Valutazione rapida della citotossicità in vitro del recettore dell'antigene chimerico che esprime Jurkat mediante imaging fluorescente

Le cellule CAR-T vengono costantemente migliorate per ottenere risposte migliori negli studi clinici sull'uomo. Stiamo identificando modi per valutarlo nel nostro laboratorio utilizzando un metodo imparziale ad alto rendimento, come l'utilizzo di imaging fluorescente per selezionare le combinazioni che funzionano meglio. Esistono diverse combinazioni di costrutti che possono essere progettate per ogni singolo frammento variabile a catena modificando la geometria dei domini extracellulari e cerniera.

Abbiamo progettato questo protocollo per identificare le combinazioni con la migliore efficacia nell'eliminazione delle cellule bersaglio utilizzando le cellule Jurkat. Si tratta di un protocollo rapido e ad alto rendimento per lo screening dei costrutti CAR in base alla citotossicità delle cellule bersaglio utilizzando cellule Jurkat, che vengono poi convalidate con cellule T convenzionali. Una dozzina di diversi costrutti CAR possono essere testati contemporaneamente in una piastra a 96 pozzetti utilizzando questa tecnica.

Qui nel laboratorio di Akhavan, quantifichiamo in numeri assoluti la ciclosi diretta delle cellule bersaglio da parte delle cellule Jurkat che esprimono CAR in modo ad alto rendimento per lo screening di più costrutti CAR. L'obiettivo primario del nostro laboratorio è quello di migliorare la traduzione clinica della terapia con cellule CAR-T contro i tumori cerebrali di alto grado. Sfruttiamo gli screening farmacologici ad alto rendimento come modalità per migliorare la citotossicità delle cellule CAR-T, oltre a mirare al microambiente tumorale.