MAK は、国立衛生研究所からこの作品のサポートを認めている/国立がん研究所許可番号 - 1R15CA152985 01A1。このプロジェクトは、マイアミ大学学部研究賞プログラム、奨学金プログラムとマイアミ大学夏学者プログラムにマイアミ大学博士課程工学部機会によってサポートされています。

ビデオで実施および下記の手順は、機関動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) マイアミ大学によって承認されている。
 1。 準備と刺激テスト 手術、手術台、事後操作テーブルの <ol><li>確立する 2 つの明瞭な区域。すべての材料と必要な道具と両方のエリアをステージします。
	出されたボンネットの下 <ol><li>ステージ オペレーティング テーブル。プロシージャの継続的かつスムーズなパフォーマンスを可能にする方法で装備テーブルを配置します</li>。
		<li>は、同じ部屋および操作のメイン テーブルの近くで術後テーブルを確立します。プロシージャ全体で生殖不能の環境として、両方のテーブルを保持します</li>。
	</ol></li> <li>次の場所は、オペレーティング テーブルの上供給: 蓋、1 つ 15 mL チューブ、手術用はさみ、70% エタノール、2 つの発泡ボード、2 つの鉗子、シリンジ 1 mL 21 ゲージ、2 つの 50 mL チューブ、1 つ遠心分離機管の 1 つのスクイズ ボトルの 1 つのペアを 1 つのガラスの瓶、1 つのセラム、4 外科パッド、10 ピン、殺菌ワイプのディスペンサー、シャープス コンテナーします。</li>
	<li>は、後の操作テーブルの上次の消耗品を配置: 1 つ分析的なバランス、液体窒素、浅いワイド 4 L デュワー口デュワー、フローティング チューブ ラック、外科はさみのペアを 1 つ、2 つの鉗子、4 つのセラム チューブのディスペンサー 1滅菌ワイプします</li>。
	<li>ホルマリンで 1 つ 50 mL と 75% のボリュームに 1 つの 15 mL チューブを入力します</li>。
	<li>郭清ボードとしておおよそ 30 cm × 30 cm 発泡ボードに 1 つの外科パッドを貼る各コーナーで pin を使用します。操作中に残りの 4 つのピンを使用します。臓器を手術後テーブルに転送する外科パッドで小さい発泡ボードを準備します 。
	注意: イソフルラン (99.9%) は、有毒化学物質、排出される麻酔ガス 8 の清掃から安全性の最大レベルを確保するため口のフードで使用する必要があります。イソフルランを使用してオープン アンド ドロップ メソッドを使用してに関連付けられている研究者へのリスクに関する追加情報がテイラーとムック 8 記事</li>。
	<li>はガラスの瓶にイソフルラン (99.9%) を数滴に浸す外科パッドを配置し、マウス、イソフルランとの直接接触を防ぐために、上にペーパー タオルを配置します。同様に、残りの管ライン、イソフルランを数滴で吸収し、マウスと、イソフルランとの直接接触を防ぐために上に追加のパッドを配置する外科パッドを使用します</li>。
	<li>注ぐ液体窒素デュワー最大行を埋めるまでに達する浅い広口にします</li>。
	<li>マウスの麻酔に郭清のために選択の場所の部屋の すなわち 〜 1 分のふたで覆われてイソフルラン (99.9%) のいくつかを浸したパッド付きのガラス瓶が値下がりしました 
	注: 今回は、マウスから異なります。マウスが意識、商工会議所から削除し、操作盤の上に配置します</li>。
	<li>は、科学者から離れて指摘した頭と、腹側が横たわっているようにマウスを合わせます。イソフルラン (99.9%) の数滴を浸した外科パッドとライニング管の頭を置き、マウスの刺激に対して反応されるように足ピンチして刺激テストを実行します。
	<ol><li>場合は、このテストは失敗し、足ピンチ テストに対するマウスの応答、手順 1.8</li>。
	</ol></li></ol> 2。初期の切開、心臓穿刺、安楽死 <ol><li>手術の発泡ボードにマウスの四肢をピンし、70% のエタノールでマウスの腹側をウェットします</li>。
	<li>は、ピンセットで尿道口近くの毛皮をピンチし、若干上向きに引き出します。腹腔正中線を尿道口から始まって、あごで終了を手術用はさみで切開を行います。
	<ol><li>鉗子で毛皮の皮の 1 つの側面をつかむ最初の切開部の開始の点の近く、別の切開はさみで下方と斜めに背中足に向かってします</li>。
		<li>は、反対側に同じ方法でこれを繰り返します 。
		注: 毛皮の皮より広い開口部を作成する可能性がありますにピンを必要はありません</li>。
	</ol></li> <li>心を確認し、注射針の目詰まりを避けるために、心臓の周りの膜である心膜を取り外します。
	<ol><li>は、鉗子で心膜をつかんで、はさみでカットします。慎重に鼓動する心臓に注射針を挿入して心臓穿刺を行い、ゆっくりとピストンを撤回する開始します</li>。
		<li>最適な採血、心臓のポンプ作用を模倣し、あまりにもすばやく描画を避けるために針のプランジャーを使用します 。
		注: 通常約 1 mL の血液を収集することができます</li>。
		<li>血のコレクションを完了すると、遠心管とシャープス コンテナーにシリンジの処分に血を払拭します</li>。
		中心部を接続する添付ファイルを削除することによって安楽死実施 <li>心臓穿刺の実行後です 。
		注: ヘパリン、抗凝固剤は、この特定における血清コレクションの凝固する血を許可する心臓穿刺する前にこの手順で注射器に追加されませんでした。しかし、研究者は、プラズマを収集するために血液凝固を防ぐために場合は、ヘパリンに追加でした心臓穿刺前にシリンジします</li>。
	</ol></li> <li>研究には、マウスの遺伝子型が含まれている場合耳の部分をハサミでチョキンし、遺伝子型検証用遠心管に配置します</li></ol>。
 3. 膵臓領域抽出 <ol><li>マウスの左側にある胃を検索します。優しく (避けるために引き裂く) 開始 2 つの鉗子を使用して胃と十二指腸と膵臓を切り離すします 。
	注: 胃や腸から膵臓をデタッチする際、非常に重要な臓器から膵臓組織をガイドしていない粉砕したり、鉗子で膵臓を引き裂く優しく鉗子を使用は。
	<ol><li>小腸の空腸および回腸のセクションから膵臓を分離し続けると最後に大腸の盲腸から</li>。
	</ol></li> <li>、盲腸で鉗子を再配置および直腸に向けて残りコロンに沿って膵の分離を続行します 。
	注: この時点ではカットし、胃から結腸、直腸の直前の領域部分を削除すると便利です</li>。
	<li>膵臓と脾臓を添付します。マウスの右側に向かって膵臓をスライドさせます。隣接脾臓と膵臓を完全にデタッチする鉗子で膵臓と胸腔内の残りの関係を区切ります</li>。
	<li>は、膵臓を外し、検査のためにそれを広げ。識別目的のため膵臓に接続されている脾臓を残します。
	<ol><li>削除すべて結合組織、膵臓からの脂肪および腸間膜の組織 。
		メモ: この組織は色白く、こうして色でピンカーは、膵臓の組織から簡単に区別することができます。これは、膵臓を全削除する必要がある場合に特に重要です。たとえば、膵臓が圧迫され、体重と動物のグループ間比較する必要があります。Ptf1a cre/+;LSL Kras G12D/+ マウス モデル古いヶ月で特に硬線維性膵組織が存在する可能性があります。この場合、腫瘍組織で腸がインター レースにすると膵臓を慎重に除去を実施する必要があります。高度な場合は、異常な脾臓と肝臓組織もあるかもしれない</li>。
	</ol></li> <li>必要に応じて、この時点で他の臓器を削除します</li></ol>。
 4 データの収集とストレージ <ol><li>臓器の抽出後、サンプルを保全のため術後のエリアに移動します。</li>。
	<li>各器官の重量を量るし、彼らのそれぞれのセラムにそれらを配置します 。
	注: ウィットに沿ってh 質量今後の参考のため、各サンプルの任意の不正を記録すべきです</li>。
	<li>器官の重量を量ったが、一度スナップ凍結用液体窒素にそれらを配置します</li>。
	<li>凍結、スナップ後長期保存用-80 ° C で臓器を格納します</li>。
	<li>は一晩、ベンチ上ホルマリン保存サンプルを配置し、次の朝は 70% エタノールにホルマリンからのソリューションを変更します 。
	注意: これらのサンプルは、長期保存のための 4 ° C で保存する必要があります</li>。
	<li>長期保存、凍結-80 ° C で血と耳パンチ。血液から血清コレクション、30 分の凝固し、それを遠心血液を許可します。ピペットを使用して血清部分を削除し、-80 で格納 ° C</li>
</ol> 5。クリーンアップ 殺菌ワイプ <ol><li>サニタイズすべての解剖ツール。キャップ、イソフルランの管は手術パッドを浸した。新鮮な外科パッドと発泡ボードの外科パッドを交換してください。処分施設ごと採取されなかったマウスの部分 &#39; s 動物処分ポリシー</li>。
</ol>

<ol>
	<li>Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. 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著者が明らかに何もありません。

既存のメソッドの意義 マウス解剖の他の非公式の動画が存在している間このビデオ説明が最初のプロの品質、査読、郭清10 でマウスの膵臓の収穫抽出に必要な詳細な手順のすべての視覚的なデモ.代謝とインスリンの主な器官をされている膵臓に生産、郭清と膵の収穫を生理的特性11の保存のためことができます。膵臓を分離することによっ?...

マウスはヒト膵癌1,2の重要な動物モデルとして登場しました。Ptf1acre/+;LSL KrasG12D/+マウス モデル、クリステンの膵臓、膵上皮内テロメラーゼ (PanINs)、その進歩と呼ばれる、膵臓の病変の開始に終って専らラット肉腫 (K ‐ Ras) 遺伝子が有効膵膵管癌は、一般的には PDACs3と呼ばれます。このマウス モデル システム、ヒト膵癌4、5生活や頻繁に PDAC に進捗状況の最初の 5 ヶ月以内、PanINs が出てくる追加の利点の最高の動物モデルの 1 つ、単一の年4、560-70 歳が人間の膵臓癌が最もよく起きるに対し。
Ptf1a から郭清による膵臓抽出cre/+;LSL KrasG12D/+パニン ・早期から進行 PDAC3,4まで様々 な年齢でのマウスは、膵臓癌の開発の詳細縦断的組織学的検討,5. 5 個から 15 ヶ月に至るまでの年齢層で膵臓の収穫も、準備組織健康から病気にかかったティッシュへの移行中に発生する膵4代謝の世界の変化の特徴を抽出する使用ことができます6,7。
この記事では、マウスの膵臓領域抽出の実行に必要な手順の完全な視覚的なガイドを提示し、膵臓がさらなる分析のための保存のためのガイドラインを提供します。個人を含む、その他の膵疾患の研究を行って I 型糖尿病、特に学生やマウスの膵臓を使っての収穫を含む研究に新しい捜査に役に立つはずのこのガイドは均等に貴重になりますメタボリック ・ プロファイリングまたは組織学的解析の郭清。

<table><tbody><tr><td>Glass Jar&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>3140-150</td><td>The glass jar used in the video has been discontinued.&amp;nbsp; This is its replacement.</td></tr><tr><td>Lid of Glass Jar</td><td>Corning</td><td>9985-150</td><td>The glass jar lid used in the video has been discontinued.&amp;nbsp; This is its replacement.</td></tr><tr><td>15 mL Falcon Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>339650</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Scissors</td><td>Fisher Scientific</td><td>9201</td><td></td></tr><tr><td>Squeeze bottle&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-409-10DD</td><td></td></tr><tr><td>100% Ethanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-032-103</td><td></td></tr><tr><td>Formalin</td><td>Fisher Scientific</td><td>245-684</td><td></td></tr><tr><td>Foam Boards</td><td>Therapak</td><td>562908</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>Fisher Scientific</td><td>200205SHN</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 21G Syringes</td><td>BD Biosciences</td><td>309624</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Falcon Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>2.0 mL Microcentrifuge Tubes&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-681-258</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Pads</td><td>Fisher Scientific</td><td>S67011</td><td></td></tr><tr><td>T-Pins Length:&amp;nbsp; 2&quot;&amp;nbsp;</td><td>Advance Store Products</td><td>X32T-05</td><td></td></tr><tr><td>Sterilizing Wipes</td><td>Professional Disposables International Inc.</td><td>Q85084</td><td></td></tr><tr><td>Sharps Container</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-827-122</td><td></td></tr><tr><td>Analytical Balance</td><td>Marshall Scientific</td><td>ME-AE200</td><td></td></tr><tr><td>4L Dewar</td><td>Taylor-Wharton</td><td>4LD</td><td></td></tr><tr><td>Shallow Wide Mouth Dewar</td><td>Fisher Scientific</td><td>F3087-V</td><td></td></tr><tr><td>Floating Microtube Rack</td><td>VWR</td><td>60986-100</td><td></td></tr><tr><td>Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-500-25</td><td></td></tr><tr><td>Isothesia (Isoflurane)&amp;nbsp;</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>050033</td><td></td></tr><tr><td>Liquid Nitrogen</td><td>Wright Brothers</td><td>NIT-60-XX</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Kras Strain</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>OO8179</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Cre Strain</td><td>MMRRC</td><td>OOO435-UNC</td><td></td></tr></tbody></table>

dissection of the mouse pancreas for histological analysis and metabolic profiling

膵臓特定のトランスクリプション要因、1 a cre リコンビナーゼ; を調査しています。lox 停止-lox クリステン ラット肉腫、12 のコドンでアスパラギン酸グリシン (Ptf1acre/+;LSL-KrasG12D/+) ヒト膵癌のモデルとしてのマウスのひずみ。私たちの現在の研究の目的は、膵臓癌の進行の新規代謝マーカーを識別するためにです。尿、糞便、血液、膵臓組織の抽出物と癌の進行を舞台に膵臓の組織学的解析のメタボリック ・ プロファイリングを行った。マウスの膵臓人間のような明確に定義された固形臓器ではなく、むしろ簡単にマウス内部解剖学になじみのない個人またはほとんどまたはまったく経験を実施して個人識別はないびまん性分散軟部組織マウス臓器の解剖。この資料の目的は、詳細な測定を提供する郭清によりマウスの膵臓の除去には初心者を誘導する視覚的なデモ。この記事は特にメタボリック ・ プロファイリングまたは組織学的解析のため郭清によってマウスの膵臓の収穫が必要研究に学生や新しい研究者に貴重なする必要があります。

図 1動作環境領域の概要については、図 2のポスト操作領域を示しています。この設定は、機器の最小限の量を提供します、ステージング、個人はこの個々 のニーズに合わせて変更することができます。プロトコルは実験の特定のニーズに合わせて最適化する必要があります。この手順は、マウスの適切な euthanization<sup clas...

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Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

このビデオの記事は、組織学的解析と代謝プロファイリングに対する郭清によってマウスの膵臓を正常に削除に必要な手順の詳細なデモを提供します。

マウスの膵臓の組織学的解析と代謝プロファイリングに対する郭清

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

dissection-mouse-pancreas-for-histological-analysis-metabolic

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

36.3K ビュー.  Miami University. このビデオの記事は、組織学的解析と代謝プロファイリングに対する郭清によってマウスの膵臓を正常に削除に必要な手順の詳細なデモを提供します。

ビデオ: Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Mimicking and Manipulating Pancreatic Acinar-to-Ductal Metaplasia in 3-dimensional Cell Culture

The differentiation of acinar cells to ductal cells during pancreatitis and in the early development of pancreatic cancer is a key process that requires further study. To understand the mechanisms regulating acinar-to-ductal metaplasia (ADM), ex vivo 3D culture and differentiation of primary acinar cells to ductal cells offers many advantages over other systems. With the technique herein, modulation of protein expression is simple and quick, requiring only one day to isolate, stimulate or virally infect, and begin culturing primary acinar cells to investigate the ADM process. In contrast to using basement membrane matrix, the seeding of acinar cell clusters in collagen I extracellular matrix, allows acinar cells to retain their acinar identity before manipulation. This is vital when testing the contribution of various components to the induction of ADM. Not only are the effects of cytokines or other ectopically administered factors testable through this technique, but the contribution of common mutations, increased protein expression, or knockdown of protein expression is testable via viral infection of primary acinar cells, using adenoviral or lentiviral vectors. Moreover, cells can be re-isolated from collagen or basement membrane matrix at the endpoint and analyzed for protein expression.

Primary acinar cell isolation, protein expression or activity modulation, culture, and down-stream applications are abundantly useful in the ex vivo study of acinar-to-ductal metaplasia (ADM), an early event in the development of pancreatic cancer.

真似をして 3次元細胞培養の膵腺房の上皮化生を操作します。

The differentiation of acinar cells to ductal cells during pancreatitis and in the early development of pancreatic cancer is a key process that requires ...

がん研究

Isolating and Analyzing Cells of the Pancreas Mesenchyme by Flow Cytometry

The pancreas is comprised of epithelial cells that are required for food digestion and blood glucose regulation. Cells of the pancreas microenvironment, including endothelial, neuronal, and mesenchymal cells were shown to regulate cell differentiation and proliferation in the embryonic pancreas. In the adult, the function and mass of insulin-producing cells were shown to depend on cells in their microenvironment, including pericyte, immune, endothelial, and neuronal cells. Lastly, changes in the pancreas microenvironment were shown to regulate pancreas tumorigenesis. However, the cues underlying these processes are not fully defined. Therefore, characterizing the different cell types that comprise the pancreas microenvironment and profiling their gene expression are crucial to delineate the tissue development and function under normal and diseased states. Here, we describe a method that allows for the isolation of mesenchymal cells from the pancreas of embryonic, neonatal, and adult mice. This method utilizes the enzymatic digestion of mouse pancreatic tissue and the subsequent fluorescence-activated cell sorting (FACS) or flow-cytometric analysis of labeled cells. Cells can be labeled by either immunostaining for surface markers or by the expression of fluorescent proteins. Cell isolation can facilitate the characterization of genes and proteins expressed in cells of the pancreas mesenchyme. This protocol was successful in isolating and culturing highly enriched mesenchymal cell populations from the embryonic, neonatal, and adult mouse pancreas.

Here, we describe a method for the isolation of cells in the pancreas microenvironment from embryonic, neonatal and adult mouse tissue, focusing on the isolation of mesenchymal cells. This method allows profiling of cell gene expression and protein secretion in order to elucidate the extrinsic signals that regulate pancreas development, function, and tumorigenesis.

フローサイトメトリーによる膵臓間葉の細胞を単離と解析

The pancreas is comprised of epithelial cells that are required for food digestion and blood glucose regulation. Cells of the pancreas microenvironment, ...

発生生物学

Single-cell Transcriptomic Analyses of Mouse Pancreatic Endocrine Cells

Pancreatic endocrine cells, which are clustered in islets, regulate blood glucose stability and energy metabolism. The distinct cell types in islets, including insulin-secreting &#946; cells, are differentiated from common endocrine progenitors during the embryonic stage. Immature endocrine cells expand via cell proliferation and mature during a long postnatal developmental period. However, the mechanisms underlying these processes are not clearly defined. Single-cell RNA-sequencing is a promising approach for the characterization of distinct cell populations and tracing cell lineage differentiation pathways. Here, we describe a method for the single-cell RNA-sequencing of isolated pancreatic &#946; cells from embryonic, neonatal and postnatal pancreases.

We describe a method for the isolation of endocrine cells from embryonic, neonatal and postnatal pancreases followed by single-cell RNA sequencing. This method allows analyses of pancreatic endocrine lineage development, cell heterogeneity and transcriptomic dynamics.

マウス膵臓内分泌細胞の単一細胞トランスクリプトーム解析

Pancreatic endocrine cells, which are clustered in islets, regulate blood glucose stability and energy metabolism. The distinct cell types in islets, ...

Pancreatic Tissue Dissection to Isolate Viable Single Cells

The pancreas includes two major systems: the endocrine system, which produces and secretes hormones, and the exocrine system, which accounts for approximately 90% of the pancreas and includes cells that produce and secrete digestive enzymes. The digestive enzymes are produced in the pancreatic acinar cells, stored in vesicles called zymogens, and are then released into the duodenum via the pancreatic duct to initiate metabolic processes. The enzymes produced by the acinar cells can kill cells or degrade cell-free RNA. In addition, acinar cells are fragile, and common dissociation protocols result in a large number of dead cells and cell-free proteases and RNases. Therefore, one of the biggest challenges in pancreatic tissue digestion is recovering intact and viable cells, especially acinar cells. The protocol presented in this article shows a two-step method that we developed to meet this need. The protocol can be used to digest normal pancreata, pancreata that include pre-malignant lesions, or pancreatic tumors that include a large number of stromal and immune cells.

Pancreatic metaplastic cells are precursors of malignant cells that give rise to pancreatic tumors. However, isolating intact viable pancreatic cells is challenging. Here, we present an efficient method for pancreatic tissue dissociation. The cells can then be used for single-cell RNA sequencing (scRNA-seq) or for two- or three-dimensional co-culturing.

生存可能な単一細胞を単離するための膵臓組織解剖

The pancreas includes two major systems: the endocrine system, which produces and secretes hormones, and the exocrine system, which accounts for ...

In situ Quantification of Pancreatic Beta-cell Mass in Mice

Tracing changes of specific cell populations in health and disease is an important goal of biomedical research. The process of monitoring pancreatic beta-cell proliferation and islet growth is particularly challenging. We have developed a method to capture the distribution of beta-cells in the intact pancreas of transgenic mice with fluorescence-tagged beta-cells with a macro written for ImageJ (rsb.info.nih.gov/ij/). Following pancreatic dissection and tissue clearing, the entire pancreas is captured as a virtual slice, after which the GFP-tagged beta-cells are examined. The analysis includes the quantification of total beta-cell area, islet number and size distribution with reference to specific parameters and locations for each islet and for small clusters of beta-cells. The entire distribution of islets can be plotted in three dimensions, and the information from the distribution on the size and shape of each islet allows a quantitative and qualitative comparison of changes in overall beta-cell area at a glance.

In situ Quantification of Pancreatic Beta-cell Mass in Mice

The following protocol outlines the process of pancreatic dissection for virtual slice imaging, and the subsequent quantification of all GFP-tagged beta-cells in the entire pancreas.

マウスにおける膵β細胞の質量のその場定量に

Tracing changes of specific cell populations in health and disease is an important goal of biomedical research. The process of monitoring pancreatic ...

生物学

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, the role of beta-cell dysfunction in type 2 diabetes has been clearly established 2. Research progress has required methods for the isolation of pancreatic islets. The protocol of the islet isolation presented here shares many common steps with protocols from other groups, with some modifications to improve the yield and quality of isolated islets from both the wild type and diabetic Leprdb (db/db) mice. A live-cell 2-photon imaging method is then presented that can be used to investigate the control of insulin secretion within islets.

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

We present here a protocol for the isolation of islets from the mouse model of type 2 diabetes, Leprdb and details of a live-cell assay for measurement of insulin secretion from intact islets that utilizes 2 photon microscopy.

LEPR<sup&gt; DB</sup&gt; 2型糖尿病のマウスモデル：無傷の膵島の膵島単離およびライブセル2光子イメージング

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, ...

医学

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one week. More than 20 x 106 acinar cells can be obtained from a single murine pancreas. This protocol offers the possibility to independently process as many as 10 pancreases in parallel. Because it preserves acinar architecture, this model is well suited for studying the physiology of the exocrine pancreas in vitro in contrast to cell lines established from pancreatic tumors, which display many genetic alterations resulting in partial or total loss of their acinar differentiation.

In this publication, we describe a rapid and convenient procedure for isolating and culturing primary pancreatic acinar cells from the murine pancreas. This method constitutes a valuable approach to study the physiology of fresh primary normal/untransformed exocrine pancreatic cells.

マウスプライマリ膵臓腺房細胞の単離と培養

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Observing Islet Function and Islet-Immune Cell Interactions in Live Pancreatic Tissue Slices

Live pancreatic tissue slices allow for the study of islet physiology and function in the context of an intact islet microenvironment. Slices are prepared from live human and mouse pancreatic tissue embedded in agarose and cut using a vibratome. This method allows for the tissue to maintain viability and function in addition to preserving underlying pathologies such as type 1 (T1D) and type 2 diabetes (T2D). The slice method enables new directions in the study of the pancreas through the maintenance of the complex structures and various intercellular interactions that comprise the endocrine and exocrine tissues of the pancreas. This protocol demonstrates how to perform staining and time-lapse microscopy of live endogenous immune cells within pancreatic slices along with assessments of islet physiology. Further, this approach can be refined to discern immune cell populations specific for islet cell antigens using major histocompatibility complex-multimer reagents.

This study presents the application of live pancreatic tissue slices to the study of islet physiology and islet-immune cell interactions.

膵臓の生きた組織スライスにおける膵島機能と膵島免疫細胞相互作用の観察

Live pancreatic tissue slices allow for the study of islet physiology and function in the context of an intact islet microenvironment. Slices are prepared ...

免疫・感染学

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. Several rodent models have been developed to study CP, of which the bile duct 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) infusion model replicates the features of neuropathic pain seen in CP. However, bile duct drug infusion in mice is technically challenging. This protocol demonstrates the procedure of bile duct TNBS infusion for generation of a CP mouse model. TNBS was infused into the pancreas through the ampulla of Vater in the duodenum. This protocol optimized drug volume, surgical techniques, and drug handling during the procedure. TNBS-treated mice showed features of CP as reflected by bodyweight and pancreas weight reductions, changes in pain-associated behaviors, and abnormal pancreatic morphology. With these improvements, mortality associated with TNBS injection was minimal. This procedure is not only critical in generating pancreatic disease models but is also useful in local pancreatic drug delivery.

Chronic pancreatitis (CP) is a disease characterized by inflammation and fibrosis of the pancreas, often associated with intractable abdominal pain. This article focuses on refining the technique to generate a mouse model of CP via bile duct infusion with 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS).

胆管TNBS輸液による慢性膵炎のマウスモデル

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

Acinar-to-Ductal Metaplasia Induction: A Method to Study Acinar Cell to Ductal Cell Differentiation in 3D Ex Vivo Culture

Source: Fleming Martinez, A. K. et. al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/59096/" target="_blank">Mimicking and Manipulating Pancreatic Acinar-to-Ductal Metaplasia in 3-dimensional Cell Culture</a>. J. Vis. Exp. (2019).
This video describes the technique of differentiating pancreatic acinar cells to ductal cells in ex vivo 3D culture. This helps to understand the mechanisms regulating the acinar-to-ductal metaplasia (ADM), a key process in the early development of pancreatic cancer.

腺房から乳管への化生誘導:3D ex vivo培養における腺房細胞から管細胞への分化を研究する方法

Source: Fleming Martinez, A. K. et. al. Mimicking and Manipulating Pancreatic Acinar-to-Ductal Metaplasia in 3-dimensional Cell Culture. J. Vis. Exp. ...