우리는 심실 보조 장치에서 잠재적인 혈전 유발 핫스팟을 식별하기 위해 실용적이고 접근 가능한 벤치탑 프로토콜을 개발하여 초기 프로토타이핑과 동물 테스트 사이의 중요한 격차를 해소하는 것을 목표로 합니다. 동물 실험은 심실 보조 장치의 혈전증을 평가하는 주요 방법으로 지속되어 왔습니다. 전산 유체 역학은 설계 검증을 위한 매우 유용한 도구가 되었지만, 아직 in vitro 및 in vivo 검증을 대체할 수는 없습니다.
혈액 응고의 복잡한 특성과 수많은 교란 요인으로 인해 실제 장치 혈전성과 실험적 인공물을 구별하기가 어렵습니다. VAD의 혈전증을 평가하기 위한 시험관 내 방법은 여전히 활용도가 낮으며 현재까지 표준화된 방법이 없습니다. 포괄적인 프로토콜 및 비디오 가이드를 제공함으로써 벤치탑 방법의 광범위한 채택을 촉진할 수 있기를 바랍니다.
이 방법은 의료기기 개발의 기술적, 윤리적 문제를 해결하여 동물 실험에 대한 의존도를 줄이는 동시에 개발 프로세스 초기에 혈전증 위험을 감지하는 능력을 향상시킵니다. 시작하려면 테스트 루프에 150ml의 혈액을 채웁니다. 루프에 갇힌 모든 공기를 제거합니다.
축류 혈액 펌프를 사용하는 경우 수직 위치로 회전하여 부력을 통해 공기를 방출합니다. 원심 펌프를 사용하는 경우 거꾸로 뒤집고 회전하여 2차 흐름 경로에 공기가 갇히지 않도록 합니다. 튜브와 저장 탱크 표면을 부드럽게 두드리고 기포를 짜서 제거합니다.
튜브의 수평 부분과 튜브와 커넥터 사이의 접합부를 면밀히 검사하여 기포가 없는지 확인합니다. 정맥 주사 백을 짜서 유체 레벨을 좁은 상단 부분에 가깝게 가져옵니다. 그런 다음 유체 라인을 가로질러 지혈제로 백을 고정하여 유체-공기 인터페이스를 제거하고 통풍구 스톱콕을 닫습니다.
다음으로 압력선 끝에 있는 마개를 닫습니다. 압력계 튜브를 제거하고 3ml 주사기를 부착합니다. 마개를 열고 1-2밀리리터의 유체를 연장선에 약 4cm로 끌어들입니다.
스톱콕을 닫고 주사기를 분리한 다음 압력계 튜브를 다시 연결합니다. 마개를 열어 압력 판독을 활성화합니다. 마지막으로 주사기를 사용하여 샘플링 포트를 프라임합니다.
다음으로, 보푸라기가 없는 물티슈를 세 개의 동일한 조각으로 자르거나 찢습니다. 한 조각의 모서리를 비틀어 팁을 만들고 주입구에 삽입하여 잔여 혈액을 흡수합니다. 두 번째 조각을 비틀어 만듭니다.
식염수를 적셔 젖은 팁을 포트에 삽입하여 남아 있는 혈액을 모두 제거합니다. 세 번째 단편을 사용하여 포트에 남아 있는 식염수를 흡수합니다. 이제 심실 보조 장치(VAD)를 저속으로 시작하고 약 5초 동안 작동하여 펌프 내에 갇힌 기포를 제거합니다.
펌프를 멈춥니다. 가방에 기포가 나타나면 디에어링을 반복하십시오. 루프의 혈액을 순환시키기 위해 저속으로 펌프를 다시 시작하십시오.
헤파린 나트륨 1 밀리리터, 준비된 염화칼슘 용액 2 밀리리터, EDTA 1.5 밀리리터를 별도의 튜브로 옮깁니다. 루프의 혈액에 헤파린을 추가하려면 마이크로피펫에 헤파린 75단위를 흡인하고, 피펫을 분주하는 동시에 주사기 플런저를 흘리지 않고 당겨 3ml 주사기에 분배합니다. 3방향 스톱콕의 가로 포트를 사용하여 주사기로 루프에 물질을 투여합니다.
스톱콕의 수 루어 잠금 장치를 회전하여 주입 포트가 위쪽을 향하도록 하여 상단의 기포를 가둡니다. 이제 포트가 위를 향하고 주사기가 수직으로 아래를 향하도록 하여 루어 잠금 장치를 통해 주사기를 주입 포트에 부착합니다. 주사기 플런저를 당겨 혈액으로 채우고 헤파린을 혈액과 혼합하면서 주사기로 공기를 흡입합니다.
기포가 주사기 상단으로 올라오도록 합니다. 그런 다음 혼합물을 루프에 주입하여 공기가 들어가지 않도록 합니다. 주사기를 통해 혈액을 4-5회 왕복하여 헤파린화된 혈액이 포트의 공간에 국한되지 않도록 합니다.
루프에서 혈액의 활성화된 응고 시간(ACT)을 적정하려면 먼저 루프에 있는 혈액 150ml에 750마이크로리터의 1몰 염화칼슘 용액을 추가합니다. 혈액 응고를 방지하기 위해 잔류 공기를 제거한 후 신속하게 액체를 주입하십시오. 또는 주사기의 염화칼슘을 트리스 완충 식염수 1ml로 희석하여 조기 응고를 줄입니다.
주입된 염화칼슘을 최소 2분 동안 순환시킨 후 1ml 주사기를 샘플링 포트에 부착합니다. 항구에서 정체된 혈액을 제거하기 위해 0.5ml의 폐혈을 뽑고 버립니다. 다음으로, 새 1ml 주사기를 샘플링 포트에 부착하고 분석을 위해 0.5ml의 혈액을 채취합니다.
현장 진료 전혈 응고 시스템을 사용하여 활성화된 응고 시간을 측정합니다. 청소 amp앞에서 설명한 것처럼 보푸라기가 없는 물티슈를 사용하여 링 포트. 적정 값을 참조하여 목표 염화칼슘 농도를 알리십시오.
칼슘 농도를 점진적으로 증가시켜 300초의 활성화된 응고 시간을 달성합니다. 루프에서 300초의 ACT가 달성되면 체외 혈전증 테스트를 시작합니다. 로터 속도를 수정하고 Hoffman cl을 사용하여 저항을 조절하여 펌프를 원하는 유량과 압력으로 조정합니다.amp.
앞에서 설명한 것처럼 루프에서 혈액 샘플을 추출하고 ACT 기기에 혈액 한 방울을 넣어 15분마다 ACT를 측정합니다. ACT가 200초 미만으로 떨어지면 루프에 헤파린 나트륨 25단위를 추가로 주입합니다. 1시간 후 1.5ml의 0.5몰 EDTA를 루프에 주입하여 추가 응고를 억제합니다.
EDTA가 순환하고 2분 동안 혼합되도록 한 다음 펌프를 멈춥니다. 지혈기를 사용하여 펌프 입구와 출구에 연결된 튜브를 고정하고 입구 및 출구 미늘에서 3-4cm 떨어진 곳에 클램프를 배치합니다. 튜브를 조심스럽게 분리하여 펌프를 해제하십시오.
그런 다음 펌프와 흐름 루프에서 혈액을 배출하여 용기로 들어갑니다. 마지막으로 펌프 입구와 출구를 통해 식염수를 피펫으로 주입하여 잔류 혈액을 씻어냅니다. 혈소판 침착은 펌프 프로토타입에서 블레이드의 뿌리를 따라 일관되게 관찰되었습니다.
티타늄 성분을 전기 연마하면 이 부위의 혈전 형성이 제거되었습니다. 프로토 타입은 또한 앞뒤 하우징 구성 요소 접합부에서 불완전한 조화를 이루어 혈액이 스며 나오고 응고되는 틈새를 생성했습니다. 래핑과 폴리싱은 구성 요소의 피팅을 개선하고 혈전 형성을 줄였습니다.
절차적 오류와 루프의 불완전한 디에어링으로 인해 아티팩트가 발생할 수 있습니다. 이 경우, 염화칼슘 주입 중 실험적 오류로 인해 국소 응고가 유발되었고, 그 결과 혈전이 원심 자기부상 펌프로 들어가 유동 경로를 막았습니다. 표면에서 관찰되는 구형의 느슨하게 부착된 응고는 종종 응고 내에 캡슐화된 기포의 결과입니다.
루프를 순환하는 이물질과 파편도 혈전에 캡슐화되어 펌프 표면에 부착되었습니다. 튜빙 커넥터 접합부의 고리 혈전은 테스트 중 최적의 ACT 범위를 나타냈습니다.
