果蝇 幼虫注射方案

该协议通过描述一种精确的方法解决了微注射幼虫的困难和挑战，该方法将允许使用果蝇黑色素胃幼虫作为各种免疫和分子研究的模型。这是一种简单的注射技术，提供了一种高效，经济高效且快速的方法，可以以统一的方式重复输送各种物质，从而获得一致且可靠的结果。首先选择第三龄期幼虫，并在一个小培养皿中用林格溶液清洗它们。

将滤纸放入培养皿中，并用5毫升林格溶液润湿。然后将幼虫放在滤纸上。在微量移液器中使用3.5"玻璃毛细管准备毛细管。

在直锯齿状中点镊子的帮助下打开玻璃毛细管。使用塑料一次性注射器用矿物油填充打开的毛细管。然后，用纳升喷油器将油从毛细管中喷出。

用注射所需的细菌制剂填充毛细血管。将麻醉的幼虫转移到用林格溶液润湿的滤纸上。使用镊子，在幼虫后端的背侧施加用力，其中气管呼吸孔明显。

然后，将针头水平插入幼虫的后端，并注入细菌储备。取出镊子以避免血栓或肠外溢。然后，取出先前插入幼虫的针头。

每种实验条件感染20只幼虫。使用画笔，轻轻地将注射的幼虫转移到单独的湿润滤纸上。根据需要添加林格溶液以防止干燥。

将培养皿在25 C的培养箱中孵育，感染Photorhabdus asymbiotica的Drosophila melanogaster幼虫在注射后24小时内表现出57%的存活率，而注射大肠杆菌的幼虫在同一时间点显示出85%的存活率。这种方法的重要性在于针头与幼虫大致平行。用于保持幼虫的压力非常小，这降低了血栓泄漏，致命伤害或所需物质输送不足的可能性。

这种技术可以通过练习来完善。