Questo protocollo suggerisce che un metodo fisico può essere adottato per aiutare a capire i problemi biologici. Questa tecnica fornisce un metodo per posizionare materiale negli insetti con un'incisione minima e studiare l'influenza della microchirurgia sullo sviluppo degli individui. Questo metodo può essere applicato ad altre larve di lepidotteri e ad altre parti degli insetti, tra cui la testa e il torace.
È molto importante esercitarsi a fare incisioni in determinati materiali e suturare abilmente. Inizia posizionando le larve maschili di Spodoptera litura al giorno 4 del 6 ° instar, o L6D4, sul ghiaccio per 10-30 minuti per tenerle anestetizzate durante l'operazione. Posizionare la larva anestetizzata sul vassoio di cera con il lato dorsale verso l'alto.
Fissare la testa e la coda della larva con spilli e fili e disinfettare l'area chirurgica applicando la tintura di iodio al 3% con un batuffolo di cotone sull'epidermide, seguito da alcool al 70%. Fai un'incisione lunga 2 millimetri sull'epidermide dorsale al 9 ° segmento del corpo e usa un batuffolo di cotone sterile per rimuovere l'emolinfa che perde e i corpi grassi per ottenere una visione chiara dell'area chirurgica. Utilizzando una pinzetta chirurgica, inserire un pezzo di foglio di alluminio tra i testicoli e quindi chiudere l'epidermide con una sutura in esecuzione.
Legare un nodo quadrato chirurgico con l'aiuto di un portaago e pinzette chirurgiche. Tagliare la sutura in eccesso dalle code ad anello con le forbici, lasciando dietro di sé un filo di 2 millimetri. Dopo la sutura, posare delicatamente la larva nella scatola di allevamento e mantenerla in una camera di simulazione ambientale pulita con osservazione continua.
La crescita e lo sviluppo delle larve maschili di Spodoptera litura dopo la microchirurgia sono stati monitorati. Il tasso di mortalità larvale era leggermente più alto nel gruppo chirurgico, mentre le percentuali di pupa, emergenza adulta e accoppiamento riuscito erano leggermente inferiori nel gruppo chirurgico rispetto al gruppo di controllo. Nel gruppo sperimentale, il numero di fasci di spermatozoi totali in fasci di spermatozoi eupirene e apirene era significativamente inferiore rispetto al gruppo di controllo e di controllo fittizio.
D'altra parte, le percentuali di fasci di spermatozoi eupirene non avevano differenze significative tra tutti e tre i gruppi. Dopo aver rimosso un testicolo unilaterale delle larve, il numero di fasci di spermatozoi totali e fasci di spermatozoi eupirene e apirene nei gruppi di microchirurgia erano significativamente inferiori rispetto al gruppo di controllo. La percentuale di fasci di spermatozoi eupireni al sesto giorno dello stadio pupale era comparabile in tutti e tre i gruppi.
È molto importante notare la posizione della ferita ed evitare di danneggiare altri organi durante l'incisione. Questa tecnica può essere utilizzata per studiare il significato biologico della fusione testicolare applicando farmaci agli organi. L'effetto dei farmaci sull'organo bersaglio può essere esplorato.
