received a significant amount of attention for its tremendous potential for impacting gene therapy, oncolytic applications and vaccine development.1,2,3 Current approaches to modifying viral surfaces, which are mostly genetics-based, often suffer from attenuation of virus production, infectivity and cellular transduction.4,5 Using chemoselective click chemistry, we have developed a straightforward alternative approach which sidesteps these issues while remaining both highly flexible and accessible.1,2
The goal of this protocol is to demonstrate the effectiveness of using bioorthogonal click chemistry to modify the surface of adenovirus type 5 particles. This two-step process can be used both therapeutically1 or analytically,2,6 as it allows for chemoselective ligation of targeting molecules, dyes or other molecules of interest onto proteins pre-labeled with azide tags. The three major advantages of this method are that (1) metabolic labeling demonstrates little to no impact on viral fitness,1,7 (2) a wide array of effector ligands can be utilized, and (3) it is remarkably fast, reliable and easy to access.1,2,7
In the first step of this procedure, adenovirus particles are produced bearing either azidohomoalanine (Aha, a methionine surrogate) or the unnatural sugar O-linked N-azidoacetylglucosamine (O-GlcNAz), both of which contain the azide (-N3) functional group. After purification of the azide-modified virus particles, an alkyne probe containing the fluorescent TAMRA moiety is ligated in a chemoselective manner to the pre-labeled proteins or glycoproteins. Finally, an SDS-PAGE analysis is performed to demonstrate the successful ligation of the probe onto the viral capsid proteins. Aha incorporation is shown to label all viral capsid proteins (Hexon, Penton and Fiber), while O-GlcNAz incorporation results in labeling of Fiber only.
In this evolving field, multiple methods for azide-alkyne ligation have been successfully developed; however only the two we have found to be most convenient are demonstrated herein &#x2013; strain-promoted azide-alkyne cycloaddition (SPAAC) and copper-catalyzed azide-alkyne cycloaddition (CuAAC) under deoxygenated atmosphere.

Adenovirus particles are engineered to contain either the unnatural amino acid analogue azidohomoalanine or the azido sugar O-GlcNAz. The azide group of each is chemoselectively ligated via "click" chemistry reactions as a means of viral surface modification.

Modificação de Superfícies quimiosseletiva virais através Química Clique Bioorthogonal

The modification of virus particles has received a significant amount of attention for its tremendous potential for impacting gene therapy, oncolytic ...

Imunologia e Infecção

Preparation of N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamides from N-tosyl-1,2,3-triazoles and Subsequent Conversion to Substituted Phthalans and Phenethylamines

Decomposition of N-tosyl-1,2,3-triazoles with rhodium(II) acetate dimer in the presence of alcohols forms synthetically versatile N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamides, which react under a variety of conditions to afford useful N- and O-containing compounds. Acid-catalyzed addition of alcohols or thiols to N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamide-containing phthalans provides access to ketals and thioketals, respectively. Selective reduction of the vinyl group in N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamide-containing phthalans via hydrogenation yields the corresponding phthalan in good yield, whereas reduction with sodium bis(2-methoxyethoxy)aluminumhydride generates a ring-opened phenethylamine analogue. Because the N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamide functional group is synthetically versatile, but often hydrolytically unstable, this protocol emphasizes key techniques in preparing, handling, and reacting these pivotal substrates in several useful transformations.

Preparation of N-2-alkoxyvinylsulfonamides from N-tosyl-1,2,3-triazoles and Subsequent Conversion to Substituted Phthalans and Phenethylamines

Representative experimental procedures for the synthesis of N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamides and subsequent conversion to phthalan and phenethylamine derivatives are presented in detail.

Preparação de N-(2-alcoxivinil)sulfonamidas a partir de N-tosil-1,2,3-triazóis e Conversão Subsequente para Fitalanos e Fenetilaminas Substituídas

Decomposition of N-tosyl-1,2,3-triazoles with rhodium(II) acetate dimer in the presence of alcohols forms synthetically versatile ...

Regioselective O-Glycosylation of Nucleosides via the Temporary 2',3'-Diol Protection by a Boronic Ester for the Synthesis of Disaccharide Nucleosides

Disaccharide nucleosides, which consist of disaccharide and nucleobase moieties, have been known as a valuable group of natural products having multifarious bioactivities. Although chemical O-glycosylation is a commonly beneficial strategy to synthesize disaccharide nucleosides, the preparation of substrates such as glycosyl donors and acceptors requires&#160;tedious protecting&#160;group manipulations and a purification at each synthetic step. Meanwhile, several research groups have reported that boronic and borinic esters serve as a protecting or activating group of carbohydrate derivatives to achieve the regio- and/or stereoselective acylation, alkylation, silylation, and glycosylation. In this article, we demonstrate the procedure for the regioselective O-glycosylation of unprotected ribonucleosides utilizing boronic acid. The esterification of 2&#39;,3&#39;-diol of ribonucleosides with boronic acid makes the temporary protection of diol, and, following O-glycosylation with a glycosyl donor in the presence of p-toluenesulfenyl chloride and silver triflate, permits the regioselective reaction of the 5&#39;-hydroxyl group to afford the disaccharide nucleosides. This method could be applied to various nucleosides, such as guanosine, adenosine, cytidine, uridine, 5-metyluridine, and 5-fluorouridine. This article and the accompanying video represent&#160;useful (visual) information for the O-glycosylation of unprotected nucleosides and their analogs for the synthesis of not only disaccharide nucleosides, but also a variety of biologically relevant derivatives.

Regioselective O-Glycosylation of Nucleosides via the Temporary 2',3'-Diol Protection by a Boronic Ester for the Synthesis of Disaccharide Nucleosides

Here, we present protocols for the synthesis of disaccharide nucleosides by the regioselective O-glycosylation of ribonucleosides via a temporary protection of their 2&#39;,3&#39;-diol moieties utilizing a cyclic boronic ester. This method applies to several unprotected nucleosides such as adenosine, guanosine, cytidine, uridine, 5-methyluridine, and 5-fluorouridine to give corresponding disaccharide nucleosides.

Regioselective O- glicosilação de nucleosídeos através o temporário 2', 3'-Diol proteção por um éster de Boronic para a síntese de dissacarídeo nucleosídeos

Disaccharide nucleosides, which consist of disaccharide and nucleobase moieties, have been known as a valuable group of natural products having ...

Preparation of 6-aminocyclohepta-2,4-dien-1-one Derivatives via Tricarbonyl(tropone)iron

aza-Michael adducts of tricarbonyl(tropone)iron are synthesized by two different methods. Primary aliphatic amines and cyclic secondary amines participate in a direct aza-Michael reaction with tricarbonyl(tropone)iron under solvent-free conditions. Less nucleophilic aniline derivatives and more hindered secondary amines add efficiently to the cationic tropone complex formed by protonation of tricarbonyl(tropone)iron. While the protocol utilizing the cationic complex is less efficient overall for accessing the aza-Michael adducts than the direct, solvent-free addition to the neutral complex, it allows the use of a broader range of amine nucleophiles. Following protection of the amine of the aza-Michael adduct as a tert-butyl carbamate, the diene is decomplexed from the iron tricarbonyl fragment upon treatment with cerium(IV) ammonium nitrate to provide derivatives of 6-aminocyclohepta-2,4-dien-1-one. These products can serve as precursors to diverse compounds containing a seven-membered carbocyclic ring. Because the demetallation requires protection of the amine as a carbamate, the aza-Michael adducts of secondary amines cannot be decomplexed using the protocol described here.

Preparation of 6-aminocyclohepta-2,4-dien-1-one Derivatives via Tricarbonyltroponeiron

Representative experimental procedures for the addition of amine nucleophiles to tricarbonyl(tropone)iron and subsequent demetallation of the resulting complexes are presented in detail.

Preparação de Derivados de 6-Aminociclohepta-2,4-dien-1-ona via Ferro-Tricarbonil(tropona)

aza-Michael adducts of tricarbonyl(tropone)iron are synthesized by two different methods. Primary aliphatic amines and cyclic secondary amines participate ...

The Synthesis of RGD-functionalized Hydrogels as a Tool for Therapeutic Applications

The use of polymers as biomaterials has provided significant advantages in therapeutic applications. In particular, the possibility to modify and functionalize polymer chains with compounds that are able to improve biocompatibility, mechanical properties, or cell viability allows the design of novel materials to meet new challenges in the biomedical field. With the polymer functionalization strategies, click chemistry is a powerful tool to improve cell-compatibility and drug delivery properties of polymeric devices. Similarly, the fundamental need of biomedicine to use sterile tools to avoid potential adverse-side effects, such as toxicity or contamination of the biological environment, gives rise to increasing interest in the microwave-assisted strategy.
The combination of click chemistry and the microwave-assisted method is suitable to produce biocompatible hydrogels with desired functionalities and improved performances in biomedical applications. This work aims to synthesize RGD-functionalized hydrogels. RGD (arginylglycylaspartic acid) is a tripeptide that can mimic cell adhesion proteins and bind to cell-surface receptors, creating a hospitable microenvironment for cells within the 3D polymeric network of the hydrogels. RGD functionalization occurs through Huisgen 1,3-dipolar cycloaddition. Some PAA carboxyl groups are modified with an alkyne moiety, whereas RGD is functionalized with azido acid as the terminal residue of the peptide sequence. Finally, both products are used in a copper catalyzed click reaction to permanently link the peptide to PAA. This modified polymer is used with carbomer, agarose and polyethylene glycol (PEG) to synthesize a hydrogel matrix. The 3D structure is formed due to an esterification reaction involving carboxyl groups from PAA and carbomer and hydroxyl groups from agarose and PEG through microwave-assisted polycondensation. The efficiency of the gelation mechanism ensures a high degree of RGD functionalization. In addition, the procedure to load therapeutic compounds or biological tools within this functionalized network is very simple and reproducible.

We present a protocol for the synthesis of RGD-functionalized hydrogels as devices for cell and drug delivery. The procedure involves copper catalyzed alkyne-azide cycloaddition (CuAAC) between alkyne-modified polyacrylic acid (PAA) and a RGD-azide derivative. The hydrogels are formed using microwave-assisted polycondensation and their physicochemical properties are investigated.