Questo protocollo è significativo perché produce il miglior modello possibile per l'ipertensione arteriosa polmonare. Nessun altro modello produce le lesioni plessiformi riscontrate nei pazienti con IAP umani. Il vantaggio principale è che raddoppiamo il flusso di sangue nel polmone destro e nell'arteria polmonare, causando danni endoteliali e costringendo i polmoni a lavorare il doppio.
Il nostro gruppo ha sviluppato un modello altamente efficiente di ipertensione arteriosa polmonare per sviluppare terapie. Oltre all'ipertensione dell'arteria polmonare, questo metodo potrebbe essere utile nella medicina rigenerativa e potrebbe dare un'idea di altre malattie con un aumento del flusso polmonare come difetti cardiaci congeniti o pazienti post-pneumonectomia. Per qualcuno che non ha mai eseguito questa tecnica, il mio consiglio è di seguire esattamente il protocollo e di assicurarmi che il chirurgo possa vedere esattamente cosa sta facendo.
Dopo aver anestetizzato il topo con il 4% di isoflurane, l'animale viene intubato utilizzando una luce d'oca in fibra ottica per illuminare la trachea. Inserire un catetere calibro 16 nella laringe e utilizzare uno specchio freddo per osservare la condensa dell'umidità nel respiro espirato dal catetere per confermare l'intubazione. Collegare il topo al ventilatore e posizionare il topo al microscopio nella posizione di decubito destro su una pastiglia riscaldante Celsius di 37 gradi.
Fissare gli arti anteriori con del nastro adesivo e utilizzare i tosaerba per radere il torace sinistro da dietro la gamba anteriore fino all'estremità della gabbia toracica. Pulire la pelle esposta con tre salviette sequenziali di iodio 10%povidone e 70% di etanolo e posizionare un pulsossimetro sul piede del ratto per monitorare la frequenza cardiaca e la saturazione di ossigeno durante l'intervento chirurgico. Ora, regola il microscopio e porta a fuoco la vista chirurgica.
Quindi, posizionare un drappo sterile sul corpo del topo e sul vassoio dello strumento per creare un ambiente sterile. E infine, posizionare strumenti sterili sul vassoio dello strumento sterile. Per eseguire una pneumonectomia sinistra, utilizzare le forbici Cooley-Mayo e le pini del tessuto Gerald per tagliare un foro da due a tre centimetri nel drappo chirurgico e utilizzare una lama chirurgica per fare un'incisione laterale lunga due centimetri nel torace sinistro.
Utilizzare le forbici Cooley-Mayo per tagliare ogni strato di tessuto fino a quando le costole e i muscoli intercostali non sono esposti. Usa una zanzara per fare un buco attraverso il muscolo del terzo spazio intercostale. Usando una sonda a doppia terminazione, sposta il polmone per visualizzare l'arteria polmonare e usa le forbici McPherson-Vannas Iris per aprire i muscoli intercostali a una larghezza di circa uno o due centimetri.
Posizionare un piccolo riavvolgitore autocontenente nella pleura sinistra per tenere aperte le costole e i muscoli e spostare il polmone sinistro più in basso nell'addome per consentire l'accesso all'arteria polmonare e al bronco. Per la legatura del bronco principale sinistro e dell'arteria polmonare, in primo luogo, caricare un Hemoclip medio in un applicatore a clip legante e utilizzare le forcep atraumatiche Wangensteen per sollevare con cura la parte superiore del polmone sinistro per esporre l'arteria polmonare. Chiudere la clip e l'applicatore intorno all'arteria, facendo attenzione a non chiudere o rompere la vena di azygos sinistra.
E aprire ulteriormente l'incisione usando la tonsille per separare le fibre muscolari. Dopo aver caricato un altro Hemoclip medio nell'applicatore della clip legante, utilizzare le forcelle atraumatiche e le forcelle tissutali standard per sollevare la parte inferiore del polmone dall'incisione fino a visualizzare il bronco principale sinistro e la vena polmonare sinistra. Ligarare con cura il bronco principale sinistro e la vena polmonare insieme alla seconda Hemoclip e utilizzare le forbici per rimuovere il polmone senza tagliare o strappare la clip.
Quindi, utilizzare un piccolo pezzo di garza sterile per assorbire qualsiasi sangue e arginare qualsiasi sanguinamento. Utilizzare il supporto dell'ago e una sutura di prolene 4-0 per chiudere le costole e i muscoli intercostali. Prima di chiudere i muscoli intercostali, inserire un catetere calibro 16 nella cavità toracica lontano dall'incisione chirurgica e nel settimo spazio intercostale e rimuovere immediatamente l'ago, lasciando il catetere in posizione.
Posizionare una sutura 5-0 nella pelle e intorno al tubo toracico in modo che quando il tubo toracico viene rimosso, il foro venga legato chiuso e legare le suture per chiudere le costole. Chiudere la pelle e lo spazio sottocutaneo con una sutura 5-0 in esecuzione e utilizzare una siringa da tre millilitri per evacuare l'aria dalla cavità pleurica attraverso il catetere per ripristinare la normale pressione negativa nel torace. Utilizzare un portaaghi per bloccare immediatamente il catetere per evitare che l'aria torni nella cavità toracica.
Rimuovere il catetere e legare la sutura per chiudere il foro. Nel gruppo pneumonectomia e monocrotalina, la grave ipertensione polmonare si sviluppa entro il giorno 21, come evidenziato da un aumento della pressione media dell'arteria polmonare rispetto al controllo degli animali fittizi non trattati. Nel gruppo della pneumonectomia più Sugen, la pressione media dell'arteria polmonare è tre volte superiore a quella del gruppo di controllo.
La pressione sistolica ventricolare destra è anche molto più alta sia negli animali trattati con monocrotalina che in sugen, rispetto al gruppo di controllo. Nelle sezioni normali del tessuto polmonare del ratto macchiate di ematossilina ed eosina, sono evidenti spazi tra gli alveoli e le strutture alveolari e i vasi sono chiari e di spessore normale. Nel polmone di ipertensione dell'arteria polmonare, ci sono prove di rimodellamento, ispessimento delle pareti del vaso, grave costrizione dei vasi e infiammazione e arterite polmonare focale.
L'animale deve compensare la perdita di un polmone, quindi è importante essere pazienti durante il periodo di recupero. Monitorare i segni vitali e dare ossigeno aggiuntivo o volume polmonare, se necessario. Sugen crea apoptosi endoteliale che è un segno clinico rilevante dell'ipertensione arteriosa polmonare.
Il modello di pneumonectomia sinistra nei roditori ha spianato la strada agli scienziati per studiare le anomalie del flusso e sviluppare nuovi trattamenti per l'ipertensione arteriosa polmonare. A causa dell'uso di isoflurane, Sugen e / o MCT in questo modello, i dispositivi di protezione individuale devono essere indossati in ogni momento.
