쥐 모델에서 실험적 지주막하 출혈을 유도하기 위한 자가 혈액의 Pre-chiasmatic, 단일 주사

이 지주막하 출혈 모델은 병태생리학적 메커니즘과 결과를 더 잘 이해하는 데 도움이 됩니다. 이것은 희망적으로 치료법을 생성하여 고통받는 환자의 질병 부담을 줄이는 결과를 가져올 것입니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 고정된 양의 혈액이 주입되기 때문에 재현성이 높다는 것입니다.

또한, 그것은 주요 매개 변수에서 인간 지주막 하 출혈과 유사합니다. ICP 프로브를 만들려면 20mm 폴리에틸렌 튜브의 한쪽 끝을 태우고 원형 플레이트를 만들고 루멘을 열어 둡니다. 그런 다음 폴리에틸렌 튜브 끝에 10mm 실리콘 튜브 조각을 연결하기 전에 폴리에틸렌 튜브 위에 1mm 실리콘 튜브 링을 밀어 넣습니다.

다음으로, Sprague Dawley 쥐를 입체 프레임에 넣기 전에 마취, 삽관 및 카테터 삽입. 국소 마취 투여 후 정중선의 바늘 천자에서 꼬리 방향으로 8mm 피부 절개를 합니다. 해부 현미경으로 모든 근육을 층으로 뭉툭하게 해부하여 대서양 후두막을 식별합니다.

그런 다음 팔 견인기를 사용하여 목 근육을 억제하고 필요한 경우 견인기를 꼬리 모양으로 놓습니다. 멸균 ICP 프로브가 ICP 변환기에 연결되어 있는지 확인한 후 ICP 프로브를 식염수로 세척하고 프로브에 기포가 없는지 확인합니다. 23 게이지 바늘을 사용하여 대서양 후두막을 절개하여 막을 통해 ICP 프로브를 부드럽게 감쌀 수 있는 구멍을 만듭니다.

프로브를 가볍게 당기고 0에서 5mm 사이의 맥동 곡선이 나타나는지 확인합니다. 그렇지 않은 경우 프로브를 제거하고 변환기에 대한 연결을 다시 확인한 다음 루멘을 통한 흐름을 확인하십시오. atlantooccipital 막이 프로브를 감싸는 영역에서 조직 접착제 두 방울을 바르십시오.

그런 다음 ICP 프로브 변위 위험을 최소화하기 위해 추가 접착제를 적용하기 전에 1mm 실리콘 튜브를 멤브레인 쪽으로 앞으로 이동합니다. ICP 프로브가 접착되면 견인기를 제거합니다. 그런 다음 비 흡수성 모노 필라멘트 4-0 봉합사를 사용하여 절개 부위의 꼬리 끝에 수평 매트리스 봉합사 1 개를, 두부 끝 부분에 단순 중단 봉합사 1 개를 놓습니다.

레이저 도플러 프로브를 배치하려면 눈 바로 앞쪽에서 시작하여 정중선에서 꼬리 방향으로 15mm 절개를합니다. 집게로 결합 조직과 근육을 제거한 후 멸균 면봉 끝을 루진으로 사용하여 브레그마와 관상 봉합사를 식별합니다. 무장 한 견인기를 배치 한 후 25 게이지 척추 바늘을 브레그마의 정위 프레임에 정확히 놓고 위치를 기록하십시오.

그런 다음 브레그마에서 바늘을 제거하십시오. 프레임을 앞쪽으로 6.5mm 움직입니다. 그런 다음 드릴링의 측면을 표시하기 위해 정중선의 바늘을 교체하십시오.

경질막이 뼈 아래에서 확인될 때까지 드릴합니다. 스트레이트 집게를 사용하여 뼈 조각을 부드럽게 제거하십시오. 그런 다음 구멍을 뼈 왁스로 채 웁니다.

다음으로, 브레그마의 오른쪽 측면과 레이저 도플러의 관상 봉합사 바로 앞쪽에 3-4 밀리미터 떨어진 곳에 또 다른 구멍을 뚫습니다. 경질막을 관통하지 않도록주의하십시오. 레이저 도플러가 혈류를 측정할 수 있는 혈관을 찾으십시오.

레이저 도플러를 놓고 값을 확인합니다. 최소 100 플럭스 단위가 필요합니다. 현미경을 제거한 후에도 값이 허용 가능한 상태로 유지되면 접착제 한 방울을 추가하여 프로브를 고정합니다.

값이 80플럭스 단위를 초과하는지 다시 확인하십시오. 지주막하 출혈을 유도하려면 두개골 기저부로 인해 저항이 느껴질 때까지 반구 사이의 정중선에 있는 두개골을 통해 바늘을 부드럽게 삽입합니다. 바늘을 1mm 후퇴시켜 시신경 바로 앞쪽에 올바른 위치를 유지합니다.

혈액을 주입 할 때 가장 균일 한 결과를 얻으려면 바늘 끝이 오른쪽을 가리키도록 바늘을 시계 방향으로 90도 돌립니다. 그런 다음 스틸레토를 제거하십시오. 15분 평형 후, 마취 수준을 조정하여 수은 80 내지 100 밀리미터 범위의 평균 동맥 혈압을 얻는다.

그런 다음 혈액 가스 분석을 수행하여 pH, 이산화탄소 분압 및 산소 분압이 생리학적 매개변수 내에 있는지 확인합니다. 다음으로, 뭉툭한 23 게이지 바늘이 달린 1 밀리리터 주사기를 사용하여 꼬리 카테터에서 500 마이크로 리터의 혈액을 빼냅니다. 공기 주입을 피하려면 척추 바늘 챔버의 사각 지대를 혈액으로 채우십시오.

주사기의 혈액량을 300 마이크로 리터로 조정 한 후 주사기를 척추 바늘에 연결하십시오. 그런 다음 주사기 주위를 단단히 잡고 평균 동맥압을 초과하도록 혈액을 수동으로 주입하십시오. 뇌내압의 급격한 상승과 뇌 혈류의 가파른 하락을 관찰하십시오.

지주막하 출혈 유도 30분 후, 바늘과 레이저 도플러 프로브를 제거한다. 그리고 충치를 뼈 왁스로 채 웁니다. 비 흡수성 모노 필라멘트 4-0 봉합사를 사용하여 두 개의 수평 매트리스 봉합사로 절개 부위를 닫습니다.

수조에 주입하기 위해 ICP 프로브를 사용하려면 실리콘 튜브를 제거하고 핀 포트 어댑터를 폴리에틸렌 튜브에 삽입합니다. 동물이 깨어있는 동안 척수강 내 투여를 수행하려면 핀 포트 인젝터를 정밀 주사기에 놓습니다. 그런 다음 핀 포트 어댑터를 통해 치료를 시행하십시오.

척수강 내 투여를 수행 할 필요가 없다면 단순 중단 봉합사를 자릅니다. 그런 다음 가위를 사용하여 ICP 프로브를 최대한 짧게 하고 끝을 접착하여 뇌척수액 누출을 방지합니다. 비 흡수성 모노 필라멘트 4-0 봉합사로 절개 부위를 봉합하십시오.

회전 극 테스트를 사용한 총 감각 운동 기능 평가에서 실험적으로 유도된 지주막하 출혈이 있는 쥐는 가짜 동물에 비해 수술 후 24시간 및 48시간에 유의하게 더 나빴습니다. 엔도텔린-1 수용체 패밀리에 대한 작용제인 엔도텔린-1에 대한 민감도는 가짜 대조군에 비해 실험 쥐의 기저 동맥 및 중대뇌 동맥에서 지주막하 출혈 이틀 후에 유의하게 증가했습니다. 실험 쥐의 두 동맥은 또한 5-하이드록시트립타민 수용체 패밀리에 대한 작용제인 5-카르복스아미도트립타민에 대한 민감도의 유사한 증가를 나타내었다.

시술 후 신경행동검사는 물론 면역조직화학, PCR, 웨스턴 블로팅 분석기를 포함한 조직 분석을 수행하여 결과와 기전을 분석할 수 있습니다.