MAK 인정 건강의 국가 학회에서이 작품에 대 한 지원 / 국립 암 연구소 번호-1R15CA152985-01A1를 부여. 이 프로젝트는 또한 마이애미 대학 학부 연구 보너스 프로그램, 마이애미 대학 박사 학위-학부 기회 장학금 프로그램 및 마이애미 대학 여름 학자 프로그램에 의해 지원 되었습니다.

비디오에서 실행 하 고 아래에 설명 된 절차는 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 마이애미 대학에 의해 승인.
 1. 준비 및 자극 테스트 수술 절차, 수술 및 사후 작업 테이블에 대 한 <ol><li>구축 두 가지 영역. 모든 재료와 필요한 기구 두 영역을 무대.
	배기 후드 <ol><li>무대 운영 테이블. 절차의 지속적이 고 한 시 빨리 벗어나게 성능을 하는 방식으로 장비와 테이블 정렬.</li>
		<li>같은 방에 있는 작업의 주요 테이블 근처 수술 후 테이블을 설정합니다. 절차를 통해 메 마른 환경으로 두 테이블을 유지.</li>
	</ol></li> <li>장소 다음 운영 테이블에 공급: 한 유리 항아리 뚜껑, 한 15 mL 튜브, 수술가 위, 70% 에탄올, 두 거품 보드, 두 집게, 두 개의 1 mL 21 게이지 주사기, 두 50 mL 튜브, 1 개의 원심 분리기 튜브의 한 짜기 병의 한 쌍 하나의 극저온 유리병, 4 외과 패드, 10 핀, 살 균 물티슈, 디스펜서 및 sharps 컨테이너.</li>
	<li>후 작업 테이블에는 다음 공급 장소: 액체 질소, 얕은 넓은의 4 L dewar dewar, 부동 microtube 랙, 수술가 위 한 쌍, 두 집게, 4 극저온 튜브, 및의 디스펜서 입 하나 하나 분석 균형 살 균 물티슈.</li>
	<li>하나 50 mL 및 75% 볼륨 한 15 mL 튜브 포 르 말린에 채울.</li>
	<li>한 외과 패드 절 개 보드로 봉사 하는 대략 30 cm x 30 cm 폼 보드 부착 각 모서리에는 핀을 사용 하 여. 나머지 4 개의 핀을 사용 하 여 작업 하는 동안. 수술 패드 장기 수술 테이블에 전송 하는 작은 폼 보드 준비. 
	주의: Isoflurane (99.9%)는 독성 화학, 그리고 폐기물 마 취 가스 8의 청소에서 안전의 최대 수준을 보장 하기 위해 환기 후드에서 사용 해야 합니다. 테일러와 묵 8 기사에 연구자 isoflurane를 사용 하 여 오픈-드롭 방법의 사용과 관련 된 위험에 대 한 추가 정보를 찾을 수 있습니다.</li>
	<li>유리 항아리에 담가 isoflurane (99.9%)의 몇 방울과 한 외과 패드를 배치 하 고 마우스는 isoflurane와의 직접 접촉을 방지 하기 위해 정상 종이 타월 장소. 마찬가지로, 외과 패드를 사용 하 여 나머지 튜브 라인 및 isoflurane의 몇 방울으로 적시고 마우스와는 isoflurane 간의 직접 접촉을 방지 하기 위해 정상 추가 패드를 배치 하.</li>
	<li>Dewar 최대 입력 라인까지 도달 얕은 넓은 입으로 액체 질소를 부 어.</li>
	<li>장소 마 취로 해 부에 대 한 선택 마우스 챔버, 즉 몇 가지 젖은 패드와 유리 항아리 방울 isoflurane (99.9%) ~ 1 분에 대 한 뚜껑으로 덮여 
	참고:이 시간은 마우스 마우스에서 다릅니다. 일단 마우스를 의식이 없는 상공에서 제거 하 고 운영 위원회에 그것을 배치.</li>
	<li>고 과학자에서 지적 하는 그것의 머리와 복 부 측 거짓말 그것 있도록 마우스를 방향을 정합니다. 외과 패드 isoflurane (99.9%)의 몇 방울과 젖 줄지어 튜브 안에 머리 놓고 마우스 자극에 응답 하지 않는 되도록 발 핀치에 의해 자극 테스트를 수행 합니다.
	<ol><li>이 테스트가 실패 하는 경우 마우스 응답 발 핀치 테스트 하 반복 단계 1.8.</li>
	</ol></li></ol> 2. 초기 절 개, 심장 펑크, 및 안락사 <ol><li>외과 폼 보드를 마우스의 사지를 고정 하 고 젖은 70% 에탄올과 마우스의 복 부 측.</li>
	<li>집게와 요도 개통 근처 모피/피부를 꼬 집 고 약간 위쪽으로 당겨. 절 개 통해 복 부 구멍 요도 개방은 중간에서 시작 하 고 턱 끝 수술가 위 확인 합니다.
	<ol><li>초기 절 개의 시작 지점 근처는 집게와 모피/피부의 한쪽을 잡아 하 고 만들고 다른 절 개는가 위 아래로 대각선 쪽으로 다시 발.</li>
		<li>반대편에 같은 방식으로이 반복. 
		참고: 모피/피부 만들 넓은 개방을 고정 수 있습니다 하지만 필요 하지 않습니다.</li>
	</ol></li> <li>마음 찾아서 주사기 바늘의 막힘을 방지 하기 위해 심장 주위 sac는 심 낭을 제거.
	<li><ol>는 집게와 심 낭을 파악 하 고는 위로 잘라. 신중 하 게 뛰는 심장에 주사기 바늘을 삽입 하 여 심장 펑크를 수행 하 고 철회 플런저를 천천히 시작.</li>
		<li>최적의 혈액 컬렉션 사용 하 여 바늘의 플런저 심장의 펌핑 작업을 모방 하 고 너무 빨리 그리기 방지. 
		참고: 일반적으로 약 1 mL의 혈액 수집 될 수 있습니다.</li>
		<li>원심 분리기 튜브 및 sharps 용기에 주사기의 dispose에 혈액 혈액 컬렉션을 마친 후 불식.</li>
		<li>심장 찔린 수행 된 후 마음을 연결 하는 첨부 파일을 제거 하 여 안락사를 실시. 
		참고: 헤 파 린, 항 응고 제는 혈 청이 특정 연구에 컬렉션에 대 한 응고 혈액을 있도록 심장 찔린 전에이 절차에서 주사기에 추가 되지 않았습니다. 그러나, 경우 연구원 플라즈마를 수집 혈액 응고를 방지 하 고 싶 었, 헤 파 린에 추가할 수 있는 심장 찔린 이전 주사기.</li>
	</ol></li> <li>연구는 마우스의 유전형을 포함 하는 경우는 위는 귀 부분을 싹 둑 하 고 유전자 확인에 대 한 원심 분리기 튜브.</li></ol>
 3. 췌 장 추출 <ol><li>찾기 마우스의 왼쪽에 위. 시작은 부드럽게 (피하기 찢 어) 두 개의 집게를 사용 하 여 위장 및 십이지 장 췌 분리. 
	참고: 위 및 내장에서 췌를 분리 하는 경우 매우 중요 하다는 집게 장기에서 췌 장 조직 안내 하 고 하지 분쇄는 집게와 췌 눈물 부드럽게 사용 됩니다.
	<ol><li>소장 공장 및 회장 섹션에서 췌 구분 하 고 마지막으로 장 caecum에서.</li>
	</ol></li> <li>Caecum에 집게를 재배치 하 고 계속 항문 쪽으로 나머지 결 따라 췌의 분리. 
	참고:이 시점에서 그것은 편리 잘라내어 콜론 항문 바로 앞의 지역에서 위 부분을 제거.</li>
	<li>췌 찾아서 비장을 첨부 합니다. 마우스의 오른쪽을 향해 췌를 밉니다. 췌 장 및 인접된 비장 완전히 분리 집게 췌와 흉 강 사이 나머지 연결 구분.</li>
	<li>췌를 제거 하 고 시험을 위해 그것을 밖으로 확산. 식별 용 췌에 연결 된 비장을 둡니다.
	<ol><li>제거 모든 결합 조직, 지방과 mesenteric 조직에서 췌 장. 
		참고:이 조직의 색깔에 하얀 이며 따라서 컬러로 pinker는 췌 장 조직에서 쉽게 구분할 수 있습니다. 이것은 췌 장 전체를 제거 해야 하는 경우에 특히 중요 하다입니다. 예를 들어, 췌 장의 무게와 몸 무게에 또는 동물의 그룹 사이 비교 하는 경우. Ptf1a에서 cre / +; LSL Kra G12D / + 마우스 모델 이전 달에서 특히 하드 섬유 췌 장 조직 있을 수 있습니다. 이 경우에, 장내 종양 조직에 인터레이스 수로 췌의 주의 제거를 실시 해야 합니다. 고급의 경우에서 비정상적인 비장 및 간 조직 또한 존재할 수 있습니다.</li>
	</ol></li> <li>원하는 경우이 시점에서 다른 장기를 제거.</li></ol>
 4. 데이터 수집 및 저장 <ol><li>장기의 적 출, 후 보존을 위한 수술 후 영역에 샘플 이동.</li>
	<li>각 장기의 무게 및 그들의 각각 극저온 유리병에 넣어. 
	참고: 따라 위트h 질량 각 샘플의 부정은 나중에 참조할에 기록 되어야 합니다.</li>
	<li>장기 무게는 일단 스냅 동결에 액체 질소에 그들을 배치.</li>
	<li>스냅 동결 후 장기 저장을 위한-80 ° C에서 장기 저장.</li>
	<li>벤치 위에 하룻밤 말린 저장 샘플을 배치 하 고 다음날 아침 그들의 솔루션 포 르 말린에서 70% 에탄올으로 변경. 
	참고: 이러한 샘플은 장기 저장을 위한 4 ° C에 저장 되어야 합니다.</li>
	<li>장기 저장용 고정-80 ° c.에 혈액과 귀 펀치. 혈액에서 혈 청 수집, 30 분 동안 응고 후 그것을 원심 혈액을 수 있습니다. 피 펫을 사용 하 여 혈 청 부분을 제거 하 고 다음-80에 저장 ° c.</li>
</ol> 5. Clean Up <ol><li>Sanitize 모든 해 부 도구 살 균 물티슈. 모자는 isoflurane 늘어서 튜브 수술 패드를 젖 었. 신선한 외과 패드에 폼 보드에 외과 패드를 바꿉니다. 처분 시설 당 하지 수집 된 마우스의 부분 &#39; s 동물 처리 정책.</li>
</ol>

<ol>
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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbic+System+Participates+in+Mediating+the+Effects+of+General+Anesthetics.">Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics.</a> Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).</li><li>Ijichi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggressive+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice+caused+by+pancreas-specific+blockade+of+transforming+growth+factor-&#946;+signaling+in+cooperation+with+active+Kras+expression.">Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-&#946; signaling in cooperation with active Kras expression.</a> Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).</li><li>Abiatari, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moesin-dependent+cytoskeleton+remodelling+is+associated+with+an+anaplastic+phenotype+of+pancreatic+cancer.">Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer.</a> J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).</li><li>Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+Statistical+significance+analysis+of+nuclear+magnetic+resonance-based+metabonomics+data.">a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data.</a> Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).</li><li>Yadav, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Idiopathic+Tumefactive+Chronic+Pancreatitis:+Clinical+Profile,+Histology,+and+Natural+History+After+Resection.">Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).</li></ol>

저자는 공개 없다.

기존의 방법에 관하여 의미 마우스 해의 다른 비공식적인 동영상 존재 하는 동안이 비디오 문서에서는 첫 번째 전문 품질, 피어 검토, 자세한 단계를 추출에 필요한 해10 부에 의해 마우스 췌의 수확의 모든 시각적 데모 . 신진 대사 활동 및 인슐린에 대 한 주요 기관 되 고 췌와 생산, 해 부와 췌의 수확 생리 특성11의 보존에 대 한 수 있습니다. 췌,...

마우스는 인간 췌장암1,2의 중요 한 동물 모델로 떠오르고 있다. Ptf1a에서cre / +; LSL KraG12D / + 마우스 모델, 쥐 육 (K-Ras) oncogene은 췌 장, 췌 장, 췌 장 intraepithelial 형성 (PanINs), 그 진행으로 알려져 있는 전 암 병 변의 결과에서 독점적으로 활성화 하는 순 영 췌 장 ductal adenocarcinomas로 일반적으로 불린다 PDACs3. 이 마우스 모델 시스템은 인간의 췌장암4,5는 PanINs 삶과 자주 내 PDAC 진행의 첫 5 개월 이내 등장 추가 이용에 대 한 최상의 사용 가능한 동물 모델 중 하나는 반면 췌장암 가장 자주 발생 인 간에 있는 나이의 60-70 년 년4,5, 단일.
Ptf1a에서 해 부에 의해 췌 장의 추출cre / +; LSL KraG12D / + , 췌 장의 암 개발의 자세한 경도 조직학 시험에 대 한 다양 한 연령대에서 쥐 수 까지의 초기 PanIN 단계에서 진행 PDAC3,4 , 5. 15 개월에 5에서 배열 하는 나가에 수확 하는 췌도 사용할 수 있습니다 준비 조직 질병 조직 건강 한에서 전환 하는 동안 발생 하는 췌 장4 물질 대사에 글로벌 변화 특징을 추출 하 6,7.
이 문서는 마우스 췌 장 추출 하는 데 필요한 단계의 완전 한 시각적 가이드를 제공 하 고 추가 분석을 위해 췌의 저장에 대 한 지침을 제공 합니다. 이 가이드는 개인 연구를 포함 한 다른 췌 장 질환에 유형 I 당뇨병, 그리고 학생과 새로운 사용 하 여 마우스 췌의 수확과 관련 된 연구 조사에 특히 유용 해야 한다 동등 하 게 가치가 있을 것입니다. 신진 대사 프로 파일링 또는 조직학 분석에 대 한 해 부입니다.

<table><tbody><tr><td>Glass Jar&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>3140-150</td><td>The glass jar used in the video has been discontinued.&amp;nbsp; This is its replacement.</td></tr><tr><td>Lid of Glass Jar</td><td>Corning</td><td>9985-150</td><td>The glass jar lid used in the video has been discontinued.&amp;nbsp; This is its replacement.</td></tr><tr><td>15 mL Falcon Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>339650</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Scissors</td><td>Fisher Scientific</td><td>9201</td><td></td></tr><tr><td>Squeeze bottle&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-409-10DD</td><td></td></tr><tr><td>100% Ethanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-032-103</td><td></td></tr><tr><td>Formalin</td><td>Fisher Scientific</td><td>245-684</td><td></td></tr><tr><td>Foam Boards</td><td>Therapak</td><td>562908</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>Fisher Scientific</td><td>200205SHN</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 21G Syringes</td><td>BD Biosciences</td><td>309624</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Falcon Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>2.0 mL Microcentrifuge Tubes&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-681-258</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Pads</td><td>Fisher Scientific</td><td>S67011</td><td></td></tr><tr><td>T-Pins Length:&amp;nbsp; 2&quot;&amp;nbsp;</td><td>Advance Store Products</td><td>X32T-05</td><td></td></tr><tr><td>Sterilizing Wipes</td><td>Professional Disposables International Inc.</td><td>Q85084</td><td></td></tr><tr><td>Sharps Container</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-827-122</td><td></td></tr><tr><td>Analytical Balance</td><td>Marshall Scientific</td><td>ME-AE200</td><td></td></tr><tr><td>4L Dewar</td><td>Taylor-Wharton</td><td>4LD</td><td></td></tr><tr><td>Shallow Wide Mouth Dewar</td><td>Fisher Scientific</td><td>F3087-V</td><td></td></tr><tr><td>Floating Microtube Rack</td><td>VWR</td><td>60986-100</td><td></td></tr><tr><td>Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-500-25</td><td></td></tr><tr><td>Isothesia (Isoflurane)&amp;nbsp;</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>050033</td><td></td></tr><tr><td>Liquid Nitrogen</td><td>Wright Brothers</td><td>NIT-60-XX</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Kras Strain</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>OO8179</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Cre Strain</td><td>MMRRC</td><td>OOO435-UNC</td><td></td></tr></tbody></table>

dissection of the mouse pancreas for histological analysis and metabolic profiling

우리는 조사 하 고 췌 특정 전사 인자, 1a cre-recombinase; lox 그만 lox-순 영 쥐 육, aspartic 산 12 codon에 글리신 (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) 인간 췌장암의 모델로 스트레인 마우스. 우리의 현재 연구의 목표는 췌장암 진행의 소설 대사 생체 식별 하입니다. 우리는 소변, 대변, 혈액, 그리고 췌 장 조직 추출, 뿐만 아니라 암 진행을 췌 장의 조직학 분석의 대사 프로 파일링을 수행 했습니다. 마우스 췌 하지 인간, 같은 잘 정의 된 고체 기관 이지만 오히려 마우스 내부 해부학에 익숙하지 않은 개인 또는 개인 거의 또는 전혀 경험 수행에 의해 쉽게 식별 되지 않으면 만들어진다 분산된 부드러운 조직 마우스 장기 해입니다. 이 문서의 목적은 현명한 상세한 제공 하는 시각적 데모 해 부에 의해 마우스 췌 장의 제거에 초보자 가이드. 이 문서는 특히 학생과 새로운 조사 대사 프로 파일링 또는 조직학 분석에 대 한 해 부에 의해 마우스 췌의 수확 필요로 하는 연구에 귀중 한 해야 합니다.

그림 2 는 게시물 작업 영역 및 그림 1 운영 환경 영역에 대 한 개요를 보여준다. 이 설정은 최소한의 장비를 제공 하는 동안 준비, 개인에 가장 개인적인 필요에 맞게이 변경 하도록 선택할 수 있습니다. 프로토콜은 실험의 특정 요구에 따라 최적화 되어야 합니다. 이 절차는 필요 적절 한 euthanization9, 마우스의 ...

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Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

이 비디오 문서는 조직학 분석 및 대사 프로 파일링에 대 한 해 부는 마우스에서 췌를 성공적으로 제거 하는 데 필요한 절차의 상세한 데모를 제공 합니다.

조직학 분석 및 대사 프로 파일링에 대 한 마우스 췌의 해 부

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

dissection-mouse-pancreas-for-histological-analysis-metabolic

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

36.3K 조회수.  Miami University. 이 비디오 문서는 조직학 분석 및 대사 프로 파일링에 대 한 해 부는 마우스에서 췌를 성공적으로 제거 하는 데 필요한 절차의 상세한 데모를 제공 합니다.

비디오: Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Mimicking and Manipulating Pancreatic Acinar-to-Ductal Metaplasia in 3-dimensional Cell Culture

The differentiation of acinar cells to ductal cells during pancreatitis and in the early development of pancreatic cancer is a key process that requires further study. To understand the mechanisms regulating acinar-to-ductal metaplasia (ADM), ex vivo 3D culture and differentiation of primary acinar cells to ductal cells offers many advantages over other systems. With the technique herein, modulation of protein expression is simple and quick, requiring only one day to isolate, stimulate or virally infect, and begin culturing primary acinar cells to investigate the ADM process. In contrast to using basement membrane matrix, the seeding of acinar cell clusters in collagen I extracellular matrix, allows acinar cells to retain their acinar identity before manipulation. This is vital when testing the contribution of various components to the induction of ADM. Not only are the effects of cytokines or other ectopically administered factors testable through this technique, but the contribution of common mutations, increased protein expression, or knockdown of protein expression is testable via viral infection of primary acinar cells, using adenoviral or lentiviral vectors. Moreover, cells can be re-isolated from collagen or basement membrane matrix at the endpoint and analyzed for protein expression.

Primary acinar cell isolation, protein expression or activity modulation, culture, and down-stream applications are abundantly useful in the ex vivo study of acinar-to-ductal metaplasia (ADM), an early event in the development of pancreatic cancer.

흉내 낸 고 3 차원 세포 배양에서 췌 장 Acinar-Ductal Metaplasia 조작

The differentiation of acinar cells to ductal cells during pancreatitis and in the early development of pancreatic cancer is a key process that requires ...

연구

암 연구학

Isolating and Analyzing Cells of the Pancreas Mesenchyme by Flow Cytometry

The pancreas is comprised of epithelial cells that are required for food digestion and blood glucose regulation. Cells of the pancreas microenvironment, including endothelial, neuronal, and mesenchymal cells were shown to regulate cell differentiation and proliferation in the embryonic pancreas. In the adult, the function and mass of insulin-producing cells were shown to depend on cells in their microenvironment, including pericyte, immune, endothelial, and neuronal cells. Lastly, changes in the pancreas microenvironment were shown to regulate pancreas tumorigenesis. However, the cues underlying these processes are not fully defined. Therefore, characterizing the different cell types that comprise the pancreas microenvironment and profiling their gene expression are crucial to delineate the tissue development and function under normal and diseased states. Here, we describe a method that allows for the isolation of mesenchymal cells from the pancreas of embryonic, neonatal, and adult mice. This method utilizes the enzymatic digestion of mouse pancreatic tissue and the subsequent fluorescence-activated cell sorting (FACS) or flow-cytometric analysis of labeled cells. Cells can be labeled by either immunostaining for surface markers or by the expression of fluorescent proteins. Cell isolation can facilitate the characterization of genes and proteins expressed in cells of the pancreas mesenchyme. This protocol was successful in isolating and culturing highly enriched mesenchymal cell populations from the embryonic, neonatal, and adult mouse pancreas.

Here, we describe a method for the isolation of cells in the pancreas microenvironment from embryonic, neonatal and adult mouse tissue, focusing on the isolation of mesenchymal cells. This method allows profiling of cell gene expression and protein secretion in order to elucidate the extrinsic signals that regulate pancreas development, function, and tumorigenesis.

분리 및 유동 세포 계측법에 의해 췌장 중간 엽 세포 분석

The pancreas is comprised of epithelial cells that are required for food digestion and blood glucose regulation. Cells of the pancreas microenvironment, ...

발생학

Single-cell Transcriptomic Analyses of Mouse Pancreatic Endocrine Cells

Pancreatic endocrine cells, which are clustered in islets, regulate blood glucose stability and energy metabolism. The distinct cell types in islets, including insulin-secreting &#946; cells, are differentiated from common endocrine progenitors during the embryonic stage. Immature endocrine cells expand via cell proliferation and mature during a long postnatal developmental period. However, the mechanisms underlying these processes are not clearly defined. Single-cell RNA-sequencing is a promising approach for the characterization of distinct cell populations and tracing cell lineage differentiation pathways. Here, we describe a method for the single-cell RNA-sequencing of isolated pancreatic &#946; cells from embryonic, neonatal and postnatal pancreases.

We describe a method for the isolation of endocrine cells from embryonic, neonatal and postnatal pancreases followed by single-cell RNA sequencing. This method allows analyses of pancreatic endocrine lineage development, cell heterogeneity and transcriptomic dynamics.

마우스 췌 장 내 분 비 세포의 단일 셀 Transcriptomic 분석

Pancreatic endocrine cells, which are clustered in islets, regulate blood glucose stability and energy metabolism. The distinct cell types in islets, ...

Pancreatic Tissue Dissection to Isolate Viable Single Cells

The pancreas includes two major systems: the endocrine system, which produces and secretes hormones, and the exocrine system, which accounts for approximately 90% of the pancreas and includes cells that produce and secrete digestive enzymes. The digestive enzymes are produced in the pancreatic acinar cells, stored in vesicles called zymogens, and are then released into the duodenum via the pancreatic duct to initiate metabolic processes. The enzymes produced by the acinar cells can kill cells or degrade cell-free RNA. In addition, acinar cells are fragile, and common dissociation protocols result in a large number of dead cells and cell-free proteases and RNases. Therefore, one of the biggest challenges in pancreatic tissue digestion is recovering intact and viable cells, especially acinar cells. The protocol presented in this article shows a two-step method that we developed to meet this need. The protocol can be used to digest normal pancreata, pancreata that include pre-malignant lesions, or pancreatic tumors that include a large number of stromal and immune cells.

Pancreatic metaplastic cells are precursors of malignant cells that give rise to pancreatic tumors. However, isolating intact viable pancreatic cells is challenging. Here, we present an efficient method for pancreatic tissue dissociation. The cells can then be used for single-cell RNA sequencing (scRNA-seq) or for two- or three-dimensional co-culturing.

생존 가능한 단일 세포를 분리하기 위한 췌장 조직 해부

The pancreas includes two major systems: the endocrine system, which produces and secretes hormones, and the exocrine system, which accounts for ...

In situ Quantification of Pancreatic Beta-cell Mass in Mice

Tracing changes of specific cell populations in health and disease is an important goal of biomedical research. The process of monitoring pancreatic beta-cell proliferation and islet growth is particularly challenging. We have developed a method to capture the distribution of beta-cells in the intact pancreas of transgenic mice with fluorescence-tagged beta-cells with a macro written for ImageJ (rsb.info.nih.gov/ij/). Following pancreatic dissection and tissue clearing, the entire pancreas is captured as a virtual slice, after which the GFP-tagged beta-cells are examined. The analysis includes the quantification of total beta-cell area, islet number and size distribution with reference to specific parameters and locations for each islet and for small clusters of beta-cells. The entire distribution of islets can be plotted in three dimensions, and the information from the distribution on the size and shape of each islet allows a quantitative and qualitative comparison of changes in overall beta-cell area at a glance.

In situ Quantification of Pancreatic Beta-cell Mass in Mice

The following protocol outlines the process of pancreatic dissection for virtual slice imaging, and the subsequent quantification of all GFP-tagged beta-cells in the entire pancreas.

마우스의 췌장 베타 세포 질량의 원위치 부량에서

Tracing changes of specific cell populations in health and disease is an important goal of biomedical research. The process of monitoring pancreatic ...

생물학

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, the role of beta-cell dysfunction in type 2 diabetes has been clearly established 2. Research progress has required methods for the isolation of pancreatic islets. The protocol of the islet isolation presented here shares many common steps with protocols from other groups, with some modifications to improve the yield and quality of isolated islets from both the wild type and diabetic Leprdb (db/db) mice. A live-cell 2-photon imaging method is then presented that can be used to investigate the control of insulin secretion within islets.

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

We present here a protocol for the isolation of islets from the mouse model of type 2 diabetes, Leprdb and details of a live-cell assay for measurement of insulin secretion from intact islets that utilizes 2 photon microscopy.

Lepr<sup&gt; DB</sup&gt; 2 형 당뇨병의 마우스 모델 : 본래 독도 췌장 섬 세포의 분리 및 라이브 셀 2 광자 이미징

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, ...

의학

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one week. More than 20 x 106 acinar cells can be obtained from a single murine pancreas. This protocol offers the possibility to independently process as many as 10 pancreases in parallel. Because it preserves acinar architecture, this model is well suited for studying the physiology of the exocrine pancreas in vitro in contrast to cell lines established from pancreatic tumors, which display many genetic alterations resulting in partial or total loss of their acinar differentiation.

In this publication, we describe a rapid and convenient procedure for isolating and culturing primary pancreatic acinar cells from the murine pancreas. This method constitutes a valuable approach to study the physiology of fresh primary normal/untransformed exocrine pancreatic cells.

마우스 기본 췌장 포상 세포의 분리 및 문화

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Observing Islet Function and Islet-Immune Cell Interactions in Live Pancreatic Tissue Slices

Live pancreatic tissue slices allow for the study of islet physiology and function in the context of an intact islet microenvironment. Slices are prepared from live human and mouse pancreatic tissue embedded in agarose and cut using a vibratome. This method allows for the tissue to maintain viability and function in addition to preserving underlying pathologies such as type 1 (T1D) and type 2 diabetes (T2D). The slice method enables new directions in the study of the pancreas through the maintenance of the complex structures and various intercellular interactions that comprise the endocrine and exocrine tissues of the pancreas. This protocol demonstrates how to perform staining and time-lapse microscopy of live endogenous immune cells within pancreatic slices along with assessments of islet physiology. Further, this approach can be refined to discern immune cell populations specific for islet cell antigens using major histocompatibility complex-multimer reagents.

This study presents the application of live pancreatic tissue slices to the study of islet physiology and islet-immune cell interactions.

살아있는 췌장 조직 조각에서 아일렛 기능 및 아슬레 면역 세포 상호 작용을 관찰

Live pancreatic tissue slices allow for the study of islet physiology and function in the context of an intact islet microenvironment. Slices are prepared ...

면역학 및 감염병학

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. Several rodent models have been developed to study CP, of which the bile duct 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) infusion model replicates the features of neuropathic pain seen in CP. However, bile duct drug infusion in mice is technically challenging. This protocol demonstrates the procedure of bile duct TNBS infusion for generation of a CP mouse model. TNBS was infused into the pancreas through the ampulla of Vater in the duodenum. This protocol optimized drug volume, surgical techniques, and drug handling during the procedure. TNBS-treated mice showed features of CP as reflected by bodyweight and pancreas weight reductions, changes in pain-associated behaviors, and abnormal pancreatic morphology. With these improvements, mortality associated with TNBS injection was minimal. This procedure is not only critical in generating pancreatic disease models but is also useful in local pancreatic drug delivery.

Chronic pancreatitis (CP) is a disease characterized by inflammation and fibrosis of the pancreas, often associated with intractable abdominal pain. This article focuses on refining the technique to generate a mouse model of CP via bile duct infusion with 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS).

담즙 덕트 TNBS 주입을 통한 만성 췌장염을 위한 마우스 모델

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

Acinar-to-Ductal Metaplasia Induction: A Method to Study Acinar Cell to Ductal Cell Differentiation in 3D Ex Vivo Culture

Source: Fleming Martinez, A. K. et. al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/59096/" target="_blank">Mimicking and Manipulating Pancreatic Acinar-to-Ductal Metaplasia in 3-dimensional Cell Culture</a>. J. Vis. Exp. (2019).
This video describes the technique of differentiating pancreatic acinar cells to ductal cells in ex vivo 3D culture. This helps to understand the mechanisms regulating the acinar-to-ductal metaplasia (ADM), a key process in the early development of pancreatic cancer.

Acinar-to-ductal metaplasia induction: 3D ex vivo 배양에서 acinar cell to ductal cell differentiation을 연구하는 방법

Source: Fleming Martinez, A. K. et. al. Mimicking and Manipulating Pancreatic Acinar-to-Ductal Metaplasia in 3-dimensional Cell Culture. J. Vis. Exp. ...