Estoy explorando los mecanismos de muerte celular en los desprendimientos de retina, y mi objetivo es garantizar la trazabilidad de los datos in vitro a experimentos in vivo. En nuestro equipo demostramos la implicación de diferentes mecanismos de muerte celular durante la degeneración de los fotorreceptores. Se han descrito muchas formas de inducir el desprendimiento de retina en roedores.
Este protocolo fue diseñado para responder a dos desafíos, la reproducibilidad y la seguridad. Proporcionar un protocolo reproducible y seguro en el desprendimiento de retina garantizará la eficiencia en este tipo de investigaciones. Para comenzar, monte una cánula metálica de calibre 30 de 10 milímetros no biselada y cementada en una jeringa de 25 microlitros en un microinyector.
Para inducir el desprendimiento de retina a largo plazo, use 2% de hidroxipropilmetilcelulosa o 1% a 5% de hialuronato de sodio. Cargue la solución preparada en la jeringa. A continuación, aplique una gota de tropicamida al 0,5% en un ojo de una rata anestesiada para obtener midriasis.
Aplicar una gota de oxibuprocaína en el ojo a operar. Use un microscopio oftálmico conectado a un interruptor de pie para realizar la cirugía. Para exponer la esclerótica, ancle dos suturas de extracción de párpados en el cuarto externo del margen palpebral en los párpados superior e inferior.
Tire de las suturas para lograr un abombamiento suave del ojo. Con una aguja de calibre 30, cree un canal escleral a través de la conjuntiva bulbar temporal aproximadamente de uno a dos milímetros del limbo corneal. Aplique el gel lagrimal como una interfaz entre lentes y ojos durante todo el procedimiento.
Para visualizar la placa retiniana, coloque una lente de contacto plana de ocho milímetros de diámetro en la superficie del ojo. Utilice el interruptor de pie del microscopio para enfocar el plano de la retina. Ahora, inserte la cánula verticalmente a través del canal escleral preformado.
Acércate lentamente a la retina y presiónala suavemente hasta que se observe un blanqueamiento de la retina. Mantenga la estabilidad de la punta mientras inyecta a través de la retinotomía formada por el flujo de inyección Después de la inyección, retire la punta de la retinotomía. A continuación, retire suavemente toda la cánula de la cavidad vítrea, asegurándose de que no se toque el cristalino.
Asegúrese de que el reflejo rojo pupilar se vea alterado por el desprendimiento de retina sin observar el flujo sanguíneo dentro de la cavidad vítrea. Retire las suturas de los párpados, luego frote cuidadosamente cualquier sangrado. Evalúe brevemente la presión intraocular de forma manual.
Para el cuidado postoperatorio, aplique el ungüento oftalmológico de cloranfenicol retinol en el ojo operado. A continuación, administrar un mililitro de monohidrato de glucosa al 5% por vía intraperitoneal. Inyecte 0,9 miligramos por kilogramo de atipamezol por vía subcutánea.
Finalmente, transfiera al animal a una cámara con temperatura controlada y vigílelo hasta que se despierte. El éxito de la inyección subretiniana se verificó mediante líquido subretiniano claro en tomografía de coherencia óptica, y la ausencia de hemorragia subretiniana en la fotografía del fondo de ojo. Y se observó un desprendimiento de retina distinto en ambas modalidades.
Ocasionalmente se observaron hemorragias intravítreas menores, principalmente cerca del sitio de la inyección, pero no se extendieron al espacio subretiniano.
