이 연구는 코넬 대학에 의해 지원 되었다. 이 작품은 코넬 센터의 시설에 대 한 재료 연구 공유, NSF MRSEC 프로그램 (그랜트 DMR-1120296)을 통해 지원 되는 사용 했다. S.R.N.는 NSF 대학원 연구 장학금 (그랜트 DGE-1650441) / 닥터 데이브 Holowka를 통해 칼슘 실험 지원을 인정합니다. 모든 의견, 결과, 결론 또는 권고가이 자료에서 표현은 저자 (들)의 고 반드시 국립 과학 재단의 의견을 반영 하지 않습니다.

참고: 농축된 산 및 기초가이 합성에 사용 됩니다. 모든 적절 한 안전 관행을 사용 하 여 엔지니어링 컨트롤 (증기 두건) 및 안전 안경, 장갑, 랩 코트, 전체 길이 바지, 폐쇄 발가락 신발 등 개인 보호 장비 (PPE)의 사용을 포함 한 반응을 수행할 때.
 1.의 준비 [(오 2) (NH 3) 4 Ru (µ-O) Ru (NH 3) 4 (오 2)] Cl 5 [Ru (NH 3) 5 Cl] Cl의 <ol><li>합성 2 12 <ol>RuCl 3 · n H 2 O의 <li>분해 1.00 g (40% 무게에 의해 Ru, 4.1 mmol) H 2 o. 쿨 얼음 목욕에서 0 ° C에 어두운 갈색 솔루션의 5 ml에서. Dropwise 방식에서 80% 히드라 진 하이드 레이트 솔루션의 11 mL (0.23 mol)를 추가 합니다. 초기 반응 갈색 솔루션의 결과로 진화 가스와 활발 한 것입니다. 16 h;에 대 한 실 온에서 저 결과 솔루션을 보자 최종 솔루션은 어두운 무엇이 될 
		주의: 히드라 진은 심하게 독성과 발암 성. 또한, 무수이 시 약이 폭발 합니다. 항상 그렇듯이, 처리할 때 적절 한 보호구 및 연기 후드를 사용 합니다. 이러한 솔루션 건조에 집중 하지 마십시오.</li>
		<li>가 솔루션 2로 pH를 조정에 집중 된 HCl의 약 5-10 mL을 추가. 이 시점에서, 솔루션 것입니다 노란색 갈색 색상에서.</li>
		<li>1-2 시간 교 반 하면서 105 ° C에서이 솔루션을 열. 노란 고체 솔루션에서 침전 한다. 더 이상 침전 가시 형태, 열에서 제거.</li>
		<li>하도록을 실내 온도에 냉각 후 0 ° C 얼음 욕조에 10 분 수집 진공 여과 및 세척 5 mL로 하 여 노란색 고체에 대 한 반응 혼합물의 에탄올과 에테르 diethyl.</li>
		<li>완전히 15-25 mL의 뜨거운 물에 원유 제품을 분해. 얼음 목욕에서 그것을 배치 하 여 집중 HCl 솔루션 필터 플라스 크에 10 mL을 진정. 창백한 노란색 순수한 고체의 강 수를 유도 하기 위해 냉장된 HCl 솔루션으로 노란색 솔루션을 필터링 합니다. 이 침전을 필터링 하 고 각 0.5 M HCl, 에탄올 및 에테르 5 mL로 씻어.</li>
		<li>특성과 복합 사용 하 여 적외선의 분광학 3226 c m -1, 1604 cm -1, 1297 cm -1, 801 c m -1에서 기지개 주파수 식별에 의해 순도 확인 합니다. 2069 cm -1에 일반적인 작은 불순 [Ru (NH 3) 5 N 2] Cl 3에 할당 됩니다.</li>
	</ol></li> <li>[(오 2) (NH 3) 4 (µ-O) Ru Ru (NH 3) 4 (오 2)] Cl 5의 합성 <ol><li>100mg (0.34 mmol)을 녹 [Ru (NH 3) 5 Cl] Cl 2 50 ml의 1 M NH 4 200 mL 무거운 벽 라운드 바닥 압력 용기에 오. 느슨하게 캡 스 토퍼와 플라스 크 6 h. 제거 열에서 75 ° C에서 반응 혼합물이 열 하 고 어두운 녹색 솔루션을 4 일 동안 실내 온도에 저 어. 
		주의! 압력 형성에 밀폐 용기 결과 난방. 적절 한 압력 안전 유리를 사용 하 여 있는지 확인 합니다. 이 반응에 대 한 선박을 씰링의 목적은 가스 NH 3의 손실을 최소화 하기 위해입니다. 따라서, 느슨하게 초과 압력의 릴리스에 대 한 수 있도록 스 토퍼를 배치.</li>
	</ol></li> <li>양이온 교환 크로마토그래피에 의해 정화 <ol><li>25 mL 비 커에 5 g 양이온 교환 수 지를 일시 중단 (예: Dowex 50WX2 200-400 메쉬 (H + 형식) 10 ml 0.1 M HCl.</li>
		<li>50 mL 용 저수지와 부착 (직경 10 m m, 높이 15 cm) 10 mL 열에이 슬러리를 로드 합니다. eluate 무색이 될 때까지 약 20-30 mL의 0.1 M HCl로 수 지를 세척.</li>
		<li>단계 1.2.1에서에서 고립 된 녹색 반응 솔루션을 반환 합니다. 이 솔루션에 추가 2, 어느 시점에서 솔루션 색상이 갈색으로 변경 pH 조정에 집중 된 HCl.</li>
		<li>부드럽게 수 지 위에 pipetting 단계 1.3.2에서에서 준비한 양이온 교환 수 지 열이 acidified 솔루션을 로드 합니다. 완전히 배수, 및 솔루션을 로드 계속 eluate 하자. 이 프로세스를 반복 하 여 전체 솔루션 추가 되었습니다. 수 지의 상단은 어두운 갈색/검은색 될 것입니다. 수 지에에서 약간 줄어듭니다.</li>
		<li>사용 수 지의 상단을 충당 하기 위해 유리 구슬. 이 새로운 솔루션은 추가 될 때 방해 되 고에서 수 지를 방지 합니다.</li>
		<li>20 mL의 1 M HCl와 열을 elute.</li>
		<li>Elute 1.5 m HCl 농도 증가 된 열 (&#8776; 50 mL). 노란 솔루션 열 내려와 시작 합니다. 2 m HCl 농도 증가 하 고 계속 방출는 eluate 무색이 될 때까지 또는 아주 창백한 녹색 황색. 150-200 mL의 총 볼륨이이 과정에 필요한 것.</li>
		<li>2.5 m (20-50 mL) HCl 농도 증가. 분수에 시험관으로는 eluate를 수집 합니다. 3m HCl 늘립니다. 제품 열에서 녹색 갈색 솔루션으로 elute 것입니다. 레드 브라운 분수 또한 열에서와 서 시작할 수 있습니다. 이 분수는 산화 루 테 늄 빨강 불순물, 녹색 갈색 분수와 수영장 하지 마십시오.</li>
	</ol></li> <li>특성화 및 검증 [(오 2) (NH 3) 4 (µ-O) Ru Ru (NH 3) 4 (오 2)] Cl 5의 순수성의 <ol><li>에서 분수의 모든 테스트 1.3.8 단계입니다. UV-마주의 분광학에 의해 이 작업을 수행 하려면 3 M NH3 2 mL에 주어진된 분수의 100 µ L을 추가 하 고 자외선에 대 한 분광학에 의해 분석. 분수 순수한 제품을 포함 하는 큰 흡 광도 밴드 있을 것 이다 360 nm와 600 덜 강렬한 흡 광도 nm. 480 또는 533 nm에서 흡 광도 산화 루 테 늄 빨강 및 루 테 늄 빨강 불순물, 각각.</li>
		<li>수영장 분수 순수한 제품을 포함 하 고 회전 증발에 의해 건조에 대 한 해결책을 증발. 제품 그린 브라운 단색으로 고립 될 것입니다. 수확량은 일반적으로 5-15 mg (수율 10-20%)의 순서. 단일-결정, x 선 회절에 대 한 적합 한 화합물의 수성 해결책에 에탄올의 증기 확산에 의해 얻어질 수 있다.</li>
		<li>확인 순도, pH 7.4 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS)의 솔루션에 대 한 UV 분광학 화합물 분석. 순도 360의 농도의 비율을 복용 하 여 사정 될지도 모른다 nm와 600 nm 봉우리. 이 비율은 이다 순수한 화합물에 대 한 31. 불순 한 화합물에 대 한 비율이 작은 것.</li>
		<li>IR 분광학에 의해는 고체에 샘플을 분석합니다. 진단 밴드 3234 cm -1, 3151 cm -1, 1618 cm -1, 1313 c m -1, 815 cm -1에 있습니다. 일반적인 불순물 밴드 1762 c m -1와 1400 c m -1에서 볼 수 있습니다, 뉴 햄프셔의 특성 4 cl. 루 테 늄 빨강 1404 cm -1, 1300 c m -1, 1037 cm -1 800 cm -1에 악대에 의해 확인 될 수 있다.</li>
	</ol></li> <li>형광 분광학에 의해 미토 콘 드리 아 칼슘 통풍 관 억제의 평가 주의! 다음 절차는 포유류 세포를 사용합니다. 작업 생물 안전 수준 2 (BSL2) 연구에 대 한 인증 된 적절 한 층 류 두건에서 실행 되어야 한다. 
	&#8203; 참고: [(오 2) (NH 3) 4 (µ-O) Ru Ru (NH 3) 4 (오 2)] Cl 5 참조 됩니다 [러]로이 단원의 <ol><li>버퍼링 확인 포함 하는 포도 당 생리 식 염 수 (BGSS)로 분석 결과 미디어입니다. BGSS 110 m KCl m, 1 mM KH 2 포 4, 1 mM MgCl 2, 20 mM 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic 산 (HEPES), 5mm 나트륨 호박, 30 µ M 에틸렌 글리콜-bis(β-aminoethyl ether)-구성 된 솔루션은 N, N N &#39;, N &#39;-tetraacetic 산 (EGTA). EGTA는 제외 하 고 모든 것을 결합, pH 7.4에 조정. EGTA를 추가 하 고 pH 7.4에 조정. 분석 결과 미디어의 50 mL에 대 한 추가 1 mg/mL 포도 당의 0.5 mL.</li>
		<li>Dulbecco에 500 cm 2 접시에 문화 HeLa 세포 &#39; s 수정이 글 매체 (DMEM) 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS) 5% CO 2 시드 100 mm 페 트리 접시에에서 성장 하는 37 ° C. 증폭 HeLa 세포에서 습도 인큐베이터에서 500 cm 2 페 트리 접시에 그들을. 큰 접시에 총 미디어 볼륨은 115 mL. 각 큰 접시 약 18 백만 셀, 두 형광 분광학 실험을 위해 이젠 그만 얻을 것입니다.
		<ol><li>성장 셀 90-95%를 도달할 때까지 confluency. 미디어를 제거 하 고 15 mL pH 7.4 PBS 가진 세포를 씻어. PBS에서 1 mM ethylenediaminetetraacetic 산 (EDTA)의 15 mL를 추가 하 고 셀을 분리를 10 분 동안 품 어. 아래 팔 콘 튜브 라운드 14 mL 셀 전송</li></ol></li> <li>거꾸로 현미경으로 trypan 블루와 hemocytometer를 사용 하 여 셀을 계산 하 고 셀의 총 수와 1.8 mL 볼륨 당 7.5 백만 세포에 도달 하는 데 필요한 미디어의 볼륨 계산 중간. 원심 5310 × g. Decant는 상쾌한 10 분에 대 한 셀을 BGSS의 계산 된 볼륨을 추가 합니다. 부드럽게 세포를 resuspend.
		<ol><li>가 분석이 결과 대 한 순수한 물에 디 메 틸 sulfoxide (DMSO), 1 m m H 2 O 및 H 2 o [Ru]. 재고 솔루션, 10 m m CaCl 2 칼슘 그린-5N에서에서 40 m m digitonin의 재고 솔루션을 준비, 1-3 m m 범위 수. 
			&#8203; 참고: 칼슘 그린-5N은 빛에 민감한. 어둠 속에 저장 하 고 빛의 노출을 최소화.</li>
		</ol></li> <li>506 nm와 532에서 방출 읽기에 흥분 하는 fluorimeter를 설치 37에서 제어 베트 홀더 nm ° C. 준비 볶음 바와 휠, 1.8 mL 세포 현 탁 액 위에, 1.8 µ L digitonin 솔루션, 3.6 1.5.2에서 아크릴 베트 & # 181. L 칼슘 그린-5N (솔루션), 그리고 9 µ L [러] (1 m m 재고 솔루션, 5 µ M 최종 농도)에 대 한. 세포는 fluorimeter에 15 분 동안 품 어.
		<ol><li>원시 흡수 대신 여기/방출 비율으로 데이터를 읽을. 광원에서 동요와 관련 된 오류를 최소화 하는이 연습.</li>
			<li>셀의 응답에 CaCl 2의 추가의 효과 측정 하는 [루]의 부재에서 첫 샘플 분석 수행.</li>
			<li>1.5.4에 설명 된 설정으로 fluorimeter에 시작 분석. 약 2 분 안정 방출 기준을 설정 하 고 CaCl 2 (10 µ M 최종 농도)의 1.8 µ L를 추가 합니다. 방출 강도 CaCl 2의 추가 시 즉시 증가 하 고 칼슘 이온 입력은 미토 콘 드리 아 분의 과정을 통해 다음 부패 합니다. 감퇴가 완료 될 때까지 기다립니다 (&#8776; 5 분). [러] 치료 하지 않을 셀의 미토 콘 드리 아 칼슘 통풍 관 응답을 확인 하려면 추가 칼슘 boluses 추가.</li>
		</ol></li> <li>다른 멧에 포함 된 5 µ M [Ru] 반복 실험 1.5.4.3에서 위에서 설명한 대로. 억제제, 존재 방출 강도 증가, 그러나 부패 하지 것 이다. 이 관측 미토 콘 드리 아 칼슘 통풍 관을 차단 하는 것을 의미 한다..</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>De Stefani, D., Rizzuto, R., Pozzan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enjoy+the+trip:+Calcium+in+mitochondria+back+and+forth.">Enjoy the trip: Calcium in mitochondria back and forth.</a> Annu. Rev. Biochem. 85, 161-192 (2016).</li><li>Contreras, L., Drago, I., Zampese, E., Pozzan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria:+the+calcium+connection.">Mitochondria: the calcium connection.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1797 (6-7), 607-618 (2010).</li><li>Giorgi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+calcium+homeostasis+as+potential+target+for+mitochondrial+medicine.">Mitochondrial calcium homeostasis as potential target for mitochondrial medicine.</a> Mitochondrion. 12 (1), 77-85 (2012).</li><li>De Stefani, D., Raffaello, A., Teardo, E., Szab&#242;, I., Rizzuto, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+forty-kilodalton+protein+of+the+inner+membrane+is+the+mitochondrial+calcium+uniporter.">A forty-kilodalton protein of the inner membrane is the mitochondrial calcium uniporter.</a> Nature. 476 (7360), 336-340 (2011).</li><li>Baughman, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrative+genomics+identifies+MCU+as+an+essential+component+of+the+mitochondrial+calcium+uniporter.">Integrative genomics identifies MCU as an essential component of the mitochondrial calcium uniporter.</a> Nature. 476 (7360), 341-356 (2011).</li><li>Kamer, K. J., Mootha, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+era+of+the+mitochondrial+calcium+uniporter.">The molecular era of the mitochondrial calcium uniporter.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 16 (9), 545-553 (2015).</li><li>Ying, W. -. L., Emerson, J., Clarke, M. J., Sanadi, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+mitochondrial+calcium+ion+transport+by+an+oxo-bridged+dinuclear+ruthenium+ammine+complex.">Inhibition of mitochondrial calcium ion transport by an oxo-bridged dinuclear ruthenium ammine complex.</a> Biochemistry. 30 (20), 4949-4952 (1991).</li><li>Emerson, J., Clarke, M. J., Ying, W. -. L., Sanadi, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+component+of+"ruthenium+red"+responsible+for+inhibition+of+mitochondrial+calcium+ion+transport.+Spectra,+electrochemistry,+and+aquation+kinetics.+Crystal+structure+of+&#181;-O-[(HCO2)(NH3)4Ru]2Cl3.">The component of "ruthenium red" responsible for inhibition of mitochondrial calcium ion transport. Spectra, electrochemistry, and aquation kinetics. Crystal structure of &#181;-O-[(HCO2)(NH3)4Ru]2Cl3.</a> J. Am. Chem. Soc. 115 (25), 11799-11805 (1993).</li><li>Matlib, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen-bridged+Dinuclear+Ruthenium+Amine+Complex+Specifically+Inhibits+Ca2++Uptake+into+Mitochondria+in+Vitro+and+in+Situ+in+Single+Cardiac+Myocytes.">Oxygen-bridged Dinuclear Ruthenium Amine Complex Specifically Inhibits Ca2+ Uptake into Mitochondria in Vitro and in Situ in Single Cardiac Myocytes.</a> J. Biol. Chem. 273 (17), 10223-10231 (1998).</li><li>Oxenoid, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Architecture+of+the+mitochondrial+calcium+uniporter.">Architecture of the mitochondrial calcium uniporter.</a> Nature. 533 (7602), 269-273 (2016).</li><li>Nathan, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+Methods+for+the+Preparation+of+a+Functional+Analogue+of+Ru360,+a+Potent+Inhibitor+of+Mitochondrial+Calcium+Uptake.">Synthetic Methods for the Preparation of a Functional Analogue of Ru360, a Potent Inhibitor of Mitochondrial Calcium Uptake.</a> Inorg Chem. 56 (6), 3123-3126 (2017).</li><li>Allen, A. D., Senoff, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+infrared+spectra+of+some+ammine+complexes+of+ruthenium(II)+and+ruthenium(III).">Preparation and infrared spectra of some ammine complexes of ruthenium(II) and ruthenium(III).</a> Can. J. Chem. 45 (12), 1337-1341 (1967).</li><li>Murphy, A. N., Bredesen, D. E., Cortopassi, G., Wang, E., Fiskum, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bcl-2+potentiates+the+maximal+calcium+uptake+capacity+of+neural+cell+mitochondria.">Bcl-2 potentiates the maximal calcium uptake capacity of neural cell mitochondria.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93 (18), 9893-9898 (1996).</li><li>Deak, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+mitochondrial+Ca&#8314;+uptake.">Assessment of mitochondrial Ca&#8314; uptake.</a> Meth. Molec. Biol. 1264, 421-439 (2015).</li></ol>

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미토 콘 드리 아 칼슘 통풍 관 억제 물 [(오2) (NH3)4(µ-O) Ru Ru (NH3)4(오2)] Cl5 [Ru (NH3)5Cl] 합성된 Cl2, 잘 알려진 ruthenium(III) 수 있습니다. 이 절차에 설명 된 대로 자료를 시작 합니다. [Ru (NH3)5Cl] Cl2 의 합성은 쉽게 작은 어려움으로 달성 됩니다. 히드라 진에 RuCl3 16 h 교 반 후 수 화, 솔루션?...

미토 콘 드리 아 칼슘은 에너지 생산 및 apoptosis를 포함 하 여 정상적인 세포 기능에 중요 한 프로세스의 수에 대 한 키 레 귤 레이 터 이다. 1 , 2 , 3 미토 콘 드리 아 칼슘 uniporter (MCU), 내부 미토 콘 드리 아 막에 상주 하는 이온 운송업 자 단백질은 미토 콘 드리 아로 칼슘 이온의 유입을 통제 한다. 4 , 5 , 6 화학 억제제는 MCU의 기능이 수송 단백질과 미토 콘 드리 아 칼슘의 세포 역할을 공부 하 고 노력을 계속 하는 데 유용한 도구는. 복합 [(HCO2) (NH3)4(µ-O) Ru Ru (NH3)4(O2CH)]3 +, Ru360, 24 µ M.7 보고 Kd 값 MCU에 대 한 유일한 알려진된 선택적 억제제 중 하나입니다. ,8,,910 이 복잡 한 상업적인 정립에서의 루 테 늄 빨강 (RuRed)는 triruthenium 디-μ-oxo 발견 일반적인 불순은 다리의 공식 [(NH3) hexacation 5 Ru (µ-O) Ru (NH3)4(μ O) Ru (NH3)5)]6 +, 또한 칼슘 통풍 관 억제 물으로 사용 되었습니다. Ru360를 상업적으로 사용할 수 있지만 그것은 매우 비용이 많이 드는입니다. 또한, 합성 및 Ru360의 절연 어려운 정화 절차와 모호한 특성 방법에 의해 도전입니다.
우리는 최근 Ru360 아날로그, [(오2) (NH3)4(µ-O) Ru Ru (NH3)4(오2)] Cl5액세스 절차 보고 있다. 11 이 화합물 높은 선호도, Ru360와 유사한 MCU 억제. 이 프로토콜에서 [Ru (NH3)5Cl] Cl2개시는 화합물의 우리의 가장 효과적인 합성을 설명 합니다. 강하게 산 성 양이온 교환 수 지를 사용 하 여 제품의 정화는이 절차에 대 한 일반적인 함정 함께 상세한입니다. 우리는 또한 특성화 및 복합 순도의 평가 대 한 방법을 제시 하 고 미토 콘 드리 아 칼슘 통풍 관 차단에 그 효능을 테스트 하는 간단한 방법의 윤곽을 그리 다.

<table><tbody><tr><td>Ruthenium Trichloride hydrate</td><td>Pressure Chemical</td><td>3750</td><td></td></tr><tr><td>Concentrated hydrochloric acid</td><td>J.T. Baker</td><td>9535</td><td></td></tr><tr><td>Concentrated ammonium hydroxide</td><td>Mallinckrodt Chemical Works</td><td>A669C-2 1</td><td></td></tr><tr><td>Dowex 50 WX2 200-400 Mesh</td><td>Alfa Aesar</td><td>13945</td><td></td></tr><tr><td>Calcium Green 5N</td><td>Invitrogen</td><td>C3737</td><td></td></tr><tr><td>Digitonin</td><td>Aldrich</td><td>260746</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Aldrich</td><td>471267</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Aldrich</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>USB</td><td>20598</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Aldrich</td><td>P3786</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Fisher Scientific</td><td>M33-500</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fluka</td><td>54466</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Succinate</td><td>Alfa Aesar</td><td>33386</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>J.T. Baker</td><td>8993-01</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Aldrich</td><td>G5000</td><td></td></tr><tr><td>200 Round bottom flask</td><td>ChemGlass</td><td>CG-1506-14</td><td></td></tr><tr><td>Glass stopper</td><td>ChemGlass</td><td>CG-3000-05</td><td></td></tr><tr><td>10 mm x 15 cm glass column with reservoirs</td><td>Custom - similar to Chemglass columns</td><td>Similar to CG-1203-20</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning</td><td>10-017-CV</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco</td><td>10437028</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Round bottom Falcon tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-11B&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>500 cm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt; petri dishes</td><td>Corning</td><td>431110</td><td></td></tr><tr><td>Trypan blue</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Hemacytometer</td><td>Aldrich</td><td>Z359629</td><td></td></tr><tr><td>Acrylic Cuvettes</td><td>VWR&amp;nbsp;</td><td>58017-875</td><td></td></tr><tr><td>UV-Vis spectrometer</td><td>Agilent Model Cary 8454&amp;nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spectrofluorimeter</td><td>SLM Model 8100C</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IR spectrometer</td><td>Bruker Hyprion FTIR with ATR attachment</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>ALC Model PM140R</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Inverted light microscope</td><td>VWR&amp;nbsp;</td><td>89404-462</td><td></td></tr></tbody></table>

synthesis and evaluation of a ruthenium-based mitochondrial calcium uptake inhibitor

우리는 합성과 정화는 미토 콘 드리 아 칼슘 통풍 관 억제 물, [(오2) (NH3)4(µ-O) Ru Ru (NH3)4(오2)]5 +의 선발. 이 화합물의 최적화 된 합성 1 m에서 [Ru (NH3)5Cl] Cl2 에서 NH4오 그린 솔루션 저조한 닫힌된 컨테이너에서 시작 됩니다. 정화는 양이온 교환 크로마토그래피와 함께 수행 됩니다. 이 화합물과 특징은 순수에 대 한 UV와 IR 분광학에 의해 확인. 미토 콘 드리 아 칼슘 통풍 관 억제 속성 permeabilized HeLa 세포에 형광 분광학에 의해 평가 됩니다.

이 메서드는 미토 콘 드리 아 칼슘 통풍 관 억제 물 [(오2) (NH3)4(µ-O) Ru Ru (NH3)4(오2)] Cl5 [Ru (NH3)5Cl] Cl2, 시작의 합성에 설명 합니다는 잘 알려진 ruthenium(III) 시작 소재입니다. [Ru (NH3)5Cl] Cl2 IR 분광학, 3200 c m-1, 1608 cm-1, 1298 cm-1, 798 cm-1 (<stro...

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Synthesis and Evaluation of a Ruthenium-based Mitochondrial Calcium Uptake Inhibitor

합성 및 루 테 늄 기반 미토 콘 드리 아 칼슘 통풍 관 억제 물의 평가

합성, 정화, 및 미토 콘 드리 아 칼슘 통풍 관의 루 테 늄 기반 억제제의 특성화에 대 한 프로토콜 제공 됩니다. Permeabilized 포유류 세포에서 효능을 평가 하는 절차를 설명 했다.

We detail the synthesis and purification of a mitochondrial calcium uptake inhibitor, [(OH2)(NH3)4Ru(&#181;-O)Ru(NH3)4(OH2)]5+. The optimized synthesis of ...

synthesis-evaluation-ruthenium-based-mitochondrial-calcium-uptake

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Chemistry

7.8K 조회수.  Cornell University. 합성, 정화, 및 미토 콘 드리 아 칼슘 통풍 관의 루 테 늄 기반 억제제의 특성화에 대 한 프로토콜 제공 됩니다. Permeabilized 포유류 세포에서 효능을 평가 하는 절차를 설명 했다.

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The Synthesis, Characterization and Reactivity of a Series of Ruthenium N-triphosPh Complexes

Herein we report the synthesis of a tridentate phosphine ligand N(CH2PPh2)3 (N-triphosPh) (1) via a phosphorus based Mannich reaction of the hydroxylmethylene phosphine precursor with ammonia in methanol under a nitrogen atmosphere. The N-triphosPh ligand precipitates from the solution after approximately 1 hr of reflux and can be isolated analytically pure via simple cannula filtration procedure under nitrogen. Reaction of the N-triphosPh ligand with [Ru3(CO)12] under reflux affords a deep red solution that show evolution of CO gas on ligand complexation. Orange crystals of the complex [Ru(CO)2{N(CH2PPh2)3}-&#954;3P] (2) were isolated on cooling to RT. The 31P{1H} NMR spectrum showed a characteristic single peak at lower frequency compared to the free ligand. Reaction of a toluene solution of complex 2 with oxygen resulted in the instantaneous precipitation of the carbonate complex [Ru(CO3)(CO){N(CH2PPh2)3}-&#954;3P] (3) as an air stable orange solid. Subsequent hydrogenation of 3 under 15 bar of hydrogen in a high-pressure reactor gave the dihydride complex [RuH2(CO){N(CH2PPh2)3}-&#954;3P] (4), which was fully characterized by X-ray crystallography and NMR spectroscopy. Complexes 3 and 4 are potentially useful catalyst precursors for a range of hydrogenation reactions, including biomass-derived products such as levulinic acid (LA). Complex 4 was found to cleanly react with LA in the presence of the proton source additive NH4PF6 to give [Ru(CO){N(CH2PPh2)3}-&#954;3P{CH3CO(CH2)2CO2H}-&#954;2O](PF6) (6).

The Synthesis, Characterization and Reactivity of a Series of Ruthenium N-triphosPh Complexes

Ruthenium phosphine complexes are widely used for homogeneous catalytic reactions such as hydrogenations. The synthesis of a series of novel tridentate ruthenium complexes bearing the N-triphos ligand N(CH2PPh2)3 is reported. Additionally, the stoichiometric reaction of a dihydride Ru&#8211;N-triphos complex with levulinic acid is described.

루테늄의 시리즈의 합성, 특성 및 반응성<em&gt; N</em&gt; -triphos<sup&gt; 박사</sup&gt; 단지

Herein we report the synthesis of a tridentate phosphine ligand N(CH2PPh2)3 (N-triphosPh) (1) via a phosphorus based Mannich reaction of the ...

연구

화학

Analyses of Mitochondrial Calcium Influx in Isolated Mitochondria and Cultured Cells

Ca2+ handling by mitochondria is a critical function regulating both physiological and pathophysiological processes in a broad spectrum of cells. The ability to accurately measure the influx and efflux of Ca2+ from mitochondria is important for determining the role of mitochondrial Ca2+ handling in these processes. In this report, we present two methods for the measurement of mitochondrial Ca2+ handling in both isolated mitochondria and cultured cells. We first detail a plate reader-based platform for measuring mitochondrial Ca2+ uptake using the Ca2+ sensitive dye calcium green-5N. The plate reader-based format circumvents the need for specialized equipment, and the calcium green-5N dye is ideally suited for measuring Ca2+ from isolated tissue mitochondria. For our application, we describe the measurement of mitochondrial Ca2+ uptake in mitochondria isolated from mouse heart tissue; however, this procedure can be applied to measure mitochondrial Ca2+ uptake in mitochondria isolated from other tissues such as liver, skeletal muscle, and brain. Secondly, we describe a confocal microscopy-based assay for measurement of mitochondrial Ca2+ in permeabilized cells using the Ca2+ sensitive dye Rhod-2/AM and imaging using 2-dimensional laser-scanning microscopy. This permeabilization protocol eliminates cytosolic dye contamination, allowing for specific recording of changes in mitochondrial Ca2+. Moreover, laser-scanning microscopy allows for high frame rates to capture rapid changes in mitochondrial Ca2+ in response to various drugs or reagents applied in the external solution. This protocol can be applied to measure mitochondrial Ca2+ uptake in many cell types including primary cells such as cardiac myocytes and neurons, and immortalized cell lines.

Here, we present two protocols for the measurement of mitochondrial Ca2+ influx in isolated mitochondria and cultured cells. For isolated mitochondria, we detail a plate reader-based Ca2+ import assay using the Ca2+ sensitive dye calcium green-5N. For cultured cells, we describe a confocal microscopy method using the Ca2+ dye Rhod-2/AM.

고립 된 미토 콘 드리 아 및 경작된 한 세포에 있는 미토 콘 드 리아 칼슘 유입의 분석

Ca2+ handling by mitochondria is a critical function regulating both physiological and pathophysiological processes in a broad spectrum of cells. The ...

생화학

An In Vitro Enzymatic Assay to Measure Transcription Inhibition by Gallium(III) and H3 5,10,15-tris(pentafluorophenyl)corroles

Chemotherapy often involves broad-spectrum cytotoxic agents with many side effects and limited targeting. Corroles are a class of tetrapyrrolic macrocycles that exhibit differential cytostatic and cytotoxic properties in specific cell lines, depending on the identities of the chelated metal and functional groups. The unique behavior of functionalized corroles towards specific cell lines introduces the possibility of targeted chemotherapy.
Many anticancer drugs are evaluated by their ability to inhibit RNA transcription. Here we present a step-by-step protocol for RNA transcription in the presence of known and potential inhibitors. The evaluation of the RNA products of the transcription reaction by gel electrophoresis and UV-Vis spectroscopy provides information on inhibitive properties of potential anticancer drug candidates and, with modifications to the assay, more about their mechanism of action.
Little is known about the molecular mechanism of action of corrole cytotoxicity. In this experiment, we consider two corrole compounds: gallium(III) 5,10,15-(tris)pentafluorophenylcorrole (Ga(tpfc)) and freebase analogue 5,10,15-(tris)pentafluorophenylcorrole (tpfc). An RNA transcription assay was used to examine the inhibitive properties of the corroles. Five transcription reactions were prepared: DNA treated with Actinomycin D, triptolide, Ga(tpfc), tpfc at a [complex]:[template DNA base] ratio of 0.01, respectively, and an untreated control.
The transcription reactions were analyzed after 4 hr using agarose gel electrophoresis and UV-Vis spectroscopy. There is clear inhibition by Ga(tpfc), Actinomycin D, and triptolide.
This RNA transcription assay can be modified to provide more mechanistic detail by varying the concentrations of the anticancer complex, DNA, or polymerase enzyme, or by incubating the DNA or polymerase with the complexes prior to RNA transcription; these modifications would differentiate between an inhibition mechanism involving the DNA or the enzyme. Adding the complex after RNA transcription can be used to test whether the complexes degrade or hydrolyze the RNA. This assay can also be used to study additional anticancer candidates.

An In Vitro Enzymatic Assay to Measure Transcription Inhibition by GalliumIII and H3 5,10,15-trispentafluorophenylcorroles

Gallium(III) 5,10,15-(tris)pentafluorophenylcorrole and its freebase analogue exhibit low micromolar cell cytotoxicity. This manuscript describes an RNA transcription reaction, imaging RNA with an ethidium bromide-stained gel, and quantifying RNA with UV-Vis spectroscopy, in order to assess transcription inhibition by corroles and demonstrates a straightforward method of evaluating anticancer candidate properties.

<em&gt; 체외</em&gt; 효소 분석은 갈륨 (III) 및 H에 의해 전사 억제를 측정하기 위해<sub&gt; 3</sub&gt; 5,10,15 트리스 (펜타 플루오로 페닐) corroles

Chemotherapy often involves broad-spectrum cytotoxic agents with many side effects and limited targeting. Corroles are a class of tetrapyrrolic ...

생체공학

Dose Uptake of Platinum- and Ruthenium-based Compound Exposure in Zebrafish by Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry with Broader Applications

Metals and metal-based compounds comprise multifarious pharmaco-active and toxicological xenobiotics. From heavy metal toxicity to chemotherapeutics, the toxicokinetics of these compounds have both historical and modern-day relevance. Zebrafish have become an attractive model organism in elucidating pharmaco- and toxicokinetics in environmental exposure and clinical translation studies. Although zebrafish studies have the benefit of being higher-throughput than rodent models, there are several significant constraints to the model.
One such limitation is inherent in the waterborne dosing regimen. Water concentrations from these studies cannot be extrapolated to provide reliable internal dosages. Direct measurements of the metal-based compounds allow for a better correlation with compound-related molecular and biological responses. To overcome this limitation for metals and metal-based compounds, a technique was developed to digest zebrafish larval tissue after exposure and quantify metal concentrations within tissue samples by inductively coupled plasma mass spectrometry (ICPMS).
ICPMS methods were used to determine the metal concentrations of platinum (Pt) from cisplatin and ruthenium (Ru) from several novel Ru-based chemotherapeutics in zebrafish tissue. Additionally, this protocol distinguished concentrations of Pt that were sequestered in the chorion of the larval compared with the zebrafish tissue. These results indicate that this method can be applied to quantitate the metal dose present in larval tissues. Further, this method may be adjusted to identify specific metals or metal-based compounds in a broad range of exposure and dosing studies.

The increased rate of pharmaco- and toxicokinetic analyses of metals and metal-based compounds in zebrafish can be advantageous for environmental and clinical translation studies. The limitation of unknown waterborne exposure uptake was overcome by conducting trace metal analysis on digested zebrafish tissue using inductively coupled plasma mass spectrometry.

제브라피쉬에서 백금 및 루테늄 기반 화합물 노출의 선량 흡수는 유도적으로 결합된 플라즈마 질량 분광법과 광범위한 응용 분야에 의한 것입니다.

Metals and metal-based compounds comprise multifarious pharmaco-active and toxicological xenobiotics. From heavy metal toxicity to chemotherapeutics, the ...

Monitoring Dynamic Changes In Mitochondrial Calcium Levels During Apoptosis Using A Genetically Encoded Calcium Sensor

Dynamic changes in intracellular calcium concentration in response to various stimuli regulates many cellular processes such as proliferation, differentiation, and apoptosis1. During apoptosis, calcium accumulation in mitochondria promotes the release of pro-apoptotic factors from the mitochondria into the cytosol2. It is therefore of interest to directly measure mitochondrial calcium in living cells in situ during apoptosis. High-resolution fluorescent imaging of cells loaded with dual-excitation ratiometric and non-ratiometric synthetic calcium indicator dyes has been proven to be a reliable and versatile tool to study various aspects of intracellular calcium signaling. Measuring cytosolic calcium fluxes using these techniques is relatively straightforward. However, measuring intramitochondrial calcium levels in intact cells using synthetic calcium indicators such as rhod-2 and rhod-FF is more challenging. Synthetic indicators targeted to mitochondria have blunted responses to repetitive increases in mitochondrial calcium, and disrupt mitochondrial morphology3. Additionally, synthetic indicators tend to leak out of mitochondria over several hours which makes them unsuitable for long-term experiments. Thus, genetically encoded calcium indicators based upon green fluorescent protein (GFP)4 or aequorin5 targeted to mitochondria have greatly facilitated measurement of mitochondrial calcium dynamics. Here, we describe a simple method for real-time measurement of mitochondrial calcium fluxes in response to different stimuli. The method is based on fluorescence microscopy of 'ratiometric-pericam' which is selectively targeted to mitochondria. Ratiometric pericam is a calcium indicator based on a fusion of circularly permuted yellow fluorescent protein and calmodulin4. Binding of calcium to ratiometric pericam causes a shift of its excitation peak from 415 nm to 494 nm, while the emission spectrum, which peaks around 515 nm, remains unchanged. Ratiometric pericam binds a single calcium ion with a dissociation constant in vitro of ~1.7 &mu;M4. These properties of ratiometric pericam allow the quantification of rapid and long-term changes in mitochondrial calcium concentration. Furthermore, we describe adaptation of this methodology to a standard wide-field calcium imaging microscope with commonly available filter sets. Using two distinct agonists, the purinergic agonist ATP and apoptosis-inducing drug staurosporine, we demonstrate that this method is appropriate for monitoring changes in mitochondrial calcium concentration with a temporal resolution of seconds to hours. Furthermore, we also demonstrate that ratiometric pericam is also useful for measuring mitochondrial fission/fragmentation during apoptosis. Thus, ratiometric pericam is particularly well suited for continuous long-term measurement of mitochondrial calcium dynamics during apoptosis.

This protocol describes a method for real-time measurement of mitochondrial calcium fluxes by fluorescent imaging. The method takes advantage of a circularly permutated YFP-based dual-excitation ratiometric calcium sensor (ratiometric pericam-mt) selectively expressed in mitochondria.

유전자 변형으로 인코딩된 칼슘 센서를 사용하여 Apoptosis 동안 Mitochondrial 칼슘 레벨에서 동적 변경 사항 모니터링

Dynamic changes in intracellular calcium concentration in response to various stimuli regulates many cellular processes such as proliferation, ...

생물학

<meta charset="utf8"></head><body>치료 및 생물 살충제 응용 분야를 위한 미토콘드리아 기능 변경

Unveiling Xenobiotic Transport and Effects in Isolated Mitochondria: Insights from Respirometric and Enzymatic Assays

Mitochondria are often referred to as the cell's powerhouse due to their crucial role in energy production through the electron transport chain (ETC). However, their significance extends far beyond energy production. Dysregulation of mitochondrial bioenergetics can trigger intracellular cascades that impact health and cellular function. Given their physiological importance, there is growing interest in exploring the pharmacological potential of mitochondrial function for developing new therapies and bioproducts. Modulating mitochondrial bioenergetics could provide innovative approaches to address challenges such as neurodegenerative disorders, metabolic diseases, and cancer, as well as to develop bioproducts for controlling pests and vector-borne diseases.
This work presents a method for assessing the effects of xenobiotics on the electron transport chain (ETC) using various substrates, including glutamate and NADH for complex I, succinate for complex II, and cytochrome c (both oxidized and reduced) for complexes III and IV. This methodology allows the activation or inhibition of electron transport through mitochondrial complexes to be evaluated using a respirometer and spectrophotometer. The mitochondria can be sourced from isolated mitochondria, fragmented cells, or homogenized tissue from various species.
In the laboratory, mitochondrial function has been analyzed in Aedes aegypti and Wistar rats, but this method is also applicable to other species, such as Rhipicephalus microplus and Rhodnius prolixus. This approach provides the basis for theorizing about the existence of uncoupler proteins and species-specific oxidizable substrate preferences influenced by their unique energetic demands. Recent findings offer valuable insights into innovative bioinsecticide design strategies that target mitochondrial function, holding significant potential for effectively controlling vector-borne diseases and pest infestations.

<meta charset="utf8"></head><body>고립된 미토콘드리아에서 이종생물 수송 및 효과 공개: 호흡량 측정 및 효소 분석의 통찰력

This study introduces a methodology for studying xenobiotic effects on mitochondrial function via respirometric and enzymatic assays. It examines electron transport chain modulation in various species, offering insights for targeted biopesticide development against insect vector-borne diseases.

고립된 미토콘드리아에서 이종생물 수송 및 효과 공개: 호흡량 측정 및 효소 분석의 통찰력

Mitochondria are often referred to as the cell's powerhouse due to their crucial role in energy production through the electron transport chain (ETC). ...

Mitochondrial Ca2+ Retention Capacity Assay and Ca2+-triggered Mitochondrial Swelling Assay

The production of ATP by oxidative phosphorylation is the primary function of mitochondria. Mitochondria in higher eukaryotes also participate in cytosolic Ca2+ buffering, and the ATP production in mitochondrial can be mediated by intramitochondrial free Ca2+ concentration. Ca2+ retention capacity can be regarded as the capability of mitochondria to retain calcium in the mitochondrial matrix. Accumulated intracellular Ca2+ leads to the permeability of the inner mitochondrial membrane, termed the opening of mitochondrial permeability transition pore (mPTP), which leads to the leakage of molecules with a molecular weight less than 1.5 kDa. Ca2+-triggered mitochondria swelling is used to indicate the mPTP opening. Here, we describe two assays to examine the Ca2+ retention capacity and Ca2+-triggered mitochondrial swelling in isolated mitochondria. After certain amounts of Ca2+ are added, all steps can be completed in one day and recorded by a microplate reader. Thus, these two simple and effective assays can be adopted to assess the Ca2+-related mitochondrial functions.

Mitochondrial Ca2+ Retention Capacity Assay and Ca2+-triggered Mitochondrial Swelling Assay

This protocol aims to describe a method to examine the Ca2+ retention capacity and Ca2+- triggered mitochondrial swelling of isolated mitochondria of SH-SY5Y cells step-by-step.

미토 콘 드 리아 캘리포니아2 + 보존 용량 분석 결과 및 캘리포니아2 +-미토 콘 드 리아 붓기 분석 결과 발생

The production of ATP by oxidative phosphorylation is the primary function of mitochondria. Mitochondria in higher eukaryotes also participate in ...

신경과학

Simultaneous Measurement of Mitochondrial Calcium and Mitochondrial Membrane Potential in Live Cells by Fluorescent Microscopy

Apart from their essential role in generating ATP, mitochondria also act as local calcium (Ca2+) buffers to tightly regulate intracellular Ca2+ concentration. To do this, mitochondria utilize the electrochemical potential across their inner membrane (&#916;&#936;m) to sequester Ca2+. The influx of Ca2+ into the mitochondria stimulates three rate-limiting dehydrogenases of the citric acid cycle, increasing electron transfer through the oxidative phosphorylation (OXPHOS) complexes. This stimulation maintains &#916;&#936;m, which is temporarily dissipated as the positive calcium ions cross the mitochondrial inner membrane into the mitochondrial matrix.
We describe here a method for simultaneously measuring mitochondria Ca2+ uptake and &#916;&#936;m in live cells using confocal microscopy. By permeabilizing the cells, mitochondrial Ca2+ can be measured using the fluorescent Ca2+ indicator Fluo-4, AM, with measurement of &#916;&#936;m using the fluorescent dye tetramethylrhodamine, methyl ester, perchlorate (TMRM). The benefit of this system is that there is very little spectral overlap between the fluorescent dyes, allowing accurate measurement of mitochondrial Ca2+ and &#916;&#936;m simultaneously. Using the sequential addition of Ca2+ aliquots, mitochondrial Ca2+ uptake can be monitored, and the concentration at which Ca2+ induces mitochondrial membrane permeability transition and the loss of &#916;&#936;m determined.

Mitochondria can utilize the electrochemical potential across their inner membrane (&#916;&#936;m) to sequester calcium (Ca2+), allowing them to shape cytosolic Ca2+ signaling within the cell. We describe a method for simultaneously measuring mitochondria Ca2+ uptake and &#916;&#936;m in live cells using fluorescent dyes and confocal microscopy.

합성 및 루 테 늄 기반 미토 콘 드리 아 칼슘 통풍 관 억제 물의 평가

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루테늄의 시리즈의 합성, 특성 및 반응성

고립 된 미토 콘 드리 아 및 경작된 한 세포에 있는 미토 콘 드 리아 칼슘 유입의 분석

제브라피쉬에서 백금 및 루테늄 기반 화합물 노출의 선량 흡수는 유도적으로 결합된 플라즈마 질량 분광법과 광범위한 응용 분야에 의한 것입니다.

유전자 변형으로 인코딩된 칼슘 센서를 사용하여 Apoptosis 동안 Mitochondrial 칼슘 레벨에서 동적 변경 사항 모니터링

고립된 미토콘드리아에서 이종생물 수송 및 효과 공개: 호흡량 측정 및 효소 분석의 통찰력

고립된 미토콘드리아에서 이종생물 수송 및 효과 공개: 호흡량 측정 및 효소 분석의 통찰력

고립된 미토콘드리아에서 이종생물 수송 및 효과 공개: 호흡량 측정 및 효소 분석의 통찰력

미토 콘 드 리아 캘리포니아^{2 +} 보존 용량 분석 결과 및 캘리포니아^{2 +}-미토 콘 드 리아 붓기 분석 결과 발생

형광 현미경으로 살아있는 세포의 잠재적 인 미토콘드리아의 칼슘과 미토콘드리아 막의 동시 측정