Ich erforsche die Mechanismen des Zelltods bei Netzhautablösungen und mein Ziel ist es, die Rückverfolgbarkeit von In-vitro-Daten auf In-vivo-Experimente zu gewährleisten. In unserem Team haben wir gezeigt, dass verschiedene Zelltodmechanismen während der Photorezeptordegeneration beteiligt sind. Es gibt viele Möglichkeiten, die beschrieben wurden, um eine Netzhautablösung bei Nagetieren zu induzieren.
Dieses Protokoll wurde entwickelt, um zwei Herausforderungen zu erfüllen: Reproduzierbarkeit und Sicherheit. Die Bereitstellung eines reproduzierbaren und sicheren Protokolls für die Netzhautablösung wird die Effizienz dieser Art von Forschung gewährleisten. Montieren Sie zunächst eine nicht abgeschrägte 10-Millimeter-Kanüle mit 30 Gauge, die auf einer 25-Mikroliter-Spritze zementiert ist, auf einen Mikroinjektor.
Um eine langfristige Netzhautablösung zu induzieren, verwenden Sie 2 % Hydroxypropylmethylcellulose oder 1 % bis 5 % Natriumhyaluronat. Laden Sie die vorbereitete Lösung in die Spritze. Tragen Sie anschließend einen Tropfen 0,5% Tropicamid auf ein Auge einer anästhesierten Ratte auf, um Mydriasis zu erhalten.
Tragen Sie einen Tropfen Oxybuprocain auf das zu operierende Auge auf. Verwenden Sie ein Ophthalmomikroskop, das mit einem Fußschalter verbunden ist, um die Operation durchzuführen. Um die Sklera freizulegen, verankern Sie zwei Augenlidziehnähte am äußeren Viertel des Lidrandes an den oberen und unteren Augenlidern.
Ziehen Sie an den Nähten, um eine sanfte Vorwölbung des Auges zu erreichen. Erzeugen Sie mit einer 30-Gauge-Nadel einen Skleralkanal durch die temporale bulbäre Bindehaut etwa ein bis zwei Millimeter vom Hornhautlimbus entfernt. Tragen Sie während des gesamten Eingriffs Tränengel als Linsen-Augen-Schnittstelle auf.
Um die Netzhautplatte sichtbar zu machen, platzieren Sie eine flache Kontaktlinse mit einem Durchmesser von acht Millimetern auf der Augenoberfläche. Verwenden Sie den Fußschalter des Mikroskops, um auf die Netzhautebene zu fokussieren. Führen Sie nun die Kanüle senkrecht durch den vorgeformten Skleralkanal ein.
Nähern Sie sich langsam der Netzhaut und drücken Sie sanft darauf, bis eine Netzhautaufhellung zu beobachten ist. Halten Sie die Stabilität der Spitze während der Injektion durch die Retiotomie aufrecht, die durch den Injektionsfluss gebildet wird. Entfernen Sie nach der Injektion die Spitze aus der Retinotomie. Ziehen Sie dann vorsichtig die gesamte Kanüle aus der Glaskörperhöhle heraus und stellen Sie sicher, dass die Linse nicht berührt wird.
Stellen Sie sicher, dass der Pupillenrotreflex durch die Netzhautablösung verändert wird, ohne den Blutfluss in der Glaskörperhöhle zu beobachten. Entfernen Sie die Lidnähte und tupfen Sie dann die Blutungen vorsichtig ab. Beurteilen Sie den Augeninnendruck kurz manuell.
Tragen Sie zur postoperativen Pflege die Chloramphenicol-Retinol-Augensalbe auf das operierte Auge auf. Verabreichen Sie dann einen Milliliter 5%iges Glukosemonohydrat intraperitoneal. Injizieren Sie 0,9 Milligramm pro Kilogramm Atipamezol subkutan.
Bringen Sie das Tier schließlich in eine klimatisierte Kammer und überwachen Sie es, bis es aufwacht. Die erfolgreiche subretinale Injektion wurde durch klare subretinale Flüssigkeit in der optischen Kohärenztomographie und das Fehlen von subretinalen Blutungen in der Fundusfotografie bestätigt. Und bei beiden Modalitäten wurde eine deutliche Netzhautablösung beobachtet.
Gelegentlich wurden kleinere intravitreale Blutungen beobachtet, vor allem in der Nähe der Injektionsstelle, die sich jedoch nicht bis in den subretinalen Raum erstreckten.
