초파리 멜라노가스터 유충 주입 프로토콜

이 프로토콜은 다양한 면역 및 분자 연구를위한 모델로 Drosophila melanogaster 유충을 사용할 수있는 정확한 방법을 설명함으로써 유충을 미세 주입하는 어려움과 도전을 해결합니다. 이것은 균일 한 방식으로 다양한 물질을 반복적으로 전달할 수있는 효율적이고 비용 효율적이며 신속한 방법을 제시하는 간단한 주입 기술로, 일관되고 신뢰할 수있는 결과를 얻을 수 있습니다. 세 번째 인스타 스테이지 애벌레를 선택하고 작은 페트리 접시에서 링거의 용액으로 씻는 것으로 시작하십시오.

페트리 접시에 여과지를 넣고 링거 용액 5ml를 적셔주십시오. 그런 다음 애벌레를 여과지에 놓습니다. 마이크로 피펫 풀러에서 3.5 "유리 모세관 튜브를 사용하여 모세 혈관을 준비하십시오.

직선 톱니 모양의 중간 점 포셉의 도움으로 유리 모세관을 엽니 다. 플라스틱 일회용 주사기를 사용하여 열린 모세관을 미네랄 오일로 채 웁니다. 그런 다음 나노 리터 인젝터로 모세관 튜브에서 오일을 배출하십시오.

주사를위한 원하는 박테리아 제제로 모세관을 채 웁니다. 마취 된 유충을 링거 (Ringer)의 용액으로 적신 여과지로 옮깁니다. 포셉을 사용하여 기관 스파이라클이 명백한 유충의 후부 끝의 등쪽 쪽에 확고한 압력을 가하십시오.

그런 다음 바늘을 수평으로 삽입하여 유충의 후부 끝쪽으로 삽입하고 박테리아 스톡을 주입하십시오. 용혈림프나 장의 유출을 피하기 위해 포셉을 제거하십시오. 그런 다음 이전에 애벌레에 삽입 된 바늘을 철회하십시오.

각 실험 조건에 대해 20 마리의 애벌레를 감염시킵니다. 페인트 브러시를 사용하여 주입 된 유충을 별도의 촉촉한 여과지로 부드럽게 옮깁니다. 건조를 방지하기 위해 필요에 따라 링거의 솔루션을 추가하십시오.

Photorhabdus asymbiotica에 감염된 25C.Drosophila melanogaster 유충의 배양기에서 페트리 디쉬를 배양하여 주사 후 24시간 동안 57%의 생존율을 보인 반면, 에스케리치아 콜리를 주입한 유충은 동시에 85%의 생존율을 보였다. 이 방법의 중요성은 바늘이 애벌레와 대략 평행하게 유지된다는 것입니다. 유충을 잡기 위해 가해지는 압력은 매우 적기 때문에 혈림프 누출, 치명적인 부상 또는 원하는 물질의 부적절한 전달의 가능성을 줄입니다.

이 기술은 연습으로 완성 될 수 있습니다.