이 연구는 독일 Krebshilfe 에 의해 지원 되었다 (AN 최대 Eder 그룹: 110972), (SMB)에 DGVS 박사 논문 장학금 및 대학 의료 센터 괴팅겐에는 Else Kröner Fresenius 재단 장학금 (RGG)을. 우리 전문가 기술 지원 또한 블 룸 베르크와 Ulrike Wegner 감사합니다. 우리는 또한 유지 하는 마우스에 대 한 대학 의료 센터 괴팅겐의 동물 시설에서 모든 동물 기술자를 감사 합니다. 모든 실험은 독일 동물 복지 규정에 따라 수행 했다.

이 프로토콜은 대학 의료 센터 괴팅겐, 독일 (33.9-42502-04-15/2056)에서 동물 보호 지침. 개별 동물의 특정 요구 사항에 따라 검토 보드, 일부 프로토콜 단계에 따라 수정할 수 있습니다.
1. 복 부 촉진 KPC 마우스의
<ol><li>피하기 위해 불필요 한 초음파 검사, 식별 수도 아마도 intraabdominal 병 변 고 이후에 복 부 초음파 검사를 받아야 한다 쥐 마우스 복 부를 만져.<ol>
<li>KPC 마우스 모델에서 나이의 8 주 이상 복 부 촉진 주간 시작을 수행 합니다. 고해상도 초음파 또한 이식된 종양 모델 (예를 들어, orthotopics) 또는 다른 유전자 조작된 마우스 모델에 적용할 수 있습니다. 참고: 종양 활동 및 연구 목표 (예방 연구, 치료 개입 연구)에 따라 매우 작은 종양 (1-2 m m)의 탐지는 모니터 종양 발병 가능 종양 palpated 수 있습니다 전에.</li>
	</ol>
</li>
	<li>감 금 소에 마우스를 놓고 부드럽게 마우스 꼬리 리프트 하 고 부드럽게 인덱스와 비-고정 손 (그림 1)의 엄지를 위아래로 이동 하 여 복 부를 만져.</li>
	<li>마우스는 부드러운 촉진 허용, 천천히 압력을 증가 하 여 진행 합니다. 더 큰 저항 위와 더 낮은 복 부에 쉽게 검색할 수 있습니다. 가끔, 하드 배설물 해석 될 수 있습니다 실수로 종양으로 질량.</li>
</ol>2입니다. 준비 작업 공간
<ol><li>적어도 3 명의 다른 작업 단위에 대 한 공간을 제공: 사전 검사 영역, 단계 및 복구 케이지를 스캔. 필요한 자료는 그림 2에 묘사 된다.</li>
	<li>주요 작업 플레이트 청소 (예를 들어 70%와 에탄올) 난방 플랫폼 (그림 3) 스캔 이전에 전환. 38-40 ° C의 목표 온도 도달 하면 첫 번째 마우스 전송 하기 전에 다는 것을 확인 하십시오.</li>
	<li>초음파 기계에 스위치와 인수 데이터 (그림 4)에 대 한 새 폴더를 만듭니다. 복 부 영상 B 모드 설정이 적용 됩니다. 또한, 복 부 변환기 컴퓨터의 활성 포트에 연결 되어 확인 하십시오. 시스템을 장착 하는 변환기를 사용 하 여 작업 단계의 상단에 변형기 머리를 수정.</li>
	<li>난방 격판덮개 또는 열 매트 (또는 사용 난방 램프) 포스트 절차 체온 조절 및 스캔된 마우스의 신속한 복구를 보장 하기 위해 복구 케이지를 준비. (그림 5)는 질 식의 위험으로 침구의 열망을 피하기 위해이 장의 하단에 쿠션으로 직물의 얇은 레이어를 넣어.</li>
</ol>3. 흡입 마 취
<ol><li>유도 챔버로 마우스를 넣어 진행 합니다. 가스 캐리어 흐름 (1 L/min 산소 또는 공기) 밸브 열고 isoflurane 농도 4% 유도 챔버의 천천히 증가 채도 수 있도록 설정 합니다. 그 자리에는 적절 한 isoflurane 청소 (수동 또는 능동 필터링) 다는 것을 확인 하십시오. 약 2-4 분 후 마우스는 깊은 진정의 밑에 일반적으로 있을 것입니다.<ol>
<li>원뿔을 통해 2 %isoflurane 작업 단계에 투여 하 여 진정 작용을 유지 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>조심 스럽게 작업 단계로 유도 챔버에서 동물 전송. 코 콘 일정 가스 흐름에 대 한 확인 하십시오. 마 취 선 콘센트의 원뿔에 마우스 주 둥이 넣어. 초기 검색에 대 한 일반적인 위치는 부정사 위치가입니다. 마우스 췌 장 머리 또는 꼬리 종양 (그림 6)의 가시성을 개선 하기 위해 오른쪽 또는 왼쪽에 배치할 수 있습니다.</li>
	<li>복 부 초음파 고통 스러운 라기보다는, 고통 무료 조건 및 깊은 마 취 상태에 대 한 지표로 서 발 꼬 집 음 시험을 수행 합니다. 마우스는 여전히 활성 또는 적극적으로 주위를 움직이고, 다시 옮긴 다 동물 반복 및 장기간 유도 위한 유도 실에서 다시.</li>
	<li>눈 보호 연 고를 사용 하 여 액체 손실로 인해 각 막 부상을 방지 하기 위해.</li>
	<li>마 취 동안 모니터링 시스템을 사용 합니다. 그러나, ECG 및 직장 온도 사용 되지 않습니다 정기적으로 복 부 초음파 검사. 중요 한 것은, 쥐 취 thermoregulate 수가 잃게됩니다. 따라서, 저체온증 이나 호흡 곤란 허 걱 등 가사에 대 한 임상 증상 관찰 밀접 하 게. 경우 어떤 증상 즉시 명백한 중지 isoflurane 장소와 복구 장에 마우스입니다.</li>
</ol>4. 초음파 설정
<ol><li>제조업체의 지침에 설명 된 대로 초음파 시스템에 전환 합니다. 기본 설정은 활성화 복 패키지와 함께 일반 영상에 넣어 다는 것을 확인 하십시오. 일반적으로 B-모드-영상 표준으로 서 데이터 수집에 사용 됩니다.</li>
	<li>다음 매개 변수 최적화 된 이미지 품질을 달성: 주파수 40 MHz, 2D 이득 25-30 dB, 이미지 깊이 10 m m, 이미지 폭 10 m m, 3-6 m m 사이 센터 3 초점 영역.</li>
</ol>5. 마우스 준비
<ol><li>위와 더 낮은 말단 접착 테이프를 사용 하 여 수정 합니다. 때문에 고정 (그림 7) 동물에 어떤 부상을 피하기 위해 최대한 주의 해야 합니다.</li>
	<li>전자 애완 동물 클리퍼 스를 사용 하 여 모든 복 부 털을 제거 합니다. 모피 텍스처 때문에 흉 곽까지 더 낮은 복 부에서 시작 합니다. 이 지역에 있는 피부 상해를 피하기 위해 프로세스 xiphoideus 에 주의. 참고: 마우스 모피 초음파 파도 반영 하 고 가시성을 감소 시킵니다.</li>
	<li>Depilatory 크림을 사용 하 여 수행 하는 최적화 된 피부 준비 및 모피의 완전 한 제거. 코 튼 팁 (그림 8)를 사용 하 여 면도 복 부에 크림의 얇은 레이어를 관리 합니다. 뒤에 모든 잔재 (그림 9, 그림 10, 그림 11)를 완전히 제거 하는 물을 충분히 건조 조직 (후 30 s 나중에 따라 또는 사용 하는 크림) 크림을 제거 합니다. 크림 나머지 초음파 후 피부와 점 막 자극을 일으킬 수 있는 고 따라서 건강에 영향을 미칠 수 있습니다.</li>
	<li>적절 한 검색 되도록 조건 (그림 12) 복 부에 초음파 젤 많이 적용 됩니다. 일반적으로, 따뜻한 초음파 젤 마우스에 대 한 저체온증을 최소화 하기 위해 사용 됩니다.</li>
	<li>직접 변환기 머리에 초음파 젤의 얇은 층을 적용. 노치 변환기 끝에 감동 하 여 테스트를 수행 합니다. 화면에서 상단 왼쪽에 신호 변환기가 올바르게 배치 하는 경우를 볼 수 있습니다.</li>
</ol>6. 복 부 초음파
<ol><li>확고 한 압력을 사용 하 여 복 부에 변환기를 조정 합니다. 무거운 압축 마우스 복 부의 호흡 또는 혈액 순환 장애를 발생할 수 있습니다 하 고 피해 야 한다.</li>
	<li>아래로 검색 합니다. 작업 플랫폼 및 x 축과 y 축에 대 한 바퀴의 프레임을 조정 합니다.</li>
	<li>첫 번째 단계로 두 신장 식별 합니다. 일반적으로 그들은 낮은 복 부에 균질 성 구조를 hyperechogenic로 나타납니다. 연결 된 베 나 renalis 찾을 수 있습니다 쉽게 더 베 나 정 맥 열 등 (그림 13)에 이르게.</li>
	<li>획기적인 혈관 베 나 lienalis 역할을 사용 하 여 췌 장에 대 한. 베 나 renalis 와 베 나 lienalis를 구별 하려고 합니다. 베 나 lienalis 의 검출 시 췌 정확 하 게 지역화할 수 있습니다. 정상 췌 오히려 멤브레인 (그림 14 와 그림 15) 고체 구조 보다 복 부 구멍을 통해 확산입니다.</li>
</ol>7. 췌 장 종양 탐지 및 볼륨 평가
<ol><li>모든 주변 구조에서 췌 장 병 변 식별 합니다. 그들은 일반적으로 hypoechoic 휘도가 원형 또는 길쭉한 조직 질량 (그림 16)으로 표시 됩니다. 종양 보통 회사 이며 거의 스캔 헤드에 의해 압축 될 수 있습니다. 참고, 때때로 종양 및 작은 창 자 루프 사이 명확 하 게 구별 하기 힘들 수도. 췌 장 종양에서 관찰 하지 한다 창 자 연동에 주의.</li>
	<li>에 종양 감지 화면 위쪽 및 아래쪽을 전체 크기의 인상을 가져오고 초음파 캘리퍼스를 사용 하 여 큰 직경을 측정. 적당 한 이미지를 발견 되 면 화면을 고정 하 고 측정 도구를 사용 하 여 종양 크기를 정확 하 게 결정. 참고, 나중을 위해 꼬리, 몸 또는 췌 장의 머리에 종양 지역화 여부를 차별화 하는 것이 중요할 것 이다.</li>
	<li>라이브 모드를 다시 변경 하기 전에 작업을 기록 하는 사진을 저장 해야 합니다. Note, 조정 바퀴를 출시 하 고 초음파 프로브 마우스 복 부를 누르면 더욱 그럴 수 있습니다 이미지를 고정 하는 동안 따라서, 동결 모드를 변경 하기 전에 압축 조정 수정.</li>
	<li>첫 비행기의 측정을 완료 한 후 경도 위치 (그림 17)에서 90 °에 의해 스캔 헤드를 회전 하거나 종양의 경도 확장을 검색 하는 쪽으로 마우스를 설정 합니다. 일부 종양 적절 한 가시성에 대 한 마우스의 위치를 변경 해야 합니다. 췌 장 꼬리 종양에 대 한 마우스 췌 장 머리 종양의 왼쪽 (그림 11 및 그림 20)에 대 한 (그림 10 과 그림 19), 그것의 오른쪽에 배치 수 있습니다.</li>
</ol>8입니다. 종양 볼륨의 정량화
참고: 모든 노력을 하나의 주요 목표는 종양 볼륨의 정확한 결심 이다. 사용할 수 있는 몇 가지 기술이 있다는 타원 면의 수식을 포함 하는 계산 방법 이지만 대학 의료 센터 괴팅겐에서 선호 합니다.
<ol><li>모든 3 개의 이전 취득 직경 있습니다 해당 종양 (그림 21)의 대략적인 양을 계산 합니다.</li>
	<li>또는, 스캔 머리의 모터 시스템을 사용 하 여 후속 볼륨 계산 및 3 차원 재구성 종양의 자동된 검색을 수행 하.</li>
</ol>9입니다. 복구
<ol><li>스캔, 후 신중 하 게 모든 접착 테이프를 제거 하 고 신중 하 게 모든 초음파 젤을 제거 건조 조직으로.</li>
	<li>조심 스럽게 복구 ( 그림 21)으로 마우스를 전송 합니다. 호흡기 장애를 발생할 수 있습니다 mouse´s 얼굴에 어떤 덮 음 조직을 하지 마십시오. 복구에 대 한 측면 위치 기본 설정 해야 합니다.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Olive, K. P., Politi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Translational therapeutics in genetically engineered mouse models of cancer. (2), 131-143 (2014).</li><li>Westphalen, C. B., Olive, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+of+pancreatic+cancer.">Genetically engineered mouse models of pancreatic cancer.</a> The Cancer Journal. 18 (6), 502-510 (2012).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice.">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).</li><li>Frese, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=nab-Paclitaxel+potentiates+gemcitabine+activity+by+reducing+cytidine+deaminase+levels+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">nab-Paclitaxel potentiates gemcitabine activity by reducing cytidine deaminase levels in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Cancer Discovery. 2 (3), 260-269 (2012).</li><li>Paredes, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-invasive+method+of+quantifying+pancreatic+volume+in+mice+using+micro-MRI.">A non-invasive method of quantifying pancreatic volume in mice using micro-MRI.</a> PLoS One. 9 (3), e92263 (2014).</li><li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer.">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).</li><li>Aung, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunotargeting+of+Integrin+alpha6beta4+for+Single-Photon+Emission+Computed+Tomography+and+Near-Infrared+Fluorescence+Imaging+in+a+Pancreatic+Cancer+Model.">Immunotargeting of Integrin alpha6beta4 for Single-Photon Emission Computed Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer Model.</a> Molecular Imaging. 15, (2016).</li><li>Akladios, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+microCT+structural+imaging+to+preclinical+evaluation+of+hepatocellular+carcinoma+chemotherapeutics+on+orthotopic+graft+in+ACI+rats.">Contribution of microCT structural imaging to preclinical evaluation of hepatocellular carcinoma chemotherapeutics on orthotopic graft in ACI rats.</a> Bulletin du Cancer. 98 (2), 120-132 (2011).</li><li>Neesse, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CTGF+antagonism+with+mAb+FG-3019+enhances+chemotherapy+response+without+increasing+drug+delivery+in+murine+ductal+pancreas+cancer.">CTGF antagonism with mAb FG-3019 enhances chemotherapy response without increasing drug delivery in murine ductal pancreas cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 110 (30), 12325-12330 (2013).</li><li>Sastra, S. A., Olive, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+murine+pancreatic+tumors+by+high-resolution+ultrasound.">Quantification of murine pancreatic tumors by high-resolution ultrasound.</a> Methods in Molecular Biology. 980, 249-266 (2013).</li></ol>

저자는 공개 없다.

이 프로토콜, 췌 장 종양 유전자 조작된 마우스 모델에서 고해상도 복 부 초음파 이미징 사용 하 여 측정에 대 한 자세한 설명을 제공 합니다. 최근, Sastra 외. 췌 장 종양 마우스 모델, 하지만 준비 및 모든 추가 단계에 대 한 전제 조건11를 표시 했다 처리에 대 한 아무 시각된 지침을 계량 하는 방법 자세한 설명 출판. 이 원고의 전반적인 목표는 고해상도 초음파 쥐에 대 한 ...

유전자 조작된 마우스 모델 연구 밀접 하 게 인간의 발암1,2,3의 복잡 한 성격을 정리 하는 능력 때문에 증가 중요성을 얻고 있다. 하나는 가장 자주 췌장암 개발 연구 모델을 사용, 진행 및 치료 응답 종양 억제기 p534의 비활성화와 결합 하는 Kra oncogene에서 활성화 돌연변이 의해 특징입니다. 이 LSL KraG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; Pdx-1-Cre (KPC) 마우스 모델 모방 침략 암 전 침략 적인 췌 장 intraepithelial neoplasia (PanIN) 병 변에서 단계별 진행. Phenotypically, 거의 모든 마우스는 출산 후 첫 6 개월 이내 PDAC를 개발. 그러나, 섹 모델 몇 개월4주 8에서 높은 변수 종양 발병을 밝혀 이식된 모델에 비해. 췌 장 종양에 도달 특정 크기 (지름 5-9 m m), 종양의 성장을 빠르게 가속 및 마우스5전 임상 시험 등록 해야 합니다. 따라서, 종양 발병 및 종양 크기의 정확한 탐지 물류 전 임상 연구 및 치료 모니터링에 대 한 필수적인 전제 조건입니다. 일반적으로, 몇 가지 방법을 같은 자기 공명 영상 (MRI)6,7,,89 또는 고해상도 초음파 단층 종양 검사 실시를 채택 될 수 있다 고 치료10. 각 기술은 그것의 장점과 단점이 있다. 비록 MRI-컴퓨터 단층 촬영 (CT) 또는-이미징 고해상도 데이터 수집 뿐만 아니라 정확한 볼륨 계산, 일반 진정에서 장시간된 시험 시간을 허용 하 고 매우 비싼 장비 필요, 그리고 자주 허용 하지 않습니다 시간의 긴 기간 동안 스캔. 대조적으로, 작은 동물 초음파 쥐11복 부 병 리에 대 한 화면을 사용할 수 있는 설정된 방법입니다. 이미징이 방법의 장점은 짧은 시간, 높은 해상도, 스캔 그리고 도플러 초음파 또는 대비 사용 가능성 향상 된 동시에 장기의 관류를 시각화 하기 위해 초음파 (CEUS). 그러나, 해 부 지식, 3D 상상력과 철저 한 실습은 올바른 이미지 해석 필요 합니다.
다음 문서에서 섹 모델에서 고해상도 초음파를 이용 하 여에 대 한 상세한 프로토콜 제공 됩니다. 또한, 표준 초음파 이미지 묘사 되며 조사에 대 한 오리엔테이션을 촉진 하기 위하여 기관 구조와 분류.

<table><tbody><tr><td>Visual Sonics Vevo2100 High Resolution Ultrasound System, including imaging stage and anesthesia line</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td><td>VS-11945</td><td></td></tr><tr><td>Vevo 2100 MicroScan Transducer MS-550-D (22-55MHz)</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td><td>VS-11874</td><td></td></tr><tr><td>Vevo Anesthesia System (anesthesia induction chamber with fresh and waste gas inlet)</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td><td>SA-12055</td><td></td></tr><tr><td>Vevo Imaging Station (working stage with nose cone for anesthesia supply)</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td><td>SA-11982</td><td></td></tr><tr><td>&amp;nbsp;electronic pet clippers</td><td>Panasonic Marketing Europe, Germany</td><td>5025232484324</td><td>Panasonic ER-PA10-s</td></tr><tr><td>Labotect Hot plate</td><td>Labor tech G&amp;ouml;ttingen, Germany</td><td>13854</td><td></td></tr><tr><td>eye cream (ophthalmic ointment)</td><td>Sch&amp;uuml;lke&amp;amp;Mayr, Germany</td><td>9080249</td><td></td></tr><tr><td>veterinary isoflurane</td><td>Abbvie, Germany</td><td>4831867</td><td></td></tr><tr><td>depilatory cream</td><td>RB healthcare UK, United Kingdom</td><td>8218535</td><td></td></tr><tr><td>70% ethanol (v/v) in distilled water</td><td>TH. Geyer, Germany</td><td>22941000</td><td></td></tr><tr><td>ultrasound gel</td><td>Asmuth, Germany</td><td>13477</td><td></td></tr><tr><td>tissue wipes</td><td>Kimberly-Clark Germany, Germany</td><td>7558</td><td></td></tr><tr><td>cotton tips</td><td>Meditrade, Germany</td><td>75481116</td><td></td></tr><tr><td>glass bowl for ultrasound gel</td><td>ARC France, France</td><td>H1149</td><td></td></tr><tr><td>water bowl</td><td>W &amp;amp; P Trading Co., USA</td><td>B00K2P6PLQ</td><td></td></tr><tr><td>gauze sponges</td><td>Fuhrmann, Germany</td><td>960504</td><td></td></tr></tbody></table>

utilizing high resolution ultrasound to monitor tumor onset and growth in genetically engineered pancreatic cancer models

LSL-KraG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; Pdx-1-Cre (KPC) 마우스 모델 췌장암에서 소설 치료 평가를 설립 하 고 자주 사용 유전자 변형 모델을 나타냅니다. 종양 발병 8 주 몇 달 사이 섹 모델 변수입니다. 따라서, 비-침략 적 이미징 도구는 화면 종양 발병 및 치료에 대 한 모니터 해야 합니다. 이 문제를 해결 하려면 다른 접근은 지난 년 동안 등장 했습니다. 고해상도 초음파 비 침해, 빠른 세션 시간 및 방사선 노출 없이 높은 이미지 해상도 같은 주요 장점이 있습니다. 그러나, 쥐에서 초음파 사소한 하 고 충분 한 해부학 지식을 이며 실용적인 기술을 성공적으로 전 임상 췌장암 모델에서 고해상도 초음파를 수행 하는 데 필요한. 다음 문서와 함께 내 생 췌장암 모델에 특히 초점 murine 모델에서 복 부 초음파에 대 한 자세한 체험 가이드 제공 됩니다. 또한, 일반적인 실수 및 그들을 피하기 위해 방법의 요약을 제공 합니다.

초음파 이미징 인간의 질병의 murine 모델에 몇 가지 문제를 해결 하는 데 사용 되는 다양 하 고 비-침략 적 기술입니다. 모든 다른 이미징 접근 주요 장점에 비해 높은 처리량, 비용 효율, 짧은 획득 시간과 실시간 이미징 있습니다. 그러나,이 도구는 정확 하 고 높은 품질의 이미지를 생성 하는 전문 지식이 필요 합니다. 원치 않는 유물 경우 특히 적어도 일부 경험 초음파 이...

Watch this Scientific Journal Video about Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models at JoVE.com

Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

이 문서에서는 유전자 조작된 췌장암 쥐에서 고해상도 초음파의 활용. 기본 목표 탐지 및 내 인 성 췌 장 종양의 평가 대 한 자세한 지침을 제공 하는.

고해상도 초음파 모니터 종양 발병 및 성장 췌장암 유전자 조작된 모델에서을 활용 하 여

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

utilizing-high-resolution-ultrasound-to-monitor-tumor-onset-growth

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Cancer Research

10.7K 조회수.  University Medical Center Goettingen. 이 문서에서는 유전자 조작된 췌장암 쥐에서 고해상도 초음파의 활용. 기본 목표 탐지 및 내 인 성 췌 장 종양의 평가 대 한 자세한 지침을 제공 하는.

비디오: Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will survive longer than five years. In order to understand and mimic the microenvironment of pancreatic tumors, we utilized a murine orthotopic model of pancreatic cancer that allows non-invasive imaging of tumor progression in real time. Pancreatic cancer cells expressing green fluorescent protein (PANC-1 GFP) were suspended in basement membrane matrix, high concentration, (e.g., Matrigel HC) with serum-free media and then injected into the tail of the pancreas via laparotomy. The cell suspension in the high concentration basement membrane matrix becomes a gel-like substance once it reaches room temperature; therefore, it gels when it comes in contact with the pancreas, creating a seal at the injection site and preventing any cell leakage. Tumor growth and metastasis to other organs are monitored in live animals by using fluorescence. It is critical to use the appropriate filters for excitation and emission of GFP. The steps for the orthotopic implantation are detailed in this article so researchers can easily replicate the procedure in nude mice. The main steps of this protocol are preparation of the cell suspension, surgical implantation, and whole body fluorescent in vivo imaging. This orthotopic model is designed to investigate the efficacy of novel therapeutics on primary and metastatic tumors.

A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here.

췌장암의 형광 동소 이식 마우스 모델

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

연구

암 연구학

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the limitations of current treatments, as the majority of patients do not respond to immunotherapy. Development of accurate preclinical models to quickly identify novel and effective therapeutic combinations are critical to address this unmet clinical need. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDA) is a canonical example of an immune checkpoint blockade resistant tumor with only 2% of patients responding to immunotherapy. The genetically engineered KrasG12D+/-;Trp53R172H+/-;Pdx-1 Cre (KPC) mouse model of PDA recapitulates human disease and is a valuable tool for assessing therapies for immunotherapy resistant in the preclinical setting, but time to tumor onset is highly variable. Surgical orthotopic tumor implantation models of PDA maintain the immunobiological hallmarks of the KPC tissue-specific tumor microenvironment (TME) but require a time-intensive procedure and introduce aberrant inflammation. Here, we use an ultrasound-guided orthotopic tumor implantation model (UG-OTIM) to non-invasively inject KPC-derived PDA cell lines directly into the mouse pancreas. UG-OTIM tumors grow in the endogenous tissue site, faithfully recapitulate histological features of the PDA TME, and reach enrollment-sized tumors for preclinical studies by four weeks after injection with minimal seeding on the peritoneal wall. The UG-OTIM system described here is a rapid and reproducible tumor model that may allow for high throughput analysis of novel therapeutic combinations in the murine PDA TME.

We describe a protocol for the ultrasound guided implantation of murine-derived pancreatic ductal adenocarcinoma cell lines directly into the native tumor site. This approach resulted in pancreatic tumors detectable by ultrasound scanning within 2-4 weeks of injection, and significantly reduced the proportion tumor cell seeding on the peritoneal wall as compared to surgical orthotopic implantation.

뮤린 췌장 연성 선암의 초음파 유도 정형 외 이식

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic alterations in oncogenes such as the KRAS oncogene, which constitutes ~25% of lung cancer cases. The difficulty in therapeutically targeting KRAS-driven lung cancer partly stems from having poor models that can mimic the progression of the disease in the lab. We describe a method that permits the relative quantification of primary KRAS lung tumors in a Cre-inducible LSL-KRAS G12D mouse model via ultrasound imaging. This method relies on brightness (B)-mode acquisition of the lung parenchyma. Tumors that are initially formed in this model are visualized as B-lines and can be quantified by counting the number of B-lines present in the acquired images. These would represent the relative tumor number formed on the surface of the mouse lung. As the formed tumors develop with time, they are perceived as deep clefts within the lung parenchyma. Since the circumference of the formed tumor is well-defined, calculating the relative tumor volume is achieved by measuring the length and width of the tumor and applying them in the formula used for tumor caliper measurements. Ultrasound imaging is a non-invasive, fast and user-friendly technique that is often used for tumor quantifications in mice. Although artifacts may appear when obtaining ultrasound images, it has been shown that this imaging technique is more advantageous for tumor quantifications in mice compared to other imaging techniques such as computed tomography (CT) imaging and bioluminescence imaging (BLI). Researchers can investigate novel therapeutic targets using this technique by comparing lung tumor initiation and progression between different groups of mice.

This protocol describes the steps taken to induce KRAS lung tumors in mice as well as the quantification of formed tumors by ultrasound imaging. Small tumors are visualized in early timepoints as B-lines. At later timepoints, relative tumor volume measurements are achieved by the measurement tool in the ultrasound software.

초음파 화상 진찰에 의하여 마우스에 있는 폐 종양 진행의 탐지

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%. New therapeutic options are critically needed and depend on improved understanding of pancreatic cancer biology. To better understand the interaction of cancer cells with the pancreatic microenvironment, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression. Luciferase-tagged pancreatic cancer cells are resuspended in Matrigel and delivered into the pancreatic tail during laparotomy. Matrigel solidifies at body temperature to prevent leakage of cancer cells during injection. Primary tumor growth and metastasis to distant organs are monitored following injection of the luciferase substrate luciferin, using in vivo imaging of bioluminescence emission from the cancer cells. In vivo imaging also may be used to track primary tumor recurrence after resection. This orthotopic model is suited to both syngeneic and xenograft models and may be used in pre-clinical trials to investigate the impact of novel anti-cancer therapeutics on the growth of the primary pancreatic tumor and metastasis.

Improved understanding of pancreatic cancer biology is critically needed to enable the development of better therapeutic options to treat pancreatic cancer. To address this need, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression using in vivo bioluminescence imaging.

췌장암의 진행 발광 동소 모델

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

의학

Generation of an Orthotopic Xenograft of Pancreatic Cancer Cells by Ultrasound-Guided Injection

Pancreatic cancer (PCa) represents one of the deadliest cancer types worldwide. The reasons for PCa malignancy mainly rely on its intrinsic malignant behavior and high resistance to therapeutic treatments. Indeed, despite many efforts, both standard chemotherapy and innovative target therapies have substantially failed when moved from preclinical evaluation to the clinical setting. In this scenario, the development of preclinical mouse models better mimicking in vivo characteristics of PCa is urgently needed to test newly developed drugs. The present protocol describes a method to generate a mouse model of PCa, represented by an orthotopic xenograft obtained by ultrasound-guided injection of human pancreatic tumor cells. Using such a reliable and minimally invasive protocol, we also provide evidence of in vivo engraftment and development of tumor masses, which can be monitored by ultrasound (US) imaging. A noteworthy aspect of the PCa model described here is the slow development of the tumor masses over time, which allows precise identification of the starting point for pharmacological treatments and better monitoring of the effects of therapeutic interventions. Moreover, the technique described here is an example of implementation of the 3Rs principles since it minimizes pain and suffering and directly improves the welfare of animals in research.

We present a protocol to generate a minimally invasive orthotopic pancreatic cancer model by ultrasound-guided injection of human pancreatic cancer cells and the subsequent monitoring of tumor growth in vivo by ultrasound imaging.

초음파 유도 주사에 의한 췌장암 세포의 동종 이종이의 생성

Pancreatic cancer (PCa) represents one of the deadliest cancer types worldwide. The reasons for PCa malignancy mainly rely on its intrinsic malignant ...

High-Resolution Ultrasonography for the Analysis of Orthotopic ATC Tumors in a Genetically Engineered Mouse Model

Anaplastic thyroid carcinoma (ATC) is associated with a poor prognosis and short median survival time, but no effective treatment improves the outcomes significantly. Genetically engineered murine models that mimic ATC&#39;s progression may help researchers to study treatments for this disease. Crossing three different genotypes of mice, a TPO-cre/ERT2; BrafCA/wt; Trp53&#916;ex2-10/&#916;ex2-10&#160;transgenic ATC model was developed. The ATC murine model was induced by an intraperitoneal injection of tamoxifen with overexpression of BrafV600E and deletion of Trp53, and the tumors were generated within about 1 month. High-resolution ultrasound was applied to investigate the tumor initiation and progression, and the dynamic growth curve was obtained by measuring the tumor sizes. Compared to magnetic resonance imaging (MRI) and computed tomography scanning, ultrasound has advantages in observing the ATC murine model, such as being noninvasive, portable, in real-time, and without radiation exposure. High-resolution ultrasound is suitable for dynamic and multiple measurements. However, ultrasonographic examination of the thyroid in mice requires relevant anatomical knowledge and experience. This article provides a detailed procedure for utilizing high-resolution ultrasound to scan tumors in the transgenic ATC model. Meanwhile, ultrasonic parameter adjustment, ultrasound scanning skills, anesthesia and recovery of the animals, and other elements that need attention during the process are listed.

The present protocol describes high-frequency ultrasonography for visualizing the entire mouse thyroid gland and monitoring the growth of anaplastic thyroid carcinoma.

유전자 조작 마우스 모델에서 동소 ATC 종양 분석을 위한 고해상도 초음파 검사

Anaplastic thyroid carcinoma (ATC) is associated with a poor prognosis and short median survival time, but no effective treatment improves the outcomes ...

Implanted Stabilized Window를 사용한 쥐 췌장 영상

Stabilized Window for Intravital Imaging of the Murine Pancreas

The physiology and pathophysiology of the pancreas are complex. Diseases of the pancreas, such as pancreatitis and pancreatic adenocarcinoma (PDAC) have high morbidity and mortality. Intravital imaging (IVI) is a powerful technique enabling the high-resolution imaging of tissues in both healthy and diseased states, allowing for real-time observation of cell dynamics. IVI of the murine pancreas presents significant challenges due to the deep visceral and compliant nature of the organ, which make it highly prone to damage and motion artifacts. 
Described here is the process of implantation of the Stabilized Window for Intravital imaging of the murine Pancreas (SWIP). The SWIP allows IVI of the murine pancreas in normal healthy states, during the transformation from the healthy pancreas to acute pancreatitis induced by cerulein, and in malignant states such as pancreatic tumors. In conjunction with genetically labeled cells or the administration of fluorescent dyes, the SWIP enables the measurement of single-cell and subcellular dynamics (including single-cell and collective migration) as well as serial imaging of the same region of interest over multiple days. 
The ability to capture tumor cell migration is of particular importance as the primary cause of cancer-related mortality in PDAC is the overwhelming metastatic burden. Understanding the physiological dynamics of metastasis in PDAC is a critical unmet need and crucial for improving patient prognosis. Overall, the SWIP provides improved imaging stability and expands the application of IVI in the healthy pancreas and malignant pancreas diseases.

저자 스포트라이트: 첨단 생체 내 이미징을 통한 췌장 질환 이해의 혁명 

We present a protocol for the surgical implantation of a stabilized indwelling optical window for subcellular-resolution imaging of the murine pancreas, allowing serial and longitudinal studies of the healthy and diseased pancreas.

쥐 췌장의 생체 내 이미징을 위한 안정화된 창

The physiology and pathophysiology of the pancreas are complex. Diseases of the pancreas, such as pancreatitis and pancreatic adenocarcinoma (PDAC) have ...

Dynamic Contrast Enhanced Magnetic Resonance Imaging of an Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe respiratory motion artifact in the abdominal area. Orthotopic tumor models offer advantages over subcutaneous ones, because those can reflect the primary tumor microenvironment affecting blood supply, neovascularization, and tumor cell invasion. We have recently established a protocol of DCE-MRI of orthotopic pancreatic tumor xenografts in mouse models by securing tumors with an orthogonally bent plastic board to prevent motion transfer from the chest region during imaging. The pressure by this board was localized on the abdominal area, and has not resulted in respiratory difficulty of the animals. This article demonstrates the detailed procedure of orthotopic pancreatic tumor modeling using small animals and DCE-MRI of the tumor xenografts. Quantification method of pharmacokinetic parameters in DCE-MRI is also introduced. The procedure described in this article will assist investigators to apply DCE-MRI for orthotopic gastrointestinal cancer mouse models.

The goal of this protocol is to apply dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) for orthotopic pancreatic tumor xenografts in mice. DCE-MRI is a non-invasive method to analyze microvasculature in a target tissue, and useful to assess vascular response in a tumor following a novel therapy.

고해상도 초음파 모니터 종양 발병 및 성장 췌장암 유전자 조작된 모델에서을 활용 하 여

요약

더 많은 비디오 탐색

이 비디오의 챕터

췌장암의 형광 동소 이식 마우스 모델

뮤린 췌장 연성 선암의 초음파 유도 정형 외 이식

초음파 화상 진찰에 의하여 마우스에 있는 폐 종양 진행의 탐지

췌장암의 진행 발광 동소 모델

초음파 유도 주사에 의한 췌장암 세포의 동종 이종이의 생성

유전자 조작 마우스 모델에서 동소 ATC 종양 분석을 위한 고해상도 초음파 검사

쥐 췌장의 생체 내 이미징을 위한 안정화된 창

쥐 췌장의 생체 내 이미징을 위한 안정화된 창

쥐 췌장의 생체 내 이미징을 위한 안정화된 창

동소 이식 췌장 암 마우스 모델의 동적 대비 강화 된 자기 공명 영상