ラットにおける網膜下注射と網膜剥離の術中可視化

私は網膜剥離における細胞死のメカニズムを探求しており、in vitroデータのin vivo実験へのトレーサビリティを確保することを目標としています。私たちのチームでは、視細胞変性におけるさまざまな細胞死メカニズムの関与を示しました。げっ歯類の網膜剥離を誘発するために説明されている多くの方法があります。

このプロトコルは、再現性と安全性という2つの課題に答えるために設計されました。網膜剥離における再現性のある安全なプロトコールを提供することで、この種の研究の効率を確保することができます。まず、25マイクロリットルのシリンジにセメントで固定された斜めのない10ミリメートル30ゲージカニューレの金属チップをマイクロインジェクターに取り付けます。

長期的な網膜剥離を誘発するには、2%ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたは1%〜5%ヒアルロン酸ナトリウムを使用します。.調製した溶液をシリンジに入れます。次に、麻酔をかけたラットの片方の目に0.5%トロピカミドを1滴塗布して散瞳を発症します。

手術する眼にオキシブプロカインを1滴塗布します。フットスイッチに接続された眼科用顕微鏡を使用して手術を行います。強膜を露出させるには、上まぶたと下まぶたの眼瞼縁の外側4分の1に2つのまぶたを引っ張る縫合糸を固定します。

縫合糸を引っ張ると、目が穏やかに膨らみます。30ゲージの針で、角膜辺縁部から約1〜2ミリメートルの側頭球結膜を通る強膜チャネルを作成します。処置全体を通して、レンズの目のインターフェースとして涙液ジェルを塗布します。

網膜板を視覚化するには、直径8mmの平らなコンタクトレンズを目の表面に置きます。顕微鏡のフットスイッチを使用して、網膜面に焦点を合わせます。次に、事前に形成された強膜チャネルを介してカニューレを垂直に挿入します。

ゆっくりと網膜に近づき、網膜の白化が観察されるまで優しく押します。注入流によって形成された網膜切開術を通して注入しながら先端の安定性を維持する 注入後、先端を網膜切開術から取り外します。次に、カニューレ全体を硝子体腔からゆっくりと引き抜き、レンズが触れないようにします。

瞳孔腔内の血流を観察せずに、網膜剥離によって瞳孔赤反射が変化していることを確認します。まぶたの縫合糸を取り外し、出血があれば慎重に綿棒で拭きます。眼圧を手動で簡単に評価します。

術後ケアのために、手術した眼にクロラムフェニコールレチノール眼軟膏を塗布します。.次に、1ミリリットルの5%グルコース一水和物を腹腔内に投与します。.アチパメゾールを1キログラムあたり0.9ミリグラムを皮下に注射します。.

最後に、動物を温度制御されたチャンバーに移し、目を覚ますまで監視します。網膜下注射の成功は、光コヒーレンストモグラフィーでの透明な網膜下液と、眼底写真での網膜下出血の欠如によって確認されました。そして、両方のモダリティで明確な網膜剥離が観察されました。

軽度の硝子体内出血は、主に注射部位の近くで時折観察されましたが、網膜下腔には広がりませんでした。.