この作品は、北京ユニオン医療大学青少年基金、中央大学 (許可番号 3332015200) の基礎的研究資金からの補助金によって支えられました。

すべての動物実験は、関連するガイドライン、規制、規制機関に準拠して実行されました。例示されている議定書を指導と承認の研究所の微小動物倫理委員会 (IMAEC) で、北京ユニオン医療大学 (医学科学院) の下で行った。
1. 動物
<ol><li>実験開始前に 12 時間の明暗周期下ケージ温度制御 (24 ± 1 ° C) と湿度 (55 ± 5%) につき 3 つの BALB/c マウスを維持します。マウスの通常の餌と水への無料アクセスを許可します。</li>
	<li>糖尿病群と非糖尿病群にマウスをランダムに分割します。正確にそれぞれの個々 のマウスの重さし、それぞれのマウスの体重を使用して注入量を計算します。</li>
	<li>ストレプトゾトシン (STZ) 投与前に、4 時間マウスを高速かつ実験 1 日目に通常どおり定期的に水を提供します。</li>
	<li>Ph 4.3 0.1 M クエン酸ナトリウム バッファーを準備します。溶液 1 mL を 1.5 mL 遠心チューブに入れるし、光の露出を避けるためにアルミ箔で遠心チューブをラップします。</li>
	<li>クエン酸ナトリウム緩衝液 (4.3) を使用する前に 5 mg/mL の最終作業濃度に STZ を溶解します。</li>
	<li>1 mL シリンジ、25 G 針を使用して 40 mg/kg の用量で stz 糖尿病グループの腹腔内注射マウスを与えます。クエン酸ナトリウム緩衝液 (4.3) の同じボリュームと非糖尿病コントロールのマウスを注入します。</li>
	<li>マウスをケージに戻すし、通常の餌と 10% ショ糖水でそれらを供給します。</li>
	<li>実験日 2 に 5 (すなわち、次に 4 日間連続) 1.3 1.7 の手順を繰り返します。</li>
	<li>最後の STZ 投与後定期的に水で 10% ショ糖水を置き換えます。</li>
	<li>高速 6 時間、マウスはしかしそれらに水への開架を与えるし、9 日後 (実験日 14) 血糖値を測定します。血ブドウ糖の監視システムを使用して高血糖を確認する尾静脈から血液サンプルを収集します。 注: 血ブドウ糖のレベル > 200 ミリグラム/dL とマウスは糖尿病と見なされます。</li>
</ol>2. 計測器の準備
<ol><li>プローブ先端の光の面とほこりや微粒子を除去するソフト、非研磨布でレーザー超音波ドプラ装置のプローブ コネクタをクリーニングします。楽器 (図 1 a) のポートにケーブルを差し込みます。</li>
	<li>フラックスを実験環境 (部屋の温度、通常 30 分間) が熱平衡にある標準により校正スタンドを組み立てます。フラックスを振る 2 分休む穏やかに 10 s と標準。</li>
	<li>校正ベースの真ん中にフラックスの標準のコンテナーを配置します。最大の高さにクランプを調整し、下方コンテナーを指すようにクランプでプローブを固定します。フラックス標準がプローブの下に正しく配置されていることを確認します。</li>
	<li>ゆっくりと先端を正しくフラックス標準に浸漬されるまで下プローブを移動します。レーザー超音波ドプラ装置の「校正」を押しますとしにプローブが接続されているチャンネルを選択します。レーザー超音波ドプラ装置の画面で「成功した校正」通知が表示されるまでは、調整プログラムを実行します。</li>
	<li>プローブ ホルダーを使用してプローブを固定します。手動での移動を避けるためにプローブを固定します。</li>
	<li>一定した温度 (24 ± 1 ° C) で実験室と湿度 (50 ~ 60%) を維持します。</li>
	<li>外部の光誘起変化を避けるために実験を実行する前に、(蛍光灯やスポット ランプ) などの任意の外部光をオフに。</li>
</ol>3. 動物の準備
<ol><li>オートクレーブ手術機器およびそれらを使用する前に室温に冷却するを許可します。</li>
	<li>マウスを与えるレーザー ドップラーによる膵微小血管皮膚血管運動を検出する前に実験環境に順応する 10 分。</li>
	<li>3% ペントバルビ タール ナトリウム 1 mL を 1 mL の注射器を入力します。マウスを麻酔するペントバルビ タール ナトリウム溶液 75 mg/kg (i. p.) を注入します。</li>
	<li>乾燥を防ぐため事前に湿らせたガーゼを使って、マウスの目を覆います。</li>
	<li>後足は、鉗子でつまむことまたはマウスが完全に意識を失うし、尻尾に応答しなくを確認します。15 分ごとに必要に応じてペントバルビ タール ソリューションの初期注入量の 10% を継ぎ足すことによって麻酔の維持麻酔と術中イベントを通して麻酔を監視します。</li>
	<li>動物以下半絶縁層に加熱パッドを配置、仰臥位に動物を配置し、レーザー超音波ドプラ装置の作業ステーションに転送。サージカル テープで作業台にマウスを固定します。</li>
	<li>綿棒、betadine、75% エタノールとマウスの腹部の皮膚は、腹部領域をきれいに綿棒に使用されます。</li>
	<li>2 %lidocaine/0.5% ブピバカイン (50/50) 混合物を皮下注入します。 ~ 3 cm カット-ガーゼ スポンジの中央に直径の穴。ガーゼ スポンジで腹部をカバーします。</li>
	<li>鉗子で腹部の皮膚を持ち上げて、メスや皮膚のはさみを使用して腹部の正中線に沿って初期縦切開を行います。</li>
	<li>鉗子で基になる筋肉をつかみ、切開腹腔内を入力します。すべての臓器を傷つけていません。腹腔内を明らかにするための胸の上、皮膚や基礎となる筋肉を隠します。優しく膵体と鈍ピンセットのペアを使用して脾臓を公開します。</li>
</ol>4. データ集録解析
<ol><li>クリックして「ファイル」→「新規作成」新しい測定ファイルを作成するレーザー超音波ドプラ装置のソフトウェアを実行します。「全般」タブの下で、接続されているモニターを構成するのには、「実行無料」監視期間を設定します。「LDF モニター」タブをクリックします「次へ」の出荷時のデフォルトを使用します。</li>
	<li>グラフ表示設定を「表示設定ダイアログ ボックス」でそれぞれのボックスをチェックして「フラックス、コンク、スピード」チャンネルを選択できます。 します次のパラメーターを選択:「チャネルのデータ ソース」と"ラベル、単位および色。「次へ」をクリックします。</li>
	<li>「ファイル情報ダイアログ ボックス」で件名の測定 (すなわち、名前と件名数演算子、監視時間、コメント、など) についてはユーザーを入力し測定構成を完了します"次へ"をクリックしますします。 注: 測定ウィンドウです (図 1 b) ソフトウェアによって自動的に作成されます。</li>
	<li>膵臓に電極を手動で進めます。プローブと膵臓の組織間の距離 1 mm 以内であることを確認します。不適切な距離を与える人工的に増加または減少させる血流朗読。</li>
	<li>微小血管血灌流ユニット (PU) データの記録を開始する「スタート」ツールバーのアイコンをクリックします。すべての実行に 1 分間継続的に PU データを収集します。測定を中止するには、「停止」をクリックします。選択して「ファイル」→「名前を付けて保存」名にし完成した測定ファイルを保存します。</li>
	<li>添加剤の効果と収縮のローカライズされた枯渇を避けるために各を実行した後、プローブを手動で再配置とリラクゼーションに最適な容量。各マウスの多点 (すなわち3 膵組織からランダムに選択したポイント) 微小血管の PU のデータを収集する手順 4.1 4.4.ベースライン管理として非反射板の PU データを測定します。</li>
	<li>腹部の筋肉層とを縫合糸で皮膚の層を閉じます。実験後、きれいなケージに動物を配置します。</li>
	<li>加熱パッドを半分に回復ケージを置くことによって動物の暖かいを保ちます。 注: は、暖かさ、衛生、流体と食物摂取、感染症に注意を払います。術後疼痛管理として 48 時間カルプロフェンを 2 mg/kg をマウスを管理します。 安楽死を実行するには、マウスが緩和できない苦痛や重篤な状態であること観察されるとき、150 mg/kg のペントバルビ タール ナトリウム i. p. を注入します。</li>
</ol>5. 血管皮膚血管運動のパラメーターを計算します。
<ol><li>*.Xlsx ファイルとして時間と PU の raw データをエクスポートし、ファイルをスプレッドシートで開くレーザーのドップラー ソフトウェアの「エクスポート」コマンドを使用します。</li>
	<li>平均ベースライン灌流ユニット (PUb) を計算する (ステップ 4.6 を参照)。</li>
	<li>平均血液灌流 (PU、) 測定の 1 分を次のように計算する: (PU、)、血液灌流を平均 = PU - PUb (式 1)。</li>
	<li>各 1 分測定の頻度 (サイクル/分) を計算します。 注: 微小血管皮膚血管運動の頻度は、毎分微小血管バソモーション波の発生ピークの数として定義されます。</li>
	<li>測定の各 1 分の振幅 (ΔPU) を計算します。<ol>
<li>(PUmax) 最大と最小 (PU分) の違いとして微小血管皮膚血管運動の振幅を計算する: 振幅 (ΔPU) = PUmax - PU分(式 2)。</li>
	</ol>
</li>
	<li>各 1 分測定の相対速度 (PU) を計算します。</li>
</ol>

<ol>
	<li>Aalkjaer, C., Nilsson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasomotion:+cellular+background+for+the+oscillator+and+for+the+synchronization+of+smooth+muscle+cells.">Vasomotion: cellular background for the oscillator and for the synchronization of smooth muscle cells.</a> Br J Pharmacol. 144 (5), 605-616 (2005).</li><li>Serne, E. H., de Jongh, R. T., Eringa, E. C., IJzerman, R. G., Stehouwer, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+dysfunction:+a+potential+pathophysiological+role+in+the+metabolic+syndrome.">Microvascular dysfunction: a potential pathophysiological role in the metabolic syndrome.</a> Hypertension. 50 (1), 204-211 (2007).</li><li>Carmines, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+renal+microvascular+dysfunction+in+type+1+diabetes:+potential+contribution+to+end+organ+damage.">Mechanisms of renal microvascular dysfunction in type 1 diabetes: potential contribution to end organ damage.</a> Curr Vasc Pharmacol. 12 (6), 781-787 (2014).</li><li>Holowatz, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cutaneous+microvascular+ageing:+potential+insights+into+underlying+physiological+mechanisms+of+endothelial+function+and+dysfunction.">Human cutaneous microvascular ageing: potential insights into underlying physiological mechanisms of endothelial function and dysfunction.</a> J Physiol. 586 (14), 3301 (2008).</li><li>De Boer, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+dysfunction:+a+potential+mechanism+in+the+pathogenesis+of+obesity-associated+insulin+resistance+and+hypertension.">Microvascular dysfunction: a potential mechanism in the pathogenesis of obesity-associated insulin resistance and hypertension.</a> Microcirculation. 19 (1), 5-18 (2012).</li><li>Nilsson, G. E., Tenland, T., Oberg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+laser+Doppler+flowmeter+for+measurement+of+tissue+blood+flow.">Evaluation of a laser Doppler flowmeter for measurement of tissue blood flow.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 27 (10), 597-604 (1980).</li><li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+the+blood+perfusion+values+determined+by+laser+speckle+imaging+and+laser+Doppler+imaging+in+normal+skin+and+port+wine+stains.">Relationship between the blood perfusion values determined by laser speckle imaging and laser Doppler imaging in normal skin and port wine stains.</a> Photodiagnosis Photodyn Ther. 13 (1), 1-9 (2016).</li><li>Fuchs, D., Dupon, P. P., Schaap, L. A., Draijer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+association+between+diabetes+and+dermal+microvascular+dysfunction+non-invasively+assessed+by+laser+Doppler+with+local+thermal+hyperemia:+a+systematic+review+with+meta-analysis.">The association between diabetes and dermal microvascular dysfunction non-invasively assessed by laser Doppler with local thermal hyperemia: a systematic review with meta-analysis.</a> Cardiovasc Diabetol. 16 (1), 11-22 (2017).</li><li>Yaginuma, N., Takahashi, T., Saito, K., Kyoguku, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microvasculature+of+the+human+pancreas+and+its+relation+to+Langerhans+islets+and+lobules.">The microvasculature of the human pancreas and its relation to Langerhans islets and lobules.</a> Pathol Res Pract. 181 (1), 77-84 (1986).</li><li>Brissova, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+microenvironment,+modulated+by+vascular+endothelial+growth+factor-A+signaling,+promotes+beta+cell+regeneration.">Islet microenvironment, modulated by vascular endothelial growth factor-A signaling, promotes beta cell regeneration.</a> Cell Metab. 19 (3), 498-511 (2014).</li><li>de Moraes, R., Van Bavel, D., Gomes Mde, B., Tibirica, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+non-supervised+low+intensity+aerobic+excise+training+on+the+microvascular+endothelial+function+of+patients+with+type+1+diabetes:+a+non-pharmacological+interventional+study.">Effects of non-supervised low intensity aerobic excise training on the microvascular endothelial function of patients with type 1 diabetes: a non-pharmacological interventional study.</a> BMC Cardiovasc Disord. 16 (1), 23-31 (2016).</li><li>Humeau-Heurtier, A., Guerreschi, E., Abraham, P., Mahe, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relevance+of+laser+Doppler+and+laser+speckle+techniques+for+assessing+vascular+function:+state+of+the+art+and+future+trends.">Relevance of laser Doppler and laser speckle techniques for assessing vascular function: state of the art and future trends.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 60 (3), 659-666 (2013).</li><li>Park, H. S., Yun, H. M., Jung, I. M., Lee, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Laser+Doppler+for+the+Evaluation+of+Pedal+Microcirculatory+Function+in+Diabetic+Neuropathy+Patients.">Role of Laser Doppler for the Evaluation of Pedal Microcirculatory Function in Diabetic Neuropathy Patients.</a> Microcirculation. 23 (1), 44-52 (2016).</li><li>Sun, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcirculatory+vasomotor+changes+are+associated+with+severity+of+peripheral+neuropathy+in+patients+with+type+2+diabetes.">Microcirculatory vasomotor changes are associated with severity of peripheral neuropathy in patients with type 2 diabetes.</a> Diab Vasc Dis Res. 10 (3), 270-276 (2013).</li><li>Pan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+PEMF+on+microcirculation+and+angiogenesis+in+a+model+of+acute+hindlimb+ischemia+in+diabetic+rats.">Effects of PEMF on microcirculation and angiogenesis in a model of acute hindlimb ischemia in diabetic rats.</a> Bioelectromagnetics. 34 (3), 180-188 (2013).</li><li>Jumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+Signs+of+End-Organ+Damage+in+Retinal+Arterioles+in+Patients+with+Type+2+Diabetes+Compared+to+Hypertensive+Patients.">Early Signs of End-Organ Damage in Retinal Arterioles in Patients with Type 2 Diabetes Compared to Hypertensive Patients.</a> Microcirculation. 23 (6), 447-455 (2016).</li><li>Nguyen, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+blood+flow+is+increased+in+type+1+diabetes+mellitus+patients+with+advanced+stages+of+retinopathy.">Retinal blood flow is increased in type 1 diabetes mellitus patients with advanced stages of retinopathy.</a> BMC Endocr Disord. 16 (1), 25-33 (2016).</li><li>Forst, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+Microcirculation+in+Type+1+Diabetic+Patients+With+and+Without+Peripheral+Sensory+Neuropathy.">Retinal Microcirculation in Type 1 Diabetic Patients With and Without Peripheral Sensory Neuropathy.</a> J Diabetes Sci Technol. 8 (2), 356-361 (2014).</li><li>Hu, H. F., Hsiu, H., Sung, C. J., Lee, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+laser-Doppler+flowmetry+measurements+with+spectral+analysis+to+study+different+microcirculatory+effects+in+human+prediabetic+and+diabetic+subjects.">Combining laser-Doppler flowmetry measurements with spectral analysis to study different microcirculatory effects in human prediabetic and diabetic subjects.</a> Lasers Med Sci. 31 (1), 1-8 (2016).</li><li>Klonizakis, M., Manning, G., Lingam, K., Donnelly, R., Yeung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+diabetes+on+the+cutaneous+microcirculation+of+the+feet+in+patients+with+intermittent+claudication.">Effect of diabetes on the cutaneous microcirculation of the feet in patients with intermittent claudication.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 61 (3), 439-444 (2015).</li><li>Khazraei, H., Shafa, M., Mirkhani, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ranolazine+on+cardiac+microcirculation+in+normal+and+diabetic+rats.">Effect of ranolazine on cardiac microcirculation in normal and diabetic rats.</a> Acta Physiol Hung. 101 (3), 301-308 (2014).</li><li>Fujita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+inner+ear+susceptibility+to+noise+injury+in+mice+with+streptozotocin-induced+diabetes.">Increased inner ear susceptibility to noise injury in mice with streptozotocin-induced diabetes.</a> Diabetes. 61 (11), 2980-2986 (2012).</li><li>Wiernsperger, N., Nivoit, P., De Aguiar, L. G., Bouskela, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcirculation+and+the+metabolic+syndrome.">Microcirculation and the metabolic syndrome.</a> Microcirculation. 14 (4-5), 403-438 (2007).</li><li>Chawla, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+content,+tone,+integrity,+and+haemodynamics+for+guiding+fluid+therapy:+a+conceptual+approach.">Vascular content, tone, integrity, and haemodynamics for guiding fluid therapy: a conceptual approach.</a> Br J Anaesth. 113 (5), 748-755 (2014).</li></ol>

著者が明らかに何もありません。

微小血管障害 (例えば、糖尿病、急性膵炎、末梢血管疾患、等) を含む場合は、いくつかの疾患は血流の低下に します。血流の変化以外は、微小循環の機能状態をミラー化する微小血管皮膚血管運動などの重要な指標があります。特定の指標、微小血管皮膚血管運動は血管ベッドで微小音の振動として一般的に定義されます。現在のプロトコルの監視システム微小血管血流を直?...

微小循環の機能状態のパラメーターとして微小血管バソモーション配信と酸素、栄養素、およびホルモンの交換のための責任を取るし、セル廃棄物や二酸化炭素などの代謝産物の除去に不可欠であります。1。 血管皮膚血管運動も血流分布と組織の灌流、局所微小循環血圧力と炎症は、多くの疾患で浮腫を引き起こすことができるレスポンスに影響することを調節します。したがって、微小血管皮膚血管運動は臓器2,3,4組織、およびコンポーネントのセルの生理機能を維持するために非常に重要です。微小血管皮膚血管運動の障害は、微小循環関連疾患5の開発の重要なステップの 1 つかもしれない。
レーザードップラー法は、観察と微小循環研究6のフィールドの数量のために開発されました。(例えば、レーザー スペックル7、経皮的酸素等)、その他の技術的なアプローチと共に、この技術は、微小循環の血流を評価するため黄金の標準と見なされています。レーザー ・ ドップラー、装置によって (すなわち毛細血管、細動脈、細静脈、等) ローカル微小循環の血流が指定の理論的根拠は、ドップラーの原理に基づいています。光の粒子が微小循環、移動の血液細胞を発生または変更されないと波長、誘導放出光の周波数変更します。したがって、微小循環の数、血液細胞の速度、微小血管の血流の方向は関連する大きさとドップラー シフトした光の周波数分布に関連するキー要因。さまざまな方法を使用して、さまざまな組織、mesenteries を含む微小循環の研究に使用されていると背側皮下脂肪マウス、ラット、ハムスター、ベーキングチャンバーも人間8。しかし、現在のプロトコルに着目、機能を使用して評価される膵微小血管バソモーションの状態レーザー ドップラーと自家製評価パラメーター システム。
膵微小循環は膵微小循環の主に構成されて、特徴を展示します。膵毛細血管網は、その外分泌相手9の毛細血管よりも 5 倍高い密度を示しています。入力値及び普及インスリンのコンジットを提供する、膵島の血管内皮細胞酸素代謝活性の細胞に提供アイレットに β 細胞。さらに、膵島の血管がインシュリンの遺伝子発現および β 細胞の生存を調節するのみならず、β 細胞機能に影響を与えるにも関与していることを示しても出現の証拠β 細胞増殖を促進血管作動性血管新生物質と成長要因10の数を生産します。したがって、この点で、我々 は膵微小血管皮膚血管運動機能の状態が膵島 β 細胞機能に影響を与える、急性・慢性膵炎、糖尿病、およびその他などの疾患の病態に関与を推論します。膵臓病。
膵微小血管皮膚血管運動の機能的状態の病理組織学的変化の分析と上記疾患膵微小循環の貢献を決定するための実行可能な戦略があります。膵微小血管皮膚血管運動体内を確認する方法を説明する詳細な手順をここで提供します。典型的な測定値は代表の結果に表示されます。最後に、メリットと手法の限界は、議論、さらにアプリケーションと一緒にでハイライトされます。

<table><tbody><tr><td>MoorVMS-LDF2</td><td>Moor Instruments</td><td>GI80</td><td>PeriFlux 5000 (Perimed Inc.) can be used as an alternative apparatus to harvest data</td></tr><tr><td>MoorVMS-PC Software</td><td>Moor Instruments</td><td>GI80-1</td><td>Software of MoorVMS-LDF2</td></tr><tr><td>Calibration stand</td><td>Moor Instruments</td><td>GI-cal</td><td>Calibration tool</td></tr><tr><td>Calibration base</td><td>Moor Instruments</td><td>GI-cal</td><td>Calibration tool</td></tr><tr><td>Calibration flux standard</td><td>Moor Instruments</td><td>GI-cal</td><td>Calibration tool</td></tr><tr><td>One Touch UltraEasy glucometer</td><td>Johnson and Johnson</td><td>#1955685</td><td>Confirm hyperglycemia</td></tr><tr><td>One Touch UltraEasy strips</td><td>Johnson and Johnson</td><td>#1297006</td><td>Confirm hyperglycemia</td></tr><tr><td>Streptozotocin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0130</td><td>Dissolve in sodium citrate buffer (pH 4.3)</td></tr><tr><td>Pentobarbital sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3761</td><td>Working concentration 3 %</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sinopharm Inc.</td><td>200121</td><td>Working concentration 75 %</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Amresco</td><td>335</td><td>Working concentration 10 %</td></tr><tr><td>Medical gauze</td><td>China Health Materials Co.</td><td>S-7112</td><td>Surgical</td></tr><tr><td>Blunt-nose forceps</td><td>Shang Hai Surgical Instruments Inc.</td><td>N-551</td><td>Surgical</td></tr><tr><td>Surgical tapes</td><td>3M Company</td><td>3664CU</td><td>Surgical</td></tr><tr><td>Gauze sponge</td><td>Fu Kang Sen Medical Device CO.</td><td>BB5447</td><td>Surgical</td></tr><tr><td>Scalpel</td><td>Yu Lin Surgical Instruments Inc.</td><td>175C</td><td>Surgical</td></tr><tr><td>Skin scissor</td><td>Carent</td><td>255-17</td><td>Surgical</td></tr><tr><td>Suture</td><td>Ning Bo Surgical Instruments Inc.</td><td>3325-77</td><td>Surgical</td></tr><tr><td>Syringe and 25-G needle</td><td>MISAWA Inc.</td><td>3731-2011</td><td>Scale: 1 ml</td></tr></tbody></table>

laser doppler: a tool for measuring pancreatic islet microvascular vasomotion in vivo

微小循環の機能状態、微小血管皮膚血管運動の酸素と栄養の配信と二酸化炭素と老廃物の除去のため重要です。微小血管皮膚血管運動障害疾患の微小循環関連の開発の重要なステップがあります。さらに、高度に血管膵内分泌機能をサポートする適応です。この点で、膵微小血管皮膚血管運動機能の状態が膵機能に影響を与える可能性があります推測することが可能です。貢献を決定するための実行可能な戦略があります膵微小血管皮膚血管運動の機能的状態の病理組織学的変化の分析とその膵微小循環は、糖尿病などの関連疾患膵炎等したがって、このプロトコルが膵微小血管バソモーションの機能の状態を確認して (平均血液灌流、振幅、周波数、および相対を含むパラメーターを確立するレーザー ドップラー血流モニターを使用してについて説明します膵微小血管皮膚血管運動の速度) 微小循環機能の状態の評価のため。ストレプトゾトシン誘発糖尿病マウスのモデルでは、膵島の血管皮膚血管運動の障害機能状態が見られました。結論としては、膵微小血管バソモーション生体内評価するためこの方法は、膵疾患に関連するメカニズムを明らかにするかもしれない。

図 1 aに微小血管皮膚血管運動測定レーザー半導体レーザー ダイオードを用いたドップラー装置の写真を示します。ユーザー インターフェイス ソフトウェアは、図 1 bに提示されます。上記の方法を使用して、非糖尿病のコントロールと糖尿病マウスの両方の膵微小血管皮膚血管運動の血行動態パラメーターが検出されま?...

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Laser Doppler: A Tool for Measuring Pancreatic Islet Microvascular Vasomotion In Vivo

レーザーのドップラー: 膵微小血管皮膚血管運動In Vivo測定のためのツール

膵微小血管バソモーション アイレット血液の分布を調節して膵島 β 細胞の生理学的機能を維持します。このプロトコルは、膵微小血管バソモーション生体内での機能の状態を確認して膵臓病に膵微小循環の貢献を評価するレーザーのドップラー モニターを使用して説明します。

As a functional status of microcirculation, microvascular vasomotion is important for the delivery of oxygen and nutrients and the removal of carbon ...

laser-doppler-tool-for-measuring-pancreatic-islet-microvascular

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

Laser Doppler: A Tool for Measuring Pancreatic Islet Microvascular Vasomotion In Vivo

8.2K ビュー.  Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College. 膵微小血管バソモーション アイレット血液の分布を調節して膵島 β 細胞の生理学的機能を維持します。このプロトコルは、膵微小血管バソモーション生体内での機能の状態を確認して膵臓病に膵微小循環の貢献を評価するレーザーのドップラー モニターを使用して説明します。

ビデオ: Laser Doppler: A Tool for Measuring Pancreatic Islet Microvascular Vasomotion In Vivo

Improved Protocol For Laser Microdissection Of Human Pancreatic Islets From Surgical Specimens

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected cells can be used for a variety of investigations, such as transcriptomic or proteomic studies, DNA assessment or chromosomal analysis 2,3. An especially challenging application of LMD is transcriptome analysis, which, due to the lability of RNA 4, can be particularly prominent when cells are dissected from tissues that are rich of RNases, such as the pancreas. A microdissection protocol that enables fast identification and collection of target cells is essential in this setting in order to shorten the tissue handling time and, consequently, to ensure RNA preservation. 
Here we describe a protocol for acquiring human pancreatic beta cells from surgical specimens to be used for transcriptomic studies 5. Small pieces of pancreas of about 0.5-1 cm3 were cut from the healthy appearing margins of resected pancreas specimens, embedded in Tissue-Tek O.C.T. Compound, immediately frozen in chilled 2-Methylbutane, and stored at -80 &deg;C until sectioning. Forty serial sections of 10 &mu;m thickness were cut on a cryostat under a -20 &deg;C setting, transferred individually to glass slides, dried inside the cryostat for 1-2 min, and stored at -80 &deg;C. 
Immediately before the laser microdissection procedure, sections were fixed in ice cold, freshly prepared 70% ethanol for 30 sec, washed by 5-6 dips in ice cold DEPC-treated water, and dehydrated by two one-minute incubations in ice cold 100% ethanol followed by xylene (which is used for tissue dehydration) for 4 min; tissue sections were then air-dried afterwards for 3-5 min. Importantly, all steps, except the incubation in xylene, were performed using ice-cold reagents - a modification over a previously described protocol 6. utilization of ice cold reagents resulted in a pronounced increase of the intrinsic autofluorescence of beta cells, and facilitated their recognition. For microdissection, four sections were dehydrated each time: two were placed into a foil-wrapped 50 ml tube, to protect the tissue from moisture and bleaching; the remaining two were immediately microdissected. This procedure was performed using a PALM MicroBeam instrument (Zeiss) employing the Auto Laser Pressure Catapulting (AutoLPC) mode. The completion of beta cell/islet dissection from four cryosections required no longer than 40-60 min. Cells were collected into one AdhesiveCap and lysed with 10 &mu;l lysis buffer. Each single RNA specimen for transcriptomic analysis was obtained by combining 10 cell microdissected samples, followed by RNA extraction using the Pico Pure RNA Isolation Kit (Arcturus). This protocol improves the intrinsic autofluorescence of human beta cells, thus facilitating their rapid and accurate recognition and collection. Further improvement of this procedure could enable the dissection of phenotypically different beta cells, with possible implications for better understanding the changes associated with type 2 diabetes.

Laser microdissection is a technique that allows the recovery of selected cells from minute amounts of parenchyma. Here we describe a protocol for acquiring human pancreatic islets from surgical specimens to be used for transcriptomic studies. Our protocol improves the intrinsic autofluorescence of human beta cells, thus facilitating their collection.

手術標本からヒト膵島のレーザーマイクロダイセクションのために改良されたプロトコル

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected ...

医学

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, the role of beta-cell dysfunction in type 2 diabetes has been clearly established 2. Research progress has required methods for the isolation of pancreatic islets. The protocol of the islet isolation presented here shares many common steps with protocols from other groups, with some modifications to improve the yield and quality of isolated islets from both the wild type and diabetic Leprdb (db/db) mice. A live-cell 2-photon imaging method is then presented that can be used to investigate the control of insulin secretion within islets.

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

We present here a protocol for the isolation of islets from the mouse model of type 2 diabetes, Leprdb and details of a live-cell assay for measurement of insulin secretion from intact islets that utilizes 2 photon microscopy.

LEPR<sup&gt; DB</sup&gt; 2型糖尿病のマウスモデル：無傷の膵島の膵島単離およびライブセル2光子イメージング

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, ...

Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate postprandial delivery of nutrients and hormones to insulin-sensitive tissues. We here describe a technique for combining intravital microscopy (IVM) and contrast-enhanced ultrasonography (CEUS) of the adductor compartment of the mouse hindlimb to simultaneously visualize muscle resistance arteries and perfusion of the microcirculation in vivo. Simultaneously assessing insulin's effect at multiple levels of the vascular tree is important to study relationships between insulin's multiple vasoactive effects and muscle perfusion. Experiments in this study were performed in mice. First, the tail vein cannula is inserted for the infusion of anesthesia, vasoactive compounds and ultrasound contrast agent (lipid-encapsulated microbubbles). Second, a small incision is made in the groin area to expose the arterial tree of the adductor muscle compartment. The ultrasound probe is then positioned at the contralateral upper hindlimb to view the muscles in cross-section. To assess baseline parameters, the arterial diameter is assessed and microbubbles are subsequently infused at a constant rate to estimate muscle blood flow and microvascular blood volume (MBV). When applied before and during a hyperinsulinemic-euglycemic clamp, combined IVM and CEUS allow assessment of insulin-induced changes of arterial diameter, microvascular muscle perfusion and whole-body insulin sensitivity. Moreover, the temporal relationship between responses of the microcirculation and the resistance arteries to insulin can be quantified. It is also possible to follow-up the mice longitudinally in time, making it a valuable tool to study changes in vascular and whole-body insulin sensitivity.

Insulin-induced vasodilation regulates muscle perfusion and increases the microvascular surface area (microvascular recruitment) available for solute exchange between blood and tissue interstitium. Combined intravital microscopy and contrast-enhanced ultrasonography is presented to simultaneously assess insulin&#39;s action at the larger vessels and the microcirculation in vivo.

インスリン依存性血管拡張や筋肉の血流を研究する生体顕微鏡観察とマウスの後肢の造影超音波検査

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing prevalence of diabetes, both immune-mediated type 1 and obesity-linked type 2, studies aimed at delineating diabetes pathophysiology and therapeutic mechanisms are of critical importance. The &#946;-cells of the pancreatic islets of Langerhans are responsible for appropriately secreting insulin in response to elevated blood glucose concentrations. In addition to glucose and other nutrients, the &#946;-cells are also stimulated by specific hormones, termed incretins, which are secreted from the gut in response to a meal and act on &#946;-cell receptors that increase the production of intracellular cyclic adenosine monophosphate (cAMP). Decreased &#946;-cell function, mass, and incretin responsiveness are well-understood to contribute to the pathophysiology of type 2 diabetes, and are also being increasingly linked with type 1 diabetes. The present mouse islet isolation and cAMP determination protocol can be a tool to help delineate mechanisms promoting disease progression and therapeutic interventions, particularly those that are mediated by the incretin receptors or related receptors that act through modulation of intracellular cAMP production. While only cAMP measurements will be described, the described islet isolation protocol creates a clean preparation that also allows for many other downstream applications, including glucose stimulated insulin secretion, [3H]-thymidine incorporation, protein abundance, and mRNA expression.

Assaying in vitro &#946;-cell function using isolated mouse islets of Langerhans is an important component in the study of diabetes pathophysiology and therapeutics. While many&#160;downstream applications are available, this protocol specifically describes the measurement of intracellular cyclic adenosine monophosphate (cAMP) as an essential parameter determining &#946;-cell function.

マウス膵島の単離と細胞内cAMP測定法

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

生物学

Observing Islet Function and Islet-Immune Cell Interactions in Live Pancreatic Tissue Slices

Live pancreatic tissue slices allow for the study of islet physiology and function in the context of an intact islet microenvironment. Slices are prepared from live human and mouse pancreatic tissue embedded in agarose and cut using a vibratome. This method allows for the tissue to maintain viability and function in addition to preserving underlying pathologies such as type 1 (T1D) and type 2 diabetes (T2D). The slice method enables new directions in the study of the pancreas through the maintenance of the complex structures and various intercellular interactions that comprise the endocrine and exocrine tissues of the pancreas. This protocol demonstrates how to perform staining and time-lapse microscopy of live endogenous immune cells within pancreatic slices along with assessments of islet physiology. Further, this approach can be refined to discern immune cell populations specific for islet cell antigens using major histocompatibility complex-multimer reagents.

This study presents the application of live pancreatic tissue slices to the study of islet physiology and islet-immune cell interactions.

膵臓の生きた組織スライスにおける膵島機能と膵島免疫細胞相互作用の観察

Live pancreatic tissue slices allow for the study of islet physiology and function in the context of an intact islet microenvironment. Slices are prepared ...

免疫・感染学

Longitudinal In Vivo Imaging and Quantification of Human Pancreatic Islet Grafting and Contributing Host Cells in the Anterior Eye Chamber

Imaging beta cells is a key step towards understanding islet transplantation. Although different imaging platforms for the recording of beta cell biology have been developed and utilized in vivo, they are limited in terms of allowing single cell resolution and continuous longitudinal recordings. Because of the transparency of the cornea, the anterior chamber of the eye (ACE) in mice is well suited to study human and mouse pancreatic islet cell biology. Here is a description of how this approach can be used to perform continuous longitudinal recordings of grafting and revascularization of individual human islet grafts. Human islet grafts are inserted into the ACE, using NOD.(Cg)-Gt(ROSA)26Sortm4-Rag2-/-mice as recipients. This allows for the investigation of the expansion of recipient versus donor cells and the contribution of recipient cells in promoting the encapsulation and vascularization of the graft. Further, a step-by-step approach for image analysis and quantification of the islet volume or segmented vasculature and islet capsule forming recipient cells is outlined.

The goal of this protocol is to continuously monitor the dynamics of the human pancreatic islet engraftment process and the contributing host versus donor cells. This is accomplished by transplanting human islets into the anterior chamber of the eye (ACE) of an NOD.(Cg)-Gt(ROSA)26Sortm4-Rag2-/-mouse recipient followed by repeated 2-photon imaging.

前眼室におけるヒト膵島移植および寄与宿主細胞のイメージングと定量

Imaging beta cells is a key step towards understanding islet transplantation. Although different imaging platforms for the recording of beta cell biology ...

Laser Doppler Perfusion Imaging in the Mouse Hindlimb

Blood flow recovery is a critical outcome measure after experimental hindlimb ischemia or ischemia-reperfusion. Laser Doppler perfusion imaging (LDPI) is a common, noninvasive, repeatable method for assessing blood flow recovery. The technique calculates overall blood flow in the sampled tissue from the Doppler shift in frequency caused when a laser hits moving red blood cells. Measurements are expressed in arbitrary perfusion units, so the contralateral non-intervened upon leg is usually used to help control measurements. Measurement depth is in the range of 0.3-1 mm; for hindlimb ischemia, this means that dermal perfusion is assessed. Dermal perfusion is dependent on several factors&#8212;most importantly skin temperature and anesthetic agent, which must be carefully controlled to result in reliable readings. Furthermore, hair and skin pigmentation can alter the ability of the laser to either reach or penetrate to the dermis. This article demonstrates the technique of LDPI in the mouse hindlimb.

Here, we present a protocol that demonstrates the technique and necessary controls for Laser Doppler perfusion imaging to measure blood flow in the mouse hindlimb.

マウスの後肢におけるレーザードップラー灌流イメージング

Blood flow recovery is a critical outcome measure after experimental hindlimb ischemia or ischemia-reperfusion. Laser Doppler perfusion imaging (LDPI) is ...

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging study, with an abdominal imaging window, enabled visualization of the cellular dynamics in abdominal organs in vivo. However, due to the soft sheet-like architecture of the mouse pancreas that can be easily influenced by physiologic movement (e.g., peristalsis and respiration), it was difficult to perform stabilized longitudinal in vivo imaging over several weeks at the cellular level to identify, track, and quantify islets or cancer cells in the mouse pancreas. Herein, we describe a method for implanting a novel supporting base, an integrated pancreatic intravital imaging window, that can spatially separate the pancreas from the bowel for longitudinal time-lapse intravital imaging of the pancreas microstructure. Longitudinal in vivo imaging with the imaging window enables stable visualization, allowing for the tracking of islets over a period of 3 weeks and high-resolution three-dimensional imaging of the microstructure, as evidenced here in an orthotopic pancreatic cancer model. With our method, further intravital imaging studies can elucidate the pathophysiology of various diseases involving the pancreas at the cellular level.

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

In vivo high-resolution imaging of the pancreas was facilitated with the pancreatic intravital imaging window.

膵臓内イメージングウィンドウを用いたマウスモデルにおける膵臓の細胞レベル可視化におけるビ ボ における縦方向の安定化

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging ...

ヒトにおける微小血管機能障害の新規メカニズムの解明

Intradermal Microdialysis: An Approach to Investigating Novel Mechanisms of Microvascular Dysfunction in Humans

The cutaneous vasculature is an accessible tissue that can be used to assess microvascular function in humans. Intradermal microdialysis is a minimally invasive technique used to investigate mechanisms of vascular smooth muscle and endothelial function in the cutaneous circulation. This technique allows for the pharmacological dissection of the pathophysiology of microvascular endothelial dysfunction as indexed by decreased nitric oxide-mediated vasodilation, an indicator of cardiovascular disease development risk. In this technique, a microdialysis probe is placed in the dermal layer of the skin, and a local heating unit with a laser Doppler flowmetry probe is placed over the probe to measure the red blood cell flux. The local skin temperature is clamped or stimulated with direct heat application, and pharmacological agents are perfused through the probe to stimulate or inhibit intracellular signaling pathways in order to induce vasodilation or vasoconstriction or to interrogate mechanisms of interest (co-factors, antioxidants, etc.). The cutaneous vascular conductance is quantified, and mechanisms of endothelial dysfunction in disease states can be delineated.

著者スポットライト:心血管疾患リスク集団のメカニズムを明らかにするための薬理学的解剖アプローチ 

Intradermal microdialysis is a minimally invasive technique used to investigate microvascular function in health and disease. Both dose-response and local heating protocols can be utilized for this technique to explore mechanisms of vasodilation and vasoconstriction in the cutaneous circulation.

皮内微小透析:ヒトにおける微小血管機能障害の新しいメカニズムを調査するためのアプローチ

The cutaneous vasculature is an accessible tissue that can be used to assess microvascular function in humans. Intradermal microdialysis is a minimally ...

レーザーのドップラー: 膵微小血管皮膚血管運動In Vivo測定のためのツール

要約

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手術標本からヒト膵島のレーザーマイクロダイセクションのために改良されたプロトコル

LEPR

インスリン依存性血管拡張や筋肉の血流を研究する生体顕微鏡観察とマウスの後肢の造影超音波検査

マウス膵島の単離と細胞内cAMP測定法

膵臓の生きた組織スライスにおける膵島機能と膵島免疫細胞相互作用の観察

前眼室におけるヒト膵島移植および寄与宿主細胞のイメージングと定量

マウスの後肢におけるレーザードップラー灌流イメージング

膵臓内イメージングウィンドウを用いたマウスモデルにおける膵臓の細胞レベル可視化におけるビボにおける縦方向の安定化

皮内微小透析:ヒトにおける微小血管機能障害の新しいメカニズムを調査するためのアプローチ

皮内微小透析:ヒトにおける微小血管機能障害の新しいメカニズムを調査するためのアプローチ

レーザーのドップラー: 膵微小血管皮膚血管運動In Vivo測定のためのツール

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手術標本からヒト膵島のレーザーマイクロダイセクションのために改良されたプロトコル

LEPR

インスリン依存性血管拡張や筋肉の血流を研究する生体顕微鏡観察とマウスの後肢の造影超音波検査

マウス膵島の単離と細胞内cAMP測定法

膵臓の生きた組織スライスにおける膵島機能と膵島免疫細胞相互作用の観察

前眼室におけるヒト膵島移植および寄与宿主細胞のイメージングと定量

マウスの後肢におけるレーザードップラー灌流イメージング

膵臓内イメージングウィンドウを用いたマウスモデルにおける膵臓の細胞レベル可視化におけるビ ボ における縦方向の安定化

皮内微小透析:ヒトにおける微小血管機能障害の新しいメカニズムを調査するためのアプローチ

皮内微小透析:ヒトにおける微小血管機能障害の新しいメカニズムを調査するためのアプローチ

膵臓内イメージングウィンドウを用いたマウスモデルにおける膵臓の細胞レベル可視化におけるビボにおける縦方向の安定化