The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.

Os vários procedimentos experimentais e a eutanásia humanitária são aprovados pelo comitê de ética instituições de acolhimento e pelos órgãos reguladores competentes. Eutanásia é normalmente conseguido usando asfixia com CO2, seguido por deslocação cervical. 1. Dispositivo <ol><li> Máquina de a parte principal da base do dispositivo a partir de um bloco sólido de resina de acetil de alta densidade, como descrito neste manuscrito. Em cada extremidade criar 3 mm de alto elevado tiras e máquina parte fora destes 2,5 mm bosques para levar as hastes (ver Figura 2 e Figura 3). </li><li> Faça hastes de aço inoxidável 2,4 milímetros de diâmetro com extremidades arredondadas. NOTA: A estrutura principal da tampa foi usinado fora da placa de duralumínio. Um número limitado de dispositivos acabados estão disponíveis a partir Dr. Goodlad. </li></ol> 2. Utilização do Dispositivo <ol><li> Dissecar o intestino delgado e cólon a partir da cavidade abdominal com uma tesourae os dedos enluvados. Remova o mesentério, segurando-o com uma pinça curva e puxando-a do intestino. </li><li> Enxaguar os intestinos com fosfato frio tamponado salino (PBS, pH 7,4) utilizando uma ponta de pipeta Gilson tipo, que tinha sido cortado para baixo na sua extremidade mais larga de modo que possa caber num 10 ou 20 ml de encaixe do luer da seringa de plástico. </li><li> Coloque para fora do intestino delgado (SB) para uma folha de papel toalha e dividir em três partes iguais em comprimento (proximal, médio e distal - SB1, SB2 e SB3) com uma tesoura. Remover o ceco e colocar para fora do cólon. </li><li> Faça várias muito pequenos cortes nos segmentos intestinais com uma tesoura para permitir que o fluido escapar e coloque uma folha de papel toalha sobre os intestinos e gentilmente executar um dedo sobre os preparativos para espremer para fora o líquido e secar. </li><li> Levantar as secções e insere as hastes de aço inoxidável que foram previamente molhadas por imersão num recipiente com solução salina tamponada com fosfato. NOTA: O intestino pode estar emvertidos se assim o desejar (virado do avesso). </li><li> Rotular um pedaço de cartão ou papel de filtro cortado à medida para encaixar na base do dispositivo. Lápis é melhor, uma vez que não é afectada por praticamente todas as soluções. Data da autópsia, código experimental e número de identificação animal são sugeridas. </li><li> Colocar a placa de papel de filtro ou para a base do dispositivo. Insira as hastes e os intestinos para as ranhuras na base do dispositivo. Certifique-se da extremidade proximal dos segmentos é posicionado de um modo padronizado. As extremidades proximais deve ser perto os rótulos de cartão. </li><li> Coloque a parte superior do dispositivo através da base. Use as barras inclinadas para guiar uma lâmina de bisturi para cortar longitudinalmente as seções. NOTA: Ajuda se o tecido é suavemente e cuidadosamente mantida com um dedo para garantir que ele não se mova com a faca. </li><li> Remover a parte superior do dispositivo. Remova cuidadosamente o papel e tecidos de filtro (ainda em suas varas). NOTA: Um pedaço de cartão rígido colocado debaixo da filpapel ter ajudará elevação. </li><li> Ligeiramente úmido (com a ponta do dedo com luva mergulhado em PBS) os segmentos. Role a vara, lado a lado para abrir o intestino e espalhá-lo plana. O tecido irá então aderir ao papel de filtro. </li><li> Examine visualmente os preparativos para quaisquer lesões graves. </li><li> Transferir o tecido aderiu ao papel de filtro a um banho superficial (ou caixa de sanduíche) contendo fixador. NOTA: Depois que o tecido adere ao papel de filtro ou de cartão permanecerá firmemente fixada. Uma ampla gama de agentes fixadores podem ser usados ​​para preservar a preparação. Recomenda-se que o fluido de Carnoy deve ser usado para o estudo de proliferações de células intestinais 6, o qual é ideal para a fixação dos melhores métodos de proliferação celular; No entanto formalina ou outros fixadores muitos também podem ser utilizados se forem necessários outros pontos de extremidade. </li><li> Após a fixação (geralmente 3 horas), transferir os preparativos em etanol a 70%. As amostras podem então ser armazenadas até serem necessárias. As preparações cum ser estudada en face e / ou utilizados para a preparação de amostras histológicas para a H &amp; E ou outras técnicas de coloração histológicos, imuno-histoquímica e / ou hibridação in situ. NOTA: prolongada fixação pode reduzir a reactividade imuno-histoquímica e / ou in situ reactividade hibridação. Caixas sanduíche polipropileno são ideais para armazenar um grande número de preparações. </li><li> Se necessário os tecidos fixos a partir dos vários segmentos intestinais pode ser feita em rolos suíços &#39;&#39; e coradas com toda a variedade de métodos histológicos 6, incluindo as descritas acima. Para fazer uma &#39;roll suíça &quot;os segmentos intestinais são removidos do papel de filtro, enroladas em torno de um palito ou um palito de dente, presa com um alfinete entomológico e processados ​​para a incorporação de cera 6. </li><li> Se necessário, manchar o tecido grosso com azul de metileno para visualizar focos de criptas aberrantes 7. </li><li> Pontuação dos preparativos fixos emlazer. </li></ol>

<ol>
	<li>Goodlad, R. A., Alison, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=+Cancer+Handbook."> Cancer Handbook.</a> , 243-262 (2007).</li><li>Ward, J. M., Treuting, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+intestinal+epithelial+carcinogenesis:+pathology+and+preclinical+models.">Rodent intestinal epithelial carcinogenesis: pathology and preclinical models.</a> Toxicol Pathol. 42, 148-161 (2014).</li><li>Sundberg, J. P., Hogenesch, H., Nikitin, A. Y., Treuting, P. M., Ward, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Training+mouse+pathologists:+ten+years+of+workshops+on+the+Pathology+of+Mouse+Models+of+Human+Disease.">Training mouse pathologists: ten years of workshops on the Pathology of Mouse Models of Human Disease.</a> Toxicol Pathol. 40, 823-825 (2012).</li><li>Wasan, H. S., Novelli, M., Bee, J., Bodmer, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fat+influences+on+polyp+phenotype+in+multiple+intestinal+neoplasia+mice.">Dietary fat influences on polyp phenotype in multiple intestinal neoplasia mice.</a> Proc Natl Acade Sci USA. 94, 3308-3313 (1997).</li><li>Rudling, R., Hassan, A. B., Kitau, J., Mandir, N., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+device+to+rapidly+prepare+whole+mounts+of+murine+intestine.">A simple device to rapidly prepare whole mounts of murine intestine.</a> Cell Prolif. 39, 415-420 (2006).</li><li>Alferez, D., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+best+measure+cell+proliferation+in+samples+from+the+intestine.">To best measure cell proliferation in samples from the intestine.</a> Cell Prolif. 40, 231-240 (2007).</li><li>Park, H. S., Goodlad, R. A., Wright, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+of+aberrant+crypt+foci+and+colonic+carcinoma+in+dimethylhydrazine-treated+rats+varies+in+a+site-specific+manner+and+depends+on+tumor+histology.">The incidence of aberrant crypt foci and colonic carcinoma in dimethylhydrazine-treated rats varies in a site-specific manner and depends on tumor histology.</a> Cancer Res. 57, 4507-4510 (1997).</li><li>Park, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+epidermal+growth+factor+and+dimethylhydrazine+on+crypt+size,+cell+proliferation,+and+crypt+fission+in+the+rat+colon.+Cell+proliferation+and+crypt+fission+are+controlled+independently.">Effects of epidermal growth factor and dimethylhydrazine on crypt size, cell proliferation, and crypt fission in the rat colon. Cell proliferation and crypt fission are controlled independently.</a> Am J Pathol. 151, 843-852 (1997).</li><li>Femia, A. P., Dolara, P., Caderni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucin-depleted+foci+(MDF)+in+the+colon+of+rats+treated+with+azoxymethane+(AOM)+are+useful+biomarkers+for+colon+carcinogenesis.">Mucin-depleted foci (MDF) in the colon of rats treated with azoxymethane (AOM) are useful biomarkers for colon carcinogenesis.</a> Carcinogenesis. 25, 277-281 (2004).</li><li>Ruehl-Fehlert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--part+1.">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).</li><li>Goodlad, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibiting+vascular+endothelial+growth+factor+receptor-2+signaling+reduces+tumor+burden+in+the+ApcMin/++mouse+model+of+early+intestinal+cancer.">Inhibiting vascular endothelial growth factor receptor-2 signaling reduces tumor burden in the ApcMin/+ mouse model of early intestinal cancer.</a> Carcinogenesis. 27, 2133-2139 (2006).</li><li>Mandir, N., Englyst, H., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistant+carbohydrates+stimulate+cell+proliferation+and+crypt+fission+in+wild-type+mice+and+in+the+Apc(Min/+)+mouse+model+of+intestinal+cancer,+association+with+enhanced+polyp+development.">Resistant carbohydrates stimulate cell proliferation and crypt fission in wild-type mice and in the Apc(Min/+) mouse model of intestinal cancer, association with enhanced polyp development.</a> Br J Nutr. 100, 711-721 (2008).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

O dispositivo acelera muito o processo para que dois operadores podem autópsia totalmente um rato dentro de 6 min. Isso vai incluir uma verificação visual para as lesões graves e evidentes de pesagem e fixa os principais órgãos. Ele também irá permitir que os operadores de lavar, limpar e pesar o estômago, ceco, intestino delgado e cólon e preparar as peças inteiras. O tecido pode ser achatada fixa muito rapidamente e, assim, evitar artefactos de degradação. Uma das principais v...

O rato eo camundongo geneticamente modificado 1-3 são um modelo de valor inestimável para o estudo de diversas patologias, especialmente câncer e sua relação com a inflamação no trato gastrointestinal. Isso muitas vezes requer a preparação de peças inteiras de intestino delgado e / ou cólon. A preparação de peças inteiras pode ser feito com um par de tesouras de deslocamento de precisão, mas pode demorar cerca de 20 minutos por ratinho 4. Isto não é muito prático para estudos comparativos, as quais requerem uma quantidade significativa de ratinhos (10 por grupo dizer sujeitas a análise estatística). Além disso, o comprimento de tempo necessário aumenta o risco de degradação do tecido. Uma tentativa de aliviar este problema levou ao julgamento de vários auxílios de preparação de corte. O primeiro foi baseado numa série de placas de metal, com os bosques de corte, mas as placas obscurecido o tecido e, portanto, o corte era difícil de controlar. A conventional lápis de seis lados, finalmente, forneceu a inspiração para o dispositivo de corte, como pudemos ver então como uma forma de meia lápis faria um bom guia para um bisturi (Figura 1). Isto resultou em um projeto para um quadro com quatro guias de corte 5. A eficácia deste dispositivo foi dramático como as preparações na Figura 4 demonstram a diferença entre a preparação e a preparação de tesoura dispositivo. Os topos dos dispositivos originais foi construída a partir de várias peças de metal, mas os posteriores, eo modelo atual foi usinado a partir de uma sólida peça de duralumínio. A base foi usinado de resina de alta densidade mais alta qualidade. O dispositivo tem provado ser de grande utilidade para a preparação de peças inteiras de rato intestino, uma vez que acelera significativamente e melhora a qualidade e consistência das preparações, que têm uma ampla gama de aplicações.

<table><tbody><tr><td>Delrin</td><td>Ryan Plastics, Earls Barton, UK</td><td></td><td>High-density acetal resin similar material would suffice</td></tr><tr><td>Duralumin plate</td><td>Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK</td><td></td><td>Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Finished device(s) ready for use</td><td>Contact Dr Goodlad&amp;nbsp; r.goodlad@imperial.ac.uk</td><td></td><td>Contact&amp;nbsp; r.goodlad@imperial.ac.uk for supply details</td></tr></tbody></table>

a simple device to rapidly prepare whole mounts of the mouse intestine

Preparar as peças inteiras do rato intestino delgado e cólon para análise subsequente ou quantificação pode ser demorado e difícil. Descreve-se a utilização de um dispositivo simples para cortar e intestinos &quot;rolo&quot; de rato para preparar rapidamente preparações integrais de montagem de qualidade superior e uniforme para o que pode ser conseguido com a mão. O dispositivo compreende uma base que contém de 4 hastes de aço inoxidável e uma parte superior, que actua como um guia de corte. As hastes são inseridas no lúmen do intestino delgado [dividida em terços] e do cólon. As varetas e as amostras são, em seguida, colocada sobre um pedaço de papel de filtro ou o cartão dentro das ranhuras de detenção na base do dispositivo. A parte superior do dispositivo é então posicionado e serve como uma guia de corte. As duas secções inclinadas do centro da peça superior são utilizadas para orientar uma faca ou bisturi, e cortar o intestino longitudinalmente no topo das hastes. Uma vez que as secções intestinais foram cortados, o topo é removido e o cartão, tissue hastes e cuidadosamente retirado do dispositivo e colocado na bancada. As hastes são então suavemente rolou de lado para nivelar e manter os segmentos intestinais para o pedaço de papel de filtro subjacente ou cartão. A preparação final pode então ser examinado ou fixo e armazenado para análise posterior. As preparações são de valor inestimável para o estudo das alterações intestinais em modelos normais ou geneticamente modificados do mouse. As preparações foram usadas para o estudo e a quantificação dos efeitos da inflamação (colite), danos, lesões pré-cancerosas (focos de criptas aberrantes (ACFs) e mucina empobrecido focos (MDF)) e pólipos ou tumores.

Os pólipos são fáceis de identificar sob um estereomicroscópio com uma fonte de luz fria para iluminar o lado do tecido (Figura 4). É útil para marcar o cartão com marcas de lápis quando um pólipo é observado a fim de que scoring pode ser discutido mais tarde e diferentes operadores podem chegar a um acordo. O tecido também pode ser volume coradas [com azul de metileno] para identificar focos de criptas aberrantes 8 ou mucina focos empobrecido (MDF) 9 por iluminação a ...

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A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

The use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

Um dispositivo simples de preparar rapidamente inteiras Mounts do mouse Intestino

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe ...

a-simple-device-to-rapidly-prepare-whole-mounts-of-the-mouse-intestine

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

19.5K visualizações.  National Institutes of Health. The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

Vídeo: A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

Video Imaging and Spatiotemporal Maps to Analyze Gastrointestinal Motility in Mice

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central nervous system. Changes in ENS function are a major cause of GI symptoms and disease and may contribute to GI symptoms reported in neuropsychiatric disorders including autism. It is well established that isolated colon segments generate spontaneous, rhythmic contractions known as Colonic Migrating Motor Complexes (CMMCs). A procedure to analyze the enteric neural regulation of CMMCs in ex vivo preparations of mouse colon is described. The colon is dissected from the animal and flushed to remove fecal content prior to being cannulated in an organ bath. Data is acquired via a video camera positioned above the organ bath and converted to high-resolution spatiotemporal maps via an in-house software package. Using this technique, baseline contractile patterns and pharmacological effects on ENS function in colon segments can be compared over 3-4 hr. In addition, propagation length and speed of CMMCs can be recorded as well as changes in gut diameter and contraction frequency. This technique is useful for characterizing gastrointestinal motility patterns in transgenic mouse models (and in other species including rat and guinea pig). In this way, pharmacologically induced changes in CMMCs are recorded in wild type mice and in the Neuroligin-3R451C mouse model of autism. Furthermore, this technique can be applied to other regions of the GI tract including the duodenum, jejunum and ileum and at different developmental ages in mice.

This article describes a video imaging technique and high-resolution spatiotemporal mapping to identify changes in the neural regulation of colonic motility in adult mice. Subtle effects on gastrointestinal (GI) function can be detected using this approach in isolated tissue preparations to advance our understanding of GI disease.

Vídeo Imagem e Mapas espaço-temporais para analisar Motilidade Gastrointestinal em Ratos

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central ...

Neurociência

Multiphoton Microscopic Observation of Vessels in Mouse Liver Tissue

Observing the intravascular dynamics of mouse liver tissue allows us to conduct further in-depth observations and studies on tissue-related diseases of the mouse liver. A mouse is injected with a dye that can stain blood vessels. To observe the mouse liver in vivo, it is exposed and fixed in a frame. Two and three-dimensional images of the blood vessels in the liver tissue are obtained using a multiphoton microscope. Images of the tissues at the selected sites are continuously acquired to observe long-term changes; the dynamic changes of blood vessels in the liver tissues are also observed. Multiphoton microscopy is a method for observing cell and cell function in deep tissue sections or organs. Multiphoton microscopy has sensitivity to tissue microstructure and enables imaging of biological tissues at high spatial resolution in vivo, providing the ability to capture the biochemical information of the organization. Multiphoton microscopy is used to observe part of the liver but fixing the liver to make the image more stable is problematic. In this experiment, a special vacuum suction cup is used to fix the liver and obtain a more stable image of the liver under the microscope. In addition, this method can be used to observe dynamic changes of specific substances in the liver by marking such substances with dyes.

In this experiment, a mouse is injected in its tail vein with Rhodamine B isothiocyanate&#8211;dextran that can stain blood vessels. After the liver is exposed and fixed, a specific part of the liver can be selected to observe the deep tissue in the living body using multiphoton microscopy.

Observação microscópica multifotípica de vasos em tecido hepático de rato

Observing the intravascular dynamics of mouse liver tissue allows us to conduct further in-depth observations and studies on tissue-related diseases of ...

Bioengenharia

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing prevalence of diabetes, both immune-mediated type 1 and obesity-linked type 2, studies aimed at delineating diabetes pathophysiology and therapeutic mechanisms are of critical importance. The &#946;-cells of the pancreatic islets of Langerhans are responsible for appropriately secreting insulin in response to elevated blood glucose concentrations. In addition to glucose and other nutrients, the &#946;-cells are also stimulated by specific hormones, termed incretins, which are secreted from the gut in response to a meal and act on &#946;-cell receptors that increase the production of intracellular cyclic adenosine monophosphate (cAMP). Decreased &#946;-cell function, mass, and incretin responsiveness are well-understood to contribute to the pathophysiology of type 2 diabetes, and are also being increasingly linked with type 1 diabetes. The present mouse islet isolation and cAMP determination protocol can be a tool to help delineate mechanisms promoting disease progression and therapeutic interventions, particularly those that are mediated by the incretin receptors or related receptors that act through modulation of intracellular cAMP production. While only cAMP measurements will be described, the described islet isolation protocol creates a clean preparation that also allows for many other downstream applications, including glucose stimulated insulin secretion, [3H]-thymidine incorporation, protein abundance, and mRNA expression.

Assaying in vitro &#946;-cell function using isolated mouse islets of Langerhans is an important component in the study of diabetes pathophysiology and therapeutics. While many&#160;downstream applications are available, this protocol specifically describes the measurement of intracellular cyclic adenosine monophosphate (cAMP) as an essential parameter determining &#946;-cell function.

Um Método para Mouse ilhotas pancreáticas Isolamento e intracelular cAMP Determinação

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Biologia

Studying Murine Small Bowel Mechanosensing of Luminal Particulates

Gastrointestinal (GI) motility is critical for normal digestion and absorption. In the small bowel, which absorbs nutrients, motility optimizes digestion and absorption. For this reason, some of the motility patterns in the small bowel include segmentation for mixing of luminal contents and peristalsis for their propulsion. Physical properties of luminal contents modulate the patterns of small bowel motility. The mechanical stimulation of GI mechanosensory circuits by transiting luminal contents and underlying gut motility initiate and modulate complex GI motor patterns. Yet, the mechanosensory mechanisms that drive this process remain poorly understood. This is primarily due to a lack of tools to dissect how the small bowel handles materials of different physical properties. To study how the small bowel handles particulates of varying sizes, we have modified an established in vivo method to determine small bowel transit. We gavage live mice with fluorescent liquid or tiny fluorescent beads. After 30 minutes, we dissect out the bowels to image the distribution of fluorescent contents across the entirety of the GI tract. In addition to high-resolution measurements of the geometric center, we use variable size binning and spectral analysis to determine how different materials affect small bowel transit. We have explored how a recently discovered "gut touch" mechanism affects small bowel motility using this approach.

To study how the small bowel handles particulates of varying sizes, we have modified an established in vivo method to determine small bowel transit.

Estudando o Mecananosense do Intestino Delgado Urinário de Partículas Luminais

Gastrointestinal (GI) motility is critical for normal digestion and absorption. In the small bowel, which absorbs nutrients, motility optimizes digestion ...

Medicina

Whole Cell Electrophysiology of Primary Cultured Murine Enterochromaffin Cells

Enterochromaffin (EC) cells in the gastrointestinal (GI) epithelium constitute the largest subpopulation of enteroendocrine cells. As specialized sensory cells, EC cells sense luminal stimuli and convert them into serotonin (5-hyroxytryptamine, 5-HT) release events. However, the electrophysiology of these cells is poorly understood because they are difficult to culture and to identify. The method presented in this paper outlines primary EC cell cultures optimized for single cell electrophysiology. This protocol utilizes a transgenic cyan fluorescent protein (CFP) reporter to identify mouse EC cells in mixed primary cultures, advancing the approach to obtaining high-quality recordings of whole cell electrophysiology in voltage- and current-clamp modes.

Enterochromaffin (EC) cells comprise a small subset of gastrointestinal epithelial cells. EC cells are electrically excitable and release serotonin, yet difficulties in culturing and identifying EC cells have limited physiological studies. The method presented here establishes a primary culture model amenable to examination of single EC cells by electrophysiology.

Eletrofisiologia celular de células enterocromafins murino culta primário

Enterochromaffin (EC) cells in the gastrointestinal (GI) epithelium constitute the largest subpopulation of enteroendocrine cells. As specialized sensory ...

Laser Ablation and Intravital Microscopy to Study Intestinal Remodeling

Investigating intestinal recovery in vivo is an exquisite technical challenge. A lack of longitudinal imaging protocols has prevented deeper insights into the cell and tissue scale dynamics that orchestrate intestinal regeneration. Here, we describe an intravital microscopy method that locally induces tissue damage at the single crypt scale and follows the regenerative response of the intestinal epithelium in living mice. Single crypts or larger intestinal fields were ablated by a high-intensity multiphoton infrared laser in a time- and space-controlled manner. Subsequent long-term repetitive intravital imaging enabled the tracking of the damaged areas over time and allowed for the monitoring of crypt dynamics during tissue recovery over a period of multiple weeks. Crypt remodeling events such as crypt fission, fusion, and disappearance were observed in the neighboring tissue upon laser-induced damage. This protocol enables the study of crypt dynamics both in homeostatic and pathophysiological settings, such as aging and tumor initiation.

Here, we present a method to obtain images of the intestine upon laser-induced wounding. By exposing the mouse intestine to a multiphoton laser, the loss of a single or multiple crypt(s) is induced locally. By repeatedly imaging the damaged area over months, the real-time dynamics of intestinal recovery is captured.

Ablação a Laser e Microscopia Intravital no Estudo do Remodelamento Intestinal

Investigating intestinal recovery in vivo is an exquisite technical challenge. A lack of longitudinal imaging protocols has prevented deeper insights into ...

Imaging Fixture Supported Mouse Liver Staging for Multiphoton Microscopy Based Vascular Visualization: A Stabilization Device-assisted Imaging Technique to Obtain Multi-dimensional Images of Blood Vessels in Mouse Liver

Source: Rongrong, W. et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/video/60932" target="_blank">Multiphoton Microscopic Observation of Vessels in Mouse Liver Tissue</a>. J. Vis. Exp. (2021)
This video describes an imaging procedure to observe and study intravascular dynamics of a mouse liver tissue using multiphoton microscopy following stabilization of the organ. Multiphoton microscopy enables the imaging of biological tissue at high spatial resolution in vivo.

Estágio de fígado de camundongo com suporte de dispositivo de imagem para visualização vascular baseada em microscopia multifotônica: uma técnica de imagem assistida por dispositivo de estabilização para obter imagens multidimensionais de vasos sanguíneos no fígado de camundongo

Source: Rongrong, W. et al. Multiphoton Microscopic Observation of Vessels in Mouse Liver Tissue. J. Vis. Exp. (2021)
This video describes an imaging ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Modelo de Roedores

Adulto

Whole Mount Preparation of Mouse Intestine: Using a Simple Gut-incising Device to Prepare Whole Mount

Source: Yoneda, M. et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/video/53042" target="_blank">A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine.</a> J. Vis. Exp. (2015)
In this video, we demonstrate whole mount preparation of the mouse intestine using a simple gut-incising device. The resulting mounts are of superior and uniform quality and can be used for histological analyses.

Preparação de montagem inteira do intestino de camundongo: usando um dispositivo simples de incisão intestinal para preparar a montagem inteira

Source: Yoneda, M. et al. A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine. J. Vis. Exp. (2015)
In this video, we demonstrate whole ...

Pesquisa do câncer

Câncer gastrointestinal

Técnicas e ensaios

Colonoscopic Guided Pinch Biopsy in a Mouse Model: A Technique to Visualize and Extract Tissue Samples from Mouse Colon

Source: Montrose, D. C., et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/60949">Performing Colonoscopic-Guided Pinch Biopsies in Mice and Evaluating Subsequent Tissue Changes.</a> J. Vis. Exp. (2021)
This video demonstrates the protocol for performing colonoscope-guided pinch biopsy in the mouse. This technique helps visually analyze the colon lumen and collect tissue samples for detailed studies.

Biópsia de pinça guiada por colonoscopia em um modelo de camundongo: uma técnica para visualizar e extrair amostras de tecido do cólon de camundongo

Source: Montrose, D. C., et al. Performing Colonoscopic-Guided Pinch Biopsies in Mice and Evaluating Subsequent Tissue Changes. J. Vis. Exp. (2021)
This ...

Mouse Ileal Loop Model: A Surgical Model to Study Intestinal Permeability in the Mouse

Source: Boerner, K., et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/62093">Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model.</a> J. Vis. Exp. (2021)
This video demonstrates the generation of an ileal loop model to study intestinal permeability in a mouse model. This method provides a live model to understand the epithelial barrier function and consequent immune response.