A função dos detectores na Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC) é analisar os solutos conforme eles saem da coluna cromatográfica. O detector reconhece a propriedade do soluto e gera sinais elétricos correspondentes, que são convertidos em um gráfico legível da resposta do detector versus tempo de eluição, chamado cromatograma no computador. Existem vários tipos de detectores de HPLC, cada um com suas próprias vantagens e limitações, dependendo das propriedades do analito e da sensibilidade necessária. É importante observar que nenhum método de detecção de HPLC pode detectar todos os analitos. Por esse motivo, os sistemas de HPLC podem incorporar dois ou mais detectores na mesma execução para aumentar a precisão e a sensibilidade da detecção. Alguns detectores de HPLC comumente usados incluem detectores espectrofotométricos, detectores de índice de refração, detectores eletroquímicos, detectores de espectrometria de massa, detectores de infravermelho por transformada de Fourier (FTIR), detectores de espalhamento de luz e detectores de fotoionização.
Detectores de UV-visível (UVD) e de fluorescência (FLD) são detectores espectrofotométricos. Os detectores UV-visíveis medem a quantidade de luz absorvida pelo analito em um comprimento de onda específico na presença de uma fase móvel não absorvente. Eles são amplamente utilizados porque são simples, confiáveis e fornecem boa sensibilidade. Eles são mais eficazes para detectar compostos com sistemas aromáticos ou conjugados de ligação dupla. Os detectores de fluorescência medem a fluorescência emitida pelo analito quando excitado pela luz de um comprimento de onda específico. Eles são altamente sensíveis e seletivos, tornando-os adequados para detectar compostos com propriedades fluorescentes. Eles são comumente utilizados para a análise de produtos farmacêuticos, poluentes ambientais, produtos petrolíferos e produtos naturais.
Os detectores de índice de refração (RID) medem a diferença no índice de refração entre a fase móvel e o analito à medida que pasam passa pelo detector. Eles respondem a quase todos os solutos, mas têm algumas desvantagens. Eles são sensíveis a mudanças de pressão e temperatura, têm baixa sensibilidade e não conseguem detectar traço de analitos. Eles são comumente usados para a análise de compostos não cromofóricos e não fluorescentes, como açúcares, lipídios e polímeros.
Os detectores eletroquímicos (ECD) medem as propriedades elétricas do analito, como seu potencial de oxidação ou redução. Esses detectores são baseados em amperometria, voltametria, coulometria e condutometria. Eles são comumente usados para a análise de compostos que podem ser eletroquimicamente ativos, como neurotransmissores, aminoácidos e pesticidas.
Os detectores de espectrometria de massa (MS) identificam e quantificam analitos com base em sua relação massa-carga. Eles são altamente sensíveis e específicos, tornando-os adequados para detectar quantidades vestigiais de analitos. O problema com esses detectores é que eles exigem amostras de fase gasosa, e o solvente deve ser vaporizado. Os espectrômetros de massa são comumente usados para a análise de misturas complexas, como proteínas, peptídeos e metabólitos. Outros detectores incluem detectores de FTIR, espalhamento de luz e fotoionização.
Do Capítulo 11:
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