私たちのアプローチは、将来の不妊治療のために腹腔鏡下膣形成術と卵母細胞回収を組み合わせることにより、マイヤー・ロキタンスキー・クスター・ハウザー症候群の治療における侵襲性疾患を最小限に抑えることを可能にします。私たちのアプローチの主な利点は、単一の麻酔の必要性と、若いRokitansky患者における経膣卵母細胞回収の実現可能性の克服です。この手順は、私たちの不妊症ユニットの上級婦人科医であるダイアナデルプラトと、生殖補助医療研究所の2人の上級臨床発生学者であるアレッサンドラアルテリとグレタセルミソーニによって実証されます。
手術日から14日目に制御された卵巣刺激を開始します。連続経腹部超音波およびエストラジオールおよびプロゲステロンの同時測定による卵巣反応を監視する。オープンテクニックで気腹膜を確立します。
腹腔鏡を挿入するための1つの10ミリメートルのアンビリカルトロカールと、中央、右、左の下象限に3つの5ミリメートルのトロカールを配置します。腹腔鏡視下では、右卵巣と左卵巣の穿刺のために中央トロカールと左トロカールを介した経膣的回収に一般的に使用されるように、吸引ポンプに接続された17ゲージの単一ルーメン針を使用します。卵胞の露出を容易にするために腹腔鏡下鉗子で卵巣を持ち上げて保持します。
互いに近い複数の卵胞を吸引する場合は、卵巣に針先を保持して、卵巣皮質が固定される回数と出血の固有のリスクを減らします。腹膜を2つの初歩的な子宮角の間で横方向に持ち上げて切開し、次に切開部を横方向、前方、および後方に伸ばして腹膜を解剖します。会陰アプローチで膣のくぼみを露出させ、H字型の切開を行い、膀胱直腸腔の鋭く鈍い解剖によって新膣腔を作成します。
次に、解剖した腹膜縁を膣前庭の端まで引き下げます。腹膜前庭吻合のためのポリジオキサノン合成吸収性3−0で縫合糸を中断した位置。丸い靭帯、卵管峡部、子宮卵巣靭帯、および外側腹膜葉の結合伝達を伴う膀胱の上の動員された腹膜から、各半骨盤のポリジオキサノン合成吸収性2-0モノフィラメントの巾着糸縫合を開始します。
次に、2つの縫合糸に、直腸直腸の外側の側面と直腸S状結腸接合部の直腸漿膜の前方の側面を含めます。最後に、腹膜コーティングされた新膣にパラフィンコーティングされたガーゼを置きます。卵胞吸引液をポータブルインキュベーターで保温した10mm丸底チューブに集め、すぐに約10分の輸送時間で発生学研究室に輸送します。
すべての積雲卵母細胞複合体が収集されたら、それらを受精培地を含む4ウェル皿に入れ、蓋と底に患者の身元に関するデータをラベル付けします。6%の二酸化炭素と5%の酸素を含む制御された雰囲気の中で摂氏37度でそれらをインキュベートします。手順の再確認が実験室スタッフの2人目のメンバーによって実行されていることを確認してください。
排卵トリガー後38時間以内に積雲コロナ細胞の除去を行います。酵素を含む中央のウェルに積雲卵母細胞複合体を置き、ガラスパスツールピペットで卵丘細胞を分散させ、卵母細胞複合体を含む溶液を最大30秒間穏やかに上下にピペッティングします。HEPES緩衝培地のみを含む第2の中央ウェルディッシュに卵母細胞を移動し、酵素の最小量を置換することを確認します。
内径が減少したデービングピペットを使用して残りのコロナセルを取り除きます。卵母細胞の成熟段階を評価し、中期IIの卵母細胞を分離します。中期II卵母細胞を、6ミリメートルの鉱物油で覆われた9滴の連続単一培養培地を含むIVF培養60ミリメートルペトリ皿に移します。
6%の二酸化炭素と5%の酸素を含む制御された雰囲気の中で摂氏37度でそれらをインキュベートします。冷却ボックスの上部まで新鮮な液体窒素を満たし、分散と蒸発を最小限に抑えるために使用されるまで覆います。内径170マイクロメートルのストリッパーピペットを使用して、操作中に卵母細胞を損傷しないようにします。
平衡化溶液、ガラス化溶液、洗浄液の各バイアルを静かに振って内容物を混合してから使用してください。60ミリリットルのペトリ皿の蓋を50マイクロリットルの洗浄液1滴で準備します。媒体の蒸発を制限するために、使用直前に滴を置きます。
インキュベーターから卵母細胞ディッシュを取り出し、培養ディッシュから最小量の培地を含む中期II卵母細胞を50マイクロリットルの洗浄液に移します。洗浄液2、平衡化溶液1、平衡化溶液2の50マイクロリットル滴を近接して分注し、液滴洗浄液1から液滴洗浄液2に卵母細胞を移します。平衡化溶液1の滴を洗浄溶液2にマージし、両方の溶液が自発的に混合されるまで2分間待ちます。
次いで、平衡化溶液2の滴を先に合流した液滴に合流させ、さらに2分間放置する。最後に、100マイクロリットルの新しい100マイクロリットルの平衡溶液3滴を以前にマージした液滴にマージし、さらに1分間放置します。卵母細胞を100マイクロリットルの平衡化溶液4滴に10分間入れます。
50マイクロリットルのガラス化保存液2滴と100マイクロリットルのガラス化保存液1滴を分注します。卵母細胞を3滴のガラス化保存液に60秒間順次移動させ、卵母細胞が各滴に約20秒間留まるようにします。60秒間のインキュベーションが終了するまでに約10秒が経過したら、クライオデバイスを顕微鏡下に置きます。
卵母細胞をピペットの先端に運び、最小限のガラス化保存液を入れたクライオデバイスに置きます。余分なガラス化保存液を吸引し、卵母細胞をガラス化保存液の薄層で覆ったままにします。クライオデバイスを液体窒素に直接突っ込み、すばやく動かします。
デバイスを液体窒素に保ち、保護蓋で覆います。卵母細胞回収と膣形成術の付随する腹腔鏡手術は、すべての患者でうまく組み合わされました。平均11.4 5.4卵母細胞が回収され、9.6 4.3 M2卵母細胞が凍結保存されました。
総平均手術時間は114 17分であった。術中失血はすべての患者で重要ではなく、術中の有害事象は観察されませんでした。.術後3日目に、患者は毎日拡張器の使用を開始し、6.0 1.0日目に退院しました。
最適なアクセスと回収を確実にするために卵巣の自動動員に十分な注意を払いながら、卵巣内の卵胞の慎重な吸引が推奨されます。
