난수성 진동과 온난화 절차는 불임 보존에 필수적입니다. 설명된 대로 이 프로토콜을 따라 사용자가 이러한 절차의 효과를 극대화할 수 있습니다. 난소 진동을 위한 불임 보존은 오늘날 확립되고 윤리적으로 허용되는 접근 방식입니다.
그것은 효과적이고 일관된 임상 결과를 달성하고 태아 냉동 보존과 관련된 도덕적, 법적 한계를 극복 할 수 있습니다. 시험성 공정에 대한 숙련도를 달성하기 위해서는 프로토콜의 모든 중요한 점에 익숙해지기 위해 극저온 보호제에 대한 샘플의 노출 시간에 특히 주의를 기울이는 것이 중요합니다. 검색 후 38시간 이내에, 모든 플라스틱 소모품을 환자의 이름, ID 및 유형의 솔루션으로 라벨을 부착하고 증인에게 냉동 장치에 대한 환자의 정보를 확인하도록 요청합니다.
모든 소모품이 라벨이 붙었을 때, 인체 혈청 알부민으로 보충된 HEPES 버퍼 매체의 30 마이크로리터 드롭과 페트리 접시에 30 마이크로리터 인접 한 방울을 혼합하고 놓기 위해 각 난모세포의 각 유리병을 여러 번 조심스럽게 반전시하십시오. 스트리퍼 파이펫을 사용하여 첫 번째 낙하에 난모를 배치하고 평형 용액의 30 마이크로 리터 드롭에 중간의 다리를 만들어 냉동 보호제의 농도가 점진적으로 증가합니다. 3분 후, 플레이트에 평형 용액의 두 번째 30 마이크로리터 드롭을 추가하고 파이펫을 사용하여 용액 방울 사이의 중간 다리를 만듭니다.
난모세포가 평형화되는 동안 각 극저온 장치에 대해 30 마이크로리터 드롭한을 플레이트에 사용합니다. 3분 후, 난모세포를 순수 평형 솔루션으로 이동하여 난모세포가 초기 크기로 돌아갈 수 있도록 합니다. 난모세포가 회복되면 1밀리리터의 진동용액을 포함하는 중앙 우물 IVF 접시를 준비하십시오.
난모를 가능한 한 적은 매체로 접시에 옮기고 조심스럽게 이동하여 과도한 평형 솔루션을 제거합니다. 인큐베이션이 끝나기 약 10초 전에 현미경으로 환자의 정보로 표시된 냉동 장치를 배치하고 저온 장치의 끝에 초점을 조정합니다. 최소 량의 바이트화 용액에 팁 옆에 나온화물을 놓고 스트리퍼 파이펫을 난모세포에서 멀리 이동하여 과도한 진동 용액을 제거하여 나분모를 중간 층으로 덮어 둡니까.
냉동고 장치를 액체 질소로 빠르게 급락시키고 장치를 빠르게 흔들어 표면에서 기포를 제거합니다. 저온 장치의 보호 캡을 핀셋으로 잡고, 액체 질소에 프로필렌 스트립을 유지하면서 캡에 장치를 삽입하기 전에 액체 질소로 캡을 채웁니다. 그런 다음 환자의 정보로 표시된 비소튜브에 냉동 장치를 저장하고 실험실 시트를 업데이트합니다.
오취물 온난화의 경우 실온으로 따뜻하게 된 해동, 희석 및 세척 용액의 각 유리병을 조심스럽게 반납하고 37°C에서 적어도 1시간 동안 페트리 접시의 중앙 우물에 해빙 용액 1밀리리터를 추가합니다. 모든 플라스틱 소모품을 환자의 이름과 ID 및 용액 유형으로 라벨을 부착하고 증인에게 냉동 장치에 대한 환자의 정보를 확인하도록 요청합니다. 각 장치를 데우려면 6개의 웰 플레이트의 첫 번째 웰에 200 마이크로리터의 희석 용액을 추가하고 플레이트의 두 번째 및 세 번째 우물에 동일한 양의 세척 용액을 추가합니다.
용액 증발을 방지하기 위해 우물 바깥쪽에 PBS를 추가합니다. 스테레오 현미경 아래에 해동 용액의 접시를 놓고 접시의 중심에 초점을 조정합니다. 극저온 장치의 보호 캡을 제거하고 프로필렌 스트립을 액체 질소로 유지하고 냉동 장치를 액체 질소에서 해동 용액으로 최대한 빨리 전송하여 탈용량의 위험을 피하기 위해 조심스럽게 비틀어냅니다.
1 분 후, 난모를 찾기 위해 냉동 장치의 끝에 초점을 맞추고 결국 부드럽게 장치에서 난모를 해제스트리퍼 파이펫을 사용합니다. 170미크론 직경스트리퍼 파이펫을 사용하여 6개의 웰 플레이트 중 첫 번째 웰에서 오사이클과 소량의 해동 용액을 희석 용액으로 이송합니다. 3분 후, 난모세포를 첫 번째 세척 용액으로 5분간 이동합니다.
인큐베이션이 끝나면 난소구를 세척 용액의 두 번째 우물로 옮기고 1분 동안 섭씨 37도에서 배양한 후 1시간 동안 미리 평형된 IVF 배양 배지의 적절한 부피로 옮기고 실험실 시트를 업데이트한다. 12 년 기간 동안, 285 명의 여성이 수집 된 성숙한 계란의 전체 코호트의 유리화를 수반하는 적어도 하나의 난낭화물 검색을 받았습니다. 이 여자의 대부분은 단 하나 검색을 겪었습니다.
35는 여러 번의 검색을 거쳤습니다. 계란 유리화에 대한 난소 세포 검색을 받는 이유는 일반적으로 암, 암, 비 의학 및 기타 이외의 의료로 특징지어졌습니다. 난자 진동에 대한 의학적 이유가있는 환자와 암 으로 인해 불임 보존을 받는 환자는 더 젊었으며 비의학 또는 기타 이유로 환자보다 더 높은 개량 여포 수를 보였습니다.
그러나, 평균 성숙율이 환자의 의학적 이유로 약간 낮았기 때문에, 평균적으로 진동하는 난모세포의 수는 그룹 사이에서 유사했습니다. 암 이외의 의학적 이유로 환자의 약 절반은 계란 진동을 위한 그밖 이유를 가진 환자의 대다수가 실제로 온난화를 위해 돌아왔습니다. 반대로, 암 또는 비의학 이유로 불임 보존을 받은 거의 환자가 IVF를 위해 그들의 유리화 된 난소세포를 사용했습니다.
진동과 온난화 사이의 경과 시간의 차이에도 불구하고, 난모세포의 생존율은 환자 그룹 간에 유사하여 난소 진동및 온난화 프로토콜의 효능과 안전성을 확인하였다. 더욱이 생존율은 진동과 온난화 작업자의 경험과 무관했다. 결과의 일관성에 영향을 미칠 수 있는 가장 중요 한 단계는 온난화와 관련 된 하나입니다.
따라서 해동 용액의 부피와 온도를 신중하게 제어하는 것이 매우 중요합니다. 난소 조직 냉동 보존은 현재 전 사춘기 환자를위한 옵션으로 현재 조사 중인 유일한 전략입니다. 유망하지만 이 접근 방식은 응용 프로그램을 제한하는 중요한 제한이 있습니다.
